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（12）纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得——高二生物学浙科版（2019）寒假作业
1.下列与微生物培养有关的叙述，错误的是（ ）
A.在进行微生物培养的实验室中不可吃东西、喝水，离开时要洗手
B.有的微生物能寄生细菌，使细菌裂解，可用于净化污水
C.在培养霉菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性
D.利用稀释涂布平板法对微生物计数，结果较真实值低
2.下列关于平板划线法的叙述，正确的是（ ）
A.划线操作必须在火焰上方进行
B.每次划线前后都要对接种环进行灭菌
C.每次划线之间注意不要相连
D.只有在最后一次划线区域才能得到所需菌落
3.对酵母菌活菌进行计数时，下列做法可导致统计的活菌数高于实际值的是（ ）
A.用同一只移液管配制一系列一定浓度梯度的稀释液
B.用直接计数法对台盼蓝染色后的活酵母菌进行计数
C.用稀释涂布平板法计数时，酵母菌的培养时间不足
D.用倒平板接种酵母菌时，培养基的温度过高
4.平板划线法是接种和分离微生物最常用的一种方法，据图分析下列操作正确的是（ ）
A.在该操作过程需要在酒精灯火焰上灼烧涂布器6次
B.在第二次划线时，需要在酒精灯火焰附近再蘸取一环菌液
C.每一次划线都应该从上一次划线的末端开始划线
D.确定对照组无菌后，选择菌落数在30-300之间的实验组平板进行计数
5.欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（ ）
A.将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释
B.同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板
C.可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照
D.用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
6.下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法计数的描述，正确的是（ ）
A.为确保结果准确，每个平板的菌落都要计数并取平均值
B.可以用细菌计数板直接计数法检测大肠杆菌菌落的数量
C.两种方法均能在计数时观察到所研究微生物的形态特征
D.使用显微计数时，活菌数的实际值比稀释涂布平板法计数所得的结果偏大
7.下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是（ ）
A.应根据微生物代谢类型选择合适的培养基并控制好培养基的pH
B.实验操作时应避免已灭菌的材料用具与周围物品接触
C.待培养基冷却至室温后，在超净工作台内酒精灯火焰附近倒平板
D.使用过的培养基应进行灭菌，不应直接丢弃
8.稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是（ ）
A.固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板
B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长
C.稀释涂布平板法分离到的单菌落需进一步划线纯化
D.稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数
9.某研究小组进行了土壤中分解尿素的细菌的分离和计数实验，操作流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A.需要配制以尿素为唯一氮源的培养基并用湿热灭菌法灭菌
B.甲平板上的一个单菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
C.上述实验中制备3个平板可避免偶然因素导致的实验误差
D.5号试管的计数结果表明每克土壤中的活菌数约为1.7×107个
10.下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法，错误的是（ ）
A.同一稀释度下应至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值
B.利用显微镜直接计数，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和
C.若牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显少于选择培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出分解尿素的细菌
D.稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目
11.某兴趣小组拟检测某品牌直饮水中的大肠杆菌数量是否超标，其部分实验流程如图，已知步骤④培养后的大肠杆菌菌落数平均值为56个。下列相关叙述正确的是（ ）
A.实验前，微生物培养的器皿、接种工具、操作者的手等应进行灭菌
B.实验后，使用过的培养基及其培养物应直接放入垃圾桶丢弃
C.经计算推测每毫升直饮水中大肠杆菌的数量约为5.6×106个
D.用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数时，稀释度越低越好
