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重点强化练70　微生物培养的相关技术
1．三糖铁培养基(TSI)含有牛肉膏、蛋白胨、糖类(乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10∶10∶1)、酚红(酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色)等成分。TSI琼脂试验法通过观察肠杆菌科细菌对三种糖的分解产生酸(少量的酸能被空气缓慢氧化)的量的多少来鉴别其种类。操作过程：用接种针挑取待测菌落后，刺入斜面TSI内，后缓慢抽出接种针，在斜面上进行“之”字划线。下列分析错误的是(　　)
A．牛肉膏可为细菌提供氮源和维生素等
B．穿刺和划线的过程需严格控制杂菌污染
C．若培养基中底层与斜面均呈黄色，推测细菌只能分解乳糖
D．若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分解葡萄糖
2．(2024·海南嘉积中学高三模拟)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。下列相关叙述正确的是(　　)
A．接种室、接种箱或超净工作台在使用过程中，可用紫外线照射30 min进行消毒
B．消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部全部微生物
C．在接种过程中涂布器、接种环和接种针常采用灼烧灭菌的方法迅速彻底地灭菌
D．将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上，可以有效防止杂菌的污染
3．(2024·天津耀华中学高三联考)如图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　)
A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖
C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理
D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养
4．(2023·北京海淀区高三二模)为探究抗生素对细菌的选择作用，将含抗生素的滤纸片放到接种了大肠杆菌的平板培养基上(如图)，一段时间后测量并记录抑菌圈的直径。从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌扩大培养，重复实验2～5次。下列叙述不正确的是(　　)
A．接种时，将高浓度菌液涂布在平板培养基上
B．①处滤纸片上不含抗生素，起对照作用
C．重复2～5次实验后，抑菌圈的直径会变大
D．抑菌圈边缘的菌落上挑取的细菌抗药性较强
5．为筛选能大量分泌蛋白酶的枯草芽孢杆菌，将浸过不同菌株a～e分泌物提取液的无菌圆纸片置于培养基表面，放置2天后结果如图。下列叙述不正确的是(　　)
A．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌
B．还应增设浸过无菌水的圆纸片进行对照
C．菌株a可作为大规模产业化培养的备选株
D．实验结果说明菌株b一定不能合成蛋白酶
6．(2024·福建福州第一中学高三检测)如图为从土壤中分离纯化尿素分解菌的过程，酚红在碱性环境中呈红色。下列有关叙述错误的是(　　)
A．①②③④培养基都应以尿素为唯一氮源
B．图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌
C．④过程采用稀释涂布平板法进行接种，接种工具是涂布器
D．依据菌落周围是否出现红色圈，可用酚红指示剂鉴定
7．(2024·云南曲靖市第一中学高三期末)丙草胺是一种应用广泛的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某生物兴趣小组从活泉公园土壤中分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其进行计数(如图所示),以期为修复被丙草胺污染的土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是(　　)
A．用以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养
B．将培养基 pH 调至酸性，有利于丙草胺降解菌的生长繁殖
C．通过计算得知每克土壤中的菌株数约为 1.7×109个
D．除了用图中所示计数方法之外，还可用显微镜直接计数法，其计数结果往往比实际值偏大
8．(2023·重庆渝中区高三一模)药物敏感试验旨在了解某病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导临床合理选用抗生素。纸片扩散法是试验的常用方法，在纸片周围会形成透明的抑菌圈。下列叙述正确的是(　　)
A．抑菌圈越大，说明该病原微生物对该种抗生素敏感性越大
B．图1中Ⅳ的抑菌圈中出现了部分菌落，可能是该病原微生物发生了基因重组
C．进行药敏试验，需使用接种环使平板上布满测试菌
D．接种后的平板在培养时的放置应如图2中②所示，可以防止污染
9．植物秸秆中的纤维素可被某些能分泌纤维素酶的微生物分解。 在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成红色复合物。为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基，成分如表(“＋”表示有，“－”表示无)。下列叙述正确的是(　　)
