资源简介

(共45张PPT)
3.1
重组DNA技术的基本工具
一、基因工程（P70）
1.概念
是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。
2原理：基因重组
①减Ⅰ前期：同源染色体的非姐妹染
色单体发生交叉互换
②减Ⅰ后期：非同源染色体自由组合
一、基因工程（P70）
3.发展过程
1944年，艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可以在同种生物个体间转移。
1961年，尼伦伯格和马太破译了第一个编码氨基酸的密码子。截至19666年，64个密码子均被破译成功。
1970年，科学家在细菌中发现了第一个限制性核酸内切酶（简称限制酶）
1972年，伯格首先在体外进行了DNA的改造，成功构建了第一个体外重组DNA分子。
1982年，第一个基因工程药物-重组人胰岛素被批准上市。基因工程药物成为世界各国研究和投资开发的热点。
1953年，沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出了遗传物质自我复制的假说。
1967年，科学家发现，在细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞间转移。
20世纪70年代初，多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
1973年，科学家证明了质粒可以作为基因工程的载体，构建重组DNA，导入受体细胞，使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现了物种间的基因交流。至此，基因工程正式问世。
1985年，穆里斯等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：基因工程（P70）
理论基础
1.DNA的基本组成单位相同（都是四种脱氧核苷酸）
2.都遵循碱基互补配对原则
3.DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
理论基础
1.基因是控制生物性状的结构与功能单位
2.遗传信息传递都遵循中心法则
3.生物界几乎共用一套遗传密码
重组DNA技术所需的三种工具
“分子手术刀”
准确切割DNA分子
“分子缝合针”
“分子运输车”
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
限制性内切核酸酶
DNA连接酶
基因进入受体细胞的载体
二、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”（P71）
1.概念
切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶。
2.来源
主要从原核生物中分离纯化出来。
3.种类
迄今分离的限制酶有数千种。（ps：是一类酶而不是一种酶）
二、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”（P71）
4.命名
EcoRⅠ
Escherichia coli
属名(大写)
种名 (小写)
属名的头一个字母
种加词的头两个字母
大肠杆菌的R型菌株分离来的
R型菌株中分离出来的第一种限制酶
二、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”（P71）
5.作用
⑴识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，
⑵并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
还记得磷酸二酯键在哪吗？
磷酸二酯键
磷酸二酯键
简化
简化
—AGTC—
—TCAG—
5’
3’
3’
5’
识别序列：
⑴概念：限制酶所识别的序列，呈现碱基互补对称。 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
⑵特点：
①都可以找到一条中（心）轴线
②中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列。
正向读与另一条链反向读的碱基顺序完全一致
EcoRⅠ限制酶
5'
5'
3'
3'
SmaⅠ限制酶
5'
5'
3'
3'
5’
3’
5’
3’
中轴线
eg：EcoRⅠ限制酶的识别序列为
从5’→3’方向的识别序列均为GAATTC，并切断G和A之间的磷酸二酯键。
eg：EcoRⅠ限制酶的识别序列为
从5’→3’方向的识别序列均为GAATTC，并切断G和A之间的磷酸二酯键。
5’
3’
5’
3’
3’
5’
5’
3’
黏性末端
黏性末端
当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是黏性末端。
ps：限制酶切割磷酸二酯键后氢键会自动断裂！
（从5’→3’读）为________
AATT
Q1.推断限制酶切一次可断开 个磷酸二酯键，产生 个游离的磷酸基团，产生 个黏性末端，消耗 分子水。
Q2.限制酶能否切开RNA分子的磷酸二酯键吗？
两
2
2
两
否，限制酶只能识别并切开双链DNA分子（酶的专一性）
5’
3’
5’
3’
中轴线
eg：SmaⅠ限制酶的识别序列为
从5’→3’方向的识别序列均为CCCGGG，并切断C和G之间的磷酸二酯键。
5’
3’
5’
3’
平末端
当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。
3’
5’
5’
3’
eg：SmaⅠ限制酶的识别序列为
从5’→3’方向的识别序列均为CCCGGG，并切断C和G之间的磷酸二酯键。
二、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”（P71）
6.结果
产生黏性末端或平末端
Q1.推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是？（P71）
限制酶是原核生物的一种防御工具，用来切割侵入细胞的外源DNA，以保证自身安全。
Q2.为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？（P74）
原核细胞DNA中不存在限制酶的识别序列或能被识别的序列被修饰（甲基化）了。
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：分析限制酶和DNA连接酶（P71）
细菌
细菌
限制酶
Q3.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeⅠ进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、XbaⅠ、EcoRⅤ和XhoⅠ进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
⑴请写出限制酶SpeⅠ、HindⅢ、XbaⅠ和XhoⅠ切割形成的黏性末端。
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：分析限制酶和DNA连接酶（P71）
