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(共49张PPT)
板块五 生物技术与工程
专题十三 发酵工程
1.获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。 2.发酵工程为
人类提供多样的生物产品。
醋酸菌
碳源
尿素
稀释涂布平板法
PART
01
第一部分
命题点1
微生物的培养、分离与计数
1.无菌技术常用方法
过滤除菌
2.微生物的纯化技术
（1）配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基
（2）两种纯化微生物方法的比较
接种环
涂布器
3.微生物分离与计数的两个实例
（1）分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数
选择
（2）纤维素分解菌的分离
纤维素
［易错提醒］关注两种对照组与一种重复组
（1）将一未接种的选择培养基与接种的选择培养基一起培养——用于确
认培养基灭菌是否彻底（制备是否合格）。
（2）将一接种的普通培养基与接种的选择培养基一起培养——用于确认
选择培养基是否起“筛选”作用。
（3）进行微生物计数时，每一稀释度下至少涂布三个平板，即设置重复
组，是为了求平均值，提高计数准确度。
【最新考情】
1.（2024·江苏选择考）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙
述正确的是( )
C
A.酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌
B.酵母菌是真核细胞，需放置在 培养箱中进行培养
C.可用稀释涂布平板法对酵母菌计数
D.该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰
解析：选C。酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌和真菌，A错误。酵母
菌培养的最适为,最适生长温度一般为 ，故需将含
有酵母菌的培养基放置在 恒温培养箱中进行培养，B错误。可用稀释
涂布平板法对酵母菌计数，C正确。酵母菌是真核细胞，具有高尔基体和
内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰，D错误。
2.（2023·江苏选择考）下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是( )
A
A.通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B.通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大
C.通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌
D.血球计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定
解析：选A。不同微生物对营养物质的需求不一样，具有高碳氮比的生物
需要高碳氮比的营养物质，反之则低，酵母菌的碳氮比高于细菌，所以通
常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比，A正确；通常细菌的生长
速度比酵母菌快，但形成的菌落不一定大于酵母菌，这与细菌的种类有关，
部分细菌的菌落小于酵母菌，B错误；通常细菌和酵母菌的培养基都可以
用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误；血球计数板适用于真菌的计数，D错误。
［把脉高考］ 该知识点为高频考点。考查点主要包括无菌技术、培养基
的配制、微生物的接种方法、微生物的培养等。试题情境常涉及生活、生
产实践和环境治理，又渗透科学实验与探究。
【历年考情】
（1）（2023·山东T15）不含氮源的平板不能用于微生物培养。( )
×
（2）（2023·广东T10）研究者拟从堆肥中取样并筛
选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。
根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原
理来判断，最可能筛选到目标菌的条件组合是 点时
取样、角蛋白氮源培养基。( )
√
（3）（2021·江苏T18）将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基
污染的概率。( )
×
（4）（2021·江苏T18）为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于
石油为唯一碳源的固体培养基上，以致死率为 的辐照剂量诱变处理。
涂布用的菌浓度应控制在个/ 。( )
×
（5）（2021·浙江6月T17）稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，
都可用于细胞计数。( )
×
（6）（2020·江苏T19）为纯化菌种，在鉴别培养基上划
线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。图中Ⅰ、Ⅱ
区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落。( )
√
（7）（2023·全国乙T37（2））采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗
液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要
作用是__________________________________________________________
