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(共71张PPT)
模块检测试卷(二)
1.(2023·绵阳高二检测)泡菜是许多餐桌上不可缺少的一道佐餐佳品。下列有关泡菜发酵的叙述，正确的是
A.与泡菜风味形成直接有关的乳酸菌不会分布在植物的体表和空气中
B.乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸的过程，只在其细胞质基质内完成
C.在坛沿水已干涸的泡菜坛内，乳酸菌在液体表面繁殖出现“生
花”“长膜”现象
D.在配制泡菜水时，应将清水煮沸冷却后再配制相应质量分数的盐水
√
选择题
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在自然界中，乳酸菌分布广泛，空气、土壤、植物体表、人和动物的肠道内都有乳酸菌分布，A错误；
在坛沿水已干涸的泡菜坛内，液体表面出现“生花”“长膜”现象，这主要是由兼性厌氧微生物——酵母菌形成的，C错误；
在配制泡菜水时，应先用清水和食盐配制相应质量分数的盐水，然后再煮沸冷却，D错误。
2.(2024·延安高二期末)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列关于酵母菌的纯培养的叙述，错误的是
A.采用平板划线法和稀释涂布平板法均可分离酵母菌
B.可用湿热灭菌法对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌
C.通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，可将菌种逐
步稀释
D.完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将接种后的平板进行培养
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选择题
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通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，C错误。
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3.如图表示采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列有关叙述不正确的是
A.该实验所用的器具、
培养基均需灭菌处理
B.①→②→③重复培养
能提高目的菌的比例
C.④→⑤的培养过程可
以纯化并计数目的菌
D.⑥⑦的培养基中都应含有对羟基苯甲酸
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⑥与⑦形成对照，其中一组加入对羟基苯甲酸，另一组不加，D错误。
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4.(2023·张家口高二调研)草莓营养价值高，被誉为“水果皇后”。如图为利用现代生物技术改良草莓品系的过程，下列相关叙述错误的是
A.过程Ⅰ能定向改变生物的遗传性状
B.过程Ⅱ可直接用聚乙二醇作为化
学诱导剂来诱导植物细胞融合
C.凤梨风味绿色草莓植株的培育原
理有细胞膜的流动性和植物细胞
的全能性
D.杂种细胞A形成的标志是再生出新的细胞壁，该过程与高尔基体有关
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选择题
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过程Ⅱ必须先利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质体，再用聚乙二醇作为化学诱导剂来诱导原生质体的融合，B错误。
选择题
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5.研究发现，生长素能够维持拟南芥bZIP59蛋白的稳定性，并增强其与LBD形成复合物的能力，bZIP59－LBD复合体直接靶向FAD－BD基因，并促进其转录，这有助于愈伤组织的形成。下列相关叙述错误的是
A.生长素通过调控植物细胞的基因表达而影响植物细胞全能性的表达
B.脱分化期间一般不需要光照，再分化时需要适当光照诱导叶绿素产生
C.杂菌污染会影响植物组织培养，因此需要对培养基和离体的植物组织
进行灭菌处理
D.植物组织培养的培养基中需要加入有机物
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选择题
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生长素通过促进bZIP59－LBD复合体的形成促进FAD－BD基因的转录，这有助于愈伤组织的形成，愈伤组织是一团未分化的细胞，全能性较高，说明生长素通过调控植物细胞的基因表达而影响植物细胞全能性的表达，A正确；
脱分化阶段一般不需要光照，愈伤组织再分化到一定阶段，形成叶绿体，能进行光合作用，需要弱光照射，B正确；
选择题
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离体的植物组织不能灭菌处理，需要消毒，C错误；
离体的植物组织培养到愈伤组织阶段的过程不能把无机物合成为有机物，因此培养基中需要加入有机物，D正确。
选择题
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6.机体发生炎症反应时，血浆中CD14水平会升高。利用小鼠制备抗CD14单克隆抗体，能够用于CD14的检测。下列相关叙述正确的是
A.反复将CD14注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B.灭活的病毒是唯一能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的因素
C.利用杂交瘤技术获得的杂交瘤细胞都可以产生抗CD14抗体
D.杂交瘤细胞体外培养过程中需要提供CO2以维持培养液的pH
选择题
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选择题
单克隆抗体是经过细胞融合技术产生的，A错误；
能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等，B错误；
利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞要经过克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，才可以获得专一产生抗CD14抗体的杂交瘤细胞，C错误。
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7.(2024·泉州高二期中)野生动物郊狼的物种数量近年不断减少、濒临灭绝，科研人员利用种间体细胞核移植技术(iSCNT)培育小郊狼的流程如图所示。下列叙述正确的是
选择题
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A.图中①是第二极体，②是透明带
B.iSCNT技术比胚胎细胞核移植技术难度要大
C.郊狼的耳廓组织培养时一般需提供营养和酸性环境
D.③通常需要激活，使其完成减数分裂和发育进程
选择题
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图中①是第一极体，A错误；
郊狼的耳廓组织在培养时，
最适的pH为7.2～7.4，C错误；
③是重构胚，通常需要激活，
