资源简介

2024年6月12日高中生物作业
学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
一、单选题
1．下列关于微生物培养的叙述，正确的是（ ）
A．高压蒸汽灭菌后，务必在常压、60摄氏度以下的温度时再打开灭菌锅
B．纯化培养时，在培养皿皿盖做标记后倒置在恒温培养箱中静置培养
C．涂布接种时，需要将涂布器浸在酒精后再酒精灯外焰引燃后，立刻涂布
D．用平板划线法对微生物进行分离计数，也可直接用显微镜对某些微生物计数
2．用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素敏感性的实验，是在某病原菌均匀分布的平板上，铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养。图示为培养的结果，其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域。下列分析正确的是（　　）
A．在图示固体培养基上可用平板划线法或稀释涂布平板法接种病原菌
B．未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生抗性变异
C．形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物较敏感
D．不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响
3．富含营养的培养基和适宜的环境既为目的菌生长提供了条件，也为杂菌繁殖提供了有利条件。防止杂菌污染是获得微生物纯净培养物的关键，抗生素能够抑制细菌的生长。下列相关叙述错误的是（ ）
A．对操作者的双手和操作台采用的消毒方法可以不同
B．培养微生物的培养基一般利用高压蒸汽进行灭菌
C．进行大肠杆菌纯化实验时，接种过程需全程在酒精灯火焰旁进行
D．培养大肠杆菌时可以添加适量抗生素以达到抑制杂菌污染的目的
4．下列是关于“检测土壤中微生物的数量”实验操作的叙述，其中错误的是（ ）
A．配制好培养基后，先倒平板再进行高压蒸汽灭菌
B．测定不同类型的微生物数量，选择的稀释梯度范围不同
C．统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少
D．选择菌落数在30～300之间的实验组平板进行计数
5．平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ）
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
6．对培养基、试管和接种环采取的灭菌方法依次是（ ）
A．高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌
B．干热灭菌、灼烧灭菌、灼烧灭菌
C．高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌
D．高压蒸汽灭菌、干热灭菌、干热灭菌
7．DDT（C14H9Cl5）是20世纪上半叶曾在世界范围内被广泛使用的杀虫剂，因难以降解而被禁用。土壤中的某些微生物能降解DDT，分离、纯化DDT降解菌的过程如图。下列说法错误的是（ ）
A．通常采用干热灭菌法对培养皿进行灭菌处理
B．选择培养和纯化培养时培养基应以DDT为唯一碳源
C．划线纯化时，划线顺序为③区→②区→①区
D．保存菌种时，减少菌种的传代次数可减少菌种衰退
8．寄生性支原体是肺炎、支气管炎等常见的病原体，也是动物细胞培养难以根除的“绝症”。在分离培养寄生性支原体时，需要先培养动物细胞后再接种；而培养独立生存的支原体时则不需要。下列表述正确的是（ ）
A．支原体细胞内的生物大分子不能使二苯胺试剂变蓝
B．培养独立生存的支原体一般不需要添加动物血清
C．稀释涂布平板法不能用于支原体的计数
D．支原体细胞在清水中不会吸水涨破
9．棉花是一种重要的经济作物，但是棉花全株含有对动物生长繁殖存在潜在危害的有毒物质——棉酚，限制了以棉花秸秆为原料来生产青贮饲料的应用。研究人员试图以棉花田的土壤为分离基质，利用以棉酚为唯一碳源的培养基，分离出高效分解棉酚的菌株。下列叙述不正确的是（　　）
A．稀释涂布平板法或平板划线法均可用来分离纯化棉酚分解菌
B．分离过程中所用的以棉酚为唯一碳源的培养基属于选择培养基
C．分离过程中所用的接种工具、培养工具以及培养基都需要高压蒸汽灭菌
D．对分离纯化得到的菌株进行计数时可采用稀释涂布平板法或显微计数法
10．下列有关微生物实验室培养的说法正确的有（ ）
