资源简介

1.2微生物的培养技术及应用——高二生物学人教版（2019）选择性必修三同步课时作业
一、单选题
1．如表为某培养基的配方，有关叙述正确的是( )
成分 牛肉膏 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 青霉素 琼脂 蒸馏水
含量 10g 10g 2g 0.4g 0.065g 1万单位 适量 1000mL
A.此培养基是人工合成的液体培养基
B.能在此培养基上生长的大肠杆菌，细胞核中有抗青霉素的基因
C.此培养基既有鉴别作用又有选择作用
D.若除去牛肉膏，该培养基可以用来培养固氮菌
2．需要在火焰旁操作的有( )
①土壤取样
②称取土壤
③稀释土壤溶液
④涂布平板
⑤微生物的培养
A.①②③④⑤ B.②③④ C.③④⑤ D.②③④⑤
3．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌( )
A.接种环、吸管、培养基、接种室 B.吸管、接种环、培养基、接种箱
C.培养基、吸管、接种环、接种箱 D.培养皿、吸管、培养基、双手
4．细菌很小，大部分真菌的个体也比较小，但在培养基上，它们会迅速繁殖，形成肉眼可见的菌落。下列有关叙述正确的是( )
A.每个菌落由大量不同种的菌体集合而成
B.一个菌落是由一个细菌或真菌细胞构成的
C.菌落特征可作为鉴别细菌与真菌的依据
D.一般在液体培养基中培养细菌
5．如图为两种纯化微生物的接种方法。下列相关描述正确的是( )
A.①为平板划线法，所用接种工具为接种环
B.②为稀释涂布平板法，所用接种工具为接种针
C.①②方法均可进行微生物的分离与计数
D.②方法计数的微生物数量往往比实际数目多
6．下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法的叙述，不正确的是( )
A.利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法
B.稀释涂布平板法计数时选取菌落数目稳定时的记录作为结果
C.两种计数方法均能在计数的同时观察到所研究微生物菌落的形态特征
D.当菌落数目稳定时，一般选取菌落数在30～300的且差异不大的平板进行计数
7．下面关于微生物的纯培养操作中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是( )
A.每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌
B.连续划线的目的是获得单个微生物纯培养形成的纯培养物
C.图甲中的a区域为划线的起始区域
D.蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行
8．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，研究人员对于无菌技术则围绕着如何避免杂菌污染展开讨论。下列操作中错误的是( )
A.灭菌常用方法有湿热灭菌，干热灭菌，灼烧灭菌等
B.在接种箱或超净工作台的使用前，可用紫外线照射30min来进行消毒
C.若培养皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养皿培养微生物
D.接种环，接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌
9．在分离、纯化细菌的实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如下图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是( )
A.每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌
B.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
C.接种环共灼烧了4次
D.不能将a区和d区划线相连
10．高压蒸汽、酒精擦拭、火焰灼烧三种处理方法分别适用于哪些材料（或用具）的杀菌处理( )
A.接种环、培养基、超净工作台 B.接种环、操作者的双手、培养基
C.培养基、操作者的双手、接种环 D.接种环、超净工作台、培养基
11．有关倒平板的操作不正确的是( )
A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上
B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C.将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上
D.等待平板冷却凝固后需要倒过来放置
12．微生物培养最基本的要求是无菌操作，下列对培养基、培养皿、接种环、双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法的正确顺序依次是( )
①化学药物消毒
②高压蒸汽灭菌
③干热灭菌
④紫外线消毒
⑤灼烧灭菌
⑥巴氏消毒法
A.⑤③⑤①④⑥ B.③②⑤④①⑥ C.②③⑤①④⑥ D.②②⑤④①⑥
13．一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物，可使培养基变得不透明）在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下图程序选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是( )
A.分离目的菌所用的培养基应该是以除草剂为唯一碳源的固体培养基
B.步骤D的两种菌落氮源不相同，应该选择透明圈与菌落直径比值大的菌落进行扩大培养
C.若需要调节培养基pH，应该在培养基灭菌后进行
D.步骤C所采用的接种方法可用来对活菌进行计数
