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作业1　传统发酵技术的应用
(分值：100分)
第1～4题，每题5分；第5～12题，每题6分，共68分。
题组一　发酵与传统发酵技术
1．(2023·成都高二检测)下列关于发酵的说法，不正确的是(　　)
A．人们了解发酵的本质是从巴斯德开始的
B．利用前一次发酵保存下来的面团进行发面，属于传统发酵技术
C．不同的微生物发酵会产生不同的产物
D．传统发酵以液体发酵为主
2．(2024·咸阳高二联考)腐乳是利用霉菌将豆腐发酵腌制而成的豆制食品，被誉为“东方奶酪”。苏州的腐乳呈黄白色，口味细腻；北京的腐乳呈红色，略带甜味；四川的腐乳则香辣油润。下列有关腐乳的叙述，错误的是(　　)
A．多种微生物参与了豆腐的发酵，有酵母菌、曲霉和毛霉等
B．毛霉有成形的细胞核，属于真核生物，代谢类型为异养需氧型
C．发酵过程中豆腐坯上长出的“白毛”为乳酸菌的直立菌丝
D．各地腐乳的色泽风味各不相同是由腌制过程中添加的香辛料不同导致
题组二　尝试制作传统发酵食品
3．关于果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是(　　)
A．发酵所利用的微生物都属于原核生物
B．发酵过程都在无氧条件下进行
C．发酵过程都在同一温度下进行
D．发酵后形成的溶液都呈酸性
4．(2024·合肥高二月考)泡菜酸脆爽口，是人们喜爱的佐餐佳品。下列有关制作泡菜的叙述，正确的是(　　)
A．泡菜坛只装八成满有利于乳酸菌有氧呼吸进行繁殖
B．为防止杂菌污染，腌制时要多放盐并将盐水与食材一同煮沸
C．腌制泡菜时，可加入适量陈泡菜水增大乳酸菌的浓度
D．泡菜制作过程中冒出的气泡是乳酸菌发酵产生的CO2
5．(2024·沈阳高二联考)下列有关制作泡菜的叙述，错误的是(　　)
A．乳酸菌产生的乳酸不利于其他杂菌的生长，在泡菜制作过程中无需严格灭菌
B．泡菜腌制的方法和温度的高低等条件都会影响亚硝酸盐的含量
C．发酵期间，当泡菜中乳酸的质量分数为4%～8%时，泡菜的口味、品质最佳
D．盖好坛盖后向坛盖边沿的水槽注满水是为了给乳酸菌提供无氧环境
6．(2024·湖北，1)制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。醋酸菌属于好氧型原核生物，常用于食用醋的发酵。下列叙述错误的是(　　)
A．食用醋的酸味主要来源于乙酸
B．醋酸菌不适宜在无氧条件下生存
C．醋酸菌含有催化乙醇氧化成乙酸的酶
D．葡萄糖在醋酸菌中的氧化分解发生在线粒体内
7．(2023·保定高二期末)下列关于葡萄酒和葡萄醋发酵的叙述，错误的是(　　)
A．葡萄酒自然发酵过程中，起主要作用的是葡萄皮表面附着的野生酵母菌
B．葡萄酒发酵过程中，酸性、缺氧的环境不利于醋酸菌等杂菌的繁殖
C．葡萄醋制作过程中发酵液表面一般会形成一层菌膜
D．葡萄醋发酵阶段酵母菌仍会产生较多的酒精
8．如图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程，下列叙述正确的是(　　)
A．过程①和②都发生在细胞质基质，过程③和④都发生在线粒体中
B．醋酸发酵是否产生乙酸，可用pH试纸来检验
C．可利用碱性重铬酸钾检测是否有酒精产生
D．过程①～④所需的最适温度相同
9．(2023·安阳高二检测)下列有关酵母菌和醋酸菌的叙述，不正确的是(　　)
A．两者的正常繁殖都离不开氧气
B．在无氧条件下，酵母菌可以产生酒精，但醋酸菌不能产生乙酸
C．两者都是异养生物，生存都离不开葡萄糖
D．醋酸菌可以用酵母菌的某种代谢产物为原料合成乙酸
10．(2024·桂林高二月考)某同学在制作泡菜前，查阅资料得知，可以向泡菜坛中加入一些“陈泡菜水”。在制作泡菜时，他在不同时间测定了泡菜中的亚硝酸盐含量，结果如图所示。下列有关叙述正确的是(　　)
A．该同学制作出的泡菜“咸而不酸”，可能的原因是食盐浓度过高、发酵温度过低等
B．泡菜制作过程中检测亚硝酸盐含量的目的是了解乳酸菌的生长状况
C．泡菜制作过程中加入的“陈泡菜水”需要进行灭菌处理
D．泡菜制作过程中，亚硝酸盐含量越积越多，因此泡菜的取食时间越早越好
11．《齐民要术》早有记载可用酒酿醋，具体做法为“粟米饭掸冷如人体投之(米酒醅)，杷搅，绵幕瓮口，每日再度搅之。”意思是将煮好的粟米饭摊开降至人体温度，与米酒醅混合，搅拌均匀，用棉纱布盖住罐口，每天重复搅拌几次。下列说法不正确的是(　　)
A．“粟米饭”与“米酒”的混合物可以作为酿醋的原材料
B．“粟米饭掸冷如人体”避免了高温影响发酵微生物的活性
C．“绵幕瓮口”是为了更好地让发酵微生物进行无氧发酵
D．“每日再度搅之”让底层发酵更充分以增加发酵产物量
12.如图是探究果酒与果醋发酵的装置示意图。下列相关叙述正确的是(　　)
A．气体入口与气体出口可以交换使用
B．果酒发酵时通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸
C．果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关，一般设定为18～30 ℃
D．当缺少糖源和氧气时，醋酸菌可将乙醇变为乙酸
13．(14分)(2024·阳江高二期中)泡菜制作在我国已有数千年历史，白萝卜、红萝卜、小黄瓜等均可作为泡菜的原料，经发酵后在口感上比新鲜蔬菜更爽脆，既好吃，又助消化。为提高泡菜品质，某兴趣小组选取了多个不同的乳酸菌菌种和萝卜切条分别进行发酵实验，实验结果绘制曲线如图。回答下列问题：
(1)小强同学第一次尝试做泡菜时将煮沸后还未放凉的盐水倒进已装好干净蔬菜的坛中，此举存在不当之处，原因是___________________________________________________________，请你根据泡菜的发酵原理给小强提出简单有效的补救措施____________________________。
(2)从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的数量变化分别是______________________________________________________，原因是____________________。若在适宜温度下，制作的泡菜“咸而不酸”，最可能的原因是____________________________________________________________________________。
(3)从实验结果分析，图中适合泡菜发酵的菌种为__________________________，依据是______________________________________________________________________________。
