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　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
学习目标：
1.简述尿素在生产实践中的作用及分解尿素的细菌的作用。
2.研究培养基对微生物的选择作用。
3.进行土壤中分解尿素细菌的分离与计数。
4.简述活菌计数技术的应用。
预学案
　　一、理论基础
1.筛选菌株
(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供 ( http: / / www.21cnjy.com )有利于①生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时②或③其他微生物生长。
(2)选择培养基:在微生物学中,将允许④　 ( http: / / www.21cnjy.com )种类的微生物生长,同时⑤或⑥其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。
2.统计菌落数目:常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的⑦足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个⑧。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在⑨的平板进行计数。此外,测定微生物数量的常用方法还有⑩直接计数。
3.设置对照:设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需有。
二、实验设计
土壤中某样品细菌的分离与计数实验的操作步骤
1.取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右,再取样。
2.制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3.微生物的与观察:将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取上清液,转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中,依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养,及时观察和记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中,观察能否产生颜色反应。
4.细菌的计数:当菌落数目稳定时,选取菌落数在的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
探究案
　知识点一: 筛选菌株
1.筛选菌株的原理是什么 请举例说明。
2.简述筛选菌株的方法。
3.请简述选择培养基的制备原理、制备方法、用途及实例。
　　知识点二:统计菌落数目和设置对照
1.如何对样品中微生物进行计数 试简述相关方法的原理及缺点。
2.如何计算每克样品中的菌落数
3.在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时,A同学从对应的106倍稀释的培 养基中筛选出大约230个菌落,但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约100个菌落。试分析其原因并设计探究方案,根据结果得出结论。
检测案
　1．　下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(　　)。
A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水
C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水
D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
2．　用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是(　　)。
A.涂布了一个平板,统计的菌落数是230
B.涂布了两个平板,统计的菌落数是215和260,取平均值238
C.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是21、212和256,取平均值163
D.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是210、240和250,取平均值233
3.本课题以土壤中的细菌为研究对象,要达到的目的是(　　)。
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌　②从土 ( http: / / www.21cnjy.com )壤中分离出能够分解氨的细菌　③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌　④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌
A.①③　　　　　　　　B.②④　　　　　　　　C.①②　　　　　　　　D.③④
4.下列说法错误的是(　　)。
A.因为土壤中各类微生物的数量不同,所以为获得不同类型的微生物,要按不同的稀释倍数进行分离
B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围不同
C.只有得到了3个或3个以上菌落数目在30~300的平板,才说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数
D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落
5.下列说法不正确的是(　　)。
A.科学家从70~80 ℃热泉中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶
B.若统计到某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5,可以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比,土壤中的微生物数量最大,种类最多
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