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专题十二-1 生物技术
基础巩固
1.稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是( )
A.固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板
B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长
C.稀释涂布平板法分离到的单菌落需进一步划线纯化
D.稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数
2.如图为两种纯化微生物的接种方法。下列相关描述正确的是( )
A.①为平板划线法，所用接种工具为接种环
B.②为稀释涂布平板法，所用接种工具为接种针
C.①②方法均可进行微生物的分离与计数
D.②方法计数的微生物数量往往比实际数目多 3.下列关于果酒、果醋和腐乳制作的叙述，正确的是( )
A.腐乳制作过程中，有机物种类增加，含有的能量减少
B.缺氧、呈酸性的发酵液，酵母菌能大量生长繁殖，醋酸菌则不能正常生长
C.在糖源和氧气都充足时，醋酸菌能将葡萄糖分解成乙醇和二氧化碳
D.为了防止发酵液受污染，应将选取的葡萄先去枝梗，再冲洗多次然后使用
4.发酵工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产品的分离、提纯等环节。下面有关分析正确的是( )
A.优良菌种只能通过诱变育种或基因工程育种来获得
B.扩大培养的目的是提高接种时发酵罐中菌种的数目
C.发酵工程的中心环节是灭菌，特别是培养基和发酵罐必须进行严格灭菌
D.若发酵产品是微生物细胞本身，可采用提取、纯化措施来获得产品
5.勤洗手是预防病毒感染的有效措施。某公司在防控新型冠状病毒期间推出一款新型免洗洗手凝胶。为衡量该凝胶的清洗效果，研究人员检测了用凝胶洗手前后手部细菌的含量。凝胶洗手前的检测流程见下图。下列叙述错误的是( )
A.统计洗手前手部细菌的数量，选择的接种方法是平板划线法
B.除图中操作外，还需要设置一组未接种的空白培养基进行培养
C.培养基上的一个菌落只可能来源于样品稀释液中的一个活菌
D.初步判断培养基上菌种的类型，需要用显微镜观察菌体的形状
6.某研究小组对非灭菌的一次性口罩中的微生物进行检测，部分操作如下：从口罩上剪取总量9cm2样品（体积近似1mL），剪碎后加入已灭菌的生理盐水中，定容至10mL，充分混匀，得到样液。下列说法错误的是( )
A.取4个经灭菌处理的培养皿，将冷却到40°C的培养基倒入培养皿，待培养基凝固后，将平板倒置
B.向前3个平板中分别加入1mL样液，用涂布器将样液涂布均匀
C.第4个平板不接种样液并与前3个平板共同培养，可用于检测是否有杂菌污染
D.若一段时间后，4个平板上长出的菌落数依次为31、42、35和0个，可计算出1cm2口罩样品中菌体数量为36个
7.某同学想利用如图所示的装置来制作葡萄酒和葡萄醋。下列叙述正确的是( )
A.制作果酒时，需要将发酵瓶装满发酵液
B.制作果醋时，图中的充气口应保持开放
C.开始发酵前，先除去枝梗，之后将新鲜葡萄清洗干净
D.酵母菌与醋酸菌呼吸作用产生CO2的场所完全相同
8.微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，下列操作中错误的是( )
①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢
②接种操作要在酒精灯火焰附近进行
③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌
④培养基要在干热灭菌箱中进行干热灭菌
⑤灭菌后的培养基要先调试pH值，然后在酒精灯火焰附近接种
A.①②③ B.①②④ C.②③④ D.③④⑤
9.研究者用酸笋开发具有降低胆固醇功能的益生菌。步骤一：酸笋发酵液接种到含有CaCO3的固体培养基上，筛选出乳酸菌。步骤二：将乳酸菌接种到含有胆固醇的培养液中，筛选出能够降解胆固醇的乳酸菌。相关叙述不正确的是( )
A.腌制酸笋需要水封，为乳酸菌发酵提供无氧环境
B.将酸笋发酵液用稀释涂布法接种到固体培养基中
C.溶钙圈直径与菌落直径比值大的菌落为步骤一的目标菌落
D.胆固醇属于脂质，主要为微生物的生长提供碳源和氮源
10.甜米酒是我国的传统酒种，某酿酒厂以无核黄皮果（富含维生素、有机酸及特殊的香味）为辅料研制出黄皮果甜米酒。制作黄皮果甜米酒的工艺流程如图1所示。甜酒曲含有微生物和淀粉酶等，回答下列问题：
（1）图1中加入甜酒曲的目的除提供少量菌种外，还能_________；主发酵中酵母菌的呼吸作用方式为_________。
（2）获得高活性酵母过程中，需要用到选择培养基，选择培养基的要求是既要允许特定微生物的生长，又要_________。
（3）在制作黄皮果甜米酒的过程中，为确定黄酒高活性干酵母（YWBY）的添加量，研究人员进行了相关实验，实验结果如图2所示。根据制作黄皮果甜米酒的实验结果可知，YWBY的最佳接种量是_________%。YWBY接种量为0.12%时酒精含量最低的原因可能是_________。
（4）研究人员发现从发酵第8天开始，作为底物的还原糖的含量基本不再减少，可能的原因是_________。
