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1．2 基因工程的基本操作程序
复习目标
1、简述基因工程原理及基本操作程序。
2、尝试设计某一转基因生物的研制过程。
复习重点
基因工程基本操作程序的四个步骤。
复习难点
（1）从基因文库中获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因。
预学案
一、目的基因的获取：
1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。
2．获取目的基因的常用方法
(1)从基因文库中获取目的基因
①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。
基因组文库：含有一种生物的 基因
②种类
部分基因文库：含有一种生物的 基因，如 文库。
③建立目的：为获得大量的目的基因作准备。
④目的基因的获取
根据目的基因的有关信息：基因的 序列 ( http: / / www.21cnjy.com )、基因的 、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。
(2)利用PCR技术扩增目的基因。
①PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。
②条件：有一段已知目的基因的 序列。
③过程：目的基因DNA受热 后解旋为 ，与 结合，然后在 的作用下进行延伸形成DNA。
④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数)
(3)化学合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以通DNA合成仪用化学方法直接 。
例1、下列获取目的基因的方法中需要模板链的 ( http: / / www.21cnjy.com )是：①从基因文库中获取目的基因；②利用PCR技术扩增目的基因；③反转录法；④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成
A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③
二、基因表达载体的构建
1．表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因等。
2．启动子：位于基因的 ，它是
的部位，驱动基因转录产生mRNA。
3．终止子：位于基因的 ，终止 。
4．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以 给下一代；使目的基因能够 和发挥作用。
5．标记基因：作用是 受体细胞是否含有目的基因。
6．由于受体细胞有植物、动物、微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。
例2、科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂 ( http: / / www.21cnjy.com )的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。由以上过程推知，作为目的基因的运载体应具备的结构是
A．目的基因、启动子 B．目的基因、终止子
C．目的基因、启动子、终止子 D．目的基因、启动子、终止子、标记基因
三、将目的基因导入受体细胞
(一)转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和 的过程。
(二)常用方法：
1．将目的基因导入植物细胞
(1)农杆菌转化法（常用方法）
①农杆菌特点：易感染 ( http: / / www.21cnjy.com ) 植物和裸子植物，对大多数___________植物没有感染能力；农杆菌中的Ti质粒上的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体的DNA上。
②转化过程：目的基因插入 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。
(2)基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。
(3)花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的）
2．将目的基因导入动物细胞
(1)方法： 注射技术（最常用、最有效的方法）。
(2)操作程序：目的基因表达载体 ( http: / / www.21cnjy.com )→取卵(受精卵) →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的 内发育→新性状动物。
3．将目的基因导入微生物细胞
(1)原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。
(2)转化过程： 处理细胞→ 细胞→重组表达载体DNA分子溶于
中与感受态细胞混合→ 细胞吸收DNA分子（需一定的 ）。
例3、采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是
①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导人细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵
A、①② B、②③ C、③④ D、①④
四、目的基因的检测与鉴定
1．检测　 (1)检测方法： 技术、抗原——抗体杂交等。
(2)内容　 ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 ，方法： ；
②检测目的基因是否转录出 ，方法： ；
③检测目的基因是否翻译成 ，方法：
2．鉴定：除了上述的 检测外，有时还需要进行 水平的鉴定，如 鉴定、抗病鉴定等。
【拓展】DNA复制与PCR技术的比较：
例4、左上图是将人的生长激素基因导 ( http: / / www.21cnjy.com )入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：