使其完成细胞分裂和发育进
程，但此过程中不进行减数
分裂，D错误。
选择题
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8.(2023·天津，7)据图，下列叙述正确的是
A.子代动物遗传性状和
受体动物完全一致
B.过程1需要MⅡ期去核
卵母细胞
C.过程2可以大幅改良动物性状
D.过程2为过程3提供了量产方式，过程3为过程1、2提供了改良性状的方式
选择题
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子代动物的遗传性状与供体基本一致，与受体无关，A错误；
核移植过程中需要处于MⅡ期的去核卵母细胞，而过程1是培育试管动物，需要培育到适宜时期(桑葚胚或囊胚期)进行胚胎移植，B错误；
选择题
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过程2得到的是克隆动物，是无性生殖的一种，不能大幅改良动物性状，C错误；
过程2克隆技术可得到大量同种个体，为过程3提供了量产方式，过程3转基因技术可导入外源优良基因，为过程1、2提供改良性状的方式，D正确。
选择题
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9.“脑彩虹”是一项最新的大脑成像技术，通过荧光蛋白“点亮”大脑内的神经元，科学家可以了解大脑的活动。研究者设计如图所示的DNA片段，转入小鼠体内，获得每个细胞仅含一个图示片段的转基因小鼠。Cre酶是该技术的关键
酶，能随机识别两个相
同的loxP序列，并将两
段序列之间的DNA敲除。
下列有关说法正确的是
选择题
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A.启动子M应当是一种只有脑组织中启动基因表达的启动子
B.在没有Cre酶存在的条件下，小鼠某脑神经元活动时，发出荧光的颜色
可能有3种
C.在有Cre酶存在的条
件下，小鼠某脑神
经元活动时会发出
红色或蓝色的荧光
D.向小鼠细胞中转入图示基因时，应用PEG对受精卵细胞进行预处理
选择题
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根据题干信息可知，荧光蛋白指示的应是脑神经元活动，但脑活动不能被离体观察，为了防止其他体细胞的荧光信号对实验结果造成干扰，M应当是一种只在脑组织中启动基因表达的启动子，A正确；
据题图分析可知，只有与启动子M相邻的荧光蛋白基因会表达，在没有Cre酶存在的条件
下，小鼠脑神经元活
动时只会发出红色荧
光，B错误；
选择题
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Cre酶可以随机识别两个相同的loxP序列，并将两段序列之间的DNA敲除，当酶识别的是loxP1序列时，小鼠脑神经元活动时发出黄色荧光，当识别的是loxP2序列时，小鼠脑神经元活动时发出蓝色荧光，C错误；
聚乙二醇(PEG)多用于
诱导细胞融合，动物
细胞转基因时常用显
微注射技术，显微注射技术不需要用到PEG，D错误。
选择题
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10.早期胚胎细胞异常凋亡是目前克隆猪成功率低的主要原因。用实时荧光逆转录PCR技术(RT－qPCR)检测细胞凋亡抑制基因Bcl－2的表达水平，有助于了解胚胎发育不同时期Bcl－2表达水平与细胞凋亡的关系。下列说法错误的是
选择题
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A.对重构胚进行培养时需加入血清等天然成分
B.卵母细胞采集后，一般要在体外培养成熟再去核作为受体细胞
C.根据RT－qPCR荧光强度可计算出基因Bcl－2在相应细胞中的翻译水平
D.胚胎在受体子宫发育过程中，其遗传特性不受影响
√
选择题
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卵母细胞采集后，要在体外培养成熟(MⅡ期)再去核，作为核移植的受体细胞，B正确；
根据RT－qPCR最终
的荧光强度不可计算
出基因Bcl－2在相应
细胞中的翻译水平，在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量分析，C错误；
选择题
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胚胎在受体子宫发育过程中，其遗传特性不受影响，受体子宫只是提供了一个发育的场所，D正确。
选择题
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11.科学家将c－Myc、Klf4、Sox2和Oct3/4这四个关键基因转入高度分化的小鼠成纤维细胞内，细胞在一定条件下转变成iPS细胞(诱导多能干细胞)。在适当条件诱导下，iPS细胞可以定向分化成各种细胞。下列叙述不正确的是
选择题
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A.图示过程运用了转基因技术和动物细胞培养技术
B.iPS细胞分化成各种组织细胞的过程中遗传物质发生了变化
C.iPS细胞分化为脂肪细胞的过程中发生了基因的选择性表达
D.小鼠成纤维细胞转变成iPS细胞后分化潜能提高
选择题
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据题图分析可知，将四个关键基因转入高度分化的小鼠的成纤维细胞，再通过培养转变成iPS细胞，运用了转基因技术，原理是基因重组，同时培养小鼠的成纤维细胞运用了动物细胞培养技术，A正确；
选择题
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iPS细胞分化成各种组织细胞的过程中，细胞的形态、结构和生理功能发生改变，细胞分化的实质是基因的选择性表达，使细胞内的mRNA和蛋白质改变，但DNA(遗传物质)不发生变化，B错误，C正确；
iPS细胞可定向分化成各
种细胞，可见其分裂分
化能力比成纤维细胞强，
D正确。
选择题
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12.(2022·辽宁，12)抗虫和耐除草剂玉米双抗12－5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是
选择题
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A.预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制
B.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分
C.延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制
D.转基因品种经检测含有目的基因后即可上市
选择题
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预变性过程是使双链DNA完全变性解聚，A错误；
后延伸过程是为了让引物延伸完全并让单链产物完全复性形成双链结构，可使目的基因的扩增更加充分，B正确；
选择题
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延伸过程需要引物参与，C错误；
转基因品种不只需要检测是否含有目的基因，还要检测目的基因是否表达，还有是否存在安全性问题，D错误。
选择题