（答出1点即可）。
用于合成微生物细胞中的含氮化合物，如核酸、蛋白质等
（8）（2022·河北T23（2））枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应
采用__________（填“静置”或“摇床振荡”）培养。培养过程中抽样检测活
菌数量时，应采用________________（填“稀释涂布平板法”或“显微镜直
接计数法”），其原因是___________________________________________
________________________________________________________________
__________。
摇床振荡
稀释涂布平板法
用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落一般都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内
突破1 培养基的制备与无菌操作
1.（2024·南通高三调研）下表是一种筛选微生物的培养基配方，相关分析
错误的是( )
成分 甘露醇
含量/ 10 0.2 0.2 0.2
成分 水 琼脂粉
含量/ 0.1 5 1 000 20
A.该培养基为无氮培养基，说明筛选的微生物不需要氮源
B.甘露醇既可为微生物提供碳源，也可以提供能源
C.该培养基为固体培养基，配制后应先分装再灭菌
D.进一步分离纯化微生物时常用平板划线法进行接种
解析：选A。该培养基为无氮培养基，利用该培养基选择培养出的微生物
可以利用空气中的氮气作为氮源，而不是不需要氮源，A错误；甘露醇是
一种可溶性的碳水化合物，可以被微生物迅速代谢产生能量，既可为微生
物提供碳源，也可以提供能源，B正确；该培养基含有琼脂粉，为固体培
养基，配制后应先分装再灭菌，减少污染的可能，C正确；分离纯化菌种
时，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，D正确。
√
2.（多选）下列与微生物培养有关的说法，正确的是( )
ABD
A.平板划线法每次划线前和最后一次划线后都需要对接种环进行灼烧灭菌
B.常用的干热灭菌法包括干热空气灭菌法和火焰灼烧法等
C.果酒发酵之后再进行果醋制作时，需要继续密闭
D.接种微生物后，将平板倒置并放入培养箱中培养
解析：选 。平板划线法每次划线前和最后一次划线后都需要对接种环
进行灼烧灭菌，防止接种环上的菌类影响划线结果和造成污染，A正确；
常用的干热灭菌法包括干热空气灭菌法和火焰灼烧法等，B正确；醋酸菌
是好氧细菌，故果酒发酵之后再进行果醋制作时，需要持续通入氧气或空
气，C错误；接种微生物后，应将平板倒置并放入培养箱中培养，以防污
染，D正确。
突破2 微生物的培养、筛选与计数
3.（多选）（2024·盐城六校高三联考）鸡蛋表面污染的细菌会逐渐侵入蛋
内，缩短鸡蛋保质期。对某地不同季节及不同养殖模式下生产的鸡蛋取样，
按每克鸡蛋用 无菌生理盐水清洗鸡蛋表面，收集清洗液，培养计数结
果如下表所示。相关叙述正确的是( )
季节 菌落数/（个·g ） 半封闭式养殖模式 全封闭式养殖模式
夏季
冬季
A.稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面细菌数比实际数略少
B.表中数据是对清洗液稀释 倍后涂布平板获得的
C.比较两种养殖模式可知鸡蛋表面的细菌主要来自环境
D.冬季鸡舍更需要消毒以减少鸡蛋表面的细菌污染
√
√
√
解析：选 。由于两个或多个细胞可能聚集在一起形成一个菌落，因此
稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面细菌数比实际数略少，A正确；稀释涂布
平板法涂布的菌液体积通常为，菌落数为 的平板适于计
数，根据题表数据分析，半封闭式养殖模式对清洗液稀释 倍后涂
布平板，全封闭式养殖模式对清洗液稀释 倍后涂布平板，B错误；
半封闭式养殖模式下的鸡蛋表面细菌数明显多于全封闭式养殖模式，这说
明环境中的细菌更容易污染鸡蛋表面，C正确；从题表数据可以看出，冬
季鸡蛋表面的细菌数明显多于夏季，这可能是因为冬季气温低，细菌更容
易在鸡蛋表面生存和繁殖，因此需要加强消毒措施，D正确。
4.（多选）（2024·宿迁高三调研）某生物活动小组为探究当地农田土壤中
分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、
计数等步骤，实验操作过程如下图所示，下列说法正确的是( )
A.图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源
的固体培养基，能生长的微生物都能合成脲酶
B.若每支试管稀释10倍，则图中的数值应为，5号试管共稀释了 倍
C.图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的
D.若仅以4号试管接种培养基计数， 该土壤中分解尿素的细菌的估算数
目是 个
BC
解析：选 。本实验的目的是探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，
因此图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，但在此培养基
上能生长的微生物不一定都能合成脲酶，如固氮菌在此培养基上也能生长，
A错误；若每支试管稀释10倍，即将与 无菌水混合稀释10倍，
则的数值为，土壤定容到 溶液被稀释了10倍，故5号试管共
稀释了 倍，B正确；题图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布
不均匀造成的，C正确；若仅以4号试管接种培养基计数， 该土壤中分
解尿素的细菌的估算数目是
（个），D错误。
PART
02
第二部分
命题点2
传统发酵技术的应用
1.