12.某生物兴趣小组从附近农田进行土壤取样，并对土壤中的尿素分解菌进行分离计数。同学甲从稀释倍数为104的培养基中筛选出约350个菌落，而其他同学只筛选出约50个菌落。下列相关叙述错误的是（ ）
A.同学甲在实验操作过程中可能因操作不当造成培养基的污染
B.同学甲出现这种结果可能是和其他同学取样的土壤不同
C.若同学甲的操作没有问题，则可能是稀释倍数太低导致
D.其他同学土样的细菌悬液中尿素分解菌的数量约为5×105个/mL
13.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数过程如图，相关叙述不正确的是（ ）
A.需要配制以尿素为唯一氮源的培养基，从功能上来说这属于选择培养基
B.5号试管的结果表明每克土壤中的活菌的菌株数为1.7×108个
C.除了用稀释涂布平板法对尿素分解菌计数外，还可以用显微镜直接计数
D.若培养高效分解尿素的细菌，可在固体培养基中额外添加酚红进行筛选
14.谷氨酸钠是味精的主要成分，工业生产中常用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸。用15%左右的葡萄糖溶液、适量的无机盐和液氨配成发酵培养基，接种谷氨酸棒状杆菌，给予适宜的条件，进行发酵生产谷氨酸，再制成钠盐即为味精。请回答下列问题：
（1）葡萄糖可为谷氨酸棒状杆菌的生长提供_____发酵培养基通常采用_____法进行灭菌。生产谷氨酸的过程中，采用液体培养基的目的是_____。
（2）若要监测发酵液中谷氨酸棒状杆菌的数目，可采用的计数方法是显微镜直接计数法，该方法的计数过程是先将稀释100倍的发酵液加入计数板（由25×16=400个小室组成，容纳液体总体积为0.1mm3）的计数室中，然后计数菌体数。若计数室中共统计到42个菌体，则1mL的原发酵液中约有菌体______个。
15.微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让微生物逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。请据此回答以下问题:
（1）已知驯化培养基成分为蛋白质、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是_____。依照物理性质划分.驯化培养基属于_____培养基。
（2）用于筛选的样品应来自____的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为____，该方法不需要梯度稀释也能获得单菌落，原因是____。
（3）将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的培养基C中，培养24小时后，通过测定培养基中______，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了4个平板D，统计菌落数分别为250，247，253，测得培养基C中活菌数为1.25×107个/mL，则涂布的菌液Y为_____mL。
答案以及解析
1.答案：C
解析：在实验室中应遵循安全规范，不可吃东西、喝水，离开时一定要洗手，防止被微生物感染，A叙述正确；有的微生物能寄生于细菌体内，使细菌裂解，可用于净化污水，B叙述正确；在培养霉菌时，需要将培养基调至酸性，C叙述错误；利用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细菌形成的菌落连成一片时，平板上观察到的只是一个菌落，D叙述正确。
2.答案：A
解析：A、为了避免染菌，划线操作必须在火焰上方进行，A正确；
B、第一次划线前接种环上有微生物，不能对接种环进行灭菌，B错误；
C、每次划线都要从上一次末端开始划，之间会有相连，但是划到最后不要与上一次相连，C错误；
D、不一定是最后一次划线区才能得到单菌落，D错误。
故选A。
3.答案：A
解析：A、若用同一只移液管配制一系列一定浓度梯度的稀释液，由于每次吸液后移液管中都有菌液残留，这种做法会导致统计的活菌数高于实际值，A符合题意；B、直接计数法计数酵母菌活菌数量时，可用台盼蓝对酵母菌进行染色，能被染色的是死酵母菌，不能被染色的是活酵母菌，不会导致统计结果高于实际值，B不符合题意；C、用稀释涂布平板法计数时，通常计数的结果都会比实际值低，若酵母菌的培养时间不足，统计的活菌数会比实际值更低，C不符合题意；D、用倒平板接种酵母菌时，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃，若培养基的温度过高，会杀死酵母菌，导致统计的活菌数低于实际值，D不符合题意。故选A。
4.答案：C
解析：A、该操作中不使用涂布器接种，而是用接种环接种，A错误；
B、除第一次划线外，其余划线都不需蘸取菌液，B错误；
C、每一次划线都应该从上一次划线的末端开始划线，已达到分离的效果，C正确；
D、能够用于菌落计数的接种方法是稀释涂布平板法，平板划线法不能用于菌落计数，D错误。
故选C。
5.答案：D
解析：A、为防止土壤浸出液浓度过高，不能获得单菌落，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；B、同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，B正确；C、可以将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以判断培养基灭菌是否彻底，C正确；D、可筛选出分解尿素的细菌的培养基是以尿素为唯一氮源的选择培养基，D错误。故选D。
6.答案：D