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13.(2024·无锡高二期末)科学家将海鱼的抗冻蛋白基因用PCR技术扩增，如图1是扩增的目的基因的示意图。为寻找合适的载体，科学家对某载体用EcoRⅠ和SmaⅠ两种限制酶进行酶切后，再利用琼脂糖凝胶电泳得到图2所示图谱(其中1号泳道是标准DNA样品的电泳结果，2号、3号、4号泳道分别是用EcoRⅠ单
独处理、SmaⅠ单独处理、
两种酶共同处理后的电
泳结果)。下列说法错误
的是
选择题
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A.应选用引物2和引物3对目的基因进行扩增
B.由图2可知，该载体DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个
C.DNA分子经过染色可在紫外灯下观察得到图2所示图谱
D.扩增5次后可得到16个等长的目的基因片段
选择题
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√
扩增5次后可得到等长的目的基因片段25－10＝22(个)，D错误。
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14.DNA疫苗是指将编码保护性抗原蛋白的基因(如图甲)插入适宜的质粒(如图乙)中得到的重组DNA分子，将其导入人体内，在人体细胞内表达的产物可直接诱导机体产生免疫应答，且可持续一段时间。限制性内切核酸酶分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析正确的是
选择题
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A.构建DNA疫苗时，可用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和质粒
B.图乙中只用EcoRⅠ切割质粒产生的DNA片段具有相同平末端
C.用EcoRⅠ切割目的基因和质粒，再用DNA聚合酶连接，会产生多种连
接产物
D.抗原基因在体内表达
时，需要经过转录和
翻译过程，会发生氢
键的断裂和形成
选择题
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构建DNA疫苗时，可
用BglⅡ和Sau3AⅠ切
割目的基因和质粒，
A错误；
EcoRⅠ切割后获得的是黏性末端，B错误；
用EcoRⅠ切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶连接，能产生多种连接产物，如目的基因自身环化、质粒自身环化、目的基因与质粒正向连接、目的基因与质粒反向连接等，C错误。
选择题
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15.(2024·汕头高二检测)酥梨醋富含果胶、维生素以及多种矿物质等营养成分，具有开胃护肝、排毒养颜、减肥除脂等多种功效，是近年来的流行饮品。下列相关叙述错误的是
A.当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成乙酸
B.当缺少氧气时，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸
C.在酥梨醋发酵液中，液面处的醋酸菌密度高于瓶底处的密度
D.随发酵时间的延长，发酵液中pH先降低，后维持稳定
选择题
1
2
3
4
5
6
7
8
9
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17
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19
20
21
22
√
当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸，B错误；
醋酸菌属于好氧细菌，在酥梨醋发酵液中，液面处的醋酸菌密度高于瓶底处的密度，C正确。
选择题
1
2
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22
16.下列关于生物科学技术的叙述，正确的是
A.用纤维素酶和果胶酶水解法获得的原生质体仍有全能性
B.动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法、所用的技术
手段、所依据的原理基本相同，都能形成杂种细胞和杂种个体
C.在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能发生细
胞脱分化，还可能发生基因突变、基因重组和染色体变异
D.试管婴儿实质就是体外受精和胚胎移植的产物，使不能产生精子或者
卵细胞的夫妇得到自己的孩子
选择题
1
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19
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21
22
√
动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法、所用的技术手段、所依据的原理均不完全相同，动物细胞融合后不能形成杂种个体，而植物体细胞杂交后能形成杂种个体，但两者都能形成杂种细胞，B错误；
在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能发生细胞脱分化，由于脱分化过程进行的是有丝分裂，因此该过程中会发生染色体变异或基因突变，不可能发生基因重组，C错误；
选择题
1
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22
试管婴儿实质上就是体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植的产物，无法使不能产生精子或卵细胞的夫妇得到自己的孩子，D错误。
选择题
1
2
3
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22
17.研究发现，人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科学家将该蛋白基因导入山羊体内使其能够在山羊乳腺细胞中表达，从而从山羊乳汁中提取人溶菌酶。图1表示被限制酶切割后的该蛋白基因，图2表示培育流程。下列叙述不正确的是
1
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21
22
选择题
A.切割该蛋白基因的限制酶有2种，识别的序列可分别为－GGATCC－和－AAGCTT－
B.①过程是基因工程的核心步骤
C.②过程常采用显微注射的
方法，受体细胞应选择山
羊乳腺细胞
D.③过程应将导入目的基因的受体细胞培育到桑葚胚或囊胚阶段再进行
移植，移植后需进行是否妊娠的检测
√
1
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21
22
选择题
②过程为将目的基因导入
受体细胞，常采用显微注
射的方法，受体细胞一般
选择受精卵，不选择体细
胞，C错误。
1
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22
选择题
18.枯草杆菌蛋白酶应用于洗涤剂、制革及丝绸工业。某研究小组利用蛋白质工程将该蛋白酶中第188位的丙氨酸替换为脯氨酸、第239位的谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位的缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现该酶的催化活性大幅度提高。下列叙述错误的是
A.对枯草杆菌蛋白酶进行改造通过改造基因来实现
