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第2练　微生物的培养技术及应用
A级·大概念对点练
概念点1　微生物的培养技术
1．巴氏杀菌乳是以生牛(羊)乳为原料，经巴氏杀菌等工序制得的液体产品，杀灭了牛奶中有害菌群的同时也保存了营养物质和纯正口感。据国家标准每毫升合格巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50 000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶合适的消毒温度的探究，相关实验操作不合理的是(　　)
A．配制牛肉膏蛋白胨培养基并在121℃、100 kPa条件下处理15～30 min
B．将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、70℃、80℃、90℃恒温水浴锅中处理30 min
C．对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用稀释涂布平板法接种在平板上并在37℃下培养24 h
D．统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为牛奶最适消毒温度
2．微生物实验需要严格的无菌操作以防止污染，下列说法错误的是(　　)
A．紫外线用于实验室空气及实验台表面的消毒
B．无菌技术可有效地避免实验操作者自身被微生物感染
C．为防止DNA污染，PCR用水应来自加热煮沸的自来水
D．使用后的培养基在丢弃前需要灭菌处理
3．稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是(　　)
A．固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板
B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长
C．稀释涂布平板法分离得到的单菌落需进一步划线纯化
D．稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数
概念点2　微生物的选择培养与计数
4．解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(　　)
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
5．一次性口罩的主要成分为聚丙烯纤维(PP)，某科研团队准备从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌。图甲表示PP分解菌分离与计数的过程，6号试管涂布的三个平板的菌落数为550、601、688；7号试管涂布的三个平板的菌落数为58、73、97；8号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。图乙表示在培养基中加入能与PP结合而显色的染色剂，目的菌落周围出现透明圈的情况。下列说法正确的是(　　)
A.图甲、图乙所用培养基分别为选择培养基和鉴别培养基，都以PP作为唯一碳源
B．图甲、图乙所用接种方法分别为稀释涂布平板法和平板划线法，都需在酒精灯火焰旁进行
C．1 g土壤样品中含有PP分解菌的估算数目是7.6×1010个，此数值一般偏大
D．可选择图乙培养基中d/D比值大的PP分解菌作为目的菌种推广使用
B级·素养提能练
6.[2024·大连模拟]某种细菌的培养和分离过程示意图如下。图中①～③表示实验过程，A1、B1、B2和B3代表平板，a1、a2、b1、b2和b3代表菌落，B1～B3中添加了适宜浓度的青霉素。有关叙述错误的是(　　)
A.实验操作过程中必须打开超净台上的紫外灯灭菌
B．平板接种细菌后，放入恒温培养箱中倒置培养
C．原始菌株的①扩大培养应选用液体培养基来培养
D．依图示结果，说明b1、b2、b3具备抗青霉素的特性
7．[2024·泰安模拟]处理生活垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解。下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。相关分析正确的是(　　)
A.筛选所用培养基中的碳源应为牛肉膏和蛋白胨
B．将菌液接种到培养基的方法是平板划线法
C．菌落①与菌落②透明圈大小不同的原因是其对碘液的分解能力不同
D．扩大培养时用不加琼脂的液体培养基效果更好
8．圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌组合可有效将餐厨垃圾中的有机质迅速分解成水和CO2。为制备分解餐厨垃圾的微生物菌剂，实现废物的资源化利用，研究人员采用稀释涂布平板法进行了两菌种的最佳接种量比例的探究实验，结果如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A.由图可知，制备所需菌剂时两菌种的最佳接种量比例为2∶1
B．可采用平板划线法替代稀释涂布平板法统计图中的有效菌落数
C．涂布平板的所有操作都应在酒精灯火焰旁进行，而系列稀释操作不需要
D．制备好的菌剂可接种到固体斜面培养基上并放入4℃的冰箱中临时保藏
9．[2024·菏泽模拟]精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌缺乏将鸟氨酸转化为精氨酸的酶，不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图，过程①将紫外线照射处理过的菌液接种在培养基甲上，待培养至菌落不再增加时，将甲中菌落转移到乙培养基中继续培养得到如图所示的结果。下列相关叙述错误的是(　　)
A．野生型菌液的培养皿中不会出现菌落
B．乙培养基与甲相比可能缺少了精氨酸