项目 酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR溶液 水
培养基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋
培养基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
A.培养基甲含有纤维素能分离获得纤维素分解菌的单菌落
B．培养基乙含有刚果红(CR)，能用于鉴别纤维素分解菌
C．用含有CR和纤维素的固体培养基能获得以纤维素分解菌的单菌落为中心的透明圈
D．比较单菌落周围透明圈的大小，透明圈小的说明该菌株分解纤维素的能力强
10．(2023·海口高三模拟)随着我国石油生产和消费量的快速增加，在其开采、炼制、储运、使用过程中，石油及各种石油产品进入环境而造成的污染问题日益突出。研究发现，土壤中某种微生物(好氧型)能降解石油，分离降解石油的菌株的实验过程如图所示。下列叙述错误的是(　　)
A．实验中，培养基只能以石油作为唯一碳源
B．配制好的培养基可使用高压蒸汽灭菌法灭菌
C．振荡培养的菌株比静置培养的菌株生长速度快
D．对微生物计数时，可以采用平板划线法接种
11．厨房中的厨余垃圾多为湿垃圾，湿垃圾处理的有效方法之一是用微生物对其进行降解。如图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列有关叙述错误的是(　　)
A．配制培养基后要先进行灭菌处理，再调节pH
B．菌落①与菌落②周围产生了透明圈，说明菌落①与菌落②产淀粉酶
C．培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个甚至几个活菌
D．初步判断培养基上菌种的类型，肉眼即可观察菌体的形态特征
12．(2023·河北衡水中学高三联考)我国科学家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉积物样品，利用富集培养基获得含拟杆菌的混合培养物，经纯培养后进一步研究了其生物学特性，结果如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．制备富集培养基采用湿热灭菌法，灭菌后应立刻接入沉积物样品
B．对拟杆菌的纯培养物采用平板划线法可获得图示的实验结果
C．据图分析，拟杆菌新菌株在以纤维素为氮源时生长状况最好
D．在沉积物样品中分离获得的拟杆菌所分泌的酶可能具有耐低温、耐盐的特性
13．(2024·四川绵阳中学高三调研)酿酒酵母菌种的性能是决定果酒品质的重要因素。如图表示从土壤中筛选酿酒酵母的过程。下列叙述正确的是(　　)
A．图示接种方法为稀释涂布平板法，据结果推测1 g土壤中酵母菌数最多为1.6×106个
B．分离、纯化酵母菌时，还可采用平板划线法，该方法也需要进行③步骤操作
C．获得酿酒酵母纯培养物的关键是防止杂菌污染，故应对土壤、培养基及用具进行灭菌
D．进行步骤⑤时，应用液体培养基培养④中的酵母菌，并检测酵母菌的数量和酒精含量
14．(2024·福州高三统考)某研究小组用马铃薯琼脂培养基对新酿米酒中的酵母菌进行初步分离，结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A．图a中下一次划线总是从上一次划线的首端开始
B．配制马铃薯琼脂培养基时，其pH需要调节至中性
C．浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在酒精灯火焰上灼烧
D．图a、图b的方法都可以实现对酵母菌的分离和计数
15．(2023·武汉高三期中)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，赖氨酸营养缺陷型突变菌由于发生基因突变，只能在添加了赖氨酸的培养基上生长。如图为以野生型菌株为材料，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变株的部分流程图，数字代表培养基，a、b、c表示操作步骤。下列有关说法正确的是(　　)
A．野生型大肠杆菌能够合成所需的全部氨基酸，因此培养基中无需提供氮源
B．①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸
C．需将①中的菌液适当稀释后，用接种环蘸取菌液在②上进行划线接种
D．从④培养基中挑取乙菌落进行纯化培养即可获得所需突变株
重点强化练70　微生物培养的相关技术（解析版）
1．三糖铁培养基(TSI)含有牛肉膏、蛋白胨、糖类(乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10∶10∶1)、酚红(酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色)等成分。TSI琼脂试验法通过观察肠杆菌科细菌对三种糖的分解产生酸(少量的酸能被空气缓慢氧化)的量的多少来鉴别其种类。操作过程：用接种针挑取待测菌落后，刺入斜面TSI内，后缓慢抽出接种针，在斜面上进行“之”字划线。下列分析错误的是(　　)
A．牛肉膏可为细菌提供氮源和维生素等
B．穿刺和划线的过程需严格控制杂菌污染
C．若培养基中底层与斜面均呈黄色，推测细菌只能分解乳糖
D．若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分解葡萄糖
答案　C