B.通过基因工程和蛋白质工程生产的枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列相同
C.改造后的枯草杆菌蛋白酶可能使空间结构发生改变导致其催化活性提高
D.对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计必须从预期蛋白酶的功能特点入手
√
1
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20
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22
选择题
基因工程生产的蛋白质是自然界中已存在的蛋白质，而蛋白质工程能生产出自然界中不存在的新蛋白质分子，两者的氨基酸序列不同，B错误。
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20
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22
选择题
(1)该培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、__________法灭菌等。
湿热灭菌
19.(2023·徐州高二期中)菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。如图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题：
非选择题
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(2)样品稀释时取1 mL原液加入9 mL无菌水中，稀释10倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后在酒精灯火焰上引燃灭菌，该操作的目的是__________。
杀灭杂菌
非选择题
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(3)本实验中微生物计数的原理是基于______________________，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏____，原因是____________________
___________________________________。
通常对获得的纯菌种可以依据菌落的___________________________(至少填3个)等特征对微生物进行初步鉴定(或分类)。
形状、大小、颜色、隆起程度
一个菌落代表一个活菌
非选择题
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小
一起时，平板上观察到的只是一个菌落
当两个或多个细胞连在
例次 不同稀释度及平均菌落数 两稀释度菌 落数之比 菌落
总数
10－1 10－2 10－3
1 1 365 164 20 － 16 400
2 2 760 295 46 1.6 ？
3 2 890 271 60 2.2 ？
(4)菌落计数的具体培养结果如表。选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数×稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30～300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填写例次2、3中“？”处的菌落总数分别为_______、_______。
37 750
27 100
非选择题
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22
结合题意可知，报告菌落总数时，应选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当有两个梯度菌落值在30～300之间时，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低的培养皿菌落数。因此例次2应选择10－2和10－3的菌落数求平均数，故例次2的菌落总数为(295÷10＋46)÷2×1 000＝37 750，例次3应选取10－2的菌落数报告，则例次3的菌落总数为271×100＝27 100。
非选择题
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20.黑线姬鼠与小鼠是同科不同属的两个物种，具有极为相似的体型和生物学特性，为远缘异种克隆提供了良好的实验材料。如图为克隆黑线姬鼠的流程示意图，请回答下列问题：
非选择题
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(1)培养成纤维细胞时要定期更换培养液，目的是_____________________
_______________________________________________________________。
成纤维细胞在培养过程中会出现___________________现象，因此在核移植前要用__________将培养的成纤维细胞分散开来。
非选择题
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清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，同时为细胞生长、增殖提供充足的营养
贴壁生长和接触抑制
胰蛋白酶
(2)为获得数量较多的卵母细胞，可以给雌性小鼠注射________________，使其超数排卵；选用卵母细胞作为细胞核的受体的主要原因是_________
_________________________________。
(3)为了提高早期胚胎的利用率，可以对囊胚期的胚胎进行_________处理，操作时要注意____________________。
非选择题
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22
外源促性腺激素
中含有促进细胞核全能性表达的物质
卵母细胞
胚胎分割
将内细胞团均等分割
21.用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体制作早早孕诊断试剂盒的过程如图1所示。回答下列问题：
非选择题
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_______________________________________________________________。
融合后的细胞接种在该培养液中，能存活并大量增殖的就是杂交瘤细胞
(1)图1过程①诱导两种细胞融合的方法有_______________________
_______________(答出3种)。已知DNA复制有S和D两条途径，不同细胞的DNA合成途径和增殖潜力如图2所示，其中D途径能被氨基蝶呤阻断，请据图2设计实验方案，筛选出杂交瘤细胞：___________
_____________________________
非选择题
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22
电融合法、PEG融合法、灭活病毒诱导法
在动物细胞培养液中加入氨基蝶呤，将诱导
(2)图1过程②需要对杂交瘤细胞进行______________________，经多次筛选，才可获得足够数量能分泌特定抗体的杂交瘤细胞。该种细胞通过动物细胞培养技术可在体外大量培养，并从____________中提纯获得单克隆抗体。
非选择题
