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参考答案：
1．B
2．D
3．D
4．A
5．B
6．D
7．D
8．C
9．B
10．D
11．A
12．D
13．B
14．C
15．D
16．C
17．D
18．D
19．B
20．C
21．B
22．D
23．D
24．D
25．B
26．(1)高压蒸汽灭菌/湿热灭菌法
(2) 皿底 50℃ 倒置
(3) 随着划线次数的增加使细菌的数量逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖形成的菌落 a、b、d
(4) 氧气 无 50
27．(1) 离心、振动、电激
(2)植物组织培养
(3) 幼龄动物组织或胚胎 胰蛋白酶 病毒诱导
(4) 相应的抗原 内质网和高尔基体 骨髓瘤细胞
28．(1) iPS细胞 诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可来源于病人自身体细胞
(2)复性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，引物和模板不完全配对
(3) T4DNA连接酶 Pvit Ⅱ切割的是平末端，而EcoR Ⅰ切割的是黏性末端，而T4DNA连接酶既能连接平末端，又能连接黏性末端 不含
(4) Tet诱导的启动子 发出绿色荧光2023-2024学年第二学期高二年级期末考试生物试卷
总分:100分; 考试时间: 75 分钟;
一、单项选择题(共50分，此题包括25 小题，每小题2分，每道题只有一项正确答案)。
1.镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是( )
A.作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌
B.“淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程
C.接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌
D.后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳
2.某兴趣小组为了探究自然发酵和人工发酵制作泡菜的过程中亚硝酸盐含量随着发酵时间的变化差异，其中人工发酵是在自然发酵条件下添加一定量的干酪乳酸菌。实验过程中，测量结果如图所示。下列叙述错误的是( )
A.该实验的自变量是干酪乳酸菌的有无和发酵时间
B.发酵早期，人工发酵制作的酸菜，食用相对较安全
C.自然发酵条件下，杂菌较多，酸菜品质变动较大
D.两种发酵条件下，发酵装置的气密性情况相同即可
3.马奶酒是具有民族传统特色的高级活性保健饮料，其发酵机理是乳酸菌和酵母菌进行乳酸发酵及酒精发酵。马奶酒酵母菌株不同于一般微生物优先利用葡萄糖，而是在生长起始期就能优先利用半乳糖，然后同时利用这两种糖进行生长。下列有关叙述错误的是 ( )
A.一般发酵食品中的酵母菌细胞中不能合成半乳糖酶
B.纯化马奶中“特殊”酵母菌常用的方法之一是平板划线法
C.马奶酒酵母菌株能优先利用半乳糖的原因是其发生了变异
D.乳酸菌和酵母菌都可进行乳酸发酵和酒精发酵
4.腐乳是我国传统发酵食品，具有很高的营养价值。某科研机构研究了腐乳生产过程中不同浓度的食盐对腐乳中氨基酸含量的影响。下列叙述正确的是 ( )
A.发酵时间和食盐浓度均可影响腐乳中氨基酸的含量
B.腐乳生产过程中，发挥主要作用的微生物是曲霉菌
C.经过发酵后，豆腐中的蛋白质均会被分解为氨基酸
D.食盐浓度越高，对杂菌的抑制越强，对制作腐乳越有利
5.利用传统发酵技术制作的果酒、果醋、腐乳、泡菜极大地丰富了人们的饮食，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是( )
A.用白萝卜制作泡菜的过程中，定期揭开泡菜坛盖子可缩短腌制时间
B.变酸的酒表面有白膜出现，是醋酸菌大量繁殖形成的
C.制作果醋、泡菜、果酒的过程中应先通气培养微生物，再密封发酵
D.腐乳制作过程主要利用的是毛霉产生的淀粉酶和脂肪酶
6.某生物兴趣小组制作泡菜时，对发酵早期发酵液中的乳酸菌含量和亚硝酸盐含量进行了测定，结果如图。分析错误的是 ( )
A.前2 天乳酸菌含量变化慢，可能是坛子内的 抑制了乳酸菌繁殖
B.前4天亚硝酸盐的含量变化快，可能是其他细菌大量繁殖导致的
C.第6天后亚硝酸盐含量变化缓慢，可能是大量乳酸抑制杂菌活动
D.为减少泡菜中亚硝酸盐的含量，该泡菜腌制8天左右食用最佳
7.某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下，下列说法不正确的是( )
A.图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，能生长的微生物可能不能合成脲酶
B.若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为2.7，5号试管共稀释了 10 倍
C.图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的