能力提高
11.细菌代谢产生的脂肽是一种生物表面活性剂，能有效分解环境中的石油等污染物，且分解后的产物对自然环境无害。下列叙述正确的是( )
A.为筛选出高产脂肽的菌株，可在校园内随机采取土样
B.用以石油为唯一碳源的液体培养基可分离得到单个菌落
C.使用显微镜直接计数所得的结果往往大于实际活菌数
D.可用干热灭菌法对配制好的培养基和接种环进行灭菌
12.细菌X合成的tcel蛋白和tcil蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X及其不同突变体进行了如下实验：在固体培养基表面放置一张能隔离细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），共同培养后，对上、下层菌计数得到的结果如图所示。下列叙述正确的是( )
A.实验中的培养皿、固体培养基和滤膜均需要进行消毒处理
B.对上、下层菌计数可以将滤膜菌体稀释后采用血球计数板计数
C.由甲、乙，丙三组结果可推测tcil蛋白能够中和tcel蛋白的毒性
D.野生型细菌X在与tcel—tcil双突变体和tcel突变体的竞争中均占优势
13.稀释涂布平板法和稀释倒平板法是分离微生物的两种方法。稀释倒平板法是指将稀释的菌液和琼脂混合，然后将其倒入无菌培养皿中进行培养。下列说法正确的是( )
A.培养过程中所用的培养基和培养皿均可采用湿热灭菌法
B.两种方法均可通过统计菌落数实现对活菌的准确计数
C.稀释倒平板法对好氧菌、热敏感菌的分离效果优于稀释涂布平板法
D.为了防止培养基温度过高杀死微生物，应将琼脂冷却至室温后再倒平板
14.利用杨木生产燃料乙醇的基本流程主要包括原料粉碎、提高纤维素浓度的预处理、释放单糖的酶解糖化、产生乙醇的微生物发酵、乙醇脱水的蒸馏工艺等步骤（预处理过程所需的果胶酶常来自于黑曲霉等微生物）。下图为发酵阶段菌种接种量对发酵结果的影响。下列说法正确的是( )
A.培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性，果胶酶是黑曲霉分泌的一种单细胞蛋白
B.在伊红—亚甲蓝培养基上可筛选出高产纤维素酶的菌株用于酶解糖化过程
C.接种的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发酵后的酒精含量与残糖含量相等
D.接种量超过15%时酒精产量反而有所降低的原因可能是菌种生长消耗大量的糖分
15.从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述错误的是( )
A.可使用液体培养基进行富集培养
B.为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌
C.获得图a所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌4次
D.利用图b计算出样品中菌体浓度为5.85×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为106倍
16.酿酒和酿醋在我国已经有上千年的历史。《齐民要术》中有关于酿酒的记载：“浸曲三日，如鱼眼汤沸，酸米。其米绝令精细”；有关“动酒酢（“酢”同“醋”）法”的酿醋工艺，“大率酒一斗，用水三斗，合瓮盛，置日中曝之。七日后当臭，衣（指菌膜）生，勿得怪也，但停置，勿移动，挠搅之。数十日，醋成”。下列叙述不正确的是( )
A.各地酿酒的原材料不同，但发酵过程中起主要作用的均是酵母菌
B.温度影响酿酒和酿醋，酿酒过程中，酵母菌的发酵温度为30-35℃
C.酿醋时，加水稀释的目的是避免酒精浓度过高抑制醋酸菌的生长繁殖
D.“衣（指菌膜）生”是醋酸菌在发酵液表面大量繁殖形成的菌膜
17.我国科学家对新疆小河墓地出土的古代发酵奶制品进行国际首例研究，揭示人类对乳酸菌的应用、传播和驯化历史。下列说法错误的是( )
A.乳酸菌是原核生物，其代谢类型为异养兼性厌氧型，因此制作奶酪时需密封处理
B.乳酸菌基因组演化是本身的适应性演化和人类长时间驯化的共同结果
C.乳酸菌发酵生产的奶酪中的营养物质更易吸收，避免引起乳糖不耐受
D.为了缩短发酵时间、确保品质稳定，工业上大规模生产奶酪采用的是纯净的乳酸菌
18.青梅果实中含有大量的齐墩果酸、丙酮酸等活性物质，常制作成具有保健功能的青梅饮品，其中青梅酒和青梅醋深受人们喜爱，其制作流程如下图。下列叙述正确的是( )
A.生物A和生物C都能进行无氧呼吸并产生CO2
B.可以用胰蛋白酶和果胶酶进行酶解以破坏细胞壁
C.由反应①到反应②需要提高温度并改善通气状况
D.可用澄清的石灰水来检测溶液B中是否含有乙醇
19.在中国，龙山文化时期（约公元前4000至4200年）已经有酒器的出现，《周礼天宫》中也记载了主管王室、官用造酒事的“酒正”“酒人”等官职，显示了当时的酿酒业已经专业化。下列有关发酵工程的叙述，错误的是( )
A.制作果酒时酵母菌一般来自果实的表皮，制作过程需保持持续通气
B.制作泡菜时，腌制时间过短可能会导致亚硝酸含量偏高
C.“酿酒不成反成醋”可能是发酵容器密封不严，醋酸菌进行有氧呼吸的结果
D.制作腐乳时毛霉产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸
20.小白菜根系部分微生物具有分解有机磷的能力，科研人员从中筛选出了分解能力强的菌株，并对培养条件的优化进行了研究，以期为微生物肥料的开发提供依据，部分研究步骤如下。
步骤1：小白菜根系微生物的分离纯化
取10g小白菜根系土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀并依次进行等比稀释。分别将稀释度10-2 10-4、10-3 10-5、10-6 10-8的菌液接种到真菌、放线菌、细菌的培养基中，置于适宜条件下培养。
步骤2：小白菜根系解磷微生物的筛选
挑取步骤1中培养基上的不同单菌落接种到有机磷培养基A上，培养一段时间后观察菌落及透明圈大小（固体培养基中有机磷在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈），结果如下图（图中字母和数字组合代表菌株种类）。
步骤3：菌株解磷能力的测定
将初步筛选的3种菌株分别接种到有机磷培养基B中进行培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量。
步骤4：解磷菌株培养条件的优化
配制有机磷培养基时分别使用葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、甘露醇作为碳源，并分别设置不同转速进行摇床培养，72小时后检测培养液中可溶性磷含量，结果如下图。
回答下列问题。
（1）步骤1取不同稀释度菌液接种到不同种类培养基的原因是________。
（2）步骤2使用的接种工具为________，接种前需进行________，以防止杂菌污染。接种时，可根据菌落的________挑取不同类型菌株分别接种到培养基A上。培养结果初步表明，FG5解磷能力最强，依据是________。
（3）与步骤2中培养基A相比，步骤3中培养基B在成分上的主要差异是________。经测定，培养FG5的上清液中________，则可确认FG5的解磷能力最强。
（4）步骤4进行摇床培养时，转速过低溶液中可溶性磷含量不高，可能原因是________，但转速过高容易导致________，从而影响其解磷能力。
（5）综上研究，在实验条件下为更好地实现有机磷的降解，你的建议是________。
思维拓展
21.我国劳动人民利用传统发酵技术制作出大量美味食品，如酱油、腐乳、豆豉等，传承和发扬了中华优秀传统饮食文化。随着科技的发展，现代发酵工程在食品领域的应用更加广泛。下列关于发酵的叙述，错误的是( )
A.工业化生产啤酒时，酵母菌的繁殖主要在主发酵阶段完成
B.腐乳和果醋都是在厌氧条件下发酵产生的传统食品
C.水封泡菜坛的目的是隔绝空气，确保坛内乳酸菌发酵处于无氧环境中
D.泡菜“咸而不酸”是因为盐水浓度过高，抑制了乳酸菌发酵
22.乳酸链球菌素（Nisin）是乳酸链球菌分泌的一种抗菌肽。研究者对Nisin发酵生产过程相关指标进行了检测，结果如图。下列叙述不正确的是( )
A.适度提高乳酸链球菌接种量可缩短Nisin发酵生产周期
B.发酵的中后期适量补加蔗糖溶液可促进菌体生长
C.向发酵罐内适时适量添加碱溶液可提高Nisin产量
D.发酵结束后主要通过收获并破碎菌体以分离获得Nisin产品
23.为纯化菌种,在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌,培养结果如图所示.下列叙述正确的是( )
A.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多,应从Ⅲ区挑取单菌落
B.倒平板后需间歇晃动,以保证表面平整
C.该实验结果因单菌落太多,不能达到菌种纯化的目的
D.菌落周围的纤维素被降解后,可被刚果红染成红色
24.某杂种植株的获取过程如图所示，下列有关分析正确的是( )
A.叶片经消毒后需用流水多次冲洗，以避免消毒剂长时间作用而产生毒害作用
B.图示①过程采用酶解法获取原生质体时，可用聚乙二醇调节渗透压
C.图示②过程通过抽真空处理使酶溶液渗入细胞间隙，提高酶解效率
D.经④过程获得的杂种细胞经鉴定和筛选后进行植物组培，获得的幼苗即可用于生产实践
25.发酵工程在工业生产上得到广泛的应用，下图是发酵工程生产产品的流程简图。下列叙述错误的是( )
A.若生产人胰岛素的工程菌是通过①获得的，则①是基因工程
B.在生产实践中，培养基的配方需要经过反复试验才能确定
C.发酵工程的中心环节是④，需严格控制温度、pH等条件
D.若⑥是微生物本身，可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离
26.隔夜菜到底能不能吃一直是争议比较大的话题。隔夜菜中会产生亚硝酸盐，亚硝酸盐与人体中某些蛋白质的分解物合成亚硝胺类化合物，这些亚硝胺类化合物容易引发癌症。某兴趣小组进行相关实验来检测不同储存条件下隔夜菜中的亚硝酸盐含量和菌落总数,实验结果如表所示。下列有关叙述正确的是( )
表1不同菜品在不同储存条件下的亚硝酸盐含量（单位:mg/kg）
样品名称 0h 6h 12h 24h
/ 4℃ 25℃ 4℃ 25℃ 4℃ 25℃
红烧牛肉 <1 <1 <1 <1 <1 <1 3.2
炒大白菜 <1 <1 <1 <1 12.8 <1 >100
凉拌黄瓜 <1 <1 <1 <1 14.2 <1 30.4
表2不同菜品在不同储存条件下的菌落总数（单位:个）