A．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、消毒、倒平板
B．分离能分解纤维素的细菌时要以纤维素作为培养基中唯一的碳源
C．培养不同微生物的培养基时都要将pH调至中性或微碱性
D．稀释涂布平板法和平板划线法均可以统计待测菌液中的活菌数目
11．如图所示，科研人员利用诱变方式选育可高产β-胡萝卜素的三孢布拉霉负菌。未突变菌不能在含有β-紫罗酮的培养基上生长。随β-胡萝卜素含量增加，菌体颜色从黄色加深至橙红色。图甲为选育菌种及获得β-胡萝卜素的流程，相关叙述正确的是（　　）
A．要得到图乙所示的菌落，可用平板划线法进行②操作，然后培养
B．经过程①紫外线照射的三孢布拉霉负菌都能在含β-紫罗酮培养基上生长
C．进行③操作时，应选择较大的橙红色菌落中的菌株继续接种培养
D．能在添加了β-紫罗酮的乙上长成菌落的细菌，其遗传物质不一定都发生了改变
12．下列关于消毒和灭菌的说法，错误的是（ ）
A．人们常用化学药剂对水源和双手进行消毒 B．接种室和超净工作台可用紫外线进行消毒
C．培养基转移到锥形瓶后可以采用湿热灭菌 D．接种环可在火焰充分燃烧层进行灼烧灭菌
二、多选题
13．通过平板划线法接种某种微生物后，在适宜条件下经培养得到的结果如图所示。下列关于接种所需培养基的制备以及接种过程的叙述，错误的是（ ）
A．培养基灭菌后需要先调整到适合该微生物生长的pH再倒平板
B．倒平板并冷却凝固后倒置，可防止皿盖的冷凝水污染培养基
C．在平板划线前、后均需要对接种环进行灭菌
D．用平板划线的方法接种并培养后可以统计平板中的单菌落数
14．屠宰场废弃血污不经过处理直接排放，会对环境造成污染。传统的处理方法有填埋法和焚烧法等。填埋法易造成地表环境、地下水资源污染。焚烧法处理也会造成大气污染，且废弃物中所含的蛋白资源不能得到有效利用。研究人员以居宰场血污堆积土壤为分离基质，利用血平板培养基（添加了动物血液），分离出了高效降血红蛋白的菌株。并初步用于降解废弃血液、生产氨基酸液态肥料。下列叙述正确的是（ ）

A．上述菌株分离纯化过程中用到了稀释涂布平板法和平板划线法
B．对分离纯化得到的菌株培养后进行计数，只能采用稀释涂布平板法
C．血平板培养基上透明水解圈大的菌落分泌的蛋白酶的活性往往较低
D．利用该菌株降解废弃血液可在保护环境的同时实现资源的可持续利用
15．微生物接种到平板培养基上方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法等。下列相关叙述中不正确的是（ ）
A．平板划线法只能用于微生物的分离纯化，稀释涂布平板法只能用于微生物的计数
B．平板划线法使用无菌接种针接种，稀释涂布平板法使用无菌涂布器涂布
C．两种方法接种后，通常需要在皿盖上注明培养基种类、培育日期等
D．两种方法接种后，都需要将平板倒置放入恒温培养箱培养
16．我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，在15℃振荡培养3小时；②梯度稀释后将样品涂布在TYS培养基中（0．5%胰蛋白胨、0．1%酵母提取物、1．5%琼脂），15℃培养7天；③挑取生长的菌落，进行划线，15℃培养后选择不同形态的菌落进行进一步的培养、鉴定和保藏。下列说法正确的是（ ）
A．人造海水、仪器等在使用前不需要进行灭菌处理
B．TYS培养基是含有机碳源、氮源的固体培养基
C．涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种
D．分析所有菌落，能还原采样点所有微生物的种类与含量
三、非选择题
17．研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在"科学号"考察船对中国南海科考中，科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。回答下列问题：

(1)研究者先制备富集培养基，然后采用 法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养，除了稀释涂布平板法，还可采用 法。据图分析，拟杆菌新菌株在以 为碳源时生长状况最好。
(2)研究发现，将上述样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是 （答一点即可）
(3)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有