D.若仅以4号试管接种培养基计数，5g该土壤中含分解尿素菌的估算数目是 个
8.基于 K-B纸片扩散法进行金黄色葡萄球菌的抗生素药敏实验，分别用含青霉素(P)、克林霉素 (DA)、红霉素(E)、氯霉素 (C)的药敏纸片处理菌板，抑菌圈的直径大小如图所示。下列叙述错误的是( )
A.由图可知，金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性大小为
B.若想增加金黄色葡萄球菌对P的耐药性，需从抑菌圈边缘挑选菌落，多次重复实验
C.在抗生素的选择作用下，金黄色葡萄球菌产生了耐药性变异
D.金黄色葡萄球菌产生耐药性对人类来说是有害变异，对其本身来说是有利变异
9.下表为某培养基的配方，下列叙述正确的有 ( )项
成分 蛋白胨 葡萄糖 K HPO 伊红 美蓝 蒸馏水 琼脂
含量 10g 10g 2g 0.4g 0.065g 1000mL 20g
①物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基
②培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
③该培养基调节合适的pH和消毒后就可以接种使用
④该培养基可以用于培养 HIV病毒
A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项
10.赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌在科研领域中具有广泛的应用价值。下图表示科研人员利用野生大肠杆菌，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变菌株的流程图，其中A、B、C 为操作步骤。已知野生大肠杆菌可以在普通培养基上生长繁殖，但赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌不能，下列叙述错误的是( )
注：原位影印是指用无菌绒布轻盖在已经长好菌落的培养基②上，然后不转动任何角度，将②上的菌落按原位“复印”至新的培养基③和④上。
A.培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂
B.野生大肠杆菌在紫外线的照射下，可提高基因突变的频率
C.培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸
D.培养基④上，乙是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来
11.为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48h，结果如图所示。下列说法错误的是( )
A.配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，还要调节pH 才能用于接种
B.待高温灭菌后的培养基冷却至50℃左右后，再进行倒平板
C.在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染
D.手掌上的某些微生物在该培养基上并没有生长繁殖形成菌落
12.微生物纯培养的两种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，如图所示。下列相关叙述正确的是( )
A.图2 中每克土样中的菌体数目为 个
B.进行平板划线操作之前，需要用酒精对接种环进行灭菌处理
C.用稀释涂布平板法测微生物数量时，平板上的统计结果一般用活菌数来表示
D.为获得纯化培养后的菌种，图1中最好选择Ⅲ区的菌落进行挑取
13.细菌的运动性在其致病性和耐药性方面有重要作用，可采用穿刺接种的方法(如图)研究细菌的运动能力。在培养基中添加无色指示剂，脱氢酶可催化指示剂变成红色。下列叙述正确的是 ( )
A.穿刺针不需要进行灭菌处理
B.红色区域越大，细菌的运动能力越强
C.红色区域的大小与细菌的繁殖速度无关
D.琼脂浓度不影响微生物的运动范围
14. 2023年 4月我国新版《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2022)正式实施,其中对微生物的检出要求如下表。兴趣小组的同学们对某蓄水池进行细菌总数测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。结合下表分析，下列说法错误的是( )
序号 指 标 限 值
1 总大肠杆菌/(MPN/100mL 或 CFU/100mL) 不应检出
2 大肠埃希氏菌/(MPN/100mL 或CFU/100mL) 不应检出
3 菌落总数/(MPN/100mL 或CFU/100mL) 100
MPN 表示最可能数, CFU 表示菌落形成单位
A.可采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法对取水样的三角瓶灭菌
B.培养基中应加入伊红—亚甲蓝以区分大肠杆菌和其他细菌菌落
C.应将0.1mL 稀释水样滴加到培养基表面并用涂布器涂抹均匀
D.应将平板倒置后在适宜条件下培养，以减少培养基污染的几率