14．(每空3分，共18分)实验装置设计是实验设计的重要环节。如图是一些简易发酵瓶(甲装置试管中的X溶液有助于维持甲瓶中的气压相对稳定)。请回答下列问题：
(1)与乙瓶相比，用甲瓶制作果酒的优点是________________________________。将果汁装入发酵瓶时，要留有大约1/3的空间，目的是_______________________________________。
(2)若果汁中含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？____________(填“能”或“不能”)。请说明理由：__________________________________。
(3)某小组欲利用乙瓶制出的果酒继续制作果醋，接下来的操作应该是__________________。
(4)丙瓶是另一种发酵装置，丙瓶的排气口与一个长而弯的胶管相连，目的是_______________________________________________________________________________。
答案精析
1．D　[传统发酵常常是固体发酵或者半固体发酵，D错误。]
2．C　[发酵过程中豆腐坯上长出的“白毛”为毛霉的直立菌丝，C错误。]
3．D　[参与果酒制作的微生物是酵母菌，属于真核生物，A错误；参与果醋制作的醋酸菌是好氧细菌，果醋发酵需要有氧条件，B错误；不同的发酵产物需要的温度不同，C错误。]
4．C　[乳酸菌是厌氧菌，不进行有氧呼吸，A错误；盐水需要煮沸，防止杂菌污染，食材不能煮沸，B错误；乳酸菌是厌氧菌，无氧呼吸的产物是乳酸，没有CO2产生，泡菜制作过程中冒出的气泡是一些杂菌呼吸产生的CO2，D错误。]
5．C　[乳酸质量分数为0.4%～0.8%时泡菜口味、品质最佳，C错误。]
6．D　[食用醋的酸味主要来自乙酸，A正确；醋酸菌是好氧型细菌，不适宜在无氧的条件下生存，B正确；制醋时，在缺失糖源的情况下，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸，因此醋酸菌体内含有催化乙醇氧化成乙酸的酶，C正确；醋酸菌属于细菌，没有核膜包被的细胞核和众多细胞器，因此没有线粒体，且葡萄糖的氧化分解不发生在线粒体内，D错误。]
7．D　[葡萄醋发酵阶段处于有氧环境，酵母菌进行有氧呼吸，也不产生酒精，D错误。]
8．B　[过程①是细胞呼吸的第一阶段，过程②是无氧呼吸的第二阶段，细胞呼吸的第一阶段以及无氧呼吸均发生在细胞质基质中，过程③是有氧呼吸的第二、三阶段，发生在线粒体中，而过程④为果醋制作过程，醋酸菌为好氧细菌，属于原核生物，没有线粒体，A错误；可利用酸性重铬酸钾检测是否有酒精的产生，C错误；过程①②③是酵母菌的细胞呼吸，所需的最适温度基本相同(18～30 ℃)，过程④是醋酸发酵过程，所需的最适温度在30～35 ℃，故过程①～④所需的最适温度不相同，D错误。]
9．C　[醋酸菌是好氧细菌，在氧气充足的环境中才能进行旺盛的生命活动；酵母菌属于兼性厌氧微生物，在有氧和无氧环境中都能生存，但其无氧呼吸产生的能量少，不能满足其繁殖时对能量的需求，所以两者的正常繁殖都离不开氧气，A、B正确；醋酸菌在缺乏糖源时，能将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸，同时释放能量，C错误，D正确。]
10．A　[亚硝酸盐含量过高不利于身体健康，泡菜制作过程中亚硝酸盐的含量会先升高后降低，可通过检测亚硝酸盐含量确定泡菜的取食时间，B、D错误；泡菜制作过程中加入的“陈泡菜水”可提供乳酸菌，不能进行灭菌处理，C错误。]
11．C　[粟米饭和米酒中的酒精在醋酸菌的作用下氧化，转化成乙酸和水，进行酿醋，A正确；温度会影响酶的活性，影响微生物的发酵，“粟米饭掸冷如人体”避免了高温影响发酵微生物的活性，B正确；醋酸菌是好氧细菌，“绵幕瓮口”是为了更好地让发酵微生物进行有氧呼吸，C错误；“每日再度搅之”可以提供氧气，又可使营养物质与发酵微生物充分混合，让底层发酵更充分以增加发酵产物量，D正确。]
12．B　[气体入口应深入发酵液内部使果醋发酵时醋酸菌充分与气体接触，出口则不用，故两者不能互换，A错误；果酒发酵时通入氮气，有利于发酵瓶中氧气的排出，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸，B正确；果醋的发酵温度为30～35 ℃，C错误；在缺少糖源、氧气充足时，醋酸菌可将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸，D错误。]
13．(1)高温会杀死蔬菜表面的乳酸菌　等泡菜水放凉后添加陈泡菜水(或等泡菜水放凉后接种乳酸菌)　(2)乳酸菌数量增加，杂菌数量减少　乳酸菌比杂菌更耐酸　食盐浓度过高，抑制了乳酸菌的发酵　(3)菌种2　与其他菌种及对照组相比，该菌种发酵过程中pH最低，说明产生的乳酸最多，另外亚硝酸盐含量最低
14．(1)不需要开盖放气，避免因开盖可能造成的杂菌污染　防止发酵过程中产生的 CO2造成发酵液溢出；便于发酵初期酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖　(2)不能　醋酸菌是好氧细菌，而果酒发酵为无氧环境，醋酸菌无法生存　(3)打开瓶盖，盖上一层纱布，将温度控制在30～35 ℃　(4)防止空气中的杂菌污染作业2　微生物的基本培养技术
(分值：100分)
第1～6题，每题5分；第7～12题，每题6分，共66分。
题组一　培养基的配制
1．(2024·长治高二质检)下列有关培养基的叙述，错误的是(　　)
A．培养基中一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等主要营养物质
B．根据微生物对碳源需求上的差别，可在培养基中增减不同的碳源
C．某些细菌生长过程中需要额外补充营养物质，如在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素
D．微生物只能在琼脂固体培养基表面生长并产生菌落
2．某异养自生固氮菌能将大气中的氮还原成氨，若在实验室中分离土壤中的该菌，则配制培养基时，一般不需要加入的物质是(　　)
A．蒸馏水 B．葡萄糖 C．氯化钠 D．蛋白胨
3．(2023·唐山高二检测)下列关于微生物培养基的叙述，正确的是(　　)
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利