18．金色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物，实验小组从腊肉中取样，分离出了耐酸的金色葡萄球菌，下图表示分离筛选金色葡萄球菌的过程。回答下列问题：
(1)培养基中的蛋白胨为微生物提供的营养物质主要是 ，实验室对培养基灭菌的方法为 。在取样后培养的过程中，在摇床上振荡培养的目的是 （答出1点）。
(2)MSA培养基能用于金色葡萄球菌的筛选和鉴定。与MSA液体培养基相比，MSA固体培养基特有的成分是 。金色葡萄球菌在MSA固体培养基上会出现稳定的菌落特征，菌落特征包括 （答出2点）。挑选合适的菌落进行平板划线，平板划线的目的是 。
(3)在工业生产上，常常将酶或细胞固定化。将酶固定化一般采用的方法是 ，将细胞固定化一般采用的方法是 。
19．中国是名副其实的“胃病大国”。究其原因除了国人的饮食习惯、生长环境外，幕后推手其实是——幽门螺旋杆菌（Hp），它主要寄生在食道、胃及十二指肠等处，可导致胃炎、消化道溃疡、胃癌等疾病，主要通过消化道传播。某科研小组在胃病患者体内采集样本制成菌液后进行培养和分离，其基本步骤为：配制培养基→灭菌→X→接种→培养→观察。请回答下列问题：
(1)获得纯净的微生物培养物（幽门螺旋杆菌）的关键是 。
(2)步骤X为 ，需要在酒精灯火焰旁操作，待培养基冷却凝固后，要将培养皿 。
(3)为分离得到单菌落，接种的方法有 和 ，其中前者还可以对菌落进行计数。菌落是 。
(4)计数时若在每个平板上均涂布0.1ml处理后的菌液，平板上长出的菌落数平均值为210个，由此估计得到菌液中细菌细胞数为2.1×107个/mL，则菌液稀释倍数为 。
(5)请写出可以预防幽门螺旋杆菌传染的健康生活方式 （1点即可）。
20．在某地的农业生产中，研究人员发现了一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，且长期使用会导致土壤被污染。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下图1程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂是一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定是该除草剂的培养基不透明）。请回答下列问题。


(1)要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，所配制培养基的特点是 。
(2)图1中，通过接种环在固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，操作全过程中需对接种工具灼烧灭菌 次。
(3)在固体培养基中分离培养出目的菌后，需通过测量 的直径，比较它们的比值以确定其降解除草剂的能力从而筛选出最佳目标菌株。
(4)图2是某小组从土壤中分离出目的菌的部分过程示意图。该接种方法在涂平板前需对菌液进行稀释，当平板上的菌落数在 之间时，则表明该稀释比例符合要求。若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上菌落数分别是38、42、40，且对照的空白平板上 ，则可以推测1g土壤中的活菌数约为 个。
(5)利用图2方法所统计的菌落数往往比活菌的实际数目要少，这是因为 。
(6)科研人员用射线处理该细菌，获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如下表：
接种的菌种 一般培养基 实验处理及结果
A 不生长 添加营养物质甲，能生长
B 不生长 添加营养物质乙，能生长
A+B 能生长 无需添加营养物质甲和乙，能生长
将突变株A和B混合接种于一般培养基中，无需添加营养物质甲和乙也能生长，原因可能是 。
21．PHB是一类与化学合成塑料性质相似的可降解聚合物，有着广阔的应用前景。许多微生物能产生PHB并储存于细胞中。尼罗红是一种荧光染色剂，可与PHB反应，在紫外灯下显红色荧光。研究人员按照如图所示的流程从活性污泥中分离得到PHB高产菌株，请回答下列相关问题：

(1)常采用 法对实验中所用到的培养基进行灭菌，②过程所用的培养基除了含有必需的营养物质外，还含有尼罗红和 。
(2)②过程中采用的接种方法是 ，③过程应挑选 的单菌落进一步培养。
(3)研究小组利用筛选获得的某种PHB高产菌株进行相关实验，结果如下表：
氮源 细胞干重（g/L） PHB的浓度（gL）
蛋白胨 2.97 0.88
牛肉膏 3.15 0.99
尿素 0.12 0.01
硫酸铵 0.79 0.13