15.将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌(菌株a和b)进行如下图所示实验。下列叙述正确的是( )
A.实验中接种至培养基方法是平板划线法
B.基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落
C.基本培养基中包含菌株a和b的生长因子
D.菌株a和b需要的生长因子有所不同
16.科研人员为了培育出在口感、甜度、水分等方面兼备荔枝A 和荔枝B的优点的三倍体荔枝，进行了如图所示的实验流程。下列关于该流程的叙述，错误的是( )
A.获得单倍体需用到植物组织培养技术
B.获得原生质体需用到纤维素酶和果胶酶
C.获得杂种细胞需用到灭活的病毒
D.获得三倍体荔枝需经历脱分化和再分化
17.植物经过基因突变产生了某一优良性状，可采用植物组织培养技术将这一优良性状保留下来，下列相关叙述错误的是( )
A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压
B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化
C.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因有可能不同
D.在植物组织培养全过程中应提供充足的光照、营养和适宜的温度、pH等
18.狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉且其细胞中的黄酮类化合物可入药。某科研小组利用植物细胞工程对狼爪瓦松进行培养，过程如图所示。下列有关分析正确的是 ( )
A.过程①前用酒精对植物甲进行消毒，就能保证外植体不被污染
B.过程⑥中黄酮类化合物可通过植物细胞培养获得，该过程体现了植物细胞的全能性
C.·除了植株丙，植株乙、丁细胞核遗传物质相同
D.过程③一般需要给予愈伤组织适当强度的光照
19.研究人员以某病毒的外壳蛋白A为抗原制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关叙述正确的是( )
A.限制酶主要来源于原核生物，因为原核生物中含有限制酶的识别序列
B.可用抗原——抗体杂交法检测转基因工程菌是否成功翻译出蛋白A
C.将纯化的蛋白A多次注射到小鼠体内，是为了促进小鼠产生更多的抗体
D.杂交瘤细胞筛选和单克隆抗体筛选的目的和原理均相同
20.用DNA 重组技术可以赋予生物新的遗传特性，在此过程中需要使用多种工具酶，其中3种限制酶的切割位点如图所示。下列叙述错误的是( )
A.限制酶和DNA 连接酶作用的均是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键
B. EcoRI酶切割后的DNA 片段可以用T4DNA 连接酶连接
C. EcoRV 酶切割后的DNA片段可以用E. coliDNA 连接酶连接
D. 经 EcoRI 酶和MunI 酶切割后产生的两个DNA片段可进行连接
21.检测和筛选是生物技术中的重要环节。下列叙述正确的是( )
A.制备单克隆抗体过程中第一次和第二次筛选的原理相同
B.基因工程中利用含抗生素的培养基筛选出的受体细胞不一定含有重组质粒
C.检测目的基因能否稳定遗传的关键是看目的基因是否成功构建为基因表达载体
D.只要检测到目的基因成功表达出蛋白质，就证明基因工程取得成功
22.基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等方面，展示出广阔的前景。下列有关基因工程的成果及应用的叙述不正确的是( )
A.基因工程能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等
B.用转基因动物作为器官移植的供体时，导入某种调节因子以抑制抗原决定基因的表达
C.基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物
D.基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因表达发挥功能，以达到治疗的目的
23.重组PCR 技术是一项新的PCR 技术，可将原来两个不相关的DNA 连接起来，成为一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1 基因片段，用重组PCR 技术构建了LTB-ST1 融合基因，融合基因的制备过程如图所示。下列相关分析正确的是( )
A.PCR 实验中，离心管、缓冲液和蒸馏水使用前要进行消毒
B.在设计引物时，P 、P 和P 的部分碱基都能互补配对
C.得到的多个杂交链都能作为模板用来延伸子链，以扩增融合基因
D.由杂交链延伸生成融合基因的过程中，不需要再另外添加引物
24.生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的有 ( )
①用花药培养得到单倍体植株需要用到植物组织培养技术
②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用
③胚胎移植作为胚胎工程的最后技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用