14．为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，菏泽某中学的同学们进行了相关实验。将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方50cm处，然后对着培养基讲话1min或咳嗽2次，再进行微生物培养和计数，下列说法错误的是( )
A.接种前要判断固体培养基是否被污染，不用接种无菌水培养检测
B.实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照
C.实验者对培养基进行处理后，放入37℃恒温培养箱中培养1～2天
D.培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征确定微生物的数量
15．赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌在科研领域中具有广泛的应用价值。下图表示科研人员利用野生大肠杆菌，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变菌株的流程图，其中A、B、C为操作步骤。已知野生大肠杆菌可以在普通培养基上生长繁殖，但赖氨酸营养缺陷型突变大肠杆菌不能，下列叙述错误的是( )
注：原位影印是指用无菌绒布轻盖在已经长好菌落的培养基②上，然后不转动任何角度，将②上的菌落按原位“复印”至新的培养基③和④上。
A.培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂
B.野生大肠杆菌在紫外线的照射下，可提高基因突变的频率
C.培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸
D.培养基④上，乙是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来
二、多选题
16．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，正确的是( )
A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B.碳源物质也是该微生物的能源物质
C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D.水是该微生物的营养要素之一
17．研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中（+代表含抗生素，+多少代表抗生素浓度，-代表不含抗生素），对两种抗生素药性分析。在37℃环境下培养24小时后，细菌生长情况如图。下列说法错误的是( )
A.为排除杂菌的影响，倒平板前需对培养基采用高压蒸汽灭菌
B.该实验使用稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养
C.长期使用抗生素A不会增加结核杆菌的抗药性基因频率
D.与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B可显著增强对结核杆菌的抑制作用
三、读图填空题
18．③号试管稀释倍数为______。
19．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请回答有关问题。
（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用_______________________的培养基进行分离。
（2）若取土样6g，应加入_______mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成101～107不同浓度的土壤溶液。将103～107倍的稀释液分别吸取0.2mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板。将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计菌落数，结果如下表，其中_______倍的稀释比较合适，由此计算出每克土壤中的菌落数为__________。
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数 （个） 1号平板 478 367 270 26 5
2号平板 496 354 264 20 8
3号平板 509 332 252 29 3
（3）若研究尿素分解菌的群体生长规律，可采用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_______________________。将分离纯化后的单个菌落进行液体培养，可采用定期取样的方法进行计数。若以一个大方格（体积为0.1mm3）有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为50，菌液稀释倍数为102 ，那么原菌液的菌群密度为________个/mL。
20．塑料在自然界中很难降解，俗称“白色污染”。人们偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有黄粉虫幼虫和成虫爬出。受此启示，研究者在黄粉虫幼虫肠道中成功分离出能够降解聚氯乙烯（PVC，化学式（C2H3Cl）n）的菌株。现欲对黄粉虫幼虫消化道中的微生物进行分离并比较各菌株的降解能力。请结合图示操作完善实验步骤。
（1）将黄粉虫放入饲养盒中，饥饿2天后，加入剪碎的聚氯乙烯膜片饲喂驯化12天。将饲喂驯化后的虫体进行表面消毒处理后，用解剖刀划破虫体，从中挑出肠道放入灭菌研钵中，加入1-3mL____充分研磨制备肠道液，再将肠道液加到定量的富集培养液中培养，富集培养的目的是____。
（2）将黄粉虫肠道菌富集培养液加入以聚氯乙烯粉末为唯一____的选择培养液中，适宜条件驯化培养12天。