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克隆化培养和抗体检测
细胞培养液
(3)抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体具有__________
________________________________________________________________________等优点(答出2点)，因此被用来制作早早孕诊断试剂盒。
非选择题
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能准确地识
别抗原的细微差异、与人绒毛膜促性腺激素发生特异性结合、可以大量制备
22.苯丙酮尿症是单基因遗传病，科学家将正常基因D导入该病患者的细胞，以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因D的DNA片段，图丙为重组载体的示意图。AmpR为氨苄青霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因，LacZ为蓝色显色基因，其表达产物可以将无色化合物X－gal转化成蓝色物质，使菌落呈蓝色，EcoRⅠ(0.6 kb)、Pvu Ⅰ(0.8 kb)为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。回答下列问题：
非选择题
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22
(1)基因工程操作的核心步骤是____________________。图甲中三种质粒适宜作为载体的是质粒______，与另外两种质粒相比，其作为载体的优点是_____________________________________。
非选择题
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22
基因表达载体的构建
B
有标记基因，复制原点不会被限制酶切割
基因工程操作的核心步骤是基因表达载体的构建。图甲中三种质粒适宜作为载体的为质粒B，因为质粒B含有EcoRⅠ、PvuⅠ两种酶切位点、氨苄青霉素抗性基因和蓝色显色基因，而且相应的限制酶切割后，可以保留氨苄
青霉素抗性基因的完
整性。与另外两种质
粒相比，其作为载体
的优点是有标记基因，复制原点不会被限制酶切割。
非选择题
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(2)获取目的基因D时对应选择图乙中的_______对其所在的DNA进行切割。如果仅知道基因D首尾的部分核苷酸序列，根据基因D已知核苷酸序列合成______，利用PCR扩增目的基因。
非选择题
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PvuⅠ
引物
(3)将目的基因D和图甲中相应质粒连接后，得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒，使用________对质粒完全酶切后，进行电泳分析。若是正向连接载体，电泳图谱中出现长度为_____kb和____kb两条带。
非选择题
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EcoRⅠ
1.2
5.5
由于EcoRⅠ在目的基因和质粒上都有酶切位点，为选出正向连接的重组质粒，使用EcoRⅠ对重组质粒完全酶切后，进行电泳分析。质粒B中EcoRⅠ酶切位点与PvuⅠ酶切位点距离为0.2 kb，若是正向连接载体，重组质粒中2个EcoRⅠ酶切点之间的距离是0.2＋1＝1.2 (kb)，重组质粒长度为2.7＋4＝6.7 (kb)，故EcoR Ⅰ酶切后，正向连接载体的情况下，电泳图谱中出现长度为1.2 kb和5.5 kb两条带。
非选择题
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(4)利用自身不含LacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，要在已转化的含重组质粒、已转化的含空质粒的受体细胞和未转化成功的细胞中筛选出已转化的含重组质粒的受体细胞的方法是_______________
____________________________________________________________________。
非选择题
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21
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霉素和X－gal的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞
在含有氨苄青模块检测试卷(二)　(分值：100分)
一、选择题(本题包括18小题，每小题3分，共54分)
1．(2023·绵阳高二检测)泡菜是许多餐桌上不可缺少的一道佐餐佳品。下列有关泡菜发酵的叙述，正确的是(　　)
A．与泡菜风味形成直接有关的乳酸菌不会分布在植物的体表和空气中
B．乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸的过程，只在其细胞质基质内完成
C．在坛沿水已干涸的泡菜坛内，乳酸菌在液体表面繁殖出现“生花”“长膜”现象
D．在配制泡菜水时，应将清水煮沸冷却后再配制相应质量分数的盐水
2．(2024·延安高二期末)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。下列关于酵母菌的纯培养的叙述，错误的是(　　)
A．采用平板划线法和稀释涂布平板法均可分离酵母菌
B．可用湿热灭菌法对培养酵母菌的马铃薯琼脂培养基进行灭菌
C．通过接种环连续蘸取菌液在固体培养基表面划线的操作，可将菌种逐步稀释
D．完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将接种后的平板进行培养
3．如图表示采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列有关叙述不正确的是(　　)
A．该实验所用的器具、培养基均需灭菌处理
B．①→②→③重复培养能提高目的菌的比例
C．④→⑤的培养过程可以纯化并计数目的菌
D．⑥⑦的培养基中都应含有对羟基苯甲酸
4．(2023·张家口高二调研)草莓营养价值高，被誉为“水果皇后”。如图为利用现代生物技术改良草莓品系的过程，下列相关叙述错误的是(　　)
A．过程Ⅰ能定向改变生物的遗传性状
B．过程Ⅱ可直接用聚乙二醇作为化学诱导剂来诱导植物细胞融合
C．凤梨风味绿色草莓植株的培育原理有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
D．杂种细胞A形成的标志是再生出新的细胞壁，该过程与高尔基体有关
5．研究发现，生长素能够维持拟南芥bZIP59蛋白的稳定性，并增强其与LBD形成复合物的能力，bZIP59－LBD复合体直接靶向FAD－BD基因，并促进其转录，这有助于愈伤组织的形成。下列相关叙述错误的是(　　)
A．生长素通过调控植物细胞的基因表达而影响植物细胞全能性的表达
B．脱分化期间一般不需要光照，再分化时需要适当光照诱导叶绿素产生
C．杂菌污染会影响植物组织培养，因此需要对培养基和离体的植物组织进行灭菌处理
D．植物组织培养的培养基中需要加入有机物
6．机体发生炎症反应时，血浆中CD14水平会升高。利用小鼠制备抗CD14单克隆抗体，能够用于CD14的检测。下列相关叙述正确的是(　　)
