资源简介

2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体学案
【学习目标】
1.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物|学等手段.使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。
3.收集单克隆抗体在临床上实际应用的资料,并进行交流分享。
【学习重难点】
1.教学重点
（1）动物细胞融合的原理和过程。（2）单克隆抗体制备的原理和过程。
2.教学难点
单克隆抗体制备的原理和过程。
【预习新知】
动物细胞融合技术
1．概念：使 结合形成一个细胞的技术。
2．诱导原理和结果
(1)诱导原理： 。
(2)诱导结果：形成 细胞。
3．诱导方法： 法、电融合法和 法等。
4．意义：突破了 的局限，使 成为可能。
5．动物细胞融合技术的应用
(1)成为研究 、 、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)用于制备 。
单克隆抗体及其应用
1．传统抗体的获得
(1) 方法：
(2) 缺点： 低、 低、 差。
2．单克隆抗体的制备及优点
（1）一种B淋巴细胞只能分泌 种特异性抗体
（2）B淋巴细胞的特点：能产生 但不能 。
（3）骨髓瘤细胞的特点：能 但不能 。
（4）杂交瘤细胞的特点：既能 又能产生 。
3.制备过程：
注：诱导融合的细胞需要进行至少两次筛选：
①第一次筛选
A.筛选目的:是为了获得 ；
B. 筛选方法：要用特定的 进行筛选。
C.筛选的原理是 。
②第二次筛选
A.筛选目的是为了获得 ；
B.筛选方法：要用特定的 进行筛选。
C.筛选的原理是 。
③培养液中共有 种融合的细胞，未融合的细胞有 种
④杂交瘤细胞的特点：既能大量 ，又能产生 。
⑤获得大量杂交瘤细胞的方法 。
⑥获得大量单克隆抗体的方法 。
4.单克隆抗体 （由杂交瘤细胞产生的）
（1）单克隆抗体的优点 、 、 。
（2）单克隆抗体的作用：
① ：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
② ：主要用于癌症治疗，可运载药物，也能用于 。
【巩固训练】
1.关于植物体细胞杂交技术和动物细胞融合技术，下列叙述正确的是( )
A.都突破了有性杂交的局限，使种间基因交流成为可能
B.融合后的细胞均为杂种细胞，遗传物质增加
C.技术原理都涉及细胞膜流动性、细胞全能性
D.细胞融合都可采用聚乙二醇促融或灭活病毒诱导
2.下表为抗丙肝病毒的单克隆抗体制备过程中的操作步骤及其目的或结果。下列叙述不正确的是( )
操作步骤 目的或结果
处死注射了丙肝病毒特定抗原的小鼠，取出脾脏 ①
诱导上述细胞与②融合 产生多种融合细胞
③ 淘汰未融合的细胞及同种融合细胞
进行抗原-抗体检测 筛选出④
注射到健康小鼠体内 获得抗丙肝病毒的单克隆抗体
A.①是促使B细胞产生更多的抗体
B.②是小鼠的骨髓瘤细胞
C.③是在特定的选择培养基上培养
D.④是能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
3.大量悬浮培养产流感病毒的单克隆细胞，可用于流感疫苗的生产。下列叙述错误的是( )
A. 悬浮培养单克隆细胞可有效避免接触抑制
B. 用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清
C. 当病毒达到一定数量时会影响细胞的增殖
D. 培养基pH不会影响单克隆细胞的病毒产量
4.甲状旁腺激素（PTH）水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述不正确的是( )
A.需要使用动物细胞培养技术
B.需要制备用PTH免疫的小鼠
C.利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞
D.筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞
5.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是( )
A.可以制成诊断盒．用于疾病的诊断
B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C.可以利用基因工程技术生产
D.可以在生物体内生产，不能体外生产
6.将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，关于其依据的下列说法不合理的是( )
A.浆细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
B.浆细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体
C.骨随瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体
D.浆细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能无限增殖
7.单克隆抗体的生产是一项复杂的过程，涉及动物细胞融合、细胞筛选、细胞培养等技术，英国人米尔斯坦和德国人科勒因在该项目上的贡献于1984年获得诺贝尔奖。下图是生产抗病毒A的单克隆抗体的流程图。下列叙述正确的是( )
A.用病毒A对小鼠甲进行免疫后，该小鼠甲的体内存在多种B淋巴细胞
B.和骨髓瘤细胞相比，图中B淋巴细胞不仅能无限增殖，还能产生抗体
C.图中筛选1需要使用基础培养基对融合细胞进行筛选，能够得到所需的杂交瘤细胞
D.图中筛选2需要一次克隆化培养和抗体检测，从而获得足够数量的相应杂交瘤细胞
8.单克隆抗体是由一种杂交瘤细胞经无性繁殖而来的细胞群所产生的，具有高度特异性。下列有关单克隆抗体及其制备过程的叙述，正确的是( )
A.对已免疫小鼠脾脏中的浆细胞进行传代培养，是为了扩大细胞数量
B.在选择培养基上，未融合的细胞会死亡，融合的细胞都能正常生长
C.抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞只有注射到小鼠腹腔内才能大量增殖