解析：A、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的微生物数目时，往往选取菌落数为30～300的平板进行计数，A错误；B、可以用细菌计数板对细菌直接进行观察和计数，大肠杆菌菌落的数量可通过肉眼直接计数，B错误；C、稀释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特征，显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征，C错误；D、稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的往往是一个菌落，故而统计值比实际值小，显微计数时不能区分死菌和活菌，故测定的微生物数量往往大于实际的活菌数，因此使用显微计数时，活菌数的实际值比稀释涂布平板法计数所得的结果偏大，D正确。故选D。
7.答案：C
解析：A、应根据微生物代谢类型选择合适培养基并控制好培养基pH，A正确；B、实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触，以防止杂菌污染，B正确；C、待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，冷却到室温时培养基已经凝固，C错误；D、使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃，以防止杂菌污染环境，D正确。故选C。
8.答案：B
解析：A、固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板，固体培养基中含有琼脂，40℃左右会凝固，因此温度过低会导致培养基凝固无法倒平板，A正确；B、倒好的平板需要冷却后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影响接种后微生物的生长，B错误；C、稀释涂布平板法分离到的单菌落仍需进一步划线纯化，以利于菌种保藏，C正确；D、稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数，D正确。故选B。
9.答案：D
解析：分离土壤中分解尿素的细菌时，应选用以尿素为唯一氮源的选择培养基，并采用高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）灭菌，A正确；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，故B正确；进行多个重复实验的目的是避免偶然因素导致的实验误差，C正确；由题图可知，稀释倍数为106，涂布液的体积为0.1mL，平均菌落数为（168+175+167）÷3=170（个），故5号试管的计数结果表明，每克土壤中的活菌数约为170÷0.1×10=1.7×106（个），D错误。
10.答案：C
解析：A、稀释涂布平板法进行计数时，得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，A正确；B、显微镜直接计数时，由于不能区分活菌和死菌，因此统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和，统计结果比实际数值偏大，B正确；C、选择培养基能抑制不需要的微生物生长，因此若选择培养基的菌落数目明显小于牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落，C错误；D、只有活菌才能长出菌落，所以利用稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，也可以用于分离微生物，D正确。故选C。
11.答案：C
解析：A、在实验前，应将微生物培养的器皿、接种工具等进行灭菌，而操作者的手需要进行消毒处理，A错误；
B、在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，B错误；
C、用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时平板上观察到的只是一个菌落，C正确；
D、血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等，D错误。
12.答案：D
解析：A、同学甲筛选出的菌落数明显比其他同学多，出现这种结果的可能原因是和其他同学取样的土壤不同，也有可能是培养基混入其他氮源或培养基被污染，A正确；B、同学甲出现这种结果可能是和其他同学取样的土壤不同，因而导致实验结果偏大，B正确；C、若同学甲的操作没有问题，则可能是稀释倍数太低进而导致菌落数过多，因而表现为数量偏多，C正确；D、其他同学选出约50个菌落，所以土样的细菌悬液中分解尿素的细菌数量约为50÷0.1×106=5×108个，D错误。故选D。
13.答案：B
解析：只有分解尿素的细菌能产生脲酶，在以尿素为唯一氮源的培养基中能生存下来，A正确；5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为（168+175+167）/3/0.1×106=1.7×109个，B错误；除了用稀释涂布平板法对尿素分解菌计数外，还可以用显微镜直接计数，C正确；细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，可使含有酚红的培养基变红，可根据变红的范围、直径大小筛选出高效降解尿素的细菌，D正确。
14.答案：（1）碳源；高压蒸汽灭菌；利于菌体与培养液充分接触，便于谷氨酸棒状杆菌获得营养物质
（2）4.2×107