A．反复将CD14注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B．灭活的病毒是唯一能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的因素
C．利用杂交瘤技术获得的杂交瘤细胞都可以产生抗CD14抗体
D．杂交瘤细胞体外培养过程中需要提供CO2以维持培养液的pH
7．(2024·泉州高二期中)野生动物郊狼的物种数量近年不断减少、濒临灭绝，科研人员利用种间体细胞核移植技术(iSCNT)培育小郊狼的流程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．图中①是第二极体，②是透明带
B．iSCNT技术比胚胎细胞核移植技术难度要大
C．郊狼的耳廓组织培养时一般需提供营养和酸性环境
D．③通常需要激活，使其完成减数分裂和发育进程
8．(2023·天津，7)据图，下列叙述正确的是(　　)
A．子代动物遗传性状和受体动物完全一致
B．过程1需要MⅡ期去核卵母细胞
C．过程2可以大幅改良动物性状
D．过程2为过程3提供了量产方式，过程3为过程1、2提供了改良性状的方式
9．“脑彩虹”是一项最新的大脑成像技术，通过荧光蛋白“点亮”大脑内的神经元，科学家可以了解大脑的活动。研究者设计如图所示的DNA片段，转入小鼠体内，获得每个细胞仅含一个图示片段的转基因小鼠。Cre酶是该技术的关键酶，能随机识别两个相同的loxP序列，并将两段序列之间的DNA敲除。下列有关说法正确的是(　　)
A．启动子M应当是一种只有脑组织中启动基因表达的启动子
B．在没有Cre酶存在的条件下，小鼠某脑神经元活动时，发出荧光的颜色可能有3种
C．在有Cre酶存在的条件下，小鼠某脑神经元活动时会发出红色或蓝色的荧光
D．向小鼠细胞中转入图示基因时，应用PEG对受精卵细胞进行预处理
10．早期胚胎细胞异常凋亡是目前克隆猪成功率低的主要原因。用实时荧光逆转录PCR技术(RT－qPCR)检测细胞凋亡抑制基因Bcl－2的表达水平，有助于了解胚胎发育不同时期Bcl－2表达水平与细胞凋亡的关系。下列说法错误的是(　　)
A．对重构胚进行培养时需加入血清等天然成分
B．卵母细胞采集后，一般要在体外培养成熟再去核作为受体细胞
C．根据RT－qPCR荧光强度可计算出基因Bcl－2在相应细胞中的翻译水平
D．胚胎在受体子宫发育过程中，其遗传特性不受影响
11．科学家将c－Myc、Klf4、Sox2和Oct3/4这四个关键基因转入高度分化的小鼠成纤维细胞内，细胞在一定条件下转变成iPS细胞(诱导多能干细胞)。在适当条件诱导下，iPS细胞可以定向分化成各种细胞。下列叙述不正确的是(　　)
A．图示过程运用了转基因技术和动物细胞培养技术
B．iPS细胞分化成各种组织细胞的过程中遗传物质发生了变化
C．iPS细胞分化为脂肪细胞的过程中发生了基因的选择性表达
D．小鼠成纤维细胞转变成iPS细胞后分化潜能提高
12．(2022·辽宁，12)抗虫和耐除草剂玉米双抗12－5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制
B．后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分
C．延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制
D．转基因品种经检测含有目的基因后即可上市
13．(2024·无锡高二期末)科学家将海鱼的抗冻蛋白基因用PCR技术扩增，如图1是扩增的目的基因的示意图。为寻找合适的载体，科学家对某载体用EcoRⅠ和SmaⅠ两种限制酶进行酶切后，再利用琼脂糖凝胶电泳得到图2所示图谱(其中1号泳道是标准DNA样品的电泳结果，2号、3号、4号泳道分别是用EcoRⅠ单独处理、SmaⅠ单独处理、两种酶共同处理后的电泳结果)。下列说法错误的是(　　)
A．应选用引物2和引物3对目的基因进行扩增
B．由图2可知，该载体DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个
C．DNA分子经过染色可在紫外灯下观察得到图2所示图谱
D．扩增5次后可得到16个等长的目的基因片段
14．DNA疫苗是指将编码保护性抗原蛋白的基因(如图甲)插入适宜的质粒(如图乙)中得到的重组DNA分子，将其导入人体内，在人体细胞内表达的产物可直接诱导机体产生免疫应答，且可持续一段时间。限制性内切核酸酶分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析正确的是(　　)
A．构建DNA疫苗时，可用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和质粒
B．图乙中只用EcoRⅠ切割质粒产生的DNA片段具有相同平末端
C．用EcoRⅠ切割目的基因和质粒，再用DNA聚合酶连接，会产生多种连接产物
D．抗原基因在体内表达时，需要经过转录和翻译过程，会发生氢键的断裂和形成
15．(2024·汕头高二检测)酥梨醋富含果胶、维生素以及多种矿物质等营养成分，具有开胃护肝、排毒养颜、减肥除脂等多种功效，是近年来的流行饮品。下列相关叙述错误的是(　　)
A．当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成乙酸
B．当缺少氧气时，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸
C．在酥梨醋发酵液中，液面处的醋酸菌密度高于瓶底处的密度
D．随发酵时间的延长，发酵液中pH先降低，后维持稳定
16．下列关于生物科学技术的叙述，正确的是(　　)
A．用纤维素酶和果胶酶水解法获得的原生质体仍有全能性
B．动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法、所用的技术手段、所依据的原理基本相同，都能形成杂种细胞和杂种个体
C．在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能发生细胞脱分化，还可能发生基因突变、基因重组和染色体变异
D．试管婴儿实质就是体外受精和胚胎移植的产物，使不能产生精子或者卵细胞的夫妇得到自己的孩子
17．研究发现，人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科学家将该蛋白基因导入山羊体内使其能够在山羊乳腺细胞中表达，从而从山羊乳汁中提取人溶菌酶。图1表示被限制酶切割后的该蛋白基因，图2表示培育流程。下列叙述不正确的是(　　)
A．切割该蛋白基因的限制酶有2种，识别的序列可分别为－GGATCC－和－AAGCTT－
B．①过程是基因工程的核心步骤
C．②过程常采用显微注射的方法，受体细胞应选择山羊乳腺细胞
D．③过程应将导入目的基因的受体细胞培育到桑葚胚或囊胚阶段再进行移植，移植后需进行是否妊娠的检测
18．枯草杆菌蛋白酶应用于洗涤剂、制革及丝绸工业。某研究小组利用蛋白质工程将该蛋白酶中第188位的丙氨酸替换为脯氨酸、第239位的谷氨酰胺替换为精氨酸、第262位的缬氨酸替换为亮氨酸，结果发现该酶的催化活性大幅度提高。下列叙述错误的是(　　)
A．对枯草杆菌蛋白酶进行改造通过改造基因来实现
B．通过基因工程和蛋白质工程生产的枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列相同
C．改造后的枯草杆菌蛋白酶可能使空间结构发生改变导致其催化活性提高
D．对枯草杆菌蛋白酶进行分子设计必须从预期蛋白酶的功能特点入手
二、非选择题(本题包括4小题，共46分)
19．(13分)(2023·徐州高二期中)菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。如图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题：
