资源简介

(共78张PPT)
噬菌体
蓝细菌
乳酸菌
醋酸菌
衣藻
酵母菌
毛霉
草履虫
变形虫
新冠病毒
酵母菌
大肠杆菌
微生物
情境导入
无细胞结构
原核细胞
真核细胞
真菌：酵母菌、毛霉等；
原生生物：草履虫、变形虫等
1.微生物的类群
病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
细菌：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：链霉菌等
难以用肉眼观察的微小生物的统称
问题情境
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。 自 制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事例屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
微生物的无菌培养技术
第2节 微生物的培养技术及应用
01
微生物的基本培养技术
实验室培养微生物的基本思路：
（1）为微生物提供合适的营养和环境条件
（2）确保杂菌无法混入
菌落
1. 定义：单个或少数同种菌体在固体培养基上大量繁殖，形成肉眼可见的子细胞群体。
2. 特征：形状、大小、颜色、光泽度、透明度等。
3. 功能：菌落是鉴定菌种的重要依据。
菌落
沙门氏菌
毛霉
青霉菌
酵母菌
强调：不同种类微生物的菌落特征各有特点,但彼此之间存在一定的相似性;
同种微生物的菌落特征受培养时间、营养物质的含量与种类等影响也会有所差异。
培养基：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
作用：
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
种类
(1)按物理性质：液体培养基、固体培养基。
(3)按化学组成：天然培养基、合成培养基。
(2)按功能用途：选择培养基、鉴别培养基。
无有 凝固剂琼脂
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
注意：固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
划分 培养基种类 特点 用途
（1）物理性质
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂，明胶，硅胶等，
扩大培养、工业生产
获取单菌落、鉴定、活菌计数、保藏菌种
液体培养基
固体培养基
观察微生物运动
半固体培养基
少量凝固剂
选择培养基
鉴别培养基
：根据某种微生物的特殊营养要求配置。
：加入能与目的菌的代谢产物发生显色
反应的指示剂。
（2）功能
例1，加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌；
例2，不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌；
例3，不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物
A.选择培养基：将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。
培养基中加氨苄青霉素
具有抗氨苄青霉素能力的菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌
选择培养基
培养基+氨苄青霉素
培养基
没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰
怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌
例1，加入伊红美蓝的培养基：鉴别大肠杆菌
例2，加入刚果红的培养基：鉴别纤维素分解菌
B.鉴别培养基：加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂，用于鉴别不同类型的微生物。
刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。
鉴别培养基
天然培养基
合成培养基
：含化学成分不明确的天然物质
：用已知的化学物质配制
（3）成分来源
工业生产
分类鉴定
培养基的配制
一
无菌技术
二
目录
微生物的纯培养
三
一
培养基的配制
一
1．培养基的营养构成
(1)主要营养物质：一般都含有 等营养物质。
水、碳源、氮源、无机盐
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000mL 水
注：牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。
1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
碳源
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-
有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等
自养微生物
异养微生物
功能：①构成细胞物质和一些代谢产物②有机碳既是碳源又是能源。
氮源
无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等
有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
功能：氮是微生物合成蛋白质、核酸等物质必须的元素。
含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。
无机盐
功能：
提供无机营养、调剂PH、维渗透压
水
功能：良好的溶剂
维持生物大分子结构的稳定
Ca、K 、Mg等大量元素
Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素
凡是能够为微生物提供C、N等元素的营养物质。
为什么培养基需要氮源？
旁栏思考
思考1：培养微生物时，培养基中是否必须添加碳源和氮源？并说明理由。
不一定。
例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；
培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。
根据碳/氮源的种类判断微生物同化作用是自养还是异养
a.异养型微生物的碳源为：
b.自养型微生物的碳源为：
含碳有机物
含碳无机物
氮源是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
几种微生物的营养和能量来源
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌 CO2 光能
硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物
大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物
自养
微生物
异养
微生物
思考1：下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养根瘤菌吗？
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
根瘤菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供有机碳源，所以该培养基不能用来培养根瘤菌。
此培养基可用来培养自养型微生物。
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌
硝化细菌
根瘤菌
大肠杆菌
CO2
NH4＋、NO3-等
光能
CO2
NH3
NH3的氧化
糖类等有机物
N2
有机物
糖类、蛋白质等有机物
蛋白质等
有机物
1.自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于 ；
自养型微生物所需的碳源来自 碳源，
异养型微生物所需的碳源来自 碳源
2.无机氮源不但能给自养型微生物提供 ，也能作为 ，
3.含有C、H、O、N的有机物可作为 微生物的碳源、氮源、能源；
碳源
氮源
能源物质
异养型
无机
有机
特别提醒
一
培养基的配制
一
1．培养基的营养构成
(1)主要营养物质：一般都含有 等营养物质。
水、碳源、氮源、无机盐
(2)其他需求：还需要满足微生物生长对 的需求。
pH、特殊营养物质、O2
例如：
④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。
①培养乳酸杆菌时，一般需要在培养基中添加 ；
②培养霉菌时，一般需要将培养基调至 ；
③培养细菌时，一般需要将培养基调至 ；
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
主要指生长因子（微生物生长所必须的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物）