醋酸
榨汁
2.泡菜腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化
【最新考情】
1.（2024·江苏选择考）关于“利用乳酸菌发酵制作酸奶或泡菜”的实验，下
列叙述正确的是( )
D
A.制作泡菜的菜料不宜完全淹没在煮沸后冷却的盐水中
B.制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌
C.发酵装置需加满菜料或牛奶并封装，以抑制乳酸菌的无氧呼吸
D.控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质
解析：选D。制作泡菜是利用乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，所以为制造无氧
环境，制作泡菜的菜料要完全淹没在煮沸后冷却的盐水，A错误。制作酸
奶时，将牛奶倒入灭菌后的奶瓶中，倒入的奶液量不要超过奶瓶容积的2/3，
再将牛奶加热至90 ，保温5 min，或将牛奶置于80 恒温水浴箱中15
min。如果采用市售未开封的鲜奶,可直接使用，不需要灭菌，B错误。制
作泡菜时泡菜装置八成满，制作酸奶时倒入的奶液量不要超过奶瓶容积的
2/3，C错误。制作酸奶或泡菜时，控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响
酸奶或泡菜的口味和品质，D正确。
2.（多选）（2023·江苏选择考）某醋厂和啤酒厂的工艺流程如图所示。酒
曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀粉水解过程。
下列相关叙述正确的有( )
CD
A.糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的是利于糖化
和灭菌
B.发酵原理是利用真菌的无氧呼吸与细菌的有
氧呼吸
C.醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，可控制发
酵温度和改善通气状况
D.啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵
时间
解析：选 。糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”均有利于灭菌，大米“蒸煮”有利于
糖化过程，A错误；题图中制酒用到了酒曲，酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸
菌，霉菌属于真菌，其为需氧型，该过程中霉菌产生的淀粉酶有利于将糯
米中的淀粉分解，乳酸菌进行的是无氧呼吸，酵母菌主要进行无氧呼吸完
成酿酒的过程，醋酸发酵过程中主要利用了醋酸菌的有氧呼吸，B错误；醋
酸发酵过程中利用了醋酸菌的有氧呼吸，在发酵过程中经常翻动发酵物，
目的是控制发酵温度和改善通气状况，C正确；啤酒酿造利用的原理是酵母
菌的无氧呼吸产生酒精，在啤酒酿造流程前期适当增加溶解氧有利于满足
酵母菌自身增殖的需要，增加酵母菌数量，有利于缩短发酵时间，D正确。
［把脉高考］ 该知识点为中频考点。考查点主要包括利用传统发酵技术
制作泡菜、果酒和果醋；利用发酵工程进行啤酒制作；发酵工程在食品工
业、医药工业和农牧业等领域中的应用等。试题情境多联系生活、生产实
践，指导应用性较强。
【历年考情】
（1）（2023·浙江6月T12）关于小曲白酒的酿造过程，糖化主要是利用霉
菌将淀粉水解为葡萄糖。( )
√
（2）（2022·山东T20）啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、
糖化、蒸煮、发酵、消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。焙烤是为了
利用高温杀死大麦种子的胚并进行灭菌。( )