(1)该培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、__________法灭菌等。
(2)(1分)样品稀释时取1 mL原液加入9 mL无菌水中，稀释10倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后在酒精灯火焰上引燃灭菌，该操作的目的是__________________________________。
(3)(6分)本实验中微生物计数的原理是基于________________________，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏________，原因是___________________________________________。
通常对获得的纯菌种可以依据菌落的________________________(至少填3个)等特征对微生物进行初步鉴定(或分类)。
(4)菌落计数的具体培养结果如表。选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数×稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30～300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填写例次2、3中“？”处的菌落总数分别为________、________。
例次 不同稀释度及平均菌落数 两稀释度菌落数之比 菌落总数
10－1 10－2 10－3
1 1 365 164 20 － 16 400
2 2 760 295 46 1.6 ？
3 2 890 271 60 2.2 ？
20．(10分)黑线姬鼠与小鼠是同科不同属的两个物种，具有极为相似的体型和生物学特性，为远缘异种克隆提供了良好的实验材料。如图为克隆黑线姬鼠的流程示意图，请回答下列问题：
(1)(5分)培养成纤维细胞时要定期更换培养液，目的是_________________________________。
成纤维细胞在培养过程中会出现__________________________现象，因此在核移植前要用________________将培养的成纤维细胞分散开来。
(2)(3分)为获得数量较多的卵母细胞，可以给雌性小鼠注射________________，使其超数排卵；选用卵母细胞作为细胞核的受体的主要原因是___________________________________。
(3)(2分)为了提高早期胚胎的利用率，可以对囊胚期的胚胎进行________________处理，操作时要注意____________________________。
21．(10分)用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体制作早早孕诊断试剂盒的过程如图1所示。回答下列问题：
(1)图1过程①诱导两种细胞融合的方法有_________________________________(答出3种)。
已知DNA复制有S和D两条途径，不同细胞的DNA合成途径和增殖潜力如图2所示，其中D途径能被氨基蝶呤阻断，请据图2设计实验方案，筛选出杂交瘤细胞：_______________________________________________________________________________。
(2)图1过程②需要对杂交瘤细胞进行________________________，经多次筛选，才可获得足够数量能分泌特定抗体的杂交瘤细胞。该种细胞通过动物细胞培养技术可在体外大量培养，并从__________中提纯获得单克隆抗体。
(3)抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体具有_________________________________________等优点(答出2点)，因此被用来制作早早孕诊断试剂盒。
22．(13分)苯丙酮尿症是单基因遗传病，科学家将正常基因D导入该病患者的细胞，以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因D的DNA片段，图丙为重组载体的示意图。AmpR为氨苄青霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因，LacZ为蓝色显色基因，其表达产物可以将无色化合物X－gal转化成蓝色物质，使菌落呈蓝色，EcoRⅠ(0.6 kb)、Pvu Ⅰ(0.8 kb)为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。回答下列问题：
(1)基因工程操作的核心步骤是______________。图甲中三种质粒适宜作为载体的是质粒____________________________，与另外两种质粒相比，其作为载体的优点是______________________________________________________________________________。
(2)(2分)获取目的基因D时对应选择图乙中的________对其所在的DNA进行切割。如果仅知道基因D首尾的部分核苷酸序列，根据基因D已知核苷酸序列合成____________，利用PCR扩增目的基因。
(3)(3分)将目的基因D和图甲中相应质粒连接后，得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒，使用__________对质粒完全酶切后，进行电泳分析。若是正向连接载体，电泳图谱中出现长度为________________kb和____________kb两条带。
(4)利用自身不含LacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，要在已转化的含重组质粒、已转化的含空质粒的受体细胞和未转化成功的细胞中筛选出已转化的含重组质粒的受体细胞的方法是________________________________________________________________。
答案精析
1．B　[在自然界中，乳酸菌分布广泛，空气、土壤、植物体表、人和动物的肠道内都有乳酸菌分布，A错误；在坛沿水已干涸的泡菜坛内，液体表面出现“生花”“长膜”现象，这主要是由兼性厌氧微生物——酵母菌形成的，C错误；在配制泡菜水时，应先用清水和食盐配制相应质量分数的盐水，然后再煮沸冷却，D错误。]
2．C　[通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，该过程中只蘸取一次菌液，C错误。]
3．D　[⑥与⑦形成对照，其中一组加入对羟基苯甲酸，另一组不加，D错误。]
4．B　[过程Ⅱ必须先利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质体，再用聚乙二醇作为化学诱导剂来诱导原生质体的融合，B错误。]
5．C　[生长素通过促进bZIP59－LBD复合体的形成促进FAD－BD基因的转录，这有助于愈伤组织的形成，愈伤组织是一团未分化的细胞，全能性较高，说明生长素通过调控植物细胞的基因表达而影响植物细胞全能性的表达，A正确；脱分化阶段一般不需要光照，愈伤组织再分化到一定阶段，形成叶绿体，能进行光合作用，需要弱光照射，B正确；离体的植物组织不能灭菌处理，需要消毒，C错误；离体的植物组织培养到愈伤组织阶段的过程不能把无机物合成为有机物，因此培养基中需要加入有机物，D正确。]