样品名称 0h 6h 12h 24h
/ 4℃ 25℃ 4℃ 25℃ 4℃ 25℃
红烧牛肉 <100 <100 100 <100 6.2×105 <100 4.8×108
炒大白菜 <100 <100 2.2×104 <100 4.4×107 <100 5.9×108
凉拌黄瓜 7.1×105 8.3×105 1.9×106 9.2×105 4.4×108 9.5×105 1.9×109
A.统计菜品中的菌落数时，可以采用稀释涂布平板法或平板划线法
B.低温下菜品中亚硝酸盐含量、菌落总数均较少与酶的变性失活有关
C.菜品中菌落总数越多，亚硝酸盐含量越高
D.相对于肉类菜品，蔬菜类菜品更不适于隔夜食用
27.“(qju)糜、糖化、发酵、压榨、陈储”是即墨老酒生产的五个环节。“煪糜”，将泡好的大黄米放入锅中不断添浆加温熬煮、搅拌而制成红棕色、铮亮、黏稠的粥；“糖化”，将好的糜降温到适当的温度后加人陈伏麦曲并不断搅拌，使其均匀的混合在一起；“发酵”，将糖化好的糜放上酵母发酵。下列说法错误的是( )
A.煪糜的主要目的是除去发酵产品中的杂菌，利于酵母菌繁殖
B.糖化阶段降温的目的是防止杀死陈伏麦曲中的微生物
C.发酵初期要适当提供O2，发酵过程中需调节pH并保持适宜的温度
D.陈储有利于老酒中醇与酸发生反应，使酒更加芳香
28.我国利用微生物发酵制作食品的历史悠久，在多种文献中均有记载。①《齐民要术》中记载：“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。”②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。”③《齐民要术》中利用谷物酿制食醋的工艺，主要发酵过程为：糖化一酒化一醋化。下列说法错误的是( )
A.①是泡菜制作过程，盐水应煮沸冷却后使用，以防止杀死发酵菌
B.②中加热杀菌保存酒液的原理，与酿酒使用的巴氏消毒法基本相同
C.③中氧气充足时糖先转化为酒再转化为醋，氧气不足时糖直接转化为醋
D.③中从酒化到醋化的过程需要移至温度较高的环境中，并通气
29.啤酒发酵依赖于发酵工程，产品质检可应用“电子舌”，电子舌可根据不同滋味信号传感器呈现的响应值对啤酒风味进行评价，结果如图。下列相关叙述错误的是( )
A.啤酒主要经酵母菌和乳酸菌发酵制成
B.发酵原料应含有糖类作为发酵菌种的碳源
C.发酵液L1和L2口味相似，而L3涩味较强
D.菌种选育可依赖于诱变育种或基因工程育种
30.反硝化细菌是一类能将硝态氮（—N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：
（1）将采集的活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7.2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中为反硝化细菌提供氮源的是_____，富集培养的目的是_____。
（2）将富集后的样品进行梯度稀释后，使用_____（填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH=6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了_____，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显_____色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5～7d，观察到小管内有气泡，检测到N20，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是__________。
（4）向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量—N等指标，结果如右图所示：
①本研究的目的是_____。
②当投菌量达到_____时，反硝化效果最好，—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，—N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是_____（答1点）。
答案以及解析
1.答案：B
解析：A、固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板，固体培养基中含有琼脂，40℃左右会凝固，因此温度过低会导致培养基凝固无法倒平板，A正确；B、倒好的平板需要冷却后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影响接种后微生物的生长，B错误；C、稀释涂布平板法分离到的单菌落仍需进一步划线纯化，以利于菌种保藏，C正确；D、稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数，D正确。故选B。
2.答案：A
解析：A、图①纯化微生物的接种方法为平板划线法，所用接种工具为接种环或接种针，A正确；B、图②纯化微生物的接种方法为稀释涂布平板法，所用接种工具为涂布器，B错误；C、稀释涂布平板法可进行微生物的分离与计数，而平板划线法不能用于微生物的计数，C错误；D、稀释涂布平板法计数的微生物数量往往比实际数目少，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的仍然是一个菌落，D错误。故选A。