×
（3）（2022·山东T14）目前已实现青霉素的工业化生产，选育出的高产
菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中。( )
√
（4）（2021·江苏T14）果醋发酵时，发酵液产生的气泡量明显少于果酒
发酵时。( )
√
（5）（2021·江苏T14）果醋发酵时，用重铬酸钾测定醋酸含量变化时，
溶液灰绿色逐日加深。( )
×
（6）（2021·辽宁T8）酵母菌和醋酸菌发酵过程中控制通气的情况不同。
( )
√
（7）（2021·山东T12）葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成
的。( )
√
（8）（2020·江苏T18）某同学在家用带盖玻璃瓶制作果酒和果醋时将玻
璃瓶用酒精消毒后，装满葡萄汁，待酒精发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，
再进行醋酸发酵。( )
×
（9）（2019·江苏T9）利用乳酸菌制作酸奶过程中，先通气培养，后密封
发酵。( )
×
（10）（2019·江苏T9）果醋制作过程中发酵液 逐渐降低，果酒制作过
程中情况相反。( )
×
（11）（2020· 全国ⅢT37（4）节选）制作果酒需要____________菌，这
一过程中也需要， 的作用是________________________________。
酵母
促进有氧呼吸，使酵母菌大量繁殖
突破1 传统发酵技术的应用
1.（2024·南通高三一模）某同学制作果酒、果醋的步骤如下：①将发酵瓶
等清洗干净后用酒精消毒；②清洗葡萄并榨汁装入发酵瓶；③将温度控制
在发酵；④打开瓶盖，盖上一层纱布再发酵 。下列说法
错误的是( )
A
A.①可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
B.②装瓶时要注意，发酵液总量不要超过发酵瓶体积的
C.③每隔一段时间旋松瓶盖一次，及时放气
D.④需要调高温度至 ，该过程几乎不产生气体
解析：选A。①过程将发酵瓶等清洗干净后用酒精消毒，不能杀死物体内
外所有的微生物，A错误；②过程装瓶时要注意，发酵液总量不要超过发
酵瓶体积的，B正确；将温度控制在 进行果酒发酵，并需适
时旋松瓶盖放气，C正确；果醋发酵的菌种是醋酸菌，为好氧细菌，最适
温度为，故④需要调高温度至 ，该过程几乎不产生
气体，D正确。
2.（2024·连云港高三一模）下列关于传统发酵技术的叙述正确的是( )
C
A.利用果酒制作果醋过程中，只需将温度提高到 即可进行果醋
发酵
B.果酒制作过程中发酵液先上升后下降，果醋制作过程中发酵液 一
直下降
C.泡菜制作过程中，需密封容器，置于阴凉处自然发酵
D.制作泡菜时，为了防止杂菌污染和加速醋酸菌发酵，可加入灭菌后的陈
泡菜水
解析：选C。利用果酒制作果醋过程中，需将温度提高到 、接种
醋酸菌、充入氧气才可进行果醋发酵，A错误；果酒制作过程中酵母菌呼
吸作用产生，使培养液 下降，B错误；泡菜制作过程中，需密封容
器创造无氧环境，置于阴凉处自然发酵，C正确；加入陈泡菜水的目的是
增加乳酸菌的数量，使乳酸菌在短时间内发展为优势菌种，而灭菌后的陈
泡菜水中乳酸菌已经死亡，达不到这个效果，D错误。
突破2 发酵工程及其应用
3.米酒旧时称酒酿，其现代生产工
艺流程如下图所示。下列说法错误
的是( )
D
A.蒸米有利于根霉曲分解糯米中的有机物，淋冷可防止杀死根霉
B.加酵母曲后应先通入一段时间无菌空气，再进行无氧发酵
C.发酵结束后对发酵液进行灭菌可延长米酒的保存期
D.若酿制的米酒有酸味，应与长期封闭酿酒容器有关
解析：选D。将糯米蒸熟可以杀死糯米中绝大多数杂菌且蒸米过程会使有
机物的结构遭到一定破坏，有利于后续根霉曲分解糯米中的有机物，淋冷
可防止杀死根霉，A正确；加酵母曲后应先通入一段时间无菌空气，促进
酵母菌有氧呼吸，使酵母菌大量繁殖，再进行无氧发酵，B正确；发酵结