种类：维生素、氨基酸、碱基、嘌呤、嘧啶、胺类等
来源：酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等
(1)牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质(　　)
(2)所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源(　　)
√
×
培养自生固氮菌的培养基中可以不添加氮源。
(3)培养不同微生物的培养基成分完全一样(　　)
×
培养不同微生物的培养基成分不完全一样，如培养自养微生物的培养基不需要碳源，培养自生固氮菌的培养基中可以不添加氮源。
具体处理 原理 目的
选择培养基 加入青霉素 青霉素能抑制细菌生长， 对真菌无作用
不加氮源 固氮微生物能利用空气中的氮气
不加有机碳源 自养型微生物能利用无机碳源
分离酵母菌、霉菌等真菌
分离固氮菌
分离自养微生物
发散思维
培养基的配制
一
无菌技术
二
目录
微生物的纯培养
三
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染！
两个方面：
消毒
对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒
灭菌
将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括：
无菌技术
二
消毒
灭菌
二、无菌技术
无菌技术的类型:
（1）消毒
①概念：使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
②适用对象：对操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
（2）灭菌
①概念：使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
②适用对象：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
芽孢指某些细菌（如芽孢杆菌等）在一定条件下细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。
芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。如某些细菌的芽孢煮沸3小时才死亡。每个细菌仅形成一个芽孢。
孢子指细菌、真菌、原生动物和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。正常情况下不需要两两结合就可以由单个细胞直接发育成新个体。
知识拓展
1.消毒
使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
常用的消毒方法：
（1）煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,用于日常生活的一般物品。
（2）巴氏消毒法：62～65℃下消毒30 min或80～90℃处理30s～1min，适合一些不耐高温的液体，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。
（3）化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。
（4）紫外线消毒法：接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min。在照射前，适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。
煮沸消毒法
巴氏消毒法
化学药物消毒法
紫外线消毒法
消毒方法
2.灭菌
概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。
优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的
某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。
对象：培养基等
① 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121℃下维持15～30min。
常用的灭菌方法：
高压蒸汽灭菌锅
1.灭菌物品不要装得太挤，以妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果
注意事项
2.锥形瓶和试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹的瓶口的纸渗入棉塞
3.加热初期打开排气阀，待冷空气排尽之后再关闭
4.断开电源，让锅内温度自然下降，待压力表指针指到零后打开排气阀
湿热灭菌
原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和
原生质干燥等。
对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于
玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)
金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌。
② 干热灭菌：干热灭菌箱内160～170 ℃下加热2～3h。
干热灭菌箱
干热灭菌：干热灭菌箱内160-170 ℃下加热2-3h。
注意：等温度降到70℃以下再打开箱门，否则骤冷容易使箱内玻璃仪器破损。
③ 灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧
效果：最彻底
原理：使微生物燃烧
对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位。
充分燃烧层
（外焰）
灼烧灭菌：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧。
接种针
接种环
涂布器
方法 工具 对象 操作
湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法） 高压蒸汽灭菌锅 培养基等 高压蒸汽灭菌锅
100kpa，121℃，15-30min
干热灭菌法 干热灭菌箱 耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿等）和金属用具等 160-170℃的热空气中维持1-2h
灼烧灭菌法 酒精灯 接种工具（如接种环、接种针、涂布器或其他金属用具）、接种过程中容易被污染的部位（如试管口、瓶口等） 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
常用的灭菌方法
防止杂菌污染的措施
（1）实验前：
①对操作空间、操作人员消毒；
②对所用器皿、接种用具和培养基灭菌。
①避免已灭菌处理材料用具与周围物品接触造成污染；
②为避免周围微生物污染，实验操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。
（2）操作时：
（3）实验后：
使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
P10旁栏思考：
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
还能有效避免操作者自身被微生物感染。
湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
干热灭菌
灼烧灭菌
化学药物消毒（酒精）
紫外线消毒
巴氏消毒法
【巩固练习】以下所采用的灭菌或消毒方法依次是
化学药物消毒（次氯酸钠）
培养基
培养皿
接种环
实验操作者的双手
实验室
牛奶
有活性生物材料
　实战训练　
(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染(　　)
(2)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底(　　)
(3)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用干热灭菌法进行灭菌(　　)
判断下列正误
√
√
×
比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭
消毒
灭菌
较为温和
强烈
部分微生物
全部微生物
一般不能
一
无菌技术
二
能
比较消毒和灭菌对微生物作用效果的差异
一
无菌技术
二
项目 主要方法 应用范围
消毒 巴氏消毒法 ℃消毒30 min 或 ℃处理15 s 或 ℃处理10～15 s 、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体
煮沸消毒法 100 ℃煮沸 min 家庭餐具等生活用品
紫外线消毒 30 W紫外灯照射 min (损伤细菌的DNA)