3.答案：A
解析：A、腐乳制作过程中，毛霉等微生物将豆腐中的蛋白质、脂肪分解成小分子有机物并利用其中一部分能量，因此腐乳制作过程中有机物种类增多，但有机物的干重减少，含有的能量减少，A正确；B、酵母菌在氧气充足的情况下能大量生长繁殖，缺氧条件下酵母菌主要通过无氧呼吸产生酒精，在缺氧、酸性的发酵液中酵母菌可以存活，而其他微生物则因无法适应这一环境而被抑制，B错误；C、醋酸菌为需氧菌，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄糖分解成醋酸，C错误；D、为了防止发酵液受污染，应将选取的葡萄先冲洗再去枝梗，冲洗是还不能进行多次冲洗，防止酵母菌洗掉，D错误。故选A。
4.答案：B
解析：A、用于发酵的菌种可以从自然界中筛选，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，A错误；B、扩大培养的目的是增大接种时发酵罐中菌种的数目，加快发酵过程的进程，B正确；C、发酵工程的中心环节是发酵过程，C错误；D、若发酵产品是微生物细胞本身，可采过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来，D错误。故选B。
5.答案：ACD
解析：A、平板划线无法得知稀释倍数，不能用于活菌计数，故统计洗手前手部细菌的数量，选择的接种方法是稀释涂布平板法，A错误；B、除图中操作外，还需要设置一组未接种的空白培养基进行培养，以验证培养基是否被杂菌污染，B正确；C、由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只是一个菌落，故培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个、甚至几个活菌，C错误；D、由于菌落肉眼可见，故初步判断培养基上菌种的类型，可用肉眼观察菌体的形态特征，D错误。故选ACD。
6.答案：ABD
解析：A、培养基要冷却到50℃左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固，A错误；B、用稀释涂布平板法统计细菌数量时，滴加到培养基表面的菌悬液的量一般不超过0.1mL，其原因是避免培养基表面的菌液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，B错误；C、培养未接种的固体培养基是为了作为对照组，第4个平板不接种样液并与前3个平板共同培养，可用于检测是否有杂菌污染，C正确；D、第4个平板没有菌落形成，说明没有杂菌污染，且前三个平板长出的菌落数均在30~300之间，说明操作中的稀释倍数（10倍）是合适的。若接种的样液是0.1ml，则9cm2口罩样品中菌体数量为（31+42+35）=36÷0.1×10=3600个，则lcm2口罩样品中菌体数量为400个，D错误。故选ABD。
7.答案：B
解析：A、在用果酒制作果醋的过程中，发酵瓶不能装满发酵液，以促使酵母菌在发酵前期大量繁殖，通杀避免发酵液溢出，A错误；B、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，制作果醋时，图中的充气口应保持开放，B正确；C、进行发酵前，通常要先取新鲜葡萄，用清水冲洗1～2次，再去除葡萄枝梗和腐烂的籽粒，以防止杂菌污染，C错误；D、酵母菌属于兼性厌氧菌，其进行有氧呼吸产生CO2的场所是线粒体基质，进行无氧呼吸产生CO2的场所是细胞质基质；醋酸菌属于原核生物，其进行有氧呼吸产生CO2的场所是细胞质基质，故酵母菌与醋酸菌呼吸作用产生CO2的场所不一定相同，D错误。故选B。
8.答案：D
解析：①100℃煮沸5~6min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，因而能起到消毒的作用，①正确；②酒精灯火焰附近存在一个无菌区，无菌操作时，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，②正确；③利用葡萄制作葡萄酒利用的是附着于葡萄皮表面的野生型酵母菌，所以家庭制作葡萄酒时将容器进行灭菌，但葡萄不进行灭菌，以免杀死酵母菌，③错误；④培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，该灭菌方法属于湿热灭菌，④错误；⑤灭菌后的培养基要需要进行倒平板，而调试pH值操作应该在灭菌前，接种操作需要在酒精灯火焰附近进行，⑤错误。故选D。
9.答案：D
解析：A、腌制酸笋是利用乳酸菌发酵产生乳酸，而乳酸菌是厌氧型微生物，所以腌制酸笋需要水封，为乳酸菌发酵提供无氧环境，A正确；B、将酸笋发酵液接种到固体培养基中可以采用稀释涂布平板法，B正确；C、溶钙圈直径与菌落直径比值越大，表明该菌落产生的乳酸越多，即为目标菌落，C正确；D、胆固醇只含有C、H、O三种元素，不含N元素，所以不能为微生物生长提供氮源，D错误。故选D。
10.答案：（1）将淀粉分解（进行糖化）；有氧呼吸和无氧呼吸
（2）抑制或阻止其他微生物的生长
（3）0.10；接种量较大，菌数增长过快导致葡萄糖消耗过多，用于酵母菌无氧呼吸产生酒精的葡萄糖减少