请为该实验拟定一个课题名称： 。由实验结果可知，最适氮源是牛肉膏，判断依据是 。若以牛肉膏作为氮源，为进一步确定PHB高产菌株生产PHB的最适氮源浓度，请简要写出实验思路： 。
(4)使用PHB代替化学合成塑料生产相应产品，优点是 （答出1点即可）。
第1页 共4页 ◎ 第2页 共4页
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参考答案：
1．A
【分析】高压灭菌锅是利用电热丝加热水产生蒸汽，并能维持一定压力的装置。在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在100KPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下维持15~30min就可以很快杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、高压蒸汽灭菌后，待灭菌锅内在常压、温度降至60℃以下后，方可取出锅内物品，以免因温度过高而骤然降温导致玻璃器皿炸裂，A正确；
B、纯化培养时，在培养皿皿底做标记后倒置在恒温培养箱中静置培养，这样方便观察，B错误；
C、涂布接种时，需要将涂布器浸在酒精后再酒精灯外焰引燃后，待其冷却再进行涂布接种，否则高温会杀死菌种，C错误；
D、可用稀释涂布平板法对微生物进行分离计数，也可直接用显微镜对某些微生物计数，平板划线法能够用于微生物分离，不能用于微生物计数，D错误。
故选A。
2．D
【分析】微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、图示固体培养基上需要菌液均匀分布，故在该固体培养基上采用的是稀释涂布平板法，不能使用平板划线法，A错误；
B、未出现抑菌圈可能的原因是该病原菌对该抗生素不敏感，这种变异不是在接触抗生素后存在的，抗生素只能起着选择作用，B错误；
C、形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物敏感度小，C错误；
D、 不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响，D正确。
故选D。
3．D
【分析】无菌技术（1）关键：防止外来杂菌的入侵。（2）具体操作①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
【详解】A、对操作者的双手和操作台采用的消毒方法可以不同：对操作者的双手可用酒精消毒，而操作台可用紫外线进行消毒，A正确；
B、培养微生物的培养基一般利用高压蒸汽进行灭菌，是湿热灭菌的一种，B正确；
C、为避免杂菌污染，进行大肠杆菌纯化实验时，接种过程需全程在酒精灯火焰旁进行，C正确；
D、培养大肠杆菌时加入抗生素会导致大肠杆菌被杀死而导致实验失败，D错误。
故选D。
4．A
【分析】①平板培养基配制的基本流程为：计算→称量→溶化→调节pH→灭菌→倒平板。②稀释的目的是为了让每个微生物的个体充分分离，以便在平板培养时能得到由单个微生物繁殖而形成的单菌落。在土壤中，不同微生物本身的密度（个/g）不同，密度大的需要更高的稀释度才能达到分离的目的；各种微生物的生长速度不同，生长快的微生物需要更高的稀释度，以免菌落面积扩大太快造成菌落之间粘连。③用稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。④利用稀释涂布平板法对微生物计数，要注意稀释倍数的选取，为了保证结果准确，通常选择菌落数在30～300之间的平板进行计数。
【详解】A、配制好培养基后，应先进行高压蒸汽灭菌，然后再倒平板，A错误；
B、土壤中不同微生物本身的密度（个/g）不同，加之生长速度也不同，为了能够分离得到由单个微生物繁殖而来的单菌落，在测定不同类型的微生物数量时，应选择的稀释梯度的范围不同，B正确；
C、当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，导致统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少，C正确；
D、对微生物进行计数时，为了保证结果准确，通常选择菌落数在30～300之间的实验组平板进行计数，D正确。
故选A。
5．D
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
2、按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
3、消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；