束后对发酵液进行灭菌，可以消灭杂菌，延长米酒的保存期，C正确；若
酿制的米酒有酸味，可能是由于酿酒容器漏气，导致氧气进入，促使醋酸
菌进行醋酸发酵，D错误。
4.（多选）（2024·南通高三调研）食用海带有补血、健脾、降低体内胆固
醇的作用，研究表明经乳酸菌发酵后的海带发酵液能较好降血脂。相关叙
述错误的是( )
AC
A.发酵过程中要经常搅拌，适度往培养基中通入无菌空气
B.为提高发酵效率，可适时向培养基中添加适量葡萄糖、蛋白胨等
C.随发酵时间延长，培养的温度升高，发酵速度加快
D.可通过检测发酵液的 监测发酵进程
解析：选 。乳酸菌属于异养厌氧细菌，乳酸菌发酵需要隔绝空气，故发
酵过程中不能通入无菌空气，A错误；葡萄糖和蛋白胨可以为乳酸菌提供
碳源和氮源，故为提高发酵效率，可适时向培养基中添加适量葡萄糖、蛋
白胨等，B正确；适当提高温度，可以加快发酵速度，但温度过高会导致
发酵菌种死亡，发酵速度降低，可见随发酵时间延长，培养的温度升高，
发酵速度不一定加快，C错误；乳酸菌发酵过程中产生大量乳酸，会导致
发酵液发生变化，故可通过检测发酵液的 监测发酵进程，并便于适
时调节 ，保证发酵效率，D正确。(共32张PPT)
专题强化训练
一、单项选择题
1.下列有关微生物的培养与应用，叙述错误的是( )
D
A.湿热灭菌后倒的平板和接种后的平板均需倒置
B.将未接种的平板培养并观察有无菌落，以判断培养基灭菌是否合格
C.同一稀释度下至少要涂布三个平板，待菌落数稳定后计数
D.对尿素分解菌进行计数时，可采用平板划线法
解析：选D。平板倒置既可防止培养皿皿盖上凝结的水滴滴入培养基造成
污染，又可避免培养基表面的水分过快挥发，A正确。将未接种的平板培
养并观察有无菌落，若未接种的培养基表面有菌落生长，则培养基灭菌不
合格，若未接种的培养基表面无菌落生长，则培养基灭菌合格，B正确。
同一稀释度下至少要涂布三个平板，进行重复实验，并且要培养到菌落数
在 再计数，C正确。平板划线法不能对菌落进行计数，D错误。
2.（2024·南通高三调研）某中学兴趣小组从垃圾堆放点的土壤中分离出一
株分解柴油的芽孢杆菌。相关叙述正确的是( )
C
A.配制培养基时应以柴油为唯一氮源，并加入琼脂
B.配制好的培养基应先分装，再用干热灭菌法灭菌
C.土壤样液可先进行富集培养，再进行涂布筛选
D.选择平板中的菌落数必须在 之间
解析：选C。配制培养基时应以柴油为唯一碳源，A错误；培养基灭菌采
用湿热灭菌法，配制好的培养基应先分装，再灭菌，B错误；土壤样液可
先进行富集培养，增加菌株数量，再进行涂布筛选，C正确；分离分解柴
油的芽孢杆菌，采用稀释涂布平板法时，对平板中的菌落数可以不做要求，
D错误。
3.（2024·扬州高三四校联考）制备筛选支原体的培养基时，需要在基础培
养基里添加动物血清、酵母浸液、青霉素等。多数 长出“油煎蛋”状
菌落。下列相关叙述错误的是( )
D
A.动物血清可以提供营养和生长因子促进支原体的生长和增殖
B.在筛选支原体的培养基里添加青霉素可以防止杂菌污染
C.实验时不能用无水乙醇对实验员的手进行消毒
D.临床上根据菌落特征确诊是否支原体感染是高效而准确的
解析：选D。支原体的生长和增殖需要培养基提供营养和生长因子，动物
血清可以满足，A正确；添加青霉素可以杀死其他杂菌，防止杂菌污染，
B正确；对实验员的手消毒不能用无水乙醇，C正确；根据菌落特征筛选
支原体需要制备筛选支原体的培养基，过程繁琐，且支原体菌落特征不明
显，不好与其他杂菌的菌落区分开，运用核酸和抗原检测是高效且准确的，
D错误。
4.“以曲酿酒”是我国白酒酿造工艺的典型特征。原始酒曲实际上来源于发
霉或发芽的谷物，现代酒曲在生产上通常以小麦、大麦和豌豆为原料进行
发酵。下列叙述错误的是( )
B
A.传统酒曲是自然接种和开放式培养，原料和环境是其微生物的来源
B.酒曲中的酵母菌可通过无氧呼吸作用将原料中的淀粉直接转化为酒精
C.酒曲中的霉菌可产生蛋白酶、脂肪酶等多种水解酶降解原料中的大分子