（3）将一定量的黄粉虫的肠道菌驯化培养液分别接种到选择培养基上，每个样品做3个平板，同时为了检测培养基灭菌是否合格，还需增加一个____培养基作为对照，并在25℃的恒温培养箱中培养5-7天。根据菌落的特征挑取菌株，在培养基上反复多次划线分离、纯化，4℃保存备用，此步骤用到的接种方法是____。
（4）接种前将筛选出的聚氯乙烯降解菌在加入定量聚氯乙烯膜片的基础培养液中培养5天，测定聚氯乙烯膜片的失重率，初步比较各菌株的降解能力。
据此推测聚氯乙烯膜片的失重率与____呈正相关。
参考答案
1．答案：C
解析：A、培养基中加入了琼脂作为凝固剂，因此属于固体培养基，A错误；B、能在此培养基上生长的大肠杆菌，含有青霉素的抗性基因，但大肠杆菌没有细胞核，B错误；C、依用途划分，加入青霉素说明该培养基为选择培养基，而加入伊红美蓝能够鉴别大肠杆菌，C正确；D、若除去牛肉膏，该培养基还有青霉素等不可以用来培养固氮菌，D错误。故选C。
2．答案：B
解析：①土壤是微生物的天然培养基，土壤取样时不需要在酒精灯含有旁操作，①错误；②称取土壤时，为避免杂菌污染，需要在酒精灯火焰旁进行操作，②正确；③稀释土壤溶液时为避免杂菌污染，需要在酒精灯火焰旁进行，③正确；④进行涂布平板接种操作时需要在酒精灯火焰旁进行，④正确；⑤微生物的培养需要在一定温度的恒温箱中进行，⑤错误。综上②③④正确。故选B。
3．答案：B
解析：接种环属于接种用的金属工具，需要用灼烧灭菌；吸管在使用前需保持干燥，需要用干热灭菌；培养基应该用高压蒸汽灭菌；接种室、接种箱需要用紫外线照射灭菌；双手可以用医用酒精消毒；综上所述，B符合题意，ACD不符合题意。故选B。
4．答案：C
解析：一个或多个细菌或真菌繁殖后形成的肉眼可见的子细胞群体称为菌落，A、B错误；菌落的形态、大小等可作为鉴别细菌和真菌的依据，C正确；一般在固体培养基中培养细菌，D错误。
5．答案：A
解析：A、图①纯化微生物的接种方法为平板划线法，所用接种工具为接种环或接种针，A正确；
B、图②纯化微生物的接种方法为稀释涂布平板法，所用接种工具为涂布器，B错误；
C、稀释涂布平板法可进行微生物的分离与计数，而平板划线法不能用于微生物的计数，C错误；
D、稀释涂布平板法计数的微生物数量往往比实际数目少，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的仍然是一个菌落，D错误。
故选A。
6．答案：C
解析：A、利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法，该种方法计数不能区分菌株的死活，A正确;B、稀释涂布平板法计数时选取菌落数目稳定时的记录作为结果，避免相应的菌落在统计时被遗漏，B正确;C、稀释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特征，显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征，C错误;D、当菌落数目稳定时，一般选取菌落在30~300的且差异不大的平板进行计数，D正确。故选C。
7．答案：C
解析：A、平板划线法中每次划线前都要灼烧接种环，保证菌种来自于上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止污染环境、感染接种者，A正确;B、连续划线可以将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单个微生物纯培养形成的纯培养物，B正确，C、图甲中a对应的区域出现了单个菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，C错误;D、为了防止空气中杂菌的污染，蘸取菌液和划线都要在酒精灯火焰旁进行，D正确。故选C。
8．答案：D
解析：A、无菌技术包括消毒和灭菌,灭菌常用方法有湿热灭菌，干热灭菌，灼烧灭菌等，A正确;B、在接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30min来进行消毒，以杀死物体表面或空气中的微生物，B正确;C、空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生，因此若培养皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养基培养微生物，C正确;D、接种环，接种针等用具应在酒精灯火焰的外焰部位灼烧灭菌，D错误。故选D。
9．答案：C
解析：A、平板划线法中每次划线前都要灼烧接种环，保证菌种来自于上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止污染环境、感染接种者，A正确； B、连续划线可以将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单个菌落，B正确； C、接种过程中每次接种前需要灼烧，最后完成后需要灼烧以免污染环境，需要灼烧5次，C错误。D、图中a对应的区域出现了单个菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，二者不能相连，D正确。
故选：C。
10．答案：C
解析：
11．答案：D
解析：
12．答案：C
解析：为了保持培养基中的水分不被烘干，常采用②高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌；培养皿等需要保持干燥的玻璃器皿可以采用③干热灭菌进行灭菌；接种过程中需要对接种环进行⑤灼烧灭菌；操作者双手可用酒精等化学药剂进行消毒，即①化学消毒法；为了杀死空气中微生物，常采用④紫外线消毒法；为防止牛奶中营养成分被破坏，常采用⑥巴氏消毒法处理牛奶，综上所述，对培养基、培养皿、接种环、双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法的正确顺序依次是②③⑤①④⑥，ABD错误，C正确。故选C。