C．紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生染色体变异
D．乙中的菌落是通过影印法接种获得的，菌落 B为鸟氨酸发酵的优良菌种
10．[2024·德州高三联考]聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类由微生物合成，在自然条件下可完全降解的生物塑料，可替代传统塑料成为新型生物材料。某科研团队以餐厨垃圾作为碳源，按照如图所示流程从含盐量高的餐厨垃圾渗沥液处理系统中筛选分离出PHA合成能力较强的耐盐菌株，下列相关叙述错误的是(　　)
注：尼罗红是细胞内储存的脂类物质的荧光染色剂，在紫外光的照射下显示红色，灵敏度较高，可用于PHA和非PHA脂类物质荧光显微镜观察，并能在一定程度上将两者区分开来。
A．配制甲培养基时可适当提高培养基的盐浓度，接种后应置于摇床中振荡培养
B．在乙培养基中加入尼罗红荧光染色剂，接种后将培养皿倒置在恒温箱中培养
C．①过程采用稀释涂布平板法，②过程中应挑选有红色荧光的菌落进行培养
D．经过多次稀释和筛选，形成的单菌落中所有细胞的遗传物质均相同
11．[2024·潍坊模拟]营养缺陷型菌株就是在人工诱变或自发突变后，微生物细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，使代谢过程中的某些合成反应不能进行的菌株。这种菌株能积累正常菌株不能积累的某些代谢中间产物，为工业生产提供大量的原料。以下是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。下列说法合理的是(　　)
A.过程①的接种方法为稀释涂布平板法，过程②两种培养基的成分相同
B．进行过程②培养时必须先将丝绒布转印至基本培养基上，顺序不能颠倒
C.统计菌落种类和数量时要每隔24 h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致菌落数目偏大
D．营养缺陷型菌株细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，与核孔复合体的蛋白质空间结构发生改变有关
12．抗生素是某些微生物产生的能杀死或抑制其他微生物生长的化学物质。下图表示从土壤中筛选某种抗生素产生菌的过程，相关叙述正确的是(　　)
A.菌株的透明圈越大，其产生的抗生素抑菌效果越差
B．没有透明圈产生的菌株一定不能产生抗生素
C．接种测试菌3时，接种环可能在灼烧后未冷却
D．测试菌2、5对该菌产生的抗生素具有抗性
13．“掌心对掌心，手心压手背，十指交叉摩，手握关节搓，拇指围轴转，指尖掌心揉，手腕别放过。”七步洗手法可以清除手部的污物和微生物，是预防新冠病毒感染的有效措施之一。某生物实验小组设计了“比较洗手前后手上细菌分布情况”的探究活动：各小组成员分别将拇指在甲组培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将洗净后的拇指在乙组培养基上轻轻按一下。将这两组培养基放入恒温培养箱中，在适宜温度下培养24小时后，统计两组培养基中菌落数目。
(1)该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水，蛋白胨可以为微生物的生长提供____________________________等营养物质，为了使配制的溶液呈固体状态，还需要加入________。为了防止外来杂菌的入侵，可以将培养基放入盛有适量________的高压蒸汽灭菌锅内灭菌15～30 min。
(2)实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的________，该操作应该在酒精灯火焰附近进行，原因是_______________________________________
________________________________________________________________________。
(3)统计甲乙两组培养皿中的菌落，乙组中菌落数比甲少得多，实验结果说明肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物。为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基，洗过的手还应进行________________________________________________________________________
________________________________________________________________________等方法处理(答出1种即可)。
(4)有同学认为乙中也有菌落产生，是因为培养过程受到杂菌污染，请你在本实验的基础上设计一个简单的方案验证他的猜想是否正确，并预期结果和结论。________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
14．聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：