C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．在培养细菌时，一般需要将培养基调至酸性
题组二　无菌技术
4．(2024·宁德高二期中)下列操作不属于消毒方法的是(　　)
A．牛奶在63～65 ℃下煮30 min以杀死其中的微生物
B．用体积分数为70%的酒精擦拭实验者双手
C．接种室、接种箱使用前用紫外线照射30 min
D．接种中试管口等易被污染的部位通过火焰
5．微生物的实验室培养要进行严格的灭菌和消毒。下列关于灭菌和消毒的叙述，正确的是(　　)
A．煮沸消毒法中100 ℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子
B．培养皿用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的
C．灼烧灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具
D．消毒和灭菌的原理是相同的
题组三　微生物的纯培养
6．(2023·宜宾高二期中)下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作的说法，正确的是(　　)
A．培养酵母菌的试剂和器具都要进行湿热灭菌
B．制作培养基时，湿热灭菌后还需要调pH
C．倒好的平板要立即使用，以免表面干燥，影响酵母菌生长
D．将平板倒置放入适宜温度的恒温培养箱中培养
7．采用平板划线法能将单个微生物分散在固体培养基上，下列有关平板划线操作的叙述，错误的是(　　)
A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种
C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免微生物污染环境和感染操作者
8．(2024·三明高二期末)如图是实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　)
A．①步骤使用的培养基已经灭菌
B．①②③步骤操作时均需要在酒精灯火焰旁进行
C．④步骤操作时，不能将第1区和第5区的划线相连
D．④操作过程中，需灼烧接种环5次
9．如表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是(　　)
序号 粉状硫10 g K2HPO4 4 g FeSO4 0.5 g 蔗糖10 g (NH4)2SO4 0.4 g H2O 100 mL MgSO4 9.25 g CaCl20.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
注：“＋”表示含有该物质，“－”表示不含有该物质。
A．甲、乙、丙都是异养型微生物
B．甲、乙都是自养型微生物、丙是异养型微生物
C．甲是固氮微生物、乙是自养型微生物、丙是异养型微生物
D．甲是异养型微生物、乙是固氮微生物、丙是自养型微生物
10.生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，某研究小组把该菌的悬浮液与不含任何特殊营养物质但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法不正确的是(　　)
A．倒平板后直接培养可判断有无污染
B．将所有平板放置在适宜的37 ℃下倒置培养并观察
C．图示结果表明该菌需要特殊营养物质乙和丙
D．生长图形法还可用于某些菌种的筛选
11．(2024·珠海高二期中)关于无菌技术，下列叙述错误的是(　　)
A．消毒只能杀死物体表面的部分微生物
B．消毒采用较温和的物理、化学或生物方法
C．灭菌能杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子
D．操作者的双手需要用化学药物进行灭菌处理，避免操作过程中的污染
12．某研究小组用平板划线法从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是(　　)
A．倒平板后应立即将培养皿倒置
B．转换划线角度时不需灼烧接种环即可进行划线
C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的
D．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上
13．(每空3分，共18分)请根据所学微生物培养的知识，回答下列问题：
(1)在液体培养基中加入____________后制成的固体培养基，是实验室最常用的培养基。
(2)实验室中常用____________法对培养基及器皿进行灭菌。不同培养基的具体配方不同，但一般都含有水、____________、____________和无机盐。
(3)培养微生物时，将培养皿倒置的目的是___________________________________________。实验结束后，应对使用过的培养基进行_____________________________处理。
14．(16分)(2022·全国乙，37)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。
碳源 细胞干重/(g·L－1) S产量/(g·L－1)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖废液 2.30 0.18
回答下列问题：
(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所用的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有__________________________________________________________________(答出2点即可)。
(2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______________；用菌株C生产S的最适碳源是______________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要______________________(答出2点即可)等营养物质。
(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是______________________。