解析：（1）培养基需要为微生物的生长提供碳源、氮源、水、无机盐及生长因子等，葡萄糖含有碳元素可为谷氨酸棒状杆菌的生长提供碳源。发酵培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。在生产谷氨酸的过程中，采用液体培养基的目的是利于菌体与培养液充分接触，便于谷氨酸棒状杆菌获得营养物质。
（2）总体积为0.1mm3的计数室中，共统计到42个菌体，且1mL=1000mm3，计数时由于发酵液稀释了100倍，所以1mL的原发酵液中约有菌体42÷0.1×100×1000=4.2×107（个）。
15.答案：（1）敌敌畏；液体
（2）（常年）施用敌敌畏（或被敌敌畏污染）；平板划线法划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌体数目逐渐被稀释（减少），最后可能形成单个菌落
（3）敌敌畏的剩余量；0.2
解析：（1）该实验目的是筛选抗敌敌畏或高效分解敌敌畏的微生物，故驯化时往培养液中逐步加入的物质X是敌敌畏。由图可知，该驯化培养基中并未加入凝固剂（如琼脂），故依照物理性质划分，该驯化培养基属于液体培养基。
（2）为了筛选能高效降解有机磷农药一敌敌畏的微生物，用于筛选的样品应来自常年施用敌敌畏的土壤，这样能够增加获得目的菌的概率。结合题图可知，将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为平板划线法；该方法中，划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，故用该方法接种不需要梯度稀释也能获得单菌落。
（3）单位时间内剩余的敌敌畏越少，说明筛选出的微生物分解敌敌畏的能力越强，故通过测定培养基C中敌敌畏的剩余量，可筛选出分解敌敌畏能力较强的微生物。微生物计数时应选择菌落数目在30~300的平板进行计数，故选择菌落数分别为250、247、253的平板，菌落的平均数（250+247+253）÷3=250（个），由图可知培养基C中的1mL菌液的稀释倍数是104，可得算式250/Y×104=1.25×107（个/ml），放涂布的菌液Y=0.2（mL）。（11）微生物的培养需要适宜条件——高二生物学浙科版（2019）寒假作业
1.培养微生物就需要配制培养基，所配制的培养基都需（ ）
A.用蒸馏水配制 B.高压灭菌 C.进行倒平板处理 D.加热融化琼脂
2.关于培养基的配制，下列叙述错误的是（ ）
A.在配制培养乳酸杆菌的培养基时，需加入维生素
B.微生物的适应性强，配制培养基时可以不考虑pH
C.在液体培养基中加入琼脂可以制成固体培养基
D.配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例
3.下列关于培养基的叙述，错误的是（ ）
A.培养基是为微生物的生长、繁殖提供营养物质的基质
B.根据微生物对碳源需要的差别，使用不同碳源的培养基
C.可在培养基中加入磷酸氢二钾或磷酸二氢钾，用于维持pH的相对稳定
D.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
4.下列关于制备培养基、倒平板的叙述，正确的是（ ）
A.倒好的培养基和培养皿要进行干热灭菌
B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D.微生物的纯培养一般用液体培养基
5.如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是（ ）
A.正确的操作顺序是丙→乙→甲→丁 B.甲应在酒精灯火焰附近进行
C.此培养基不可能为液体培养基 D.完成甲后应快速进行了操作
6.无菌技术是微生物培养获得成功的关键，下列有关说法正确的是（ ）
①微生物培养时，关键是避免杂菌的入侵，对无菌操作的要求非常严格
②对培养基及器械用高压蒸汽灭菌
③对实验空间及操作者的双手进行表面消毒时要考虑药剂的消毒效果及实验者的安全
④不同器械、不同用具区别对待，采用不同灭菌方法
⑤对目的菌及培养基可用高压蒸汽灭菌
⑥如果不小心导致污染，将可能造成培养工作前功尽弃
A.①②③④⑤ B.①②③④ C.①②③④⑥ D.①②③④⑤⑥
7.微生物培养过程中，十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作错误的是（ ）
A.实验操作者双手用75%酒精消毒
B.接种操作要在酒精灯火焰附近进行
C.接种用的接种环要进行灼烧灭菌
D.加入培养基中的指示剂不需要灭菌
8.下列关于灭菌和消毒的理解.不正确的是（ ）
A.接种环用灼烧法灭菌
B.消毒和灭菌实质上是相同的
C.发酵工程中常采用空气过滤、除菌的方法来净化所需空气
D.常用的灭菌和消毒方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法
9.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术应围绕着如何避免杂菌污染展开。请分析下列操作中错误的是（ ）
A.倒平板后，对空白培养基进行培养，可检测培养基是否被污染
B.在接种箱或超净工作台的使用过程中，可用紫外线照射30min进行消毒
C.若培养皿皿盖和皿底之间溅有培养基，则不，宜用此培养皿培养大肠杆菌
D.高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是压力为1kg/cm2、121℃，维持15~20min
10.无菌技术是微生物培养中的关键技术之一，内容主要包括消毒和灭菌。下列关于无菌技术的叙述，错误的是（ ）
A.生物消毒法可以杀死物体内部包括芽孢和孢子在内的所有微生物