（4）酵母菌发酵过程中pH降低和酒精的积累对酵母菌的代谢产生了抑制作用
解析：（1）图1中加入的甜酒曲含微生物和淀粉酶等，加入甜酒曲的目的除提供少量菌种外，还能促进蒸熟糯米的淀粉分解；主发酵中酵母菌先进行菌体的繁殖，再进行发酵，主发酵中酵母菌的呼吸作用方式为有氧呼吸和无氧呼吸。
（2）选择培养基的要求是既要允许特定微生物的生长，又要抑制或阻止其他微生物的生长。
（3）据图2可知，接种量为0.1%时，达到最大酒精含量时，产酒精量比其它接种量高，因此最佳接种量为0.1%。据图2可知，接种量为0.12%时，酒精含量最低，原因可能是接种量较大，菌数剧增过快导致葡萄糖消耗过多，用于酵母菌无氧呼吸产生酒精的葡萄糖减少。
（4）研究人员发现从发酵第8天开始，作为底物的还原糖的含量基本不再减少，可能的原因是酵母菌发酵过程中pH降低和酒精的积累对酵母菌的代谢产生了抑制作用。
11.答案：C
解析：A、为筛选出高产脂肽的菌株可在石油污染的土壤中采取土样，A错误；
B、以石油为唯一碳源的固体培养基可分离得到单个菌落，B错误；
C、由于显微镜直接计数无法区分死菌和活菌，所以使用显微镜直接计数所得的结果往往大于实际活菌数，C正确；
D、培养基采用高压蒸汽灭菌，接种环采用灼烧灭菌，D错误。
故选C。
12.答案：C
解析：A、为避免杂菌的污染，实验中的滤膜、培养皿、固体培养基等均需灭菌处理，A错误；B、对活菌进行计数的方法是稀释涂布平板法，具体方法是：先将菌体进行梯度稀释，再涂布到滤膜的表面，待菌落数稳定时进行计数，不能用显微镜直接计数的原因是显微镜直接计数不能区分死菌和活菌，B错误；C、tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白，乙组中野生型可产生tce1蛋白作用于tcel-tcil双突变体，后者无法产生tci1蛋白中和tcel蛋白的毒性，使野生菌在竞争中占据优势；而在丙组中，野生型可产生tce1蛋白作用于tcel突变体，后者可以产生tci1蛋白中和tcel蛋白的毒性，使野生型的生长受到抑制，由此推测，tcil蛋白能够中和tcel蛋白的毒性，C正确；D、由甲组、乙组可知，野生型细菌X在与tcel-tcil双突变体的竞争中均占优势，由甲组、丙组可知，野生型细菌X在与tcel突变体的竞争中不占优势，D错误。故选C。
13.答案：A
解析：A、培养过程中所用的培养基和培养皿均可采用高压蒸汽灭菌法，A错误；
B、两种方法均可通过统计菌落数，实现对活菌的估算，B错误；
C、稀释倒平板法对好氧菌、热敏感菌的分离效果优于稀释涂布平板法，C正确；
D、为了防止培养基温度过高杀死微生物，应将琼脂冷却至50摄氏度左右后再倒平板，D错误。
故选C。
14.答案：D
解析：A、培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性，但单细胞蛋白指微生物菌体，果胶酶不属于单细胞蛋白，A错误；
B、伊红一亚甲蓝培养基是鉴定大肠杆菌的培养基，本实验应该用刚果红培养基筛选高产纤维素酶菌株，B错误；
C、酒精发酵的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发酵后的酒精含量与残糖的含量曲线有交点，但两者的纵坐标数值及单位均不同，故发酵后二者含量不同，C错误；
D、由图可知，菌种接种量为15%时对应的酒精含量达到最大值，接种量超过15%，菌种数量大，自身的生长会大量消耗反应物，导致酒精产量降低，D正确。
故选D。
15.答案：B
解析：A、与使用固体培养基相比，使用液体培养基培养菌种时，菌体可以分布在整个培养基中，可充分利用其中的营养物质，提高培养液中氧气含量，菌体数量增加的更快，A正确；
B、需要从采集的样品分离得到目的菌种，不能对样品进行灭菌，B错误；
C、图a所示结果的接种次数为3次，接种环需灭菌4次，C正确；
D、利用稀释涂布平板法计算菌体浓度的方法为：菌落数÷接种液体积×稀释倍数，而用于计数的平板的菌落数应在30-300之间，因此58.5个÷0.1ml×稀释倍数=5.85×108个/ml，计算得出稀释倍数为106倍，D正确。
故选B。
16.答案：B
解析：A、各地酿酒的原材料不同，但发酵过程中都是利用酵母菌的无氧呼吸，A正确；
B、温度影响酿酒和酿醋，酿酒过程中，酵母菌的发酵温度为18-30℃，B错误；
C、加水的目的是对“酒”进行稀释，避免酒精浓度过高杀死醋酸菌（失水过多），C正确；
D、醋酸菌对氧气的含量特别敏感，“衣”位于变酸的酒表面，是由原酒中的醋酸菌在发酵液表面进行有氧呼吸大量繁殖形成的，D正确。
故选B。
17.答案：A
解析：A、乳酸菌是一种原核生物，其代谢类型为异养厌氧型，A错误；
B、适应性演化是指物种在特定环境的选择下，进化出有利于提高其适应性的表型，所以乳酸菌基因组演化是本身的适应性演化和人类长时间驯化的共同结果，B正确；
C、乳酸菌发酵生产的奶酪的形成是因为微生物发酵过程产生的酸性物质使可溶的奶蛋白变性形成不溶的凝块，奶酪再经过微生物发酵，将牛奶中蛋白质分解成小分子，有利于蛋白质的消化和吸收，避免引起乳糖不耐受，C正确；
D、工业上大规模生产时，通常会先通过微生物培养技术获得单一纯净菌种，再将它们接种到物料中进行发酵，与传统发酵相比，这种方法的好处是可以缩短发酵时间，确保品质稳定，D正确。
故选A。
18.答案：C