SpeⅠ： HindⅢ： XbaⅠ： XhoⅠ:
CTAG AGCT CTAG TCGA
Q3.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeⅠ进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、XbaⅠ、EcoRⅤ和XhoⅠ进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
⑵哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶SpeⅠ切割A片段产生的DNA片段相连接？为什么？（P75）
XbaⅠ。因为XbaⅠ与SpeⅠ切割产生了相同的黏性末端。
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：分析限制酶和DNA连接酶（P71）
Q3.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeⅠ进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、XbaⅠ、EcoRⅤ和XhoⅠ进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
⑶同种限制酶切割产生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割产生的黏性末端是否一定不同？
同种限制酶产生的黏性末端相同。
不同的限制酶可能会形成相同的黏性末端。
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：分析限制酶和DNA连接酶（P71）
Q3.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeⅠ进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、XbaⅠ、EcoRⅤ和XhoⅠ进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
⑷不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义？（P75）
识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。用同尾酶构建载体时，切割位点的选择范围更大。例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断，这时可以考虑用合适的同尾酶（目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列）来获取目的基因。
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：分析限制酶和DNA连接酶（P71）
G A A T T C
C T T A A G
G A A T T C
C T T A A G
G
C T T A A
A A T T C
G
G
C T T A A
A A T T C
G
用同种限制酶切割
（EcoRⅠ）
Q：把两种来源不同的DNA进行重组，应该怎样处理？
G
C T T A A
A A T T C
G
G
C T T A A
A A T T C
G
Q：把两种来源不同的DNA进行重组，应该怎样处理？
完全互补的黏性末端能通过氢键暂时连接在一起，但并不稳定。
而要形成重组DNA分子，还必须使基本骨架之间通过磷酸二酯键 “ 缝 ” 上，就像断成两截的梯子，不仅要把中间的踏板连接起来，还要把两边的扶手连接在一起。
2.DNA连接酶——“分子缝合针”
对所连接的DNA片段两端的碱基序列没有专一性要求
(1)作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的____________。
(2)种类
磷酸二酯键
T4噬菌体
黏性末端
P52
三、DNA连接酶——“分子缝合针”（P71）
1.概念
一种能够将两个DNA片段连接起来的酶。
（①作用位点：磷酸二酯键 ②作用底物：DNA片段）
2.种类
种类
来源 大肠杆菌 T4噬菌体
作用 差别 只连接____________ 缝合_________和____________________
E.coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
黏性末端
黏性末端
平末端（效率较低）
恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
技巧：E谐音1；T为英文2的首字母
1.3 传统发酵技术
思考·讨论：比较与DNA相关的几种酶（P72）
DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？
DNA连接酶的作用示意图
DNA聚合酶的作用示意图
1.3 传统发酵技术
拓展：DNA连接酶和DNA聚合酶的比较（P72）
DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？
A A T T G
A
A
T
T
A
A
T
T
DNA聚合酶
DNA聚合酶
DNA聚合酶
DNA聚合酶
DNA聚合酶
C
①作用位点：
磷酸二酯键
②作用底物：
脱氧核苷酸
1.3 传统发酵技术
拓展：DNA连接酶和DNA聚合酶的比较（P72）
DNA连接酶 DNA聚合酶
相同 作用实质 化学本质 不 同 点 模板
作用对象
作用结果
用途
都能催化形成磷酸二酯键
都是蛋白质
不需要
需要DNA的一条链作模板
形成重组DNA分子
形成DNA的一条链
基因工程
DNA复制
在两个DNA片段间形成磷酸二酯键
将单个核苷酸连接到已有DNA片段，形成磷酸二酯键
1.3 传统发酵技术
拓展：与DNA相关的几种酶的比较
名称 作用部位 作用结果
限制酶
DNA 连接酶
DNA 聚合酶
DNA （水解）酶
DNA 解旋酶
磷酸二酯键
碱基对之间
的氢键
将DNA切成两个片段
磷酸二酯键
将两个DNA片段连接为一个DNA分子
磷酸二酯键
将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端
磷酸二酯键
将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
将双链DNA分子局部解旋为单链
Q1.怎样才能将外源基因送入细胞呢？
通常是利用质粒作为载体，将基因送入细胞。
Q2.为什么不能直接将外源基因送入细胞呢？
游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，就算可以进行转录并翻译成蛋白质、游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。若将目的基因插入载体，由于载体可以在细胞内复制，随着细胞分裂，载体会带着目的基因存在于每个子代细胞中。这样，基因工程才有意义。
Q3.什么是质粒？
四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