(1)实验小组欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于以________为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是_____________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)该实验小组选取PET浓度为800 mg·L－1的富集液进行系列稀释，分别取10－3、10－4和10－5倍数的稀释液0.1 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为(286、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为________倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是________________________。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养目的菌，原因是__________________________________。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)在保藏PET降解菌菌种时，可采取________的方法进行长期保存。
C级·真题实战练
15.[2023·广东卷]研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　)
A.a点时取样、尿素氮源培养基
B．b点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
16．[2023·全国乙卷]某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆(清水淋洗时菌T不会流失)，在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵(酒精发酵)。实验流程如图所示。
回答下列问题。
(1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是________________________________________________________________。
(2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________(答出1点即可)。
通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有______________________________________________________
________________________________________________________________________(答出2点即可)。
(3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是______________。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是______________。发酵液中的乙醇可用______________溶液检测。
(4)本实验收集的淋洗液中的________可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是
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第2练　微生物的培养技术及应用
1．答案：D
解析：配制的牛肉膏蛋白胨培养基需使用湿热灭菌法灭菌，即在121℃、100 kPa条件下处理15～30 min，将培养基彻底灭菌，以避免培养基上的微生物影响实验结果，A正确；新鲜牛奶应使用巴氏消毒法消毒，为了探究新鲜牛奶合适的消毒温度，可将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、70℃、80℃、90℃恒温水浴锅中处理30 min，并检测不同温度处理下的牛奶中微生物的数量进行比较，B正确；若要统计消毒后的牛奶中微生物的数量，可用稀释涂布平板法接种，即可对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用稀释涂布平板法接种在平板上并在37℃下培养24 h，C正确；由于温度过高会破坏牛奶中的营养成分，所以菌落数最少的组对应的温度不一定是最适的消毒温度，因为还需要考虑牛奶的营养价值不被破坏，D错误。
2．答案：C
解析：紫外线能破坏DNA的结构，故紫外线可用于实验室空气及实验台表面的消毒，A正确；无菌技术可以避免实验材料被感染，也可以避免操作者自身被微生物感染，B正确；为防止DNA污染，PCR用水应为高压的双蒸水，加热煮沸的自来水也仍存在细菌等微生物，C错误；使用后的培养基在丢弃前需要湿热灭菌处理，以免污染环境，D正确。
3．答案：B
解析：固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板，温度过低易凝固且导致污染，温度过高无法操作，A正确；倒好的平板需要冷却后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影响接种后微生物的生长，B错误；稀释涂布平板法分离得到的单菌落仍需进一步划线纯化，以利于菌种保藏，C正确；稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数，D正确。
4．答案：B
解析：根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确；乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确；可以利用该平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以是菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。
5．答案：A