6．D　[单克隆抗体是经过细胞融合技术产生的，A错误；能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等，B错误；利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞要经过克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，才可以获得专一产生抗CD14抗体的杂交瘤细胞，C错误。]
7．B　[图中①是第一极体，A错误；郊狼的耳廓组织在培养时，最适的pH为7.2～7.4，C错误；③是重构胚，通常需要激活，使其完成细胞分裂和发育进程，但此过程中不进行减数分裂，D错误。]
8．D　[子代动物的遗传性状与供体基本一致，与受体无关，A错误；核移植过程中需要处于MⅡ期的去核卵母细胞，而过程1是培育试管动物，需要培育到适宜时期(桑葚胚或囊胚期)进行胚胎移植，B错误；过程2得到的是克隆动物，是无性生殖的一种，不能大幅改良动物性状，C错误；过程2克隆技术可得到大量同种个体，为过程3提供了量产方式，过程3转基因技术可导入外源优良基因，为过程1、2提供改良性状的方式，D正确。]
9．A　[根据题干信息可知，荧光蛋白指示的应是脑神经元活动，但脑活动不能被离体观察，为了防止其他体细胞的荧光信号对实验结果造成干扰，M应当是一种只在脑组织中启动基因表达的启动子，A正确；据题图分析可知，只有与启动子M相邻的荧光蛋白基因会表达，在没有Cre酶存在的条件下，小鼠脑神经元活动时只会发出红色荧光，B错误；Cre酶可以随机识别两个相同的loxP序列，并将两段序列之间的DNA敲除，当酶识别的是loxP1序列时，小鼠脑神经元活动时发出黄色荧光，当识别的是loxP2序列时，小鼠脑神经元活动时发出蓝色荧光，C错误；聚乙二醇(PEG)多用于诱导细胞融合，动物细胞转基因时常用显微注射技术，显微注射技术不需要用到PEG，D错误。]
10．C　[卵母细胞采集后，要在体外培养成熟(M Ⅱ期)再去核，作为核移植的受体细胞，B正确；根据RT－qPCR最终的荧光强度不可计算出基因Bcl－2在相应细胞中的翻译水平，在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量分析，C错误；胚胎在受体子宫发育过程中，其遗传特性不受影响，受体子宫只是提供了一个发育的场所，D正确。]
11．B　[据题图分析可知，将四个关键基因转入高度分化的小鼠的成纤维细胞，再通过培养转变成iPS细胞，运用了转基因技术，原理是基因重组，同时培养小鼠的成纤维细胞运用了动物细胞培养技术，A正确；iPS细胞分化成各种组织细胞的过程中，细胞的形态、结构和生理功能发生改变，细胞分化的实质是基因的选择性表达，使细胞内的mRNA和蛋白质改变，但DNA(遗传物质)不发生变化，B错误，C正确；iPS细胞可定向分化成各种细胞，可见其分裂分化能力比成纤维细胞强，D正确。]
12．B　[预变性过程是使双链DNA完全变性解聚，A错误；后延伸过程是为了让引物延伸完全并让单链产物完全复性形成双链结构，可使目的基因的扩增更加充分，B正确；延伸过程需要引物参与，C错误；转基因品种不只需要检测是否含有目的基因，还要检测目的基因是否表达，还有是否存在安全性问题，D错误。]
13．D　[扩增5次后可得到等长的目的基因片段25－10＝22(个)，D错误。]
14．D　[构建DNA疫苗时，可用Bgl Ⅱ和Sau3A Ⅰ切割目的基因和质粒，A错误；EcoR Ⅰ切割后获得的是黏性末端，B错误；用EcoR Ⅰ切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶连接，能产生多种连接产物，如目的基因自身环化、质粒自身环化、目的基因与质粒正向连接、目的基因与质粒反向连接等，C错误。]
15．B　[当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸，B错误；醋酸菌属于好氧细菌，在酥梨醋发酵液中，液面处的醋酸菌密度高于瓶底处的密度，C正确。]
16．A　[动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法、所用的技术手段、所依据的原理均不完全相同，动物细胞融合后不能形成杂种个体，而植物体细胞杂交后能形成杂种个体，但两者都能形成杂种细胞，B错误；在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能发生细胞脱分化，由于脱分化过程进行的是有丝分裂，因此该过程中会发生染色体变异或基因突变，不可能发生基因重组，C错误；试管婴儿实质上就是体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植的产物，无法使不能产生精子或卵细胞的夫妇得到自己的孩子，D错误。]
17．C　[②过程为将目的基因导入受体细胞，常采用显微注射的方法，受体细胞一般选择受精卵，不选择体细胞，C错误。]
18．B　[基因工程生产的蛋白质是自然界中已存在的蛋白质，而蛋白质工程能生产出自然界中不存在的新蛋白质分子，两者的氨基酸序列不同，B错误。]
19．(1)湿热灭菌　(2)杀灭杂菌　(3)一个菌落代表一个活菌　小　当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落　形状、大小、颜色、隆起程度　(4)37 750　27 100
解析　(4)结合题意可知，报告菌落总数时，应选取菌落数30～300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当有两个梯度菌落值在30～300之间时，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低的培养皿菌落数。因此例次2应选择10－2和10－3的菌落数求平均数，故例次2的菌落总数为(295÷10＋46)÷2×1 000＝37 750，例次3应选取10－2的菌落数报告，则例次3的菌落总数为271×100＝27 100。
20．(1)清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，同时为细胞生长、增殖提供充足的营养　贴壁生长和接触抑制　胰蛋白酶　(2)外源促性腺激素　卵母细胞中含有促进细胞核全能性表达的物质　(3)胚胎分割　将内细胞团均等分割
21．(1)电融合法、PEG融合法、灭活病毒诱导法　在动物细胞培养液中加入氨基蝶呤，将诱导融合后的细胞接种在该培养液中，能存活并大量增殖的就是杂交瘤细胞　(2)克隆化培养和抗体检测　细胞培养液　(3)能准确地识别抗原的细微差异、与人绒毛膜促性腺激素发生特异性结合、可以大量制备
22．(1)基因表达载体的构建　B　有标记基因，复制原点不会被限制酶切割　(2)Pvu Ⅰ　引物　(3)EcoR Ⅰ　1.2　5.5
(4)在含有氨苄青霉素和X－gal的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞
解析　(1)基因工程操作的核心步骤是基因表达载体的构建。图甲中三种质粒适宜作为载体的为质粒B，因为质粒B含有EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ两种酶切位点、氨苄青霉素抗性基因和蓝色显色基因，而且相应的限制酶切割后，可以保留氨苄青霉素抗性基因的完整性。与另外两种质粒相比，其作为载体的优点是有标记基因，复制原点不会被限制酶切割。(3)由于EcoR Ⅰ在目的基因和质粒上都有酶切位点，为选出正向连接的重组质粒，使用EcoR Ⅰ对重组质粒完全酶切后，进行电泳分析。质粒B中EcoR Ⅰ酶切位点与Pvu Ⅰ酶切位点距离为0.2 kb，若是正向连接载体，重组质粒中2个EcoR Ⅰ酶切点之间的距离是0.2＋1＝1.2 (kb)，重组质粒长度为2.7＋4＝6.7 (kb)，故EcoR Ⅰ酶切后，正向连接载体的情况下，电泳图谱中出现长度为1.2 kb和5.5 kb两条带。

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