13．答案：B
解析：A、由图可知，该过程用的是固体选择培养基，所用培养基应以该除草剂为唯一氨源，A错误;B、步骤D的两种菌落氨源不相同，无透明圈的菌落以空气中的氮气作为氮源，有透明圈的菌落以该除草剂作为氨源，两者氮源不同，应该选择透明圈半径与菌落半径比值大的菌落进行扩大培养，B正确;C、需要调节培养基pH时应该先对培养基调节pH后进行灭菌，C错误;D、步骤C所采用的接种方法平板划线法，该方法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环接种针的时候也会杀死一部分菌类，因此步骤C所采用的接种方法不能用来对活菌进行计数，D错误。故选B。
14．答案：D
解析：A、要验证培养基是否被污染，应将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当时间，观察是否有菌落产生，A正确；B、该实验中的实验组是正确佩戴口罩的实验者口部前方50cm处，然后对着培养基讲话1min或咳嗽2次，为了确保实验的准确性，还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照，B正确；C、本实验是为了确定正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，而人体的温度约为37℃，因此应设置与人体相同的温度，即在37℃恒温培养箱中培养1～2天，C正确；D、由于不同微生物的菌落特征不同，因此培养结束后可根据菌落的形状、大小、色泽等特征确定微生物种类，但不能确定微生物数量，D错误。故选D。
15．答案：D
解析：A、培养基①是液体培养基，培养基②是固体培养基，培养基①和②在物质种类上的差异在于，前者不含凝固剂，A正确； B、野生大肠杆菌在紫外线的照射下，可提高基因突变的频率，B正确； C、培养基③是不添加赖氨酸的普通培养基，培养基④是添加赖氨酸的普通培养基，所以培养基③和④在物质种类上的差异在于，前者不含赖氨酸，C正确； D、培养基④上，甲能在④普通培养基上生长，但不能在③不添加赖氨酸的普通培养基上生长，因此甲是由赖氨酸营养缺陷型突变菌繁殖而来，D错误。
故选：D。
16．答案：ACD
解析：A、微生物生长繁殖需要氮源,氮源物质为该微生物提供必要的氮素,A正确;B、该碳源是二氧化碳,属于无机物,不能作为微生物的能源物质,B错误;C、无机盐是微生物生长繁殖不可缺少的营养物质,C正确;D、生命活动离不开水,水是该微生物的营养要素之一,D正确。故选B。
17．答案：CD
解析：A、为排除杂菌的影响，倒平板前应该用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，然后冷却到50℃左右倒平板，A正确；B、如图，菌落分布均匀，是利用了稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养，B正确；C、长期使用抗生素A，在抗生素A的选择作用下，结核杆菌的抗药性基因频率可能会增加，C错误；D、根据图中平板上菌落的分布可知，与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B不能增强对结核杆菌的抑制作用，D错误。故选CD。
18．答案：104
解析：略
19．答案：（1）尿素作为唯一的氮源
（2）54；105；1.31×108
（3）将聚集的菌体逐步稀释以便获得（不连续）单个菌落；2.5×108
解析：（1）要分离出分解尿素的细菌,应该用以尿素作为唯一氮源的培养基,属于选择培养基,细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,会使培养基的碱性增强,pH升高,培养基中加入的酚红指示剂将变红,可以鉴定该类微生物。
（2）6 g土样配制成稀释10倍土壤溶液,总体积应为60 mL,因此应加入54 mL的无菌水。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。一般选择菌落数在30 300的平板进行计数。稀释105倍的三个平板中平均菌落数为(277+261+254)+ 3=264 个,故每克土壤中的菌落数为:264 ÷0.2×105=1.32×108个。这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,因为当两个或多个菌落连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
（3）在第二次及以后划线时,总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得(不连续)单个菌落。五个中方格中总菌数为45,则每个小格中菌数为(45÷5÷16) 个,血细胞计数板一个大方格(体积为0.1mm3)中400个小格,菌液稀释倍数为102,那么1mL原菌液的菌群数量为45÷5÷16×400÷10000×102=2. 25×108个。
20．答案：（1）无菌水；增加功能菌株的浓度
（2）碳源
（3）未接种的选择；平板划线法
（4）菌株降解聚乙烯的能力或菌株使聚乙烯膜片减少的质量
解析：
（1）微生物培养过程中要防止其他杂菌的污染，故制备肠道液应加入无菌水。富集培养是将菌液放在液体培养基中培养，能使功能菌株与营养物质充分接触，菌体繁殖速度加快，以增加功能菌株的浓度。
（2）需要筛选出能对聚乙烯地膜具有较强降解能力的功能菌株，可以将昆虫肠道菌富集培养液加入以聚乙烯粉末为唯一碳源的选择培养液中，适宜条件驯化培养。
（3）为了检测培养基灭菌是否合格，还需增加一个未接种的选择培养基作为空白对照。根据菌落的特征挑取生长的菌株，在培养基上反复多次划线分离、纯化，接种方法为平板划线法。
（4）根据该公式可知，聚乙烯膜片的失重率越大，说明聚乙烯膜片减少的质量越多，菌株降解聚乙烯的能力越强，因此聚乙烯膜片的失重率与菌株降解聚乙烯的能力（或菌株使聚乙烯膜片减少的质量）呈正相关。

展开更多......

收起↑