解析　牛肉膏可为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素等，A正确；酚红在酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色，若培养基的中底层与斜面均呈黄色，说明细菌产酸量多，推测细菌可能分解乳糖、蔗糖和葡萄糖，或分解含量较多的乳糖和蔗糖(或其中之一)，C错误；若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因培养基中葡萄糖的含量较少，其产酸量也较少，斜面上所生成的少量酸被空气缓慢氧化，使斜面由黄色变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所产生的酸一时不能被空气氧化而仍保持黄色，故若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分解葡萄糖，D正确。
2．(2024·海南嘉积中学高三模拟)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。下列相关叙述正确的是(　　)
A．接种室、接种箱或超净工作台在使用过程中，可用紫外线照射30 min进行消毒
B．消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部全部微生物
C．在接种过程中涂布器、接种环和接种针常采用灼烧灭菌的方法迅速彻底地灭菌
D．将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上，可以有效防止杂菌的污染
答案　C
解析　接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min进行消毒，A错误；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物，B错误；灼烧灭菌是将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，C正确；将土壤稀释液彻底灭菌，所要培养的目的菌也会一并被杀死，D错误。
3．(2024·天津耀华中学高三联考)如图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　)
A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖
C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理
D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养
答案　B
解析　步骤①培养基倒入培养皿后要立即盖上培养皿的皿盖，B错误；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱培养，以防止冷凝水污染培养基，D正确。
4．(2023·北京海淀区高三二模)为探究抗生素对细菌的选择作用，将含抗生素的滤纸片放到接种了大肠杆菌的平板培养基上(如图)，一段时间后测量并记录抑菌圈的直径。从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌扩大培养，重复实验2～5次。下列叙述不正确的是(　　)
A．接种时，将高浓度菌液涂布在平板培养基上
B．①处滤纸片上不含抗生素，起对照作用
C．重复2～5次实验后，抑菌圈的直径会变大
D．抑菌圈边缘的菌落上挑取的细菌抗药性较强
答案　C
解析　将高浓度菌液涂布在平板培养基上，使平板上长出密集菌落，有利于观察抑菌圈，A正确；①处滤纸片周围未出现抑菌圈，滤纸片上不含抗生素，起对照作用，B正确；随重复次数增加，抗药菌株的比例增加，抑菌圈的直径会变小，C错误；抑菌圈边缘的菌落可能是耐药菌，所以抑菌圈边缘的菌落上挑取的细菌抗药性较强，D正确。
5．为筛选能大量分泌蛋白酶的枯草芽孢杆菌，将浸过不同菌株a～e分泌物提取液的无菌圆纸片置于培养基表面，放置2天后结果如图。下列叙述不正确的是(　　)
A．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌
B．还应增设浸过无菌水的圆纸片进行对照
C．菌株a可作为大规模产业化培养的备选株
D．实验结果说明菌株b一定不能合成蛋白酶
答案　D
解析　一般使用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，A正确；为增加实验数据的可信度，排除圆纸片本身和其他无关变量的影响，还应在相关实验操作中增设浸过无菌水的圆纸片进行对照，B正确；若用于生产，首选的菌株应是a，图中a形成的透明区域最大，说明含蛋白酶最多，C正确；灭菌后培养基中高浓度的蛋白质导致培养基不透明，菌株b提取物周围没有形成明显透明区，可能原因是无蛋白酶或分泌蛋白酶少或蛋白酶活性低，D错误。
6．(2024·福建福州第一中学高三检测)如图为从土壤中分离纯化尿素分解菌的过程，酚红在碱性环境中呈红色。下列有关叙述错误的是(　　)
A．①②③④培养基都应以尿素为唯一氮源
B．图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌
C．④过程采用稀释涂布平板法进行接种，接种工具是涂布器
D．依据菌落周围是否出现红色圈，可用酚红指示剂鉴定
答案　C
解析　尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解，从而能利用尿素，其他微生物不能，因此要分离纯化尿素分解菌，培养基都应以尿素为唯一氮源，A正确；④过程采用的是平板划线法进行接种，接种工具是接种环，C错误；分解尿素的细菌能将尿素分解成氨，使培养基碱性增强，pH升高，酚红指示剂会变红，D正确。