B、平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；
C、使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；
D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。
故选D。
6．C
【分析】1、灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌，常用的方法有灼烧灭菌（主要适用于金属接种工具）、干热灭菌（主要适用于需要保持干燥的玻璃器具）和高压蒸汽灭菌（主要适用于培养基的灭菌）；
2、消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。
【详解】培养基一般用高压蒸汽灭菌、培养皿一般用干热灭菌、接种环一般用灼烧灭菌，ABD错误、C正确。
故选C。
7．C
【分析】灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的芽孢。常用的灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
【详解】A、对培养皿等玻璃器皿可采用干热灭菌法灭菌，A正确；
B、本实验是分离、纯化DDT降解菌，因此应以DDT为唯一碳源，使DDT降解菌能生存，而不能降解DDT的菌体因缺少碳源而不能存活，B正确；
C、据图可知，①区域的菌体密集，而②③部位的菌体形成了单个菌落，因此划线纯化时，划线顺序为①区→②区→③区，C错误；
D、减少菌种的传代次数，可减少菌种发生自发突变的概率，防止菌种退化，有利于保持菌种优良性状，D正确。
故选C。
8．B
【分析】支原体属于原核生物，没有以核膜为界限的细胞核，没有细胞壁，只有核糖体一种细胞器。
【详解】A、支原体属于原核生物，其遗传物质是DNA，DNA在水浴加热条件下能使二苯胺试剂变蓝，A错误；
B、动物细胞培养培养液需要加一些天然成分，比如血清，但培养独立生存的支原体时则不需要先培养动物细胞后再接种，所以培养独立生存的支原体一般不需要添加动物血清，B正确；
C、稀释涂布平板法可以用来纯化菌株，也可以用来计数，C错误；
D、支原体细胞没有细胞壁，其在清水中会吸水涨破，D错误。
故选B。
9．C
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长， 随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、稀释涂布平板法或平板划线法均可用于接种纯化，故稀释涂布平板法或平板划线法均可用来分离纯化棉酚分解菌，A正确；
B、分离过程中所用的以棉酚为唯一碳源的培养基， 只有能分解棉酚的微生物能生长，故该培养基属于选择培养基，B正确；
C、分离过程中所用的接种工具、培养工具可以用灼烧灭菌等方法，C错误；
D、对分离纯化得到的菌株进行计数时可采用稀释涂布平板法(用于计数活菌)或显微计数法(计数时活菌和死菌一起被计数)，D正确。
故选C。
10．B
【分析】1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调至酸性，培养细菌时需要将培养基pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时需要提供无氧条件。
2、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A错误；
B、分离能分解纤维素的细菌时要以纤维素作为培养基中唯一的碳源，不能以纤维素为碳源的微生物无法生存，从而筛选出能分解纤维素的细菌，B正确；
C、培养霉菌时，需将培养基的pH调至酸性，C错误；
D、平板划线法不能用于统计待测菌液中活菌的数目，D错误。
故选B。
11．C
【分析】1、微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是纯化的菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂适体培养基的表面，进行培养。
2、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
【详解】A、图乙所示的菌落，利用的是稀释涂布平板法，A错误；
B、过程①紫外线照射的作用是利用物理因素诱导基因突变，由于突变具有低频性和不定向性，被照射的三孢布拉霉负菌不可能都能在含β-紫罗酮培养基上生长，B错误；