(4)(4分)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：___________________________________________________。
(5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其意义是_________________________________。
答案精析
1．D　[微生物可以在琼脂固体培养基表面或内部生长，形成肉眼可见的菌落，D错误。]
2．D　[培养该菌时，需要加入蒸馏水；该微生物为异养生物，需要葡萄糖作为碳源；培养该微生物需要无机盐，故需要加入氯化钠；该微生物可以自己固氮，不需要加入氮源，故不需要加入蛋白胨，D符合题意。]
3．A　[固体培养基中含有凝固剂琼脂，加入水不会制成液体培养基，C错误；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，D错误。]
4．D　[接种中试管口等易被污染的部位通过火焰，属于灼烧灭菌，D符合题意。]
5．D　[灭菌可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子，消毒只能杀死物体表面或内部一部分微生物，A错误；玻璃器皿等耐高温、需要保持干燥的实验器具，应采用干热灭菌法进行灭菌，而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的，B错误；灼烧灭菌的对象可以是金属器具，也可以是玻璃器具，C错误；消毒和灭菌的原理是相同的，都是使微生物的蛋白质变性，D正确。]
6．D　[接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用湿热灭菌法处理，A错误；制作培养基时，应先调pH再灭菌，B错误；倒好的平板需要冷却后再使用，C错误。]
7．C　[从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，C错误。]
8．D　[每次划线前后都要灼烧接种环，因此④操作过程中，需灼烧接种环6次，D错误。]
9．C　[根据表格分析，甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培养基缺氮，说明甲属于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，而甲和丙都不能，Ⅱ培养基中没有有机碳源，说明乙属于自养微生物；而丙不能在Ⅰ培养基中生长，说明不能固氮，又不能在Ⅱ培养基中生长，说明不能合成有机物，只能在Ⅲ培养基中生长，说明丙属于异养微生物，C正确。]
10．B　[倒平板后不接种任何菌种直接进行培养观察有无菌落的出现，可以判断培养基有无污染，A正确；该菌为嗜热菌，应放置在其适宜的高温条件下培养，而不是37 ℃，B错误；图中嗜热菌在添加了乙、丙特殊营养物质的区域生长，故该菌需要的特殊营养物质是乙和丙，C正确；不同的菌种所需的特殊营养物质不同，利用生长图形法可用于某些菌种的筛选，菌种只会在提供其需要的生长因子的区域生长，D正确。]
11．A　[消毒也可以杀死物体内部的部分微生物，A错误。]
12．C　[倒平板后应等平板冷凝后，再将培养皿倒置，A错误；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌，接种环冷却后再进行划线，B错误；划线时左手将皿盖打开一条缝隙，右手于酒精灯火焰旁将接种环迅速伸入平板内，在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖，不可完全打开皿盖，D错误。]
13．(1)琼脂(凝固剂)　(2)湿热灭菌　碳源　氮源　(3)防止皿盖上的水珠落入培养基　灭菌
14．(1)干热灭菌、湿热灭菌(或高压蒸汽灭菌)　(2)葡萄糖　制糖废液　氮源、无机盐、生长因子　(3)缺少淀粉酶　(4)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度　(5)减少污染、节省原料、降低生产成本
解析　(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染，对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有干热灭菌、湿热灭菌(或高压蒸汽灭菌)、灼烧灭菌。(2)分析题干实验结果，以葡萄糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C生长的最适碳源是葡萄糖；以制糖废液为碳源时，S产量最高，故用菌株C生产S的最适碳源是制糖废液。微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源以及特殊的营养物质，故菌株C的生长除需要碳源外，还需要氮源、无机盐、生长因子等营养物质。(3)由实验结果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉为碳源时，菌株C不能生长，说明菌株C无法利用淀粉，原因是菌株C不能合成淀粉酶，导致其无法利用淀粉。(4)以制糖废液作为碳源，进一步确定生产S的最适碳源浓度，可以以碳源浓度作为自变量，不同碳源浓度下S产量作为因变量，实验思路为：设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，从而确定最适碳源浓度。作业3　微生物的选择培养和计数
(分值：100分)
第1～9题，每题6分；第10～11题，每题7分，共68分。
题组一　选择培养基和微生物的选择培养
1．(2022·江苏，3)下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是(　　)
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
2．(2023·邢台高二期中)原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是(　　)
A．应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用
B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基
C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上
D．在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种