物质
D.酒曲中的乳酸菌可产生乳酸，抑制其他不耐酸的微生物生长繁殖
解析：选B。分析题意可知，原始酒曲实际上来源于发霉或发芽的谷物，
传统酒曲是自然接种和开放式培养，原料（发霉或发芽的谷物）和环境是
其微生物的来源，A正确；淀粉属于多糖，不能直接被酵母菌利用，酿酒
的原理是酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖分解为酒精和 ，B错误；酒曲
中的霉菌可产生蛋白酶、脂肪酶等多种水解酶降解原料中的大分子物质，
C正确；微生物的生长需要适宜的环境，酒曲中的乳酸菌可产生乳酸，抑
制其他不耐酸的微生物生长繁殖，D正确。
5.（2024·常州高三模拟）胶质芽孢杆菌可以分解含钾矿物质硅酸盐并释放
出钾离子供植物利用，它还可产生多种生物活性物质，促进植物生长。某
实验室在土壤中分离到了胶质芽孢杆菌。下列有关 的分离、纯
化和计数的叙述，正确的是( )
D
A.培养基中的氮源仅能提供
B.培养基 的调节在灭菌前后进行都可以
C.可采用平板划线法对胶质芽孢杆菌进行分离和计数
D.分离纯化 时需使用含钾矿物质硅酸盐作为唯一钾源的培养基
解析：选D。培养基中的氮源除提供 外，还可提供无机盐，A错误；微生
物培养应注意无菌操作，应该在灭菌之前调节 ，B错误；平板划线法可
对微生物进行分离，但不能用于计数，计数应采用稀释涂布平板法，C错
误；分离纯化 时需使用含钾矿物质硅酸盐作为唯一钾源的培养基，
在该培养基上只有能分解含钾矿物质硅酸盐的目的菌能够生存，D正确。
6.下列有关果酒和果醋制作的叙述，错误的是( )
A
A.为降低杂菌污染，发酵前需要对原料和器具进行灭菌处理
B.装置密闭发酵过程中，酒精度的变化是先增加后趋于稳定
C.葡萄酿酒过程中，使用果胶酶利于出汁，还能提高酒的透明度
D.由果酒制作转为果醋制作时，不仅要升高发酵温度，还要注意通气
解析：选A。为降低杂菌污染，发酵前需要对器具进行灭菌处理，而原料
不需要灭菌，因为菌种来自原料本身，灭菌会导致菌种被杀死，A错误；
装置密闭发酵过程中，随着发酵的进行酒精积累，酒精度逐渐增大，而在
发酵后期由于底物被大量消耗，酒精度趋于稳定，B正确；果胶酶能破坏
细胞壁，利于葡萄汁的榨取，还能使酒变得清澈透明，C正确；果酒制作
需要的菌种是酵母菌，在无氧条件下将葡萄糖分解为酒精，果酒制作的适
宜温度是 ，制作果醋需要的菌种是醋酸菌，为好氧细菌，果醋
制作的适宜温度是 ，因此由果酒制作转为果醋制作时，不仅要
升高发酵温度，还要注意通气，D正确。
7.下列关于分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数实验操作的叙述，错误
的是( )
B
A.利用稀释涂布平板法估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度
B.若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置未接种的牛肉膏蛋
白胨培养基作为对照
C.将培养皿倒置于恒温箱中培养，每 观察一次
D.在超净工作台上和酒精灯火焰附近进行操作，是为了防止杂菌污染
解析：选B。利用稀释涂布平板法估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度，
涂布平板后菌落数要在 之间，A正确；若要判断选择培养基是否
起到了选择作用，需要设置接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，当选择
培养基上的菌落数少于牛肉膏蛋白胨培养基时，说明起到了选择作用，B
错误；将培养皿倒置于恒温箱中培养，每 观察一次每个培养皿
中的细菌菌落，C正确；在超净工作台上和酒精灯火焰附近都有无菌区域，
操作时可以防止杂菌污染，D正确。
8.（2024·无锡高三调研）下列有关发酵工程及其应用的叙述，正确的是
( )
C