B.常用的消毒方法主要包括煮沸消毒、化学药物消毒、紫外线消毒等
C.常用的灭菌方法主要包括干热灭菌、湿热灭菌、灼烧灭菌等
D.为避免周围环境中微生物的污染，消毒灭菌后的操作应在超净工作台进行
11.无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中正确的是（ ）
A.紫外线照射前，适量喷洒石炭酸等消毒液，可以加强消毒效果
B.不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.在微生物接种的实验中，用95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒
12.无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述正确的是（ ）
A.实验过程中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B.酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，无水乙醇比70％乙醇消毒效果更好
C.试管口、瓶口等易被污染的部位，接种时可通过火焰灼烧来灭菌
D.不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
13.消毒和灭菌在作用强度和作用效果方面差异显著，下列关于消毒和灭菌的说法错误的是（ ）
A.煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒是常用的消毒方法
B.消毒和灭菌均可消灭芽孢和孢子
C.湿热灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌是常用的灭菌方法
D.培养皿和金属器械的灭菌常采用干热灭菌
14.无菌操作在微生物培养、植物组织培养和动物细胞培养中都至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A.生物技术实验中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B.酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，95%的酒精用来消毒效果最好
C.动物细胞培养基配置时，加入抗生素即可达到无菌培养的目的
D.易分解的活性物质过滤除菌后，在无菌条件下加入灭菌的培养基中
15.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的污染。下列有关无菌技术的叙述，正确的是（ ）
A.操作者的双手清洁后，用无水乙醇擦拭消毒
B.经巴氏消毒法处理的食品不含微生物，可长期保存
C.接种室、接种箱使用前可用紫外线照射进行消毒
D.接种环、培养基、培养皿等均须采用干热灭菌法灭菌
答案以及解析
1.答案：A
解析：A、为排除其他物质的影响，配置培养基一般选择蒸馏水，A正确；
B、如果培养基中含有热敏感的成分，则不能进行高压灭菌，应该采用过滤灭菌，B错误；
C、液体培养基的配置过程不需要进行倒平板处理，C错误；
D、培养基含凝固剂（如琼脂）是固体培养基，不含凝固剂的成液状态的是液体培养基，D错误。
故选A。
2.答案：B
解析：A、乳酸杆菌自身不能合成维生素，而维生素又是维持其生命活动不可缺少的，故需在培养基中添加，A正确；
B、pH影响微生物的生长和代谢，配制培养基时pH一定要适宜，B错误；
C、琼脂在44℃以下凝固，在常规培养条件下呈固态，在液体培养基中加入琼脂可以制成固体培养基，C正确；
D、微生物也是由C、H、O、N、P、S等元素组成，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物，可归纳为碳源、氮源、生长因子、水、无机盐等，但配制时要注意各种养分的浓度和比例，D正确。
故选B。
3.答案：D
解析：A、微生物的营养物质主要有碳源、氮源、无机盐、水和生长因子，培养基是为微生物的生长、繁殖提供营养物质的基质，A正确；
B、根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基，例如培养自养型的细菌，在培养基中不需加入碳源，B正确；
C、微生物培养基调节pH值时可以用磷酸氢二钾或磷酸二氢钾，C正确；
D、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，D错误。
故选D。
4.答案：B
解析：A、倒好的培养基和培养皿要进行高压蒸汽灭菌，A正确；
B、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。B正确；
C、固体培养基中去除琼脂（凝固剂）即可制成液体培养基，C错误；
D、在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。微生物的纯培养一般用固体培养基，D错误。
故选B。
5.答案：D
解析：A、倒平板的操作中，需要在无菌环境下操作，首先轻轻震荡灭菌后的锥形瓶，待冷却至50°C左右之后，然后在酒精灯附近灼烧锥形瓶瓶口灭菌，再在酒精灯附近进行倒平板操作，最后待培养基凝固后倒置存放，故正确的操作顺序为丙→乙→甲→丁，A正确；B、培养基分装时，需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，防止瓶口的微生物污染培养基，B正确；C、图示操作为配置固体培养基的操作，C正确；D、培养皿应冷却到50°C倒平板，此温度下不烫手，等到所到的平板凝固后，再进行了的操作，D错误。
6.答案：C