3．油烟污染由多种有害物质组成，不易降解。某同学从长期受到油烟污染的环境中分离出油烟降解菌，其筛选分离过程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．图中①～③的过程为梯度稀释
B．在培养基中加入油烟污染物，其作用是为微生物提供碳源和能源
C．④使用的是固体培养基，需加入琼脂作为微生物生长繁殖的营养物质
D．过程④可采用稀释涂布平板法或平板划线法分离菌种并进行计数
4．(2024·广州高二期末)稀释涂布平板法是微生物培养与计数中常用的方法，下列叙述错误的是(　　)
A．由于土壤中细菌的数量庞大，需将土壤溶液稀释后再涂布在选择培养基上培养计数
B．稀释涂布平板法操作时可用无菌水进行稀释
C．涂布器使用前和使用后均需要灼烧灭菌
D．在同一稀释度下至少对3个平板进行重复计数，统计的菌落数目往往比活菌数目多
5．(2024·玉溪高二期中)从自然界筛选嗜盐菌(好氧型)的一般步骤：采集菌样→富集培养→纯种分离→计数及性能测定。图1表示上述步骤中的一个环节，图2表示该筛选过程中一个培养基上菌落的分布情况，其中白色部分为透明圈，黑点代表大小不同的菌落。下列相关叙述正确的是(　　)
A．富集培养必须在固体培养基中进行
B．图1所示的接种方法也适用于对细菌进行计数
C．图2中嗜盐菌的耐盐性能最强的是乙
D．按用途划分，图1所示的培养基属于鉴别培养基
题组二　微生物的数量测定
6．(2023·无锡高二质检)养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可被硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中，下列说法正确的是(　　)
A．需要配制添加一定浓度铵盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌
B．应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行
C．采用平板划线法进行分离和计数时，还需与未接种的空白培养基同时培养
D．若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数
7．下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法的叙述，不正确的是(　　)
A．利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法，其缺点是不能区分死菌与活菌
B．两种计数方法，其统计值与实际值相比，均有差异，但产生差异的原因不同
C．两种计数方法均能在计数的同时观察到所研究微生物的形态特征
D．当菌落数目稳定时，一般选取菌落数在30～300的且差异不大的平板进行计数
8．(2024·西宁高二期中)如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验示意图。据图分析，下列相关叙述错误的是(　　)
A．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是5号试管中的10倍
B．5号试管中稀释液进行平板培养的结果表明每克该土壤中的菌株数目为1.7×106个
C．当样品稀释度足够高时，一般平板上一个单菌落来源于一个活菌
D．某一稀释度下至少涂布3个平板，确保实验结果的准确性
9．(2021·山东，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是(　　)
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
10．筛选是分离和培养微生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是(　　)
A．在全营养的LB培养基(普通培养基)中，筛选大肠杆菌
B．在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物
C．用以纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物
D．在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体的微生物
11．(2023·重庆高二期中)精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图。下列相关叙述不正确的是(　　)
A．野生型菌液的培养皿中不会出现菌落
B．乙培养基与甲相比可能缺少了精氨酸
C．紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生可遗传变异
D．乙中的菌落A为鸟氨酸发酵的优良菌种
12．(16分)某生物兴趣小组试图探究山羊瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌(目的菌)。实验步骤如图所示。请回答下列问题：
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数 500 367 248 36 18
(1)该实验中所用培养基在成分上的特殊要求是______________________；培养基中的KH2PO4和Na2HPO4的作用有_____________________________________________________。
(2)实验中采用的分离纯化细菌的方法是____________________________________________。实验过程中，除了需将接种后的平板放在适宜的环境中培养一段时间后观察，还需要设置在相同条件下培养的_______________，作为对照实验，其目的是_________________________。
(3)为了计数细菌，将取自瘤胃中的液体进行稀释，接种在培养基上，放置在37 ℃恒温培养箱中培养24～48 h，统计菌落数，结果如上表。其中________倍的稀释倍数比较适合计数。有同学认为，该计数方法统计的细菌数目会比实际数目________，他的理由是_______________________________________________________________________________。
13．(16分)(2023·龙岩高二期末)某种在田间广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能有效降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明，培养皿中会残留少量无菌空气)。回答下列问题：