A.作为微生物饲料的单细胞蛋白，可通过发酵工程从微生物细胞中提取
B.菌种的选育是发酵工程的中心环节，优良菌种可从自然界筛选出来
C.酱油制作中利用黑曲霉将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸
D.啤酒发酵过程中糖的分解和代谢物的生成主要在后发酵阶段完成
解析：选C。作为微生物饲料的单细胞蛋白是微生物菌体，并不是通过发
酵工程从微生物细胞中提取获得的，A错误；发酵生产是发酵工程的中心
环节，B错误；酱油制作中利用黑曲霉将原料中的蛋白质分解成小分子的
肽和氨基酸，C正确；啤酒发酵过程中糖的分解和代谢物的生成主要在主
发酵阶段完成，D错误。
二、多项选择题
9.（2024·苏锡常镇高三调研）为筛选
出可高效抑制番茄枯萎病菌
（一类真菌）的芽孢杆菌菌株，科研
人员从土壤中采集、分离、筛选芽孢
杆菌菌株作为待测菌株，并采用平板
对峙培养法观察各待测菌株的抑菌能力。下图为研究过程示意图，下列叙
述正确的是( )
A.过程①常利用涂布器蘸取 菌液涂布平板
B.过程②可根据芽孢杆菌菌落的形态、颜色进行挑选
C.若甲、乙、丙三个平板的平均菌落数为12个，则 土样中芽孢杆菌约
有 个
D.实验筛选出的菌株仍需进行大田种植试验以检测防治效果
√
√
解析：选。过程①常利用移液管吸取 菌液，滴加到培养基表面，
然后用涂布器涂布平板，A错误；每种细菌的菌落都有特定的形态、大小
和颜色，所以过程②可根据芽孢杆菌菌落的形态、颜色进行挑选，B正确；
若甲、乙、丙三个平板的平均菌落数为12个，不符合 的菌落计数
要求，故不能进行计算，C错误；筛选出的菌株需要进一步确定其抑制番
茄枯萎病菌的效果，所以需进行大田种植试验，以检测防治效果，D正确。
10.（2024·泰州高三一模）某种物质A（一种含有C、、 的有机物）难
以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照下图
所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将 中的菌
液稀释一定倍数后，取涂布到平板上，初步估测摇瓶中 菌
液中细菌数为 个。相关叙述正确的是( )
A.实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B.乙中需要加琼脂和物质A等，实验需设平行重复实验，需另外设置空白
对照
C.步骤③的接种工具是接种环，菌落数目稳定时，大小不同的菌落形成的
起始时间一般不同
D.若乙平板上菌落数平均为240个，则接种的菌液的稀释倍数为
√
√
解析：选 。实验时，要从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株，淤
泥中有菌种，因此不能对淤泥进行灭菌处理；盛有培养基的摇瓶通常采用
高压蒸汽灭菌法进行灭菌，A错误。③是用稀释涂布平板法将菌种接种到
以A为唯一碳源和氮源的选择培养基上，因此乙为固体培养基，需要加琼
脂和物质A等，为了提高准确度，实验需设平行重复实验，且需要另外设
置空白对照，以检测培养基配制是否合格，B正确。乙培养基中菌落分布
较均匀，③接种方法为稀释涂布平板法，接种工具是涂布器，大小不同的
菌落是分解菌分解能力不同导致的，C错误。若乙平板上的菌落数平均为
240个，假设稀释倍数为，根据摇瓶中菌液中细菌数为
个，在每个平板上涂布 稀释后的菌液，则有
，则稀释倍数 ，D正确。
11.（2024·苏锡常镇高三调研）用高
盐稀态发酵法酿造的酱油风味独特、
具有复杂香气，其生产工艺流程如下
图所示。下列叙述正确的是( )
AC
A.利用产生蛋白酶的米曲霉，可将蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸
B.发酵阶段加入酵母菌、乳酸菌等主要用于控制米曲霉的种群密度
C.制醪阶段提高冷冻盐水浓度，可降低杂菌污染概率，但不能缩短发酵周期