1.作用
作为运输工具，与外源/目的基因的DNA片段结合，将外源基因送入受体细胞中。
2.种类
质粒（最常用的载体）、动植物病毒、噬菌体
是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA外，并具有自我复制能力的环状双链DNA。
真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
拟核DNA
质粒
大肠杆菌细胞
目的基因插入位点
复制原点
氨苄青霉素抗性基因
大肠杆菌及质粒结构模式图
思考：分析归纳载体需要具备的条件：
Q1：载体要与外源基因连接，需要具备什么条件？
条件①：具有一个或多个限制酶切割位点
Q2：要使携带的外源基因在受体细胞中稳定存在，载体需要具备什么条件？
条件②：能在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制
Q3：我们用肉眼看不到载体是否进入受体细胞，为了便于筛选重组DNA分子，载体需要具备什么条件？
条件③：具有标记基因，便于重组DNA分子的筛选
条件④：载体DNA必须是安全的，不会对受体细胞有害
三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
3.载体需具备的条件
①稳定存在并能自我复制或整合到受体DNA上
能使目的基因稳定存在且数量可扩增
②有一个至多个限制酶切割位点
供外源DNA片段（基因）插入其中
③具有特殊的标记基因
便于重组DNA分子的筛选
标记基因通常有：
抗生素的抗性基因，如： 抗氨苄青霉素基因、抗四环素基因
荧光蛋白基因，如：绿色荧光蛋白基因、红色荧光蛋白基因
④对受体细胞无害、易分离
对受体细胞无毒害作用，避免受体细胞受到损伤
1.3 传统发酵技术
拓展：标记基因的筛选原理
载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。
导入
受体细胞
培养
只有含有载体，并且载体上的抗性基因表达的大肠杆菌才能存活并增殖
含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒）
加入氨苄青霉素
1.3 传统发酵技术
拓展：关于限制酶的选择
活动：体验用限制酶切割和DNA连接酶连接及可能出现的结果
（ps：DNA连接酶无特异性，符合要求的DNA片段都能连接！）
第一步：如图所示剪好两个大小相同的纸条并写上碱基序列
1.3 传统发酵技术
拓展：关于限制酶的选择
活动：体验用限制酶切割和DNA连接酶连接及可能出现的结果
（ps：DNA连接酶无特异性，符合要求的DNA片段都能连接！）
第二步：用EcoRⅠ酶切割这个DNA片段，展示结果
BamH Ⅰ
GGATCCAAGCTTGGG
CCTAGGTTCGAACCC
CCCAAGCTT
GGGTTCGAA
Hind Ⅲ
Hind Ⅲ
BamH Ⅰ
Bt基因
Hind Ⅲ
Xba Ⅰ
Sma Ⅰ
多
克
隆
位
点
动
子
启
终
子
止
标
R
记
基
因
Kan
复制
原点
AGCTT
A
GGATCCA
CCTAGGTTCGA
Bt基因
A
T
G
C
A
A
C
G
T
T
A
T
DNA连接酶
同一种限制酶切（单酶切）
Bt基因
Bt基因
Bt基因
A
A
C
G
T
T
T
G
C
A
A
T
T
A
C
G
T
A
T
A
T
A
C
G
Bt基因
A
A
C
G
T
T
T
G
C
A
A
T
T
A
C
G
T
A
T
A
T
A
C
G
Bt基因
Bt基因
单酶切的问题：
目的基因、质粒的自身环化、
目的基因与质粒反向连接
1.3 传统发酵技术
拓展：关于限制酶的选择
活动：体验用限制酶切割和DNA连接酶连接及可能出现的结果
（ps：DNA连接酶无特异性，符合要求的DNA片段都能连接！）
Q：哪些片段可以被DNA连接酶连接？环化DNA片段是怎样的？
怎么避免该问题？
展示再用SpeⅠ限制酶切割后的片段←
Bt基因
A
A
C
G
T
T
C
T
A
G
G
C
C
A
C
G
T
A
T
G
C
G
A
T
A
C
T
A
G
A
C
G
T
T
G
C
AGCTT
A
G
CCTAG
Bt基因
同两种限制酶切（双酶切）
双酶切：
①能避免反向连接
②避免自身环化，增大目的基因和运载体连接的概率
DNA连接酶
练习与应用
图甲是含有目的基因的外源DNA片段，图乙是用于将目的基因导入受体细胞的质粒（阴影部分表示抗生素抗性基因），相关限制酶的作用部位如图所示，现欲培养转基因抗病植株，回答下列问题。
（1）在基因工程的操作中，不宜选用SmaI，原因是SmaI会破坏__________和_________________________。
（2）在基因工程的操作中，不宜选用EcoRI，原因是用EcoRI切割外源DNA片段后，__________________________________________________。
目的基因
质粒上的抗生素抗性基因
目的基因只有一侧含有黏性末端，不能插入到质粒中
练习与应用
（3）由于反应体系中含有大量的外源DNA片段和质粒，加入PstI一种限制酶后，会得到大量的目的基因片段和质粒片段，再加入DNA连接酶后，除了会形成目的基因与质粒连接的环状产物外，还会形成_____________________连接的环状产物以及_____________________连接的环状产物。此外，目的基因与质粒的连接既可以是正向连接，也可以是__________，后者可能会导致目的基因无法正常表达。
目的基因与目的基因
质粒片段与质粒片段
反向连接
练习与应用
图甲是含有目的基因的外源DNA片段，图乙是用于将目的基因导入受体细胞的质粒（阴影部分表示抗生素抗性基因），相关限制酶的作用部位如图所示，现欲培养转基因抗病植株，回答下列问题。
（4）为避免目的基因和质粒的自身环化以及目的基因的反向连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，例如可选择用_______和________这两种限制酶。
PstⅠ
EcoRⅠ
课堂小结(共18张PPT)
3.1
重组DNA技术的基本工具
DNA 的粗提取与鉴定
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
1.基本思路
DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。
2.提取生物大分子的提取原理与鉴定原理
⑴提取原理：
①DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
②DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，
能溶于2mol/L NaCl溶液。
⑵鉴定原理：
在一定温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。
0
0.14
NaCI浓度（mol/L）
DNA溶解度
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
3.材料用具
⑴选材：
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。