解析：甲是筛选PP分解菌的过程，培养基为选择培养基，图乙表示在培养基中加入能与PP结合而显色的染色剂，鉴别PP分解菌的过程，所以图乙所用培养基为鉴别培养基，都以PP作为唯一碳源，A正确；图甲、图乙所用接种方法都是稀释涂布平板法，都需在酒精灯火焰旁进行，B错误；由于平板计数范围为30～300，故取7号试管中的数量，7号试管的稀释倍数为108，则[（58＋73＋97）÷3]÷0.1×108＝7.6×1010，即1 g土壤样品中含有PP分解菌的估算数目是7.6×1010个，此数值一般偏小，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C不正确；可选择图乙培养基中D/d较大的菌株（降解圈直径D、菌落直径d），因为这一指标越大说明单个菌株分解PP的能力越强，所以可作为目的菌种推广使用，D错误。
6．答案：A
解析：紫外线对人有害，在实验操作过程中，不需要打开超净台上的紫外灯消毒，因为在实验操作前已经打开紫外灯进行过消毒，A错误；平板接种细菌后，放入恒温培养箱中倒置培养，这样可以防止冷凝水滴落到培养基表面，B正确；原始菌株的①扩大培养应选用液体培养基来培养，这样可保证菌体与培养液充分接触，保证营养获取，C正确；依图示结果，由于B1～B3中添加了适宜浓度的青霉素，同时采用了影印法接种，根据培养基上菌落的情况可以看出b1、b2、b3均具备抗青霉素的特性，D正确。
7．答案：D
解析：筛选所用培养基应以淀粉作为唯一碳源，这样才能将降解淀粉的菌种筛选出来，A错误；由培养基上的单个菌落可知，将菌液接种到培养基的方法是稀释涂布平板法，B错误；由于培养基中的唯一碳源是淀粉，而淀粉遇碘液会变蓝，故菌落①与②周围透明圈的大小不同原因可能是两个菌群对淀粉的分解能力不同，C错误；液体培养基可增大溶氧量，也能增加菌种与营养物质的接触面积，故扩大培养时用不加琼脂的液体培养基效果更好，D正确。
8．答案：D
解析：根据图示可知，两菌种的最佳接种量比例为1∶1时，有效菌落数最大，故处理该餐厨垃圾废液，两菌种的最佳接种量比例为1∶1时，效果最佳，A错误；平板划线法不能用于计数，B错误；涂布平板的所有操作和系列稀释操作都应在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，C错误；制备好的菌剂可接种到固体斜面培养基上并放入4℃的冰箱中临时保藏，D正确。
9．答案：C
解析：液体培养基只是用作细菌的快速大量繁殖，如果需要形成菌落，那么应该接种在固体培养基上，因此野生型菌液的培养皿中不会出现菌落，A正确；图甲平板上有A、B两种菌落，乙平板上只有A菌落，据此推测A菌落可能是野生型谷氨酸棒状杆菌，B菌落是精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌，乙培养基中可能缺少精氨酸，B正确；谷氨酸棒状杆菌是原核生物，没有染色体，紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生基因突变，不能发生染色体变异，C错误；乙中的菌落是在甲的基础上采用影印法接种培养后得到的结果，由分析可知，菌落A是野生型菌种，菌落B为精氨酸依赖型菌株，可作为鸟氨酸发酵的优良菌种，D正确。
10．答案：D
解析：由题干可知，实验目的是筛选分离出PHA合成能力较强的耐盐菌株，甲为选择培养基，作用是进行选择培养，配制时应适当提高盐浓度，抑制非目的菌株生长。振荡培养的目的是让目的菌与培养液充分混合，增加目的菌的数量，A正确；选择培养后，将菌液经稀释涂布到平板上，并在平板中加入尼罗红荧光染色剂，在紫外灯下出现红色荧光的菌株代表可产生PHA，接种后将培养皿倒置在恒温箱中培养，B、C正确；菌落往往是由一个细菌繁殖而成的子细胞群体，该实验中筛选出的菌落中的菌种降解能力可能不同，故细胞的遗传物质不一定相同，D错误。
11．答案：B
解析：过程①得到的菌落均匀分布，接种方法为稀释涂布平板法，过程②两种培养基的成分不同，基本培养基中缺乏某种氨基酸，A错误；进行过程②培养时先将丝绒布转印至完全培养基上，可能会携带某种氨基酸进入基本培养基，因此顺序不能颠倒，B正确；统计菌落种类和数量时要每隔24 h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致菌落数目偏小，C错误；若该菌株为原核细胞，则不存在核孔复合体，营养缺陷型菌株细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，应是控制该酶合成的基因发生突变，D错误。
12．答案：D
解析：产生透明圈，说明菌株产生的抗生素能抑制指示菌S的生长，透明圈越大，抑菌效果越明显，A错误；没有透明圈产生的菌株不一定不能产生抗生素，B错误；接种测试菌3，发现离能产生透明圈菌株的距离较远，说明可能是产生的抗生素抑制了测试菌3的生长，C错误；测试菌2和5距离产生透明圈菌株的距离近，说明测试菌2、5对该菌产生的抗生素具有抗性，D正确。
13．答案：（1）碳源、氮源和维生素　琼脂　水　（2）接种　避免周围环境中的微生物污染培养基　（3）酒精棉球擦拭双手、戴消毒手套　（4）再加一个不接种的相同培养基（空白培养基），与甲乙在相同条件下培养，若该培养基上没有生长菌落，说明培养过程未被杂菌污染，猜想错误；若该培养基上生长菌落，说明培养基被杂菌污染，猜想正确
解析：（1）该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水，蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，故蛋白胨可以为微生物的生长提供碳源、氮源和维生素等营养物质，为了使配制的溶液呈固体状态，还需要加入琼脂。为了防止外来杂菌的入侵，可以将培养基放入盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内灭菌15～30 min。
（2）实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的接种，该操作应该在酒精灯火焰附近进行，这样能够保证接种时处于一个无菌的环境，防止周围环境中的微生物污染培养基。