C、橙红色的菌体为高产菌，进行③操作时，应选择较大的橙红色菌落中的菌株继续接种培养 ，C正确；
D、能在添加了β-紫罗酮的乙上长成菌落的细菌是经过紫外线照射后的高产菌，其遗传物质都发生了改变，D错误。
故选C。
12．C
【分析】消毒是采用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物；灭菌是指使用较强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、人们常用酒精擦拭双手进行消毒，用氯气消毒水源，A正确；
B、接种室和超净工作台等表面消毒，可用紫外线进行消毒，B正确；
C、培养基采用湿热灭菌法进行灭菌，具体做法为将配制好的培养基转移到锥形瓶后，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压灭菌锅中进行灭菌，C错误；
D、接种环属于金属用具，可在火焰充分燃烧层进行灼烧灭菌，D正确。
故选C。
13．AD
【分析】1、制备培养基的步骤：配制培养基→调节pH→灭菌→倒平板。
2、培养基倒置培养的目的：防止培养基水分过快挥发；防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
3、平板划线法在第一次划线之前要灼烧接种环，目的是杀死接种环上的微生物。第二次及以后划线之前要灼烧接种环，目的是杀死接种环上的残留菌种。划线结束后也要灼烧接种环，目的是杀死接种环上的微生物，防止污染环境和感染操作者。
4、接种、分离、纯化微生物，获得单菌落的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。微生物数量测定的方法：稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。
【详解】A、制备培养基应先调节pH再灭菌，防止先灭菌再调节pH引入杂菌，A错误；
B、培养基倒置培养的目的：防止培养基水分过快挥发；避免皿盖上的水珠落入培养基造成污染，B正确；
C、平板划线法在第一次划线之前、第二次及以后划线之前、划线结束后均需要灼烧接种环灭菌，C正确；
D、平板划线法不能用于微生物的计数，D错误。
故选AD。
14．AD
【分析】微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。该方法可用于微生物的计数。
【详解】A、根据图中培养皿上的菌落可知，分离纯化过程中先后用到了稀释涂布平板法和平板划线法，A正确；
B、对分离纯化得到的菌株培养后进行计数，除了采用稀释涂布平板法，还可以用显微镜直接计数法，B错误；
C、平板培养基上添加了动物血液，能降解血红蛋白的菌株周围会出现透明圈，且透明水解圈大的菌落分泌的蛋白酶的活性往往较高，C错误；
D、根据题干信息可知，利用该菌株可降解废弃血液，同时生产氨基酸液态肥料，可在保护环境的同时实现资源的可持续利用，D正确。
故选AD。
15．ABC
【分析】稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
【详解】A、平板划线法和稀释涂布平板法均可用于微生物的分离纯化，但只有稀释涂布平板法能用于微生物的计数，A错误；
B、平板划线法使用无菌接种环接种，稀释涂布平板法使用无菌涂布器涂布，B错误；
C、两种方法接种后，通常需要在皿底上注明培养基种类、培育日期等，C错误；
D、两种方法接种后，都需要将平板倒置放入恒温培养箱培养，D正确，
故选ABC。
16．BC
【分析】无菌技术的关键是防止杂菌污染。蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，故蛋白胨的作用有提供碳源和氮源。
【详解】A、人造海水、仪器等在使用前需要进行灭菌处理，不灭菌可能有杂菌污染，A错误；
B、在TYS培养基中，含有“0．5%胰蛋白胨、0．1%酵母提取物、1．5%琼脂”可知，TYS培养基是含有机碳源、氮源的固体培养基，B正确；
C、涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种，C正确；
D、可能由于培养条件限制，有一些菌种无法培养出，因此不能还原采样点所有微生物的种类与含量，D错误。
故选BC。
17．(1) 湿热灭菌（或高压蒸汽灭菌） 平板划线 纤维素
(2)某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存（或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活）
(3)耐低温