(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。
(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、营养成分的角度要求上述培养基具备的特点是__________________________________。若需要调节培养基pH，应在灭菌________(填“前”或“后”)进行。对培养基进行灭菌，常采用________________法。
(3)图中形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源可能是________________，有透明带菌落利用的氮源主要是________________，据此可筛选出目的菌。
(4)若对活菌进行计数，常用的接种方法为____________________。为了测定微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液 0.1 mL，培养后菌落数目分别为155、160、176、149，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为________个。
答案精析
1．D　[农田或公园土壤中含有较多的产脲酶的微生物，A合理；为了筛选可分解尿素的细菌，配制的培养基应选择尿素作为唯一氮源，能合成脲酶的微生物在该培养基上能生长，B合理；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，C合理；在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，D不合理。]
2．C　[若将土壤稀释液进行灭菌，则不能筛选出能高效降解原油的菌株，C错误。]
3．B　[图中①～③的过程中加入油烟污染物作为唯一碳源，能够初步筛选出能分解油烟的微生物，故该过程称为选择培养，A错误；配制固体培养基时加入琼脂，其作用是作为凝固剂，而不是为微生物生长提供碳源，C错误；分离菌种常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，但对活菌进行计数时常用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，D错误。]
4．D　[当两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落，因此统计的菌落数目往往比活菌的数目少，D错误。]
5．C　[富集培养一般在液体培养基中进行，A错误；图1所示的接种方法是平板划线法，该方法不适于对细菌进行计数，B错误；图2中的乙菌落的透明圈直径/菌落直径最大，说明该菌落嗜盐菌的耐盐性能最强，C正确；图1所示的培养基属于选择培养基，D错误。]
6．B　[要分离硝化细菌，应该用以铵盐为唯一氮源的培养基，培养基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A错误；平板划线法不能用于菌落计数，C错误；若空白对照组上长出了菌落，则说明培养基被污染了，实验数据无效，需重新实验，D错误。]
7．C　[显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌，A正确；稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故而统计值比实际值小；显微镜直接计数法计数时不能区分死菌和活菌，故测定的微生物数量往往大于实际的活菌数，因此两种计数方法其统计值与实际值相比，均有差异，但产生差异的原因不同，B正确；稀释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特征，显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征，C错误。]
8．B　[5号试管中稀释液进行平板培养的结果表明，每克土壤中的菌株数为(168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109(个)，B错误。]
9．B　[根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲菌可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确；乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确；可以利用该平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以是菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。]
10．A　[在全营养的LB培养基(普通培养基)中，几乎所有细菌都能生长，不能筛选大肠杆菌，A符合题意；在尿素固体培养基中，只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生长，能够筛选分解尿素的微生物，B不符合题意；在以纤维素为唯一碳源的培养基中，只有能分解纤维素的微生物才能生长，不能分解纤维素的微生物因缺乏碳源不能生长，能够筛选分解纤维素的微生物，C不符合题意；在培养基中加入不同浓度的氯化钠，只有抗盐的微生物才能生长，故可用于筛选抗盐突变体的微生物，D不符合题意。]
11．D　[由图观察可知，乙中的菌落A是野生型菌种，菌落B为精氨酸依赖型菌株，B可作为鸟氨酸发酵的优良菌种，D错误。]
12．(1)以尿素为唯一氮源　为细菌生长提供无机盐、作为缓冲液维持培养液的pH　(2)稀释涂布平板法　未接种的空白培养基　检测培养基是否被污染　(3)105或106　偏小　当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
13．(1)稀释　(2)以除草剂为唯一氮源的固体培养基　前　湿热灭菌　(3)N2　该除草剂　
(4)稀释涂布平板法　1.6×109
