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(共27张PPT)
植物体细胞杂交技术
动物细胞融合技术
选择性必修三 第 2 章 第 2 节
动物
细胞工程
人细胞
小鼠细胞
杂交细胞
红色荧光标记
膜蛋白
染绿色荧标记
膜蛋白
荧光标记人鼠融合实验
1970年
细胞融合
37℃
40℃
将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。
植物体细胞杂交技术
动物细胞融合技术
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
原理
细胞膜的流动性
动物细胞融合
动物细胞融合
物理法：
化学法：
生物法：
电融合法
聚乙二醇(PEG)融合法
灭活病毒诱导法
诱导方法
植物体细胞杂交的特有诱导方法：
高Ca2+ - 高pH融合法
动物细胞融合的特有诱导方法：
灭活病毒诱导法
A细胞
B细胞
诱导融合
【P48相关信息】病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
灭活病毒诱导法
病毒黏附使细胞凝聚
膜打开
膜融合
细胞质融合
【P48相关信息】灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。
仙台病毒
紫外线
灭活
丧失感染活性(不感染细胞)
保留融合活性(诱导细胞融合)
A细胞
B细胞
诱导融合
动物细胞融合
杂交细胞
核的融合时间：
细胞融合完成的标志:
细胞核融合成一个核
单核细胞
含两个或多个细胞的遗传物质
杂交细胞特点：
杂交细胞第一次有丝分裂时进行
正在融合的鸡血细胞
A细胞
B细胞
诱导融合
动物细胞融合
杂交细胞
生物种类 细胞来源 成功年代
酵母菌—鸡 原生质体—血红细胞 1975年
人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年
人—小鼠 纤维肉瘤细胞——畸胎瘤细胞 1978年
正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
动物细胞融合
杂交瘤细胞
单克隆抗体
体液免疫
自学时间
P48-49
Q1：单克隆抗体的制备过程选择哪两种细胞进行融合？
Q2：单克隆抗体的制备过程细胞融合后有几种融合细胞？
Q2：如何筛选出所需要的融合细胞？
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
注射特定抗原1
脾脏
B细胞自身融合细胞
骨髓瘤细胞自身融合细胞
诱导融合
杂交瘤细胞
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
B细胞自身融合细胞
骨髓瘤细胞自身融合细胞
杂交瘤细胞
选择培养基
杂交瘤细胞
（既能迅速大量增殖，又能产生抗体）
注射抗原1
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞 融合
筛选2
B1-G
B
G
B-B
G-G
B2-G
Bn-G
筛选出杂交瘤细胞
B1-G
B2-G
B3-G
选择培养基
筛选1
B1-G
筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞
多孔培养板
稀释
杂交瘤细胞
B1-G
B2-G
B3-G
“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞，“克隆化培养”每个杂交瘤细胞。
筛选二
抗体
检测板
多孔细胞培养板
克隆化培养：将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养
抗体检测 ：一段时间后，滴加相应抗原1，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体
多次克隆化培养和抗体检测进行筛选
阳性孔
B1-G
B1-G
注射抗原1
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞融合
选择培养基
筛选2
B1-G
B
G
B-B
G-G
B2-G
Bn-G
筛选出杂交瘤细胞
B1-G
B2-G
B3-G
筛选1
B1-G
筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞
多次克隆化培养和抗体检测进行筛选
注射抗原1
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞 融合
选择培养基
筛选2
B1-G
B
G
B-B
G-G
B2-G
Bn-G
筛选出杂交瘤细胞
B1-G
B2-G
B3-G
筛选1
B1-G
筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞
多次克隆化培养和抗体检测进行筛选
体外培养
体内培养：注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
注射抗原1
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞 融合
选择培养基
筛选2
B1-G
B
G
B-B
G-G
B2-G
Bn-G
筛选出杂交瘤细胞
B1-G
B2-G
B3-G
筛选1
B1-G
筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞
多次克隆化培养和抗体检测进行筛选
体外培养
体内培养：注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
动物细胞融合技术
动物细胞培养技术
单克隆抗体制备技术
抗蛇毒血清
抗狂犬病血清
抗体
破伤风抗毒素
免疫治疗
抗原
动物体
抗体
反复注射
浆细胞
动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上
抗体不纯
产量低
纯度低
特异性差
1984
米尔斯坦（英）
科勒（德）
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1984
"for the discovery of the principle for production of monoclonal antibodies"
单克隆抗体
能准确识别抗原的细微差异
可大量制备
与特定抗原发生特异性结合
(1)用于治疗疾病
特异性强、灵敏度高、疗效高、毒副作用小
治疗中重度银屑病
治疗肝癌
思考·讨论：单克隆抗体的应用
【资料1 】用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，在妊娠第8天就可以作出诊断，这比原来的诊断方法提前了10 d左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。
单克隆抗体被广泛用作诊断试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
例如，利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。
准确、高效、简易、快速
(2)作为诊断试剂——广泛应用
思考·讨论：单克隆抗体的应用
【资料2】 使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体—药物偶联物（antibody-drug
conjugate，ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。
单抗
药物
接头
ADC
抗体通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞，药物发挥治疗效应，杀伤靶细胞。
靶向治疗
药物
单克隆抗体
(3)用于运载药物
靶向药物

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