(1)目前把重组质粒导入细菌细胞时 ( http: / / www.21cnjy.com )，效率还不高，导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒。以下步骤可鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就导入了质粒A或重组质粒，反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是 。
(2)若把通过鉴定证明导入了普通质粒A或重组 ( http: / / www.21cnjy.com )质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，会发生的现象是 。
原因是
____________________________________________________________________________
(3)导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么
检测案
（一）、选择题：
1、下列属于获取目的基因的方法的是 ( http: / / www.21cnjy.com )①利用mRNA反转录形成；②从基因组文库中提取；③从受体细胞中提取；④利用PCR技术；⑤利用DNA转录；⑥人工合成
A．①②③⑤ B．①②⑤⑥ C．①②③④ D．①②④⑥
2、不属于目的基因与运载体结合过程的是
A．用一定的限制酶切割质粒,露出黏性末端 B．用同种限制酶切割目的基因,露出黏性末端
C．将切下的目的基因插入到质粒的切口处 D．将重组DNA引入到受体细胞中进行扩增
3、分辨基因工程是否成功是通过
A．提取目的基因 B．基因表达载体的构建
C．目的基因导人受体细胞 D．目的基因的检测与鉴定
4．下列不属于获取目的基因的方法的是
A．利用DNA连接酶复制目的基因 B．利用DNA聚合酶复制目的基因
C．从基因文库中获取目的基因 D．利用PCR技术扩增目的基因
5．哪项不是基因表达载体的组成部分
A．启动子 B．终止密码 C．标记基因 D．目的基因
6．在胰岛素的基因与质粒形成重组DNA ( http: / / www.21cnjy.com )分子的过程中,下列哪组是所需要的：①同一种限制酶切割两者②不需同一种限制酶切割两者③加入适量的DNA连接酶④不需加DNA连接酶
A．①③ B．①④ C．②④ D．②③
7．下列说法中正确的是
A．基因表达载体的构建方法是一致的
B．标记基因也叫做抗生素基因
C．显微注射技术是最为有效的一种将目的基因导入植物细胞的方法
D．大肠杆菌是常用的微生物受体
8、下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法
A．基因枪法 B．显微注射法 C．农杆菌转化法 D．花粉管通道法
9．基因工程中常用的受体细胞不包括
A．人体细胞 B．动物细胞 C．植物细胞 D．微生物细胞
10．基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞。下列不属于这样做的原因的是
A．结构简单，多为单细胞 B．繁殖速度快
C．遗传物质含量少 D．性状稳定，变异少
11．要检测目的基因是否成功的插入了受体DNA中，需要用基因探针，基因探针是指
A．用于检测疾病的医疗器械 B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
C．合成一球蛋白的DNA D．合成苯丙羟化酶的DNA片段
12．基因工程的正确操作步骤是：
①构建基因表达载体；②将目的基因导入受体细胞；③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求；④取目的基因
A．③②④① B．②④①③ C．④①②③ D．③④①②
13．下列有关基因工程技术的叙述，正确的是
A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和基因进入受体细胞的载体
B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞主要是因为细菌繁殖快、遗传物质少
D．只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达
14．基因工程中不会出现
A．DNA连接酶将黏性末端的碱基连接起来 B．限制性内切酶可用于目的基因的获取
C．目的基因必须有载体导入受体细胞 D．人工合成目的基因不用限制性核酸内切酶
15、下列哪项不是基因工程技术
A．基因转移 B．基因扩增 C．基因检测 D．基因表达
（二）、填空题：
16．根据下列所给材料回答问题：
材料一 把人的胰岛素基因拼接到大肠杆菌的质粒上，然后导入大肠杆菌内，产生出人的胰岛素。
材料二 把萤火虫的荧光基因转入烟草体内，培育荧光的烟草。
材料三 有人把蜘蛛产生丝腺蛋白的基因转入羊的细胞屯，在羊分泌的乳汁中加入某种物质后，可抽出细丝，这种细丝可望用作手术的缝合线。
(1)上述生物新品种的产生运用了 技术。
(2)一种生物的基因在另一种生物体 ( http: / / www.21cnjy.com )内能够表达，而不影响其他基因的表达，这说明基因是有________效应的 片段，具有一定的 性；同时可以说明各种生物共用一套 。
(3)上述技术所用的工具酶有 。
(4)材料三中所用缝合线与普通缝合线相比有何优点 。
(5)可遗传的变异分为三种： 、 、 ，而基因工程改变一个物种的基因属于 。
(6)从上述所给的材料，不能得出哪一结论
A．动植物之间可以相互转基因 B．真核生物与原核生物之间可以相互转基因
C．基因工程可以定向地改变生物的基因 D．转基因生物的出现对生物的进化是有利的
17．人体受病毒刺激后，可以产生干扰素，干扰素分为、、三类，1980年，生物学家成功破译了干扰素的全部遗传信息，并运用插入质粒的方法，用大肠杆菌生产得到干扰素可以用于治疗肝炎和肿瘤，回答下列问题：
(1)上述材料中涉及的现代生物技术有 。
(2)在利用大肠杆菌生产干扰过程中，目的基因是 ，所用载体是 。表达载体的结构组成包括 、 、 、 。
(3)目的基因在大肠杆菌体内表达时，必须经过 和 过程。

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