解析：①获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，实验中对无菌操作的要求非常严格，①正确；②对于整个操作过程中的凡是和植物组织接触的材料、用具和试剂都要进行灭菌消毒，培养基及器械用高压蒸汽灭菌，②正确；③因为不同材料对药剂耐受力不同，故对实验空间及操作者的双手进行表面消毒时要考虑药剂的消毒效果及实验者的安全，如对操作者的双手采用酒精进行消毒，衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒，③正确；④不同器械、不同用具区别对待，采用不同灭菌方法，如实验过程中频繁使用的接种工具可灼烧灭菌，而培养皿常采用干热灭菌，④正确；⑤对目的菌不能用高压蒸汽灭菌，否则菌体将全部死亡，⑤错误；⑥如果不小心引起污染，将可能造成培养工作前功尽弃，导致整个技术的失败，⑥正确。综上分析，C正确，ABD错误。故选C。
7.答案：D
解析：加入培养基中的指示剂也需要灭菌，否则会引起杂菌污染导致实验失败，D错误。
8.答案：B
解析：接种环为金属制品，可用灼烧法灭菌，A正确；灭菌与消毒相比，前者消灭微生物更彻底，B错误；通过过滤除菌设备的空气几乎可以达到无菌的程度，并有足够的压力和适宜的温度，以满足好氧微生物纯培养的需要，C正确；生产中常用的灭菌和消毒方法有加热法、过滤法（用细菌不能通过致密具孔滤材的原理除去气体或液体中微生物的方法，常用于气体、热不稳定的药品溶液或原料的除菌）、紫外线法、化学药品法，D正确。
9.答案：B
解析：实验室中检测培养基是否被污染，一般是在倒平板后对空白培养基进行培养，A正确；在使用接种箱或超净工作台前，可用紫外线照射30min进行消毒，B错误；若培养皿皿盖和皿底之间溅有培养基，空气中的微生物可能在培养皿皿盖和皿底之间的培养基上滋生，因此不宜用此培养皿培养大肠杆菌，C正确；高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是压力为1kg/cm2、温度为121℃，维持15~20min，D正确。
10.答案：A
解析：生物消毒法比较温和，只能除去部分微生物，A错误。
11.答案：A
解析：A、用紫外线照射30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石炭酸等消毒液，可以加强消毒效果，A正确；B、不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不会破坏牛奶的营养成分，B错误；C、为了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；D、在微生物接种的实验中，一般用75%酒精对实验者的双手进行消毒，用紫外线照射30min对超净工作台进行灭菌，D错误。故选A。
12.答案：C
解析：A、微生物培养的器皿、接种用具和培养基等均需要灭菌，生物材料依据情况消毒或灭菌，A错误；B、酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，70%的酒精效果更好，B错误；C、将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌，C正确；D、消毒是指用比较温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程，不耐高温的牛奶使用巴氏消毒法可以避免牛奶中营养物质丢失过多，D错误。故选C。
13.答案：B
解析：A、消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程，煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒是常用的消毒方法，A正确；B、灭菌才能杀死一切的微生物，包括芽孢和孢子，消毒不能杀灭芽孢和孢子，B错误；C、灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程，湿热灭菌（如高压蒸汽灭菌）、干热灭菌、灼烧灭菌是常用的灭菌方法，C正确；D、能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌，都可用干热灭菌，D正确。故选B。
14.答案：D
解析：A.要对所有培养基和培养皿消毒，但是生物材料要根据实际情况来，比如说植物组织培养，外植体只能消毒，不能灭菌，不然高温下植物细胞会死亡，A错误；
B.一般消毒用的是70%的酒精，B错误；
C.抗生素只能杀灭细菌和一部分真菌，不能达到无菌的效果，C错误；
D.易分解的活性物质应该用过滤灭菌，无菌条件下加入无菌培养基，D正确。
故选D。
15.答案：C
解析：A、操作者的双手清洁后，用体积分数为75%的酒精擦拭消毒，不能用无水乙醇进行消毒，这是因为过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死，达不到消毒的目的，A错误；
B、巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底杀死，仍会有部分较耐热的细菌或细菌芽孢存在，故不能长期保存，B错误；
C、接种室、接种箱使用前用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物，是紫外线消毒，C正确；
D、培养皿等玻璃器皿可采用干热灭菌法灭菌，培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。
故选C。

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