资源简介

(共24张PPT)
平板划线法
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
分散
生长繁殖
分区划线法
连续划线法
选择性必修三 第 1 章 第 2节
微生物的培养技术
及应用（二）
1 mL
9 mL 无菌水
90mL无菌水
10g土样
稀释涂布平板法
单个细胞
微生物群
单个菌落
稀释分散
生长繁殖
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1×102
1×103
1×104
1×105
1×106
1×107
1×10
（1）梯度稀释
移液枪
（2）涂布平板
取0.1mL菌液
滴加到培养基表面
用涂布器将菌液
均匀地涂布在培养基表面
涂布器
将涂布器浸在
盛有酒精的烧杯中
将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布
涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀
灼烧灭菌
待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。
恒温培养箱
平板划线法
稀释涂布平板法
从社会中来
稀释涂布平板法
呈现的杂菌群
选择培养基
自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。
选择培养基
将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
真菌
固氮微生物
④石油作为唯一碳源的培养基：
分解石油的微生物
③不加含碳有机物的培养基：
②不加氮源的培养基：
①加入青霉素(能杀死细菌、放线菌)的培养基能：
自养型微生物
分解尿素的细菌
？
⑤尿素作为唯一氮源的培养基：
④含高浓度食盐的培养基：
金黄色葡萄球菌
1973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术
PCR仪
耐高温的DNA聚合酶
那么，自然界中什么环境中存在这种酶？
美国黄石国家公园
筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术
PCR仪
耐高温的DNA聚合酶
那么，如何从众多的微生物中筛选出耐热的水生栖热菌？
70-80℃高温选择培养基
耐寒微生物
耐热微生物
石油分解菌
寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找！
温泉
冰川
油田
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。
取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。
注 意
土壤取样
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
选择培养基
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
当样品中的稀释足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
一般选择菌落数为30~300的平板进行计数
至少3个平板重复计数，取平均值
菌落数往往少于活菌实际数，统计结果用菌落数
以尿素作为唯一氮源
稀释涂布平板法
分析：两种方法培养到的菌落，哪种才可以用于计数？
稀释涂布平板法接种培养结果
平板划线法接种培养结果
不能计数
可以计数
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
例：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？
（80+90+100）/3
0.1
× 105 =9 ×107个
方法一：稀释涂布平板法
——间接计数法
0.1mL菌液
保证获得菌落数在30～300之间
血细胞计数板：
细菌计数板：
常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。
对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
方法二：显微镜直接计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
——直接计数法
缺点：
①不能区分死菌和活菌→偏大
②不适于对运动细菌的计数。
③个体小的细菌在显微镜下难以观察。
优点：快速、直观
①待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。
初步鉴定：
菌落特征（性状、大小、颜色）
②每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
鉴定培养基
加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应
分解尿素CO（NH2）2的细菌产生的脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。
CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3
脲酶
选择什么指示剂或化学药品鉴定分解尿素的细菌？
原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性
①液体培养基可以直接看液体的变色情况；
②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。
伊红-美蓝试剂，用来鉴别大肠杆菌的试剂，可将大肠杆菌染成具有金属光泽的黑色
伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌
刚果红+纤维素
刚果红
红色复合物
透明圈
刚果红并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生反应
刚果红培养基
鉴别纤维素分解菌
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
每个浓度设置了3个平板（重复实验）
对照组：牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
判断选择培养基是否具有选择作用
对照组：未接种的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基
验证培养基中是否含有杂菌。
酒曲
原料准备。需要准备大米、辣蓼草、桂树叶、橘树叶、扁豆叶、竹叶、田边草等。1
原料处理。将桂树叶、橘树叶、扁豆叶、竹叶、田边草各200克，辣蓼草4公斤切碎晒干，与50公斤大米混合，用粉碎机粉碎后待用。
制丸。将上述混合粉加入37摄氏度温水搅拌，加水量以手捏成团而不滴水为宜，做成鸭蛋大小的球丸。
装筐。把球丸放在筐里转动，边转边撒上药头，药头用量控制在使球丸表面均匀沾上一层即可。
发酵。将装好球丸的筐逐只放进谷仓或选一墙角，底下铺上稻草，将筐放上，上面盖一层稻草，用薄膜包裹，发酵24到36小时，见薄膜或稻草上有水珠时，将覆盖物掀开降温通风，以免温度过高，烧坏酒曲，待其自然冷却后取出摊晒，干燥即为成品。

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