解析：A、生物A为酵母菌，生物C为醋酸菌，前者无氧呼吸能产生CO2，后者无氧呼吸不能产生CO2，A错误；
B、根据酶的专一性，可以用纤维素酶和果胶酶进行酶解以破坏细胞壁，B错误；
C、由酒精发酵转变为醋酸发酵，需要通入无菌空气、提高发酵温度，C正确；
D、澄清的石灰水是用来检测CO2的，检测是否含有乙醇需要用酸性重铬酸钾溶液，D错误。
故选C。
19.答案：A
解析：A、果酒制作时酵母菌一般来自果实的表皮，在发酵前期通气可以保证酵母菌大量繁殖，但后期酒精发酵应保持无氧条件，A错误；B、在制作泡菜的过程中，要注意控制温度、时间和食盐的用量，温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加，B正确；C、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，醋酸菌是好氧菌，“酿酒不成反成醋”可能是发酵容器密封不严，醋酸菌进行有氧呼吸的结果，C正确；D、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，毛霉产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，D正确。故选A。
20.答案：（1）土壤中含有的真菌、放线菌和细菌的数量有差异，且真菌、放线菌和细菌对营养物质的需求有差异
（2）涂布器；灭菌；颜色、形状、大小、透明度、光滑程度等；FG5形成的菌落表现为透明圈直径与菌落直径比值最大
（3）不含琼脂；可溶性磷含量最高
（4）培养液中溶解氧含量低，且解磷菌与培养液不能充分混合；转速过高容易导致解磷菌生长繁殖受阻
（5）为更好地实现有机磷的降解，可使用甘露醇作为碳源制备培养基，同时在培养过程中将转速设定在180r.min-1左右
解析：（1）步骤1取不同稀释度菌液接种到不同种类培养基的原因是土壤中含有的真菌、放线菌和细菌的数量有差异，因而用不同的稀释倍数，将不同稀释度的菌液涂布在不同种类的培养基上的目的是筛选出真菌、放线菌和细菌。
（2）步骤2接种的方法是稀释涂布平板法，因而使用的接种工具为涂布器，接种前需进行灼烧灭菌其具体操作是引燃涂布器上的酒精直至燃尽，而后冷却后进行涂布，其目的是防止杂菌污染。接种时，可根据菌落的颜色、形状、大小、透明度、光滑程度等挑取不同类型菌株分别接种到培养基A上。培养结果初步表明，FG5解磷能力最强，因为该菌落表现出的透明圈直径与菌落直径比值最大，
（3）与步骤2中培养基A相比，步骤3中培养基B在成分上的主要差异是其中不含有琼脂，为液体培养基。经测定，培养FG5的上清液中可溶性磷含量最高，则可确认FG5的解磷能力最强，
（4）步骤4进行摇床培养时，转速过低溶液中可溶性磷含量不高，可能由于培养液中溶解氧含量低，且解磷菌与培养液不能充分混合，因而导致培养液中的有机磷不能充分被分解，但转速过高容易导致解磷菌生长繁殖受阻，从而影响其解磷能力。
（5）根据实验数据可知，在实验条件下为更好地实现有机磷的降解，可使用甘露醇作为碳源制备培养基，同时在培养过程中奖转速设定在180r.min-1左右最适宜解磷菌的生长。
21.答案：B
解析：酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成，A正确；腐乳和果醋都是在有氧条件下发酵产生的传统食品，B错误；乳酸菌是厌氧菌，水封泡菜坛可以隔绝空气，确保坛内乳酸菌发酵处于无氧环境中，C正确；制作泡菜时，如果盐水浓度过高，乳酸菌会通过渗透作用失水，其生长受到抑制，因此制作出的泡菜会“咸而不酸”，D正确。
22.答案：D
解析：A、适量提高乳酸链球菌的接种量,可以使菌体数量增加较快,进而使Nisin浓度更快提高,因此可以缩短发酵生产周期,在较短时间收获产品,A正确;B、蔗糖是乳酸链球菌的营养物质,随着发酵的进行,发酵液中蔗糖含量逐渐降低,因此中后期补加一定量的蔗糖溶液利于菌体生长,B正确;C、乳酸菌生长过程中产生的乳酸会使发酵罐内pH下降,因此在发酵过程中向发酵罐内适时适量添加碱液,可以创造适于Nisin生产的pH条件,C正确;D、如果发酵产品是微生物细胞本身,可在发酵结束之后,采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥获得产品。如果产品是分泌到发酵液中的,可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施从发酵液中获得产品。Nisin为乳酸链球菌的分泌产物,主要存在于发酵液,D错误。
23.答案：A
解析：本题主要考查平板划线法的相关使用技巧。Ⅰ区、Ⅱ区没有出现单菌落,说明细菌数量太多,故应从Ⅲ区挑取单菌落,A正确,倒平板后不需要晃动;B错误;出现单菌落即达到了菌种纯化的目的,C错误;刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,D错误。
24.答案：C
解析：A、叶片经消毒后需用无菌水冲洗，以避免消毒剂长时间作用而产生毒害作用，A错误；
B、聚乙二醇是诱导细胞融合的物质，不是调节渗透压的物质，通常加入甘露醇来调节渗透压，B错误；
C、为了提高酶解效率，图示②过程可通过抽真空处理，利用负压使酶溶液快速渗入细胞间隙，通过处理，酶解效率会提高，C正确；
D、经组培获得的杂种幼苗，一般需要经过由无菌到有菌的炼苗过程才能用于生产实践，D错误。