D.灭菌阶段常采用高压蒸汽法灭菌以保证酱油的品质和风味
解析：选 。米曲霉可产生蛋白酶将蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，
A正确；酵母菌、乳酸菌在发酵阶段加入，也为发酵菌种，它们产生的酶
可以分解蛋白质、脂肪，增加酱油的香味、口感、营养价值，B错误；制
醪阶段提高冷冻盐水浓度，降低温度，能降低杂菌污染的概率，但不能缩
短发酵周期，C正确；灭菌阶段不能采用高压蒸汽法灭菌，D错误。
三、非选择题
12.我国早在公元前22世纪就采用发酵法酿酒，制酱、制醋、制腐乳、制泡
菜等也具有悠久的历史。回答下列问题：
（1）传统啤酒酿造的发酵过程是在敞开式发酵池中进行的，麦芽汁中接
种酵母菌后通入大量无菌空气，之后会产生大量气体翻腾逸出，形成厚厚
的气泡层。其中，气泡层起__________的作用，有利于酒精的生成。
隔绝空气
（2）制作泡菜时煮沸的盐水须冷却后再倒入装好干净蔬菜的坛中，以免
高温______________________。
发酵过程中，除乳酸菌外，其他微生物在密封发酵2天后均大幅度减少，
主要原因是________________________________________。
杀死蔬菜表面的乳酸菌
只有乳酸菌能耐受酸性且缺氧的发酵液环境
（3）乳酸菌常用于制作酸奶等发酵食品。制作酸奶时，若牛奶中含有抗
生素，会影响酸奶的制作效果，原因是__________________________。
抗生素能抑制乳酸菌的生长
（4）研究人员为探究发酵温度对红树莓果酒发酵的影响做了相关实验，
得到下图结果：
①据图可知，发酵的最适温度是 ，理由是该温度时________________
________。
②发酵进行一段时间后残糖量不再降低，推测原因可能是______________
_____________。
残糖量最低，酒精度最高
酒精度过高导致酵母菌死亡
13.链孢霉是食用菌生产过程中常产
生的一种竞争性真菌，具有危害范围
广、繁殖快、防治困难等特点。研究
人员从菌袋的污染部位挑取链孢霉孢
子，进行了下图所示实验，所得实验
结果（即菌落直径，单位： ）如下表所示。回答下列问题：
杀菌剂种类 不同稀释倍数下的菌落直径 100 300
百菌清 5.5 11.8
多菌灵 2.3 6.3
霉菌克星 1.6 5.7
高效洁霉净 1.4 5.3
链孢克星 0 4.4
克霉灵 0 3.5
（1）图中除了____________外，其余操作均需在燃烧的酒精灯火焰附近
进行。步骤①为配制好的 培养基经______________法灭菌后，冷却至
不烫手（或 左右），实验组分别加入____________________________
________，然后进行步骤②。
配制培养基
高压蒸汽灭菌
等量不同种类、不同稀释倍数的杀菌剂
（2）接种②是使用________（填接种工具）将孢子悬液用_____________
法接种在培养基表面。分析表中数据，可以得到的实验结论有_________
________________________________________________________________
（答出两点即可）。
涂布器
稀释涂布平板
6种杀菌剂对链孢霉均有抑菌作用、稀释100倍的克霉灵及链孢克星的抑菌作用最好
（3）链孢霉虽可采用化学药剂防治，但因存在_______________________
（答出两点即可）等缺点，研究者欲尝试分离纯化能抑制链孢霉生长的
细菌，采用上图中接种方法，将分离得到的单株纯化细菌接种到接种有链
孢霉的培养基平板上培养3天，若某细菌和链孢霉之间存在拮抗线
（两个不同的菌种相互抵御对方的侵入，从而在两个菌种之间形成一条深
色线），则说明________________________。
污染环境、易产生抗药性
该细菌可抑制链孢霉生长

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