（3）为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基，洗过的手还应用酒精棉球擦拭双手、戴消毒手套等方法处理。
（4）有同学认为乙中也有菌落产生，是因为培养过程受到杂菌污染，若要验证乙培养基是否被污染，需要再加一个不接种的相同培养基作为对照，与甲乙在相同条件下培养，若该培养基上没有生长菌落，说明培养过程中未被杂菌污染，故猜想错误；若该培养基上生长菌落，则说明猜想正确。
14．答案：（1）PET　增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌　（2）10－5　稀释倍数为10－3时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10－4组的结果　（3）灭菌，防止微生物污染　空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生　使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落　（4）甘油管藏
解析：（1）欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于以PET为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌。（2）为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，据此结合题意可知：不适合用于计数的为10－5倍数的稀释液。用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数，得到的细菌数不一致的原因可能是稀释倍数为10－3时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10－4组的结果。（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，其目的是灭菌，防止微生物污染。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此这个平板不能用来培养目的菌。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，为使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线。（4）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
15．答案：D
解析：研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，所以D正确，A、B、C错误。
16．答案：（1）菌T能够分泌纤维素酶
（2）为合成微生物细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂）　①把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭；②为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min；③无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央，有利于蒸汽流通；④灭菌完成后，应使锅内蒸汽压力缓慢降低，排气时间不少于10～12 min
（3）制造无氧环境　排出二氧化碳　酸性重铬酸钾
（4）葡萄糖　节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广
解析：（1）菌T能够分泌纤维素酶，纤维素酶能将纤维素最终分解为葡萄糖，因此在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解。（2）培养基的主要成分：水、碳源、氮源、无机盐，其中氮源主要为合成微生物的细胞结构提供原料（微生物细胞中的含氮物质，如核酸、蛋白质、磷脂）。高压蒸汽灭菌法的注意的事项有①把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭。如果高压锅内的空气未排除或未完全排除，则蒸汽不能达到饱和，蒸汽的温度未达到要求的高度，结果导致灭菌的失败；②为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min；③无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央，有利于蒸汽流通；④灭菌完成后，应使锅内蒸汽压力缓慢降低，排气时间不少于10～12 min，否则锅内蒸汽压力突然降低，液体突然沸腾，冲走瓶盖，使液体喷出或使容器破裂。（3）酒精的生产原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，将酵母菌接种到灭菌后的培养基中进行酒精发酵，酒精发酵需要在无氧的条件下进行，此时拧紧瓶盖的主要目的是制造无氧环境。酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，在发酵过程中密闭，所以需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放出二氧化碳，酒精可用酸性重铬酸钾溶液来检测，该物质与酒精反应呈现灰绿色。（4）与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，利用纤维素为原料生产乙醇具有节约粮食、废物利用、清洁环保、不污染环境、生产成本低、原料来源广等优点。

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