故选C。
25.答案：C
解析：A、从自然界中分离菌体的方法有基因工程、诱变育种等，若生产人生长激素的工程菌是通过①获得的，则①是基因工程，A正确；B、微生物培养需要适宜的条件，在生产实践中，培养基的配方需要经过反复试验才能确定，B正确；C、发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，而④是接种，C错误；D、发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢产物，另一类是菌体本身，若⑥是微生物本身，可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离，D正确。故选C。
26.答案：D
解析：对微生物进行计数时，可以采用稀释涂布平板法，平板划线法不适于对微生物进行计数，A错误；低温抑制了酶的活性，但不会使酶变性失活，B错误；25℃下储存24h时，凉拌黄瓜中的菌落总数高于炒大白菜，但亚硝酸盐含量却低于炒大白菜，C错误；由题表实验结果可知，蔬菜类菜品中的亚硝酸盐含量与菌落总数大多等于或高于肉类菜品，故蔬菜类菜品更不适于隔夜食用，D正确。
27.答案：A
解析：A、“烟糜”，将泡好的大黄米放入锅中不断添浆加温熬煮、搅拌而制成红棕色、铮亮、黏稠的粥，其目的是进行消毒，除去发酵产品中的酵母菌等微生物，利于酒的储藏，A错误；B、“烟糜”后，温度较高，通常需要进行冷却，再加入陈伏麦曲，其目的是防止温度过高杀死酒曲中的微生物，B正确；C、发酵初期要适当提供O2，让酵母菌进行有氧呼吸，增加酵母菌的数量，有利于活化酵母，发酵过程中需调节pH并保持适宜的温度，以免影响发酵，C正确；D、陈储是将榨出的酒放入罐内存放，有利于黄酒中醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香，D正确。故选A。
28.答案：C
解析：A、①是泡菜制作过程，盐水煮沸的目的是杀菌、除去水中的溶解氧，冷却后再使用是为了防止杀死发酵菌，A正确；B、②是酿酒过程，古文中加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同，都是采用了低温加热处理的方法，B正确；C、醋酸发酵的菌种为醋酸菌，是一种好氧菌，③为酿醋的过程，在糖源不足时，醋酸菌在氧气充足条件下将酒精转化为乙醛，再将乙醛最终转化为醋酸；在糖源充足时，醋酸菌在氧气充足条件下直接将糖转化为醋，C错误；D、③中从酒化到醋化的过程与醋酸菌发酵有关，需要移至温度较高的环境中，醋酸菌对氧气敏感，故需持续通气，D正确。故选：C。
29.答案：A
解析：A、啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌无氧呼吸将糖类分解为酒精而制成的，A错误；B、酒精发酵的原材料是糖类，B正确；C、由题图可知，发酵液L1和L2口味相似，而L3涩味较强，C正确；D、菌种选育可依赖于诱变育种或基因工程育种等，获得改良幅度较大的菌种，D正确。故选A。
30.答案：（1）KNO3；对反硝化细菌进行扩增
（2）涂布器；设置重复，取平均值，减少实验误差；蓝
（3）其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低
（4）探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响；5%；投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢
解析：（1）培养基的成分主要包括碳源、氮源、水、无机盐等，培养基中KNO3含有N，可以提供氮源。
（2）稀释涂布平板法用到涂布器将样液均匀涂布在BTB培养基上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了设置重复，取平均值，减少实验误差；分析题干，反硝化细菌可以产生碱性物质，BTB是酸碱指示剂碱性条件下为蓝色，放在30℃环境中培养2~3天后，挑选周围显蓝色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）反硝化细菌和其他微生物都能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低，因此不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌。
（4）①分析题干，该实验的自变量是菌株N1的接种量，因变量是反硝化效果，因此可知，本研究的目的是探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响;
②分析图，当投菌量达到5%时，反硝化效果最好，—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，—N和总脱氮率反而下降，因为投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降;或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢。

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