7．(2024·云南曲靖市第一中学高三期末)丙草胺是一种应用广泛的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某生物兴趣小组从活泉公园土壤中分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其进行计数(如图所示),以期为修复被丙草胺污染的土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是(　　)
A．用以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养
B．将培养基 pH 调至酸性，有利于丙草胺降解菌的生长繁殖
C．通过计算得知每克土壤中的菌株数约为 1.7×109个
D．除了用图中所示计数方法之外，还可用显微镜直接计数法，其计数结果往往比实际值偏大
答案　B
解析　要分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，需要用以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养，该培养基中只有能降解丙草胺的细菌菌株才能生长，其他微生物的生长会受到抑制，A正确；将培养基 pH 调至中性或弱碱性，有利于丙草胺降解菌的生长繁殖，B错误；5号试管的稀释倍数是106，则每克土壤中的菌株数约为 (168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109(个)，C正确；图中计数利用的是稀释涂布平板法，还可用显微镜直接计数法，由于死亡的细菌计算在内，因此计数结果往往比实际值偏大，D正确。
8．(2023·重庆渝中区高三一模)药物敏感试验旨在了解某病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导临床合理选用抗生素。纸片扩散法是试验的常用方法，在纸片周围会形成透明的抑菌圈。下列叙述正确的是(　　)
A．抑菌圈越大，说明该病原微生物对该种抗生素敏感性越大
B．图1中Ⅳ的抑菌圈中出现了部分菌落，可能是该病原微生物发生了基因重组
C．进行药敏试验，需使用接种环使平板上布满测试菌
D．接种后的平板在培养时的放置应如图2中②所示，可以防止污染
答案　A
解析　抑菌圈越大，说明该种抗生素对该种病原微生物抑制作用越强，说明该病原微生物对该种抗生素敏感性越大，A正确；图1中Ⅳ的抑菌圈中出现了部分菌落，可能是该病原微生物发生了基因突变，产生了耐药性，B错误；进行药敏试验需利用稀释涂布平板法使平板上布满测试菌，使用的工具是涂布器，C错误；接种后的平板应倒置培养，即如图2中①所示，倒置培养能防止冷凝形成的水珠滴入培养基造成污染，D错误。
9．植物秸秆中的纤维素可被某些能分泌纤维素酶的微生物分解。 在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成红色复合物。为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基，成分如表(“＋”表示有，“－”表示无)。下列叙述正确的是(　　)
项目 酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR溶液 水
培养基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋
培养基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
A.培养基甲含有纤维素能分离获得纤维素分解菌的单菌落
B．培养基乙含有刚果红(CR)，能用于鉴别纤维素分解菌
C．用含有CR和纤维素的固体培养基能获得以纤维素分解菌的单菌落为中心的透明圈
D．比较单菌落周围透明圈的大小，透明圈小的说明该菌株分解纤维素的能力强
答案　C
解析　培养基甲为液体培养基，不能用于分离纤维素分解菌的单菌落，A错误；培养基乙中以淀粉作碳源，不能用于鉴别纤维素分解菌，B错误；CR可以和纤维素形成复合物，而当纤维素被纤维素分解菌分解后，就无法形成复合物，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈，C正确，比较单菌落周围透明圈的大小，透明圈大的说明该菌株分解纤维素的能力强，D错误。
10．(2023·海口高三模拟)随着我国石油生产和消费量的快速增加，在其开采、炼制、储运、使用过程中，石油及各种石油产品进入环境而造成的污染问题日益突出。研究发现，土壤中某种微生物(好氧型)能降解石油，分离降解石油的菌株的实验过程如图所示。下列叙述错误的是(　　)
A．实验中，培养基只能以石油作为唯一碳源
B．配制好的培养基可使用高压蒸汽灭菌法灭菌
C．振荡培养的菌株比静置培养的菌株生长速度快
D．对微生物计数时，可以采用平板划线法接种
答案　D
解析　分离降解石油的菌株，培养基只能以石油作为唯一碳源，不能利用石油作为碳源的微生物，不能在该培养基上生存，A正确；振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长，同时还能使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，C正确；对微生物计数时，可以采用稀释涂布平板法接种，平板划线法不能用于计数，D错误。
11．厨房中的厨余垃圾多为湿垃圾，湿垃圾处理的有效方法之一是用微生物对其进行降解。如图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列有关叙述错误的是(　　)