解析　(3)根据题中信息“该除草剂的培养基不透明”，则可知无透明带菌落利用的氮源并不是除草剂，而是空气中的N2，有透明带菌落利用的氮源为该除草剂。(4)接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法还可用于对微生物进行计数。在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1 mL，培养后菌落数目分别为155、160、176、149，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为(155＋160＋176＋149)÷4÷0.1×106＝1.6×109(个)。作业4　发酵工程及其应用
(分值：100分)
第1～12题，每题6分，共72分。
题组一　发酵工程的基本环节
1．下列关于微生物发酵过程的说法，正确的是(　　)
A．菌种选育是发酵工程的中心环节
B．只要不断地向发酵罐中通入液体培养基，就能保证发酵的正常进行
C．在发酵过程中，要严格控制温度、pH、溶解氧、通气量与转速等发酵条件，否则会影响菌种代谢物的形成
D．在发酵工程的发酵环节中，发酵条件会影响微生物的生长繁殖，但是不影响微生物的代谢途径
2．(2023·沧州高二检测)通过发酵罐发酵可大规模生产谷氨酸，生产中常用的菌种是好氧的谷氨酸棒状杆菌。下列有关谷氨酸发酵过程的叙述，正确的是(　　)
A．配制高浓度营养物质的培养基，会使谷氨酸棒状杆菌大量繁殖
B．用一般的过滤、沉淀等方法无法将谷氨酸从培养液中分离提取出来
C．排出发酵罐中的谷氨酸，不利于谷氨酸的合成和产量的提高
D．发酵液pH呈碱性时，谷氨酸棒状杆菌易形成谷氨酰胺
3．(2023·深圳高二月考)下列有关发酵工程基本环节的叙述中，不合理的是(　　)
A．由于工业发酵罐所需接入的菌种总体积一般都比较大，所以，在发酵之前还需要对菌种进行扩大培养
B．在菌种确定之前，要先制备好培养基
C．发酵工程中所用的菌种大多是单一菌种
D．如果发酵产品是代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品
4．(2024·延安高二期中)发酵工程可实现发酵产品的大规模生产，如图为发酵工程的基本环节，下列相关叙述正确的是(　　)
A．①②可以是诱变育种或基因工程育种
B．开始发酵后就不能再往发酵罐内添加营养物质，避免杂菌污染
C．产物浓度的检测必须在发酵结束后进行
D．发酵条件为室温和近中性的pH等
题组二　发酵工程的应用
5．与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列叙述错误的是(　　)
A．传统发酵技术多是混合菌种发酵，发酵工程一般为纯种发酵
B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
C．发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身
D．发酵工程通常可以采用连续培养的方法以最大限度地获得人类所需的产品
6．(2024·绵阳高二检测)下列关于发酵工程在食品工业上的应用的叙述，错误的是(　　)
A．生产传统发酵产品，如利用产生蛋白酶的霉菌酿造酱油
B．生产各种各样的食品添加剂，可以改善食品的口味但不能增加食品的营养
C．生产食品酸度调节剂，如柠檬酸可以通过黑曲霉的发酵制得
D．生产酶制剂，少数酶制剂由动植物生产，绝大多数通过发酵工程生产
7．近年来，在农牧业生产上，微生物肥料、微生物农药和微生物饲料得到广泛应用。下列相关叙述错误的是(　　)
A．微生物肥料是利用微生物代谢产生的有机酸、生物活性物质等发挥作用
B．微生物农药指的是微生物的代谢物，而不是微生物本身
C．微生物饲料主要是利用微生物大量繁殖产生的高蛋白菌体来生产饲料的
D．单细胞蛋白被作为饲料使用，是因为微生物的蛋白质含量高，繁殖快
8．(2024·衡水高二期中)下列关于发酵工程应用的说法，正确的是(　　)
A．食品添加剂可以改善食品的色、香、味，使用时应尽量多添加
B．利用放线菌产生的井冈霉素防治水稻枯纹病是化学防治的有效手段
C．在青贮饲料中添加乳酸菌，可以提高饲料的品质，使饲料保鲜，同时提高动物免疫力
D．一些极端微生物已应用于生产实践，例如，嗜热菌有助于提高热敏性产品的产量
9．(2022·山东，14)青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是(　　)
A．发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖
B．可用深层通气液体发酵技术提高产量
C．选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中
D．青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌
10．(多选)某高校采用如图所示的发酵罐进行葡萄酒主发酵过程的研究，下列叙述正确的是(　　)
A．夏季生产果酒时，常需对罐体进行升温处理
B．乙醇为挥发性物质，故发酵过程中空气的进气量不宜太大
C．正常发酵过程中罐内的压力会低于大气压
D．可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
11．(2022·山东，20改编)啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法不正确的是(　　)
A．用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生α-淀粉酶
B．焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌
C．糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵
D．在菌种选育上，使用基因工程改造的啤酒酵母，可以加速发酵过程，缩短发酵周期
12．(2024·朔州高二期中)下列对发酵工程应用的叙述，错误的是(　　)
A．发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身
B．谷氨酸发酵生产中，要将pH严格控制在中性或弱酸性
C．从某些微生物中分离出的抗生素，可以作为微生物农药用于防治作物疾病
D．发酵工程生产的微生物肥料可能抑制土壤中病原微生物的生长
13．(14分)(2023·镇江高二检测)青霉素是一种常用的抗生素，其工业化生产流程如图所示。请据图分析回答下列问题：
(1)培育青霉素高产菌株的育种方法是__________，过程①②属于发酵工程的____________环节，其主要目的是_______________________________________________________________。
(2)过程③不能用化学药物进行灭菌处理，原因是_____________________________________。