④PCR 反应过程可以在PCR 扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定 PCR 的产物
⑤利用基因工程技术的生物反应器，可以让哺乳动物批量生产相应的药物
⑥蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础，逆中心法则进行，就可以改造或制造新的蛋白质
A. 2项 B. 3项 C. 4项 D. 5项
25.实验人员将一段外源 DNA 片段(包含约850个基因)与丝状支原体(一种原核生物)的DNA进行重组后，植入大肠杆菌，制造出一种“新的生命”。该生物能够正常生长、繁殖。下列有关该技术应用的叙述中，错误的是( )
A.该技术可以制造某些微生物，用于生产药品、制造染料、降解有毒物质等
B.由于存在生殖隔离，因此人造生命进入自然界并不会破坏生物多样性
C.人造生命扩散到自然界，有可能造成环境安全性问题
D.此项技术可能被用来制造生物武器，从而危及人类安全
二、非选择题 (共50分,每空2分)。
26.(18分)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：
(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，及时对培养基进行分装，并进行 灭菌。
(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入在培养皿的 上做好标记的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约为 的培养基倒入培养Ⅲ混匀，冷凝后 培养。
(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。操作时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是 。下列关于相
关操作叙述合理的有 。
a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株供应。
(4)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和 供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用 型血细胞的计数板计数5个中格中的细胞数，理论上 色细胞的个数应不少于 才能达到每毫升5×10 个活细胞的预期密度。
27.(16 分)如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：
(1)若 A、B 是植物细胞，在细胞融合之前已处理，除去了细胞壁；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是 。
(2)若 A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用 技术把D培养成植株。
(3)若 A、B是动物细胞，一般取自 ，然后用 使其分散开来；A、B到C的过程中常用的但不能用于植物细胞培养的手段是 。
(4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了 。注射后小鼠身体产生了相应的免疫反应，生成的抗体过程有哪些具膜细胞器直接参与 ， 图中B为 。
28.(16分)基因Pdxl对胰腺定向发育和成熟有重要作用。科研人员将Pdx1 基因构建到含Tet诱导型启动子的基因表达载体(GV347)中，转入小鼠胚胎干细胞(ES)，以期实现Pdx1基因在胚胎干细胞中的定时和定量表达。回答下列问题：
(1)科研人员通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为 ，其应用前景优于胚胎干细胞的原因是 (答出1点即可)。
(2)从胰腺细胞中提取DNA，利用特定引物PCR 扩增获得Pdxl基因，电泳检测发现除目标序列外还有很多非特异性条带，请从引物的角度分析出现此情况的原因可能是 。
(3)基因表达载体(GV347)如图所示，相关限制酶的识别序列及切割位点如表所示(注：箭头表示切割位点)。科研人员利用两种酶切割Pdxl基因和质粒，为了成功构建基因表达载体，应该选择 (填“E. coli DNA 连接酶”或“T DNA 连接酶”)将Pdx1基因和质粒连接起来，理由是 。为使基因表达载体能成功表达Pdx1蛋白和绿色荧光蛋白的融合蛋白，应将 (填“含”或“不含”) 终止子的Pdx1 基因插入到GV347的限制酶切割位点。
名称 识别序列和切割位点
PvitII CAG↓CTG GTC↑GAC
EcoRI G↓AATTC CTTAA↑G
注：Tet诱导的启动子在四环素存在的条件下，可以激活基因表达。
(4)将重组载体导入ES，然后筛选出成功导入载体的ES。当四环素存在时，有利于 RNA聚合酶与 结合，驱动下游序列转录出mRNA.从细胞水平检测Pdxl基因是否成功翻译的方法是在荧光显微镜下观察ES，若 ，则说明目的基因成功翻译。

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