A．配制培养基后要先进行灭菌处理，再调节pH
B．菌落①与菌落②周围产生了透明圈，说明菌落①与菌落②产淀粉酶
C．培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个甚至几个活菌
D．初步判断培养基上菌种的类型，肉眼即可观察菌体的形态特征
答案　A
解析　培养基应先调节pH，再高压蒸汽灭菌，A错误；淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，会形成透明圈，图中菌落①与菌落②周围产生了透明圈，说明菌落①与菌落②能产生淀粉酶，B正确；当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只是一个菌落，故培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个甚至几个活菌，C正确；由于菌落肉眼可见，故初步判断培养基上菌种的类型，可用肉眼观察菌体的形态特征，D正确。
12．(2023·河北衡水中学高三联考)我国科学家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉积物样品，利用富集培养基获得含拟杆菌的混合培养物，经纯培养后进一步研究了其生物学特性，结果如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．制备富集培养基采用湿热灭菌法，灭菌后应立刻接入沉积物样品
B．对拟杆菌的纯培养物采用平板划线法可获得图示的实验结果
C．据图分析，拟杆菌新菌株在以纤维素为氮源时生长状况最好
D．在沉积物样品中分离获得的拟杆菌所分泌的酶可能具有耐低温、耐盐的特性
答案　D
解析　制备富集培养基采用湿热灭菌法，灭菌并冷却后再接入沉积物样品，A错误；平板划线法可分离菌种，但不能用于计数，图示接种方法能够对微生物进行计数，属于稀释涂布平板法，B错误；在以纤维素(元素组成为C、H、O)为碳源的培养基中，细胞数量最多，可推知拟杆菌新菌株在以纤维素为碳源时生长状况最好，C错误。
13．(2024·四川绵阳中学高三调研)酿酒酵母菌种的性能是决定果酒品质的重要因素。如图表示从土壤中筛选酿酒酵母的过程。下列叙述正确的是(　　)
A．图示接种方法为稀释涂布平板法，据结果推测1 g土壤中酵母菌数最多为1.6×106个
B．分离、纯化酵母菌时，还可采用平板划线法，该方法也需要进行③步骤操作
C．获得酿酒酵母纯培养物的关键是防止杂菌污染，故应对土壤、培养基及用具进行灭菌
D．进行步骤⑤时，应用液体培养基培养④中的酵母菌，并检测酵母菌的数量和酒精含量
答案　D
解析　图示接种方法为稀释涂布平板法，据结果推测1 g土壤中酵母菌数约为1.6×106个，由于该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，A错误；分离、纯化酵母菌时，还可采用平板划线法，该方法一般不需要进行③步骤操作，B错误；对土壤灭菌会将其中的酿酒酵母杀死，将不能获得酿酒酵母的纯培养物，C错误。
14．(2024·福州高三统考)某研究小组用马铃薯琼脂培养基对新酿米酒中的酵母菌进行初步分离，结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A．图a中下一次划线总是从上一次划线的首端开始
B．配制马铃薯琼脂培养基时，其pH需要调节至中性
C．浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在酒精灯火焰上灼烧
D．图a、图b的方法都可以实现对酵母菌的分离和计数
答案　C
解析　图a的接种方法为平板划线法，下一次划线总是从上一次划线的末端开始，以达到逐级稀释菌种的目的，A错误；马铃薯琼脂培养基用于培养酵母菌时，配制时需要将其pH调节至酸性，B错误；涂布器需要先用酒精浸泡，再放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，可防止杂菌污染，C正确；图a(平板划线法)、图b(稀释涂布平板法)的方法都可以实现对酵母菌的分离，但图a平板划线法不能用于计数，D错误。
15．(2023·武汉高三期中)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，赖氨酸营养缺陷型突变菌由于发生基因突变，只能在添加了赖氨酸的培养基上生长。如图为以野生型菌株为材料，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷型突变株的部分流程图，数字代表培养基，a、b、c表示操作步骤。下列有关说法正确的是(　　)
A．野生型大肠杆菌能够合成所需的全部氨基酸，因此培养基中无需提供氮源
B．①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸
C．需将①中的菌液适当稀释后，用接种环蘸取菌液在②上进行划线接种
D．从④培养基中挑取乙菌落进行纯化培养即可获得所需突变株
答案　B
解析　野生型大肠杆菌菌株需要以培养基中添加的氮源为原料合成所需的全部氨基酸，A错误；图中①②④需要添加赖氨酸，③为基本培养基，不能添加赖氨酸，B正确；需将①中的菌液适当稀释后，用涂布器将菌液均匀地涂布在②表面，C错误；甲在基本培养基中无法生长，在添加了赖氨酸的培养基中可生长，说明甲是赖氨酸营养缺陷型菌落，故经c过程影印及培养后，可从④培养基中挑取甲菌落进行纯化培养，D错误。

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