(3)发酵过程中必须严格控制好______________________________(至少答出3点)等发酵条件，使发酵全过程处于最佳状态；同时定期检测______________________(至少答出2点)等，以了解发酵进程。
(4)过程④常用的方法是________。
14．(14分)(2024·南阳高二联考)啤酒是以大麦芽、啤酒花、水为主要原料，经酵母发酵作用酿制而成的饱含二氧化碳的低酒精度酒。啤酒中的低分子糖和氨基酸很容易被吸收利用，在体内产生大量的热量，被称为“液体面包”。图1是啤酒生产工艺流程简图。回答下列问题：
(1)图1中焙烤的目的是降低麦芽水分，并________________________，但不使淀粉酶失活，然后去根制成成品麦芽。将粉碎的麦芽等原料用温水分别在糊化罐、糖化罐中混合，调节温度以制造麦汁，破碎麦芽的目的是_________________________________________________。
(2)____________________是发酵工程的中心环节。麦汁冷却后再加入啤酒酵母使其发酵，麦汁冷却的目的是_________________________________________________________________。
(3)现代发酵工程使用的大型发酵罐均具有计算机控制系统，能使发酵全过程处于最佳状态，图2为发酵罐示意简图。发酵过程有机物分解释放的能量会引起发酵罐温度升高，常用冷却水对发酵罐进行温度的调节，冷却水进入口和排出口分别是______(填图2中的标号)。酵母菌酒精发酵过程中要“先通气后密封”，通过空气入口________(填图2中的标号)来控制溶解氧。发酵还需要用排气管调节罐压，原因是________________________________________。
答案精析
1．C　[发酵工程的基本环节包括菌种选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面，其中发酵是发酵工程的中心环节，A错误；发酵过程中应随时检测培养液中的细菌数目、产物浓度等，同时应对发酵过程中的一些条件进行控制才能保证发酵的正常进行，B错误；在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径，D错误。]
2．B　[谷氨酸棒状杆菌在扩大培养时，培养基中营养物质的浓度要合适，若浓度过高，不利于谷氨酸棒状杆菌的大量繁殖，A错误；谷氨酸是小分子物质，单纯的过滤、沉淀等方法不能将谷氨酸从培养液中分离提取出来，B正确；谷氨酸发酵过程中，当谷氨酸合成量过多时，就会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而使谷氨酸的合成过程中断，因此需要及时地排出谷氨酸，才可以解除此抑制作用，有利于谷氨酸的合成和产量的提高，C错误；谷氨酸发酵过程中，当发酵液的pH为酸性时，谷氨酸棒状杆菌易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺，D错误。]
3．B　[培养基要在菌种确定之后，再选择原料制备。而且在生产实践中，培养基的配方要经过反复试验才能确定。]
4．A　[在发酵过程中要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程，还要及时添加必需的营养组分，同时要严格控制发酵条件，B、C错误；不同微生物的最适温度和pH有所不同，因此不同发酵过程需控制的温度和pH也有所不同，D错误。]
5．B　[单细胞蛋白是指以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废料等为原料，通过发酵获得的大量的微生物菌体，而并非微生物的代谢物，B错误。]
6．B　[食品添加剂不仅可以改善食品的口味，还能增加食品的营养，B错误。]
7．B　[微生物农药是利用微生物或其代谢物来防治病虫害的，B错误。]
8．C　[食品添加剂过量使用会对人体健康造成影响，甚至危及生命，不能过量使用，A错误；利用放线菌通过发酵工程产生的井冈霉素防治水稻枯纹病，属于生物防治，B错误；自然界中还存在着一定数量的极端微生物，其中一些极端微生物已应用于生产实践，例如，嗜热菌、嗜盐菌可以用来生产洗涤剂，嗜低温菌有助于提高热敏性产品的产量，D错误。]
9．D　[青霉菌处于葡萄糖浓度不足的环境中会通过分泌青霉素杀死细菌；提供相同含量的碳源，葡萄糖溶液单位体积中溶质微粒较多，会导致细胞失水，发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖，乳糖是二糖，可被水解为半乳糖和葡萄糖，是青霉菌生长的最佳碳源，可以被青霉菌缓慢利用而维持青霉素分泌的有利条件，A正确；青霉菌的代谢类型为异养需氧型，可用深层通气液体发酵技术提高产量，B正确；选育出的高产青霉素菌株经扩大培养纯化后，才可接种到发酵罐中进行工业化生产，C正确；为了防止细菌、其他真菌等微生物的污染，获得纯净的青霉素，发酵罐仍需严格灭菌，D错误。]
10．D　[果酒发酵的适宜温度为18～30 ℃，因此夏季生产果酒时，常需对罐体进行降温处理，A错误；乙醇是酵母菌无氧呼吸的产物，因此发酵过程中不需要通入空气，B错误；无氧呼吸产生了二氧化碳，但是没有消耗氧气，因此发酵罐中的气压不会低于大气压，C错误；葡萄酒发酵的原料是糖类，因此可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵，D正确。]
11．B　[焙烤是为了加热杀死大麦种子胚，但不使淀粉酶失活，不是利用高温进行灭菌，B错误。]
12．B　[谷氨酸发酵生产中，在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸，在酸性条件下容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺，B错误；有的微生物肥料可以抑制土壤中病原微生物的生长，从而减少病害的发生，D正确。]
13．(1)诱变育种　扩大培养　快速增加菌种的数量　(2)残留在培养基中的化学药物会抑制青霉菌的生长繁殖　(3)温度、pH、溶解氧、罐压、营养物质　微生物数量、产物浓度　(4)过滤
14．(1)加热杀死大麦种子胚　有利于淀粉酶与淀粉充分接触， 提升反应速率　(2)发酵罐内发酵　防止接种时酵母菌被杀死　(3)③④　⑤　防止酵母菌无氧呼吸产生的 CO2气体使发酵罐中的液体培养基溢出，防止罐体气压过高引起爆裂

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