Q：猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料？操作时如何防止血液凝固？
猪血（哺乳动物的成熟红细胞）无细胞核，不适合。
鸡血中红细胞有核DNA，且核DNA的量较多，适合。
鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
3.材料用具
⑵试剂：
①研磨液
②体积分数为95%的酒精→析出DNA
③2mol/L 的NaCl溶液→溶解DNA
④二苯胺试剂（现配现用，水浴加热）→鉴定DNA
⑤蒸馏水
4.方法步骤
取上
清液
充分
研磨
纱布过滤
95%冷酒精
离心
离心
丝状物
沉淀物
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
4.方法步骤
取材、研磨
过滤或离心
酒精析出或离心
溶解并鉴定
⑴取材、研磨：
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨。
Q1.研磨的目的？
破坏细胞壁，裂解细胞，使核物质易溶解在研磨液中。
Q2.充分研磨？
研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而影响提取的DNA含量。
Q3.研磨时间不宜太长？
防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量。
有条件的可在材料处理过程中加入纤维素酶、果胶酶。
若用鸡血动物细胞：加入清水，让细胞吸水胀破，释放DNA。
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
4.方法步骤
取材、研磨
过滤或离心
酒精析出或离心
溶解并鉴定
⑵过滤或离心取上清液：
在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。
Q1.过滤能用滤纸代替吗？
不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。
Q2.上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖等杂质。
Q3.低温放置几分钟的作用：
①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解。
②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出。
③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
4.方法步骤
取材、研磨
过滤或离心
酒精析出或离心
溶解并鉴定
⑶预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA：
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。
Q1.搅拌时应轻缓、并沿一个方向？
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
Q2.酒精预冷的作用？
同“低温放置的作用”
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
4.方法步骤
取材、研磨
过滤或离心
酒精析出或离心
溶解并鉴定
⑷NaCl溶液溶解DNA并鉴定：
取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
加入2mol/L氯化钠溶液
不加入丝状物
加入4ml二苯胺试剂
加入2mol/L氯化钠溶液
加入丝状物
加入4ml二苯胺试剂
实验组
对照组
水浴加热
五、DNA的粗提取与鉴定（P74）
5.结果分析与评价
⑴你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？
观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功。如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。
⑵你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？
可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。
⑶与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。
对同种材料采用不同的方法，不同的材料等。
现学现用
(1)充分研磨的目的是______________________。
(2)在研磨液过滤获得的上清液中加入体积分数为95%的酒精溶液的目的是使DNA______ (填“溶解”或“析出”)，依据的原理是______________________________________________________。
(3)用玻璃棒搅拌时沿一个方向搅拌的目的是________________。
裂解细胞，释放DNA
析出
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精
防止DNA断裂
P58
例1 下表关于“DNA粗提取与鉴定”实验的表述，错误的是(　　)
选项 试剂 操作 作用
A 研磨液 与生物材料混合 提取溶解DNA
B 2(mol·L－1) NaCl溶液 与提取出的DNA混合 溶解DNA
C 预冷的酒精 加入离心后的上清液中 溶解DNA
D 二苯胺试剂 加入溶解有DNA的NaCl溶液中 鉴定DNA
例2 下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是(　　)
A.新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取
C.DNA只能溶于2 mol/L的NaCl溶液
D.溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂后颜色呈紫色
B.植物材料需先研磨破碎细胞
练习与应用
一、概念检测
1. DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（ ）
A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键
B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键
C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重形成磷酸二酯键
D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端
2.在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是
（ ）
A.大肠杆菌的质粒 B.切割DNA分子的酶
C.DNA片段的黏性末端 D.用来识别特定基因的DNA探针
C
A

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