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2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体学案
【预习新知】
（一）动物细胞融合技术
1．定义：使 个或 个动物细胞结合形成 个细胞的技术。
2．结果：融合后形成的杂交细胞具有原来 个或 个细胞的遗传信息。
3．原理： 。
4．诱导融合常用的方法： 、 、 。
(1) 法是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。
(2) 不灭活的病毒会 细胞，因而不能用于诱导细胞融合。
(3) 与植物原生质体融合方法对比，诱导动物细胞融合的特有方法是 。
5．特点：突破了 的局限，使 成为可能。
6．动物细胞融合技术涉及的变异类型是 。
7．应用
(1) 间、属间、科间，甚至动物与植物之间的细胞融合都已获得了成功。
(2)动物细胞融合技术已成为研究细胞 、细胞 、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(3)利用动物细胞融合技术发展起来的 技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
（二）单克隆抗体及其应用
1．传统抗体
(1)制备方法：向动物体内反复注射某种________，使之产生相应抗体，从动物________中分离出所需抗体。
(2)缺点：产量低、________、________。
2．单克隆抗体制备原理
(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞只分泌____________。
(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量________。
(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能________又能产生大量________。
3．制备过程
4．单克隆抗体的优点
能准确地识别______________，与特定抗原发生特异性结合，并且可以________。
5．单克隆抗体的应用
(1)作为________，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于________和________。
【巩固训练】
1.利用细胞融合技术可以制备单克隆抗体，下列关于该过程的叙述正确的是( )
A.杂交瘤细胞能无限增殖，无需进行传代培养
B.利用抗原抗体反应即可筛选出杂交瘤细胞
C.外界抗原多次刺激动物可以提高动物体内杂交瘤细胞的数量
D.体外培养杂交瘤细胞需提供CO2以维持培养液的pH
2.科研人员以甲型H1N1流感病毒的HA蛋白为抗原对小鼠进行免疫，取其脾脏的淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，获得产生抗HA蛋白抗体的杂交瘤细胞。下列叙述错误的是( )
A.淋巴细胞与骨髓瘤细胞1：1混合后，发生融合的细胞不全是杂交瘤细胞
B.选择培养基上获得的杂交瘤细胞可能产生抗HA蛋白抗体
C.可在培养液中添加一定量的抗生素，以防止杂交瘤细胞培养过程中的污染
D.抗HA蛋白抗体特异性强、灵敏度高，可广泛用于各种流感病毒的检测
3.为解决杂交瘤细胞在传代培养过程中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失问题，研究者将抗原刺激后的B淋巴细胞用EBV（一种病毒颗粒）感染，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能存活，但对Oua不敏感。下图表示操作过程，下列有关分析错误的是( )
A.B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的脾脏
B.HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞
C.杂交瘤细胞染色体丢失可能会导致抗体的产生能力下降
D.杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力
4.用单克隆抗体治疗传染性疾病获评为2021年度大科学突破之一。下图表示单克隆抗体的制备过程。下列有关说法错误的是( )
A.过程①的目的是使小鼠产生能分泌特定抗体的B淋巴细胞
B.过程②细胞融合后,培养体系中只有两两融合的杂种细胞
C.过程③用多孔板培养时,每一个孔尽量只接种一个杂交瘤细胞
D.过程①能筛选得到分泌特定抗体的杂交瘤细胞
5.抗体—药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，错误的是( )
A.用普通培养基也可对融合细胞进行初步筛选
B.用特定的选择培养基筛选出的杂交瘤细胞有多种
C.用多孔板进行克隆化培养过程，不存在筛选作用
D.需要利用动物细胞融合、动物细胞培养等技术
6.人参皂苷是人参的主要活性成分。科研人员分别诱导人参根与胡萝卜根产生愈伤组织并进行细胞融合，以提高人参皂苷的产率。下列叙述错误的是( )
A.细胞融合前应去除细胞壁
B.高Ca2+—高pH溶液可促进细胞融合
C.融合的细胞即为杂交细胞
D.杂交细胞可能具有生长快速的优势
7.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等优点，被广泛用作诊断试剂。下图是医学上常用的定量检测抗原含量的“双抗体夹心法”示意图。将过量的固相抗体固定在某种固相载体表面上，加入抗原，再加入酶标抗体，洗脱未结合的酶标抗体，最后加入无色底物，该底物在酶标抗体上酶的催化作用下形成产物，通过产物（有色）量反映抗原量。下列说法正确的是( )
A.固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于两者结构相同
B.实验过程所加入的抗原、酶标抗体、底物均应过量