化学药物消毒 擦拭实验者双手
水源
牛奶
63～65
72～76
5～6
30
体积分数为70%～75%的酒精
氯气
接种室、接种箱或超净工作台
80～85
一
无菌技术
二
项目 主要方法 应用范围
灭菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的 层灼烧
干热灭菌 干热灭菌箱中， ℃的热空气中维持 。
高压蒸汽灭菌 (湿热灭菌)
充分燃烧
接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等
160～170
1～2h
100 kPa、121 ℃的条件下，维持15～30 min
培养基等
耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等
思考
1.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？
在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。
2.为什么体积分数为70%～75%的酒精杀菌效果最好？
若酒精浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；若酒精浓度过低，杀菌能力减弱。
跟踪训练
1.下列有关无菌技术的说法，正确的是
A.无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物
B.培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌
C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存
D.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌
√
无菌技术的关键是防止杂菌污染，A错误；
无菌技术中，若处理对象为液体，可以用湿热灭菌法灭菌，D错误。
跟踪训练
√
教材P10〔相关信息〕
生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。
2.(2023·山西阳泉高二期中)无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。下列说法正确的是
A.在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于灭菌方法
B.对接种室、涂布器、操作者的衣着和双手只需要进行消毒处理
C.培养基可借助高压蒸汽灭菌锅或干热灭菌箱进行灭菌
D.利用某些寄生于细菌体内的微生物裂解细菌来净化污水属于生物消毒法
培养基的配制
一
无菌技术
二
目录
微生物的纯培养
三
一
微生物的纯培养
三
单个或少数同种菌体在固体培养基上大量繁殖，形成肉眼可见的子细胞群体，即菌落。
特征：形状、大小、颜色、光泽度、透明度等。
沙门氏菌
毛霉
青霉菌
酵母菌
强调：不同种类微生物的菌落特征各有特点,但彼此之间存在一定的相似性;
同种微生物的菌落特征受培养时间、营养物质的含量与种类等影响也会有所差异。
菌落是鉴定菌种的重要依据
一
微生物的纯培养
三
结合教材P11-12，理解以下概念
纯培养物：
纯培养：
培养物：
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体称为培养物。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
获得纯培养物的过程就是纯培养。
配制培养基
灭菌
接种
分离
培养
1
概念
2
纯培养的步骤：
一
微生物的纯培养
三
平板划线法 稀释涂布平板法
(1)原理：采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
(2)获得单菌落的方法：
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
酵母菌菌落：
湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚。
（3） 实验目的
① 学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板
② 学会进行无菌操作
③ 尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落
（4）材料用具
酵母菌培养液
提供接种用的酵母菌
配制酵母菌固体培养基
马铃薯
葡萄糖（或蔗糖）
蒸馏水
琼脂
天平，小刀，纱布，烧杯，锥形瓶，棉塞、牛皮纸（或报纸）；
皮筋，培养皿，接种环，酒精灯，超净工作台；
高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱和恒温培养箱等；
超净工作台
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
去皮
切块
加水
(1000mL)
加热煮沸
软烂
马铃薯
纱布过滤
加琼脂
（15～20g）
酵母菌
培养基
加水定容
(1000mL)
称取马铃薯
(200g)
马铃薯块
滤液
加葡萄糖/蔗糖
（20g）
调pH
①
②
(5)方法步骤：
第1步 制备培养基 ：配制培养基
制备培养基
接种与分离
培养
培养基——高压蒸汽灭菌
转移
灭菌15~30min
皮筋勒紧
包牛皮纸
放入高压蒸汽灭菌锅中（100kPa、121℃）
酵母菌培养基
锥形瓶
加棉塞
高压蒸汽灭菌锅
1. 避免因水蒸气凝结而浸湿棉塞。
2. 避免再次污染
第2步 灭菌
培养皿——干热灭菌
灭菌2h
几层牛皮纸包紧
放入干热灭菌箱（160～170℃）
5～8套培养皿
干热灭菌箱
培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。
1
拔出锥形瓶的棉塞。
2
将瓶口迅速通过火焰。
3
用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿（10～20mL），立即盖上皿盖。
4
等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。
1.防止培养基水分蒸发。
2.防止皿盖上冷凝水滴落，造成污染。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
不能完全打开，以免杂菌污染培养基。
第3步 倒平板：
（1）培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
（2）整个操作在酒精灯火焰旁附近进行，避免周围环境中微生物的污染。
（3）平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（4）倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
（5）将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
倒平板的注意事项
倒平板注意事项：
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
分离的方法
平板划线法
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。
连续划线法
分区划线法
(5)方法步骤：
第2步 接种和分离酵母菌
平板划线法的具体操作
1
将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。
2
在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。
将试管口通过火焰。
3
4
在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。
防止温度太高杀死菌种。
平板划线法的具体操作
5
将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。
6
灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。
7
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。
1. 为什么每次划线之前都要灼烧接种环？
思考 · 讨论
第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物。
第二次及以后划线前：杀死上次划线时残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端。
2. 划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？
杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。
思考 · 讨论
3. 划五次线，接种环需要灼烧几次？
1
2
3