D.单克隆抗体能准确识别不同抗原之间的细微差异，可用于抗原检测
9.研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列叙述正确的是( )
A.正常条件下，已免疫的脾细胞也可以无限增殖
B.步骤②可使用灭活的病毒，在病毒的作用下，细胞膜会发生一定程度的损伤
C.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原-抗体杂交
D.步骤⑥培养瓶需要置于含有95%CO2和5%空气的混合气体中培养
10.由人类乳头瘤病毒（HPV）感染引起的宫颈癌是全球女性第四大常见癌症。为研制抗HPV抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。下列相关说法错误的是( )
A.扩大培养的细胞既能迅速大量繁殖，又能产生抗体
B.在特定的选择培养基上，只有融合的细胞才能存活
C.第2次筛选是指克隆化培养和抗HPV抗体检测
D.抗HPV抗体可以从小鼠的腹水或细胞培养液中获取
参考答案
1.答案：A
解析：A、植物体细胞杂交技术和动物细胞融合技术都突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能，A正确；
B、植物体细胞杂交技术和动物细胞融合技术融合后的细胞不一定都是杂种细胞，也可能是同种细胞的融合，B错误；
C、植物体细胞杂交技术涉及的原理有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，但动物细胞融合技术不涉及细胞全能性，C错误；
D、灭活病毒诱导法是动物细胞融合技术的特有方法，D错误。
故选A。
2.答案：A
解析：A、丙肝病毒特定抗原能引起机体发生免疫反应，处死注射了丙肝病毒特定抗原的小鼠，取出脾脏，目的①为获得已免疫的B淋巴细胞，A错误；
B、②将已免疫的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，目的是获得融合细胞，B正确；
C、③是在特定的选择培养基上培养进行筛选杂交瘤细胞，能淘汰未融合的细胞及同种融合细胞，C正确；
D、进行专一抗体阳性检测，是利用了抗原-抗体杂交技术筛选出④能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 ，D正确。
故选A。
3.答案：D
解析：贴壁培养的细胞会发生接触抑制。悬浮培养是指通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法，可有效避免接触抑制，故A正确。在体外培养动物细胞时，培养基中应含有细胞所需要的各种营养物质。将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加人血清等一些天然成分，B正确。病毒必须寄生在活细胞内、利用宿主细胞中的物质和能量才能完成自身的生命活动，当病毒达到一定数量时，细胞的生命活动会受到影响，进而会影响细胞的增殖，C正确。单克隆细胞的正常生命活动需要适宜的pH，培养基pH会影响单克隆细胞的代谢，进而影响其病毒产量，D错误。
4.答案：D
解析：A、单克隆抗体的制备过程中需要用到动物细胞培养技术，如骨髓瘤细胞的培养等，A正确；B、分析题意可知，本操作的目的是制备单克隆抗体用于快速检测PTH，为获得能产生抗PTH抗体的B淋巴细胞，可用PTH对小鼠进行免疫，B正确；C、抗原与抗体的结合具有特异性，故可利用抗原一抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞，C正确；D、杂交瘤细胞是B细胞与骨髓瘤细胞融合之后经筛选而得到的，由于一种B细胞经免疫后只能产生一种抗体，故理论上讲，单个杂交瘤细胞只能产生一种抗体，D错误。故选：D。
5.答案：D
解析：
6.答案：B
解析：
7.答案：A
解析：A、用病毒A对小鼠甲进行免疫后，该小鼠甲的体内存在多种B淋巴细胞，所以需要筛选两次，包括选择培养基和专一抗体检验阳性，A正确；B、图中的B淋巴细胞不能无限增殖，B错误； C、将鼠的骨髓瘤细胞与获得的B淋巴细胞融合，图中筛选1需要使用相应的选择培养基（如HAT培养基）进行筛选，在该培养基上未融合的细胞和同种融合的细胞都死亡，只有杂交瘤细胞能存活，从而筛选得到所需的杂交瘤细胞，C错误； D、图中筛选2需要多次克隆化培养和抗体检测，从而获得足够数量的相应杂交瘤细胞，D错误。故选：A。
8.答案：D
解析：浆细胞是高度分化的细胞,不进行细胞分裂,无法通过传代培养以扩大细胞数量,A错误;在选择培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞才能生长,B错误;可将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,C错误。
9.答案：B
解析：A、正常条件下，已免疫的脾细胞高度分化，不能无限增殖，A错误;B、步骤②可使用灭活的病毒诱导后让骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，灭活的病毒仍然具有一定的毒性和侵染性，在病毒的作用下，细胞膜表面会发生一定程度的损伤，但是伤害程度一般不大，B正确;C、步骤③是特定培养基筛选杂交瘤细胞，步骤④是抗原-抗体杂交，C错误;D、步骤⑥培养瓶需要置于含有95%的空气和5%的CO2的混合气体中培养，D错误。故选B。
10.答案：B
解析：A、扩大培养的细胞为杂交瘤细胞，既能迅速大量繁殖，又能产生抗体，A正确；
B、单克隆抗体的制备涉及两次筛选，筛选1是用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，因为只有融合的杂交瘤细胞才能在选择培养基上生长，B错误；
C、第2次筛选是指克隆化培养和抗HPV抗体检测，经过多次筛选，可以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，C正确；
D、抗HPV抗体可以从小鼠的腹水或细胞培养液中获取，D正确。
故选B。

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