C.反应体系最终呈现的颜色深浅与抗原量呈负相关
D.加入酶标抗体的目的是通过测定酶促反应产物量来判断待测抗原量
8.杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等优点。下列有关叙述中，不正确的是( )
A.可用灭活病毒诱导法促进B细胞和骨髓瘤细胞的融合
B.杂交瘤细胞具有既能大量增殖、又能产生抗体的特点
C.在杂交瘤细胞的筛选过程中，需要用到抗原—抗体杂交技术
D.用单克隆抗体诊断肿瘤等疾病时，只能用荧光标记法
9.抗体由恒定区段和可变区段两部分构成，其中可变区段决定抗体的特异性。利用小鼠制备的鼠源性单克隆抗体需经人源化改造才可应用于临床免疫治疗。下列说法错误的是( )
A.制备鼠源性单克隆抗体需将小鼠B细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
B.鼠源性单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的天然抗体
C.人源化改造降低了人对鼠源性单克隆抗体的免疫排斥反应
D.人源化改造即将鼠源性单克隆抗体的可变区段替换成人的相应区段
10.研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是( )
A.步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞
B.经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖
C.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交
D.步骤⑥和植物组织培养均需使用二氧化碳培养箱进行大规模培养
参考答案
1.答案：D
2.答案：D
解析：抗HA蛋白抗体特异性强、灵敏度高,可用于甲型H1N1流感病毒的检测,而不是各种流感病毒的检测,D错误。
3.答案：D
解析：D、由于杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞染色体丢失的问题,所以有的杂交瘤细胞不一定具有持续产生抗EBV抗体的能力,D错误。
故选D。
4.答案：B
解析：过程①对小鼠注射特定抗原,刺激其体内发生特异性免疫,产生能分泌相应抗体的B淋巴细胞,A正确;过程②是将已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合,由于融合是随机的,培养体系中有未融合的细胞、融合的具有同种核的细胞,以及B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂种细胞,B错误;过程③为克隆化培养,每个孔尽量只接种一个杂交瘤细胞,是为了保证繁殖得到的细胞群体来自同一杂交瘤细胞,产生的是同一种抗体,以便后续抗体检测,C正确;过程④为抗体检测,加入抗原后,能产生特定抗体的杂交瘤细胞所在的孔会发生阳性反应,筛选得到所需杂交瘤细胞,D正确。
5.答案：A
解析：A、用选择培养基对融合细胞进行初步筛选，A错误;
B、用特定的选择培养基筛选出的杂交瘤细胞有多种，还需进行克隆化培养和抗体检测，才能得到所需杂交瘤细胞，B正确;
C、用多孔板进行克隆化培养过程，不存在筛选作用，抗体检测过程涉及筛选作用，C正确;
D、单克隆抗体制备过程中需要利用动物细胞融合、动物细胞培养等技术，D正确。
6.答案：C
解析：融合的细胞中有人参根﹣人参根细胞、人参根﹣胡萝卜根细胞、胡萝卜根﹣胡萝卜根细胞，只有人参根﹣胡萝卜根细胞才是杂交细胞，C错误。
7.答案：D
解析：A、据图可知，固相抗体和酶标抗体分别与抗原的不同部位结合，说明两者的结构不同，A错误；
B、该方法通过产物（有色）量反映抗原量，所以抗原不能过量，B错误；
C、抗原越多，留下的酶标抗体越多，颜色越深，因此反应体系最终呈现的颜色深浅与抗原量呈正相关，C错误；
D、加入酶标抗体的目的是酶催化检测底物反应，可通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量，D正确。
故选D。
8.答案：D
解析：A、可用灭活病毒诱导法促进B细胞和骨髓瘤细胞的融合，A正确；
B、杂交瘤细胞具有既能大量增殖、又能产生抗体的特点，B正确；
C、在杂交瘤细胞的筛选过程中，需要经过多次筛选，其中需要用到抗原—抗体杂交技术，C正确；
D、用单克隆抗体诊断肿瘤等疾病时，可以使用荧光标记法或同位素标记法，D错误。
故选D。
9.答案：D
解析：A、制备鼠源性单克隆抗体需将小鼠B细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，并经筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，A正确;
B、鼠源性单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，没有经过改造的天然抗体，B正确;
CD、不同生物体的组织相容性抗原不同，若将鼠源性单克隆抗体直接用于人，会产生免疫排斥反应，由于抗体的可变区段决定抗体的特异性，即为识别抗原的部位，因此可将鼠源性单克隆抗体的恒定区段替换成人的相应区段，减少人对鼠源性单克隆抗体的免疫排斥反应，C确，D错误。
10.答案：A
解析：A、步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞；步骤⑤向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A正确；
B、经步骤②诱导后融合的细胞只有杂交瘤细胞才能既能分泌TREM2抗体又可无限增殖，B错误；
C、步骤三是特定培养基筛选杂交瘤细胞，步骤4是抗原抗体杂交，C错误；
D、动物细胞培养过程中二氧化碳用于调节培养液的pH值，而植物组织培养的过程中不需要二氧化碳培养箱，D错误。
故选A。

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