【分析】1、进行微生物纯培养时，人们需要按照微生物对营养物质的不同需求配制培养基，满足微生物对水、无机盐、碳源、氮源以及pH、O2、特殊营养物质(如维生素)的需求。
2、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术主要包括消毒和灭菌。消毒较为温和，仅杀死物体表面或内部的部分微生物；灭菌较为强烈，要杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3、微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。操作方法各不相同，但是核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。
【详解】（1）培养基配制后通常采用湿热灭菌（或高压蒸汽灭菌法）进行灭菌。接种时，可以采用稀释涂布平板法或平板划线法，将菌种分散在固体培养基上，经过培养得到单菌落，从而获得纯净培养物。分析图中曲线可知，在以纤维素为碳源的培养基中，细胞数量最多，可推知拟杆菌新菌株在以纤维素为碳源时生长状况最好。
（2）根据题意，深海冷泉中存在的某些微生物，只有利用冷泉中的特有物质才能生存，或者只能在深海冷泉的特定环境中才能存活，故在缺少深海冷泉特有物质或缺少特定环境的情况下，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍可能有很多微生物不能被分离筛选出来。
（3）深海冷泉温度较低，故生活在其中的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，应具有耐低温的特性，才能高效降解多糖，保证拟杆菌的正常生命活动所需。
18．(1) 碳源、氮源和维生素 高压蒸汽灭菌法 提高培养液的溶氧量、使培养液中的微生物与营养物质充分接触
(2) 琼脂 菌落的大小、形状、颜色和隆起程度 纯化菌种，获得单菌落
(3) 化学结合法（或物理吸附法） 包埋法
【分析】培养基通过人工加入微生物的生长所必需的各种成分，包括水，碳源，单元，无机盐和生长因子各种营养物质配置而成的养料。微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。由于实验目的，培养基种类及容器等不同，一般分为平板划线法和稀释涂布平板法。以获得生长良好的纯种微生物。酶固定化一般采用的方法有物理吸附法、化学结合法等，固定化细胞通常采用包埋法，将细胞包埋在能固化的载体中。
(1)
蛋白胨为微生物的生长繁殖提供的营养物质主要是碳源、氮源和维生素。实验室对培养基灭菌的方法一般是高压蒸汽灭菌法。振荡培养能提高培养液的溶氧量、有利于培养液中的微生物与营养物质充分接触。
(2)
固体培养基要加入琼脂作为凝固剂。挑选合适的菌落进行平板划线的目的是纯化菌种，获得单菌落。
(3)
将酶固定化一般采用的方法是化学结合法或物理吸附法，将细胞固定化一般采用的方法是包埋法。
19．(1)防止杂菌污染
(2) 倒平板 倒置（倒过来放置）
(3) 稀释涂布平板法 平板划线法 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成肉眼可见的，有一定形态结构的子细胞群体
(4)104
(5)不与感染者共用餐具（分开吃饭、分开使用餐具等）及生活物品（毛巾、杯子等）；不与感染者有身体的密切接触；避免唾液传染；使用清洁水源等
【分析】稀释涂布平板计数法的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。统计平板上的菌落数，就能推测样品中大约含有多少活菌。其计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M（C代表某一稀释度下平板生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）。
【详解】（1）获得纯净的培养物，一定要避免杂菌污染，从而获得单细胞培养而来的纯净微生物。
（2）步骤X是在灭菌之后，应是倒平板，然后接种。培养基凝固后，将培养皿倒置培养，防止冷凝水回流造成污染。
（3）接种微生物的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释涂布平板法的一个菌落来自于一个活菌，可以据此进行计数。菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成肉眼可见的，有一定形态结构的子细胞群体。