4
5
第1次划线
接种环灭菌
第2次划线
接种环灭菌
第3次划线
接种前接种环灭菌
接种环灭菌
第4次划线
接种环灭菌
第5次划线
接种环灭菌
需要灼烧6次。
4. 第二次及以后的划线时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
5. 为什么不能将最后一次的划线与第一次的划线相连？
将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单菌落。
线条末端酵母菌的数目比起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使酵母菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到单菌落。
思考 · 讨论
菌种经数次划线后培养，分离得到单菌落。
第一次划线酵母菌数量多，最后一次划线酵母菌数量少，首尾相连，不容易得到单个菌落。
第3 步 培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
警示
对照：说明培养基是否被杂菌污染。
(5)方法步骤：
未接种的培养基是不能有菌生长的，如果有菌生长，则说明受到污染或者灭菌不彻底。
正确的做法是，配好培养基之后，将培养基放在温箱里培养24小时观察，长菌的培养基应该丢弃，无菌生长的方能使用。这样做的另一个好处是将培养基水蒸发干，不会对微生物的培养产生影响。
1. 在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
2. 如果你观察到了不同形态的菌落，你认为可能是由哪些原因引起的？
可能是接种的菌种不纯、培养基灭菌不彻底，或接种过程中感染了杂菌。
结果分析与评价（p13）
有一段时间，水果“酵素”风靡各地。水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水，密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。
“酵素”就是“酶”的另一种说法。
其制作是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。
其中可能有糖类（包括一些简单的糖和膳食纤维等）、蛋白质（包括多种酶）、有机酸等成分。
不存在它独有的、特殊的营养物质。
其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。
思维训练评估论点的可信程度
水果“酵素”是什么？
其制作原理是什么？
其中可能含有哪些成分？
其是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？
其中的所有成分都有益于人体健康吗？
1. 微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。
（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ）
（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。 （ ）
（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ）
×
√
×
练习与应用（p14）
一、概念检测
练习与应用（p14）
2. 日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
干制—降低食品的水分含量；
腌制—通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；
低温储存—通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
一、概念检测
二、拓展应用
1. 某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
（1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有 。
培养皿和培养基
（2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？
接种
练习与应用（p14）
（3）从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。
可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
二、拓展应用
1. 某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
练习与应用（p14）
2. 某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210 r/min， 230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
（1）摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？
二、拓展应用
意味着培养液中O2含量不同。
（2）从图中数据你可以得出什么结论？其原因是什么
培养液中O2含量越高，酵母菌种群密度越大。
（3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定
这时候已经达到了环境容纳量。
课堂小结
本堂课你学到了哪些知识？画出概念图进行总结
微生物的基本培养技术
无菌技术
煮沸消毒法
纯培养
培养基
固体培养基
接种分离
平板划线法
稀释涂布平板法
种类
液体培养基
营养
水、碳源、氮源、无机盐
消毒
巴氏消毒法
灭菌
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
五分钟查落实
【要语必背】
1.培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源等。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。
2.培养基的种类：按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。
3.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。
4.培养基灭菌常采用湿热灭菌法，培养皿灭菌常采用干热灭菌法，接种环和涂布器灭菌常采用灼烧灭菌法。
5.菌落是指分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
6.平板划线操作的第一步是灼烧接种环，目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
【长句表达】
1.培养基中加入氮源的原因是培养基中的氮元素是___________________
___________________。
2.无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。消毒是指_______________________________________________________
_____________。灭菌则是指______________________________________
_____________________。
3.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_______________________________________。
微生物合成蛋白质、
核酸等物质所必需的
使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部
一部分微生物
使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微
生物，包括芽孢和孢子
在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少
4.平板冷凝后，将平板倒置的原因：_______________________________
_________________________________________________。
5.在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因：_________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________。
既可以避免培养基中的水分过快地
挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
　　　划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落

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