（4）根据菌落的计算公式：菌落数=（C/V）×M，现在菌落数（细胞数）是2.1×107个/mL，C是210个，V是0.1ml，则M=10000，即104。
（5）为预防幽门螺旋杆菌传染，不与感染者共用餐具（分开吃饭、分开使用餐具等）及生活物品（毛巾、杯子等）；不与感染者有身体的密切接触；避免唾液传染；使用清洁水源等。
【点睛】通过Hp情境，考查倒平板操作、纯化微生物的方法、微生物的计数方法。
20．(1)以该除草剂为唯一氮源
(2) （连续）划线 6/六
(3)透明圈和菌落
(4) 30-300 无菌落或者菌落数为0 4.0×107
(5)当两个或多个菌体连在一起生长时培养基上形成的是一个菌落
(6)突变株A为突变株B提供营养物质乙，突变株B为突变株A提供营养物质甲
【分析】分析题图：该实验是从土壤中筛选分离能降解除草剂的微生物的过程。该实验要将土壤稀释处理，以除草剂为唯一氮源的培养基筛选土壤微生物，以菌落计数法进行统计计数。
【详解】（1）分析题意可知，本实验目的是筛选能降解该除草剂的微生物，由于能降解该除草剂的微生物能以该除草剂作为氮源，而其它微生物则不能利用除草剂作为氮源，因此可配置以该除草剂作为唯一氮源的选择性培养基，以筛选和分离能降解除草剂的微生物。
（2）图1中采用的是平板划线法进行菌种接种，所用接种工具为接种环，过接种环在固体培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面；图中共划了5个区域，每次接种前后都需要灼烧灭菌，因此共需要对接种工具灼烧灭菌6次。
（3）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，因此可通过测量透明圈和菌落的直径，比较它们的比值以确定其降解除草剂的能力从而筛选出最佳目标菌株。
（4）稀释涂布平板法统计数目时，应选择30-300之间的进行统计；故若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上菌落数分别是38、42、40，且对照的空白平板上无菌落或者菌落数为0（说明培养基制备合格，未被污染），图中将1g土样加入到99ml无菌水中，稀释了100倍，此后又经过稀释，稀释倍数是105倍，则可以推测1g土壤中的活菌数约为（38+42+40）÷3÷0.1×105=4.0×107个。
（5）据图可知，图2中属于稀释涂布平板法接种，由于当两个或多个菌体连在一起生长时培养基上形成的是一个菌落，因此这样统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
（6）根据题意可知，突变株A在普通培养基中不生长，加营养物质甲可以生长，说明突变株A不能合成突变株A必需的营养物质甲，同理突变株B不能合成突变株B必需的营养物质乙，生物体内的生化反应都需要酶的参与，不能反应就说明缺少相应的酶；而A+B接种就可以生长，说明A可以提供B所必需的营养物质乙，B可以提供A所必需的营养物质甲。
21．(1) 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 琼脂
(2) 稀释涂布平板法 在紫外灯下呈现红色荧光
(3) 探究不同氮源对PHB高产菌株菌体生长（细胞干重）和PHB浓度的影响 选用牛肉膏作氮源时细胞干重和PHB的浓度均最大 制备一系列含不同浓度牛肉膏的培养基分别培养PHB高产菌株，测定不同组中PHB产量，确定最适氮源浓度
(4)可降解、原料可再生
【分析】稀释涂布平板法：将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
【详解】（1）高压蒸汽灭菌常用于对培养基进行灭菌；②过程为接种到固体培养基上，固体培养基需要用到琼脂作为凝固剂。
（2）②得到的菌落分布较均匀，为稀释涂布平板法接种的结果；尼罗红是一种荧光染色剂，可与PHB反应，在紫外灯下显红色荧光，③过程应挑选在紫外灯下呈现红色荧光的单菌落进一步培养。
（3）研究小组利用筛选获得的某种PHB高产菌株进行相关实验，结合表格可知，可以探究不同氮源对PHB高产菌株菌体生长（细胞干重）和PHB浓度的影响；选用牛肉膏作氮源时细胞干重和PHB的浓度均最大，因此最适氮源是牛肉膏；为进一步确定PHB高产菌株生产PHB的最适氮源浓度，可以制备一系列含不同浓度牛肉膏的培养基分别培养PHB高产菌株，测定不同组中PHB产量，确定最适氮源浓度。
（4）PHB是一类与化学合成塑料性质相似的可降解聚合物，可降解、原料可再生，比化学合成塑料好。
答案第1页，共2页
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