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(共68张PPT)
章末检测试卷(三)
第三章 基因工程
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1.近年来，基因工程的发展非常迅速，科学家可以用DNA探针和外源基因导入的方法进行遗传病的诊断和治疗。下列做法错误的是
A.用DNA探针检测镰状细胞贫血
B.用DNA探针检测病毒性肝炎
C.用导入外源基因的方法治疗镰状细胞贫血
D.用基因替换的方法治疗21三体综合征
√
单项选择题
21三体综合征属于染色体遗传病，患者的21号染色体比正常人多一条，无法从基因水平上对其进行治疗，D错误。
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2.如图表示4种限制酶的识别序列及酶切位点，下列叙述错误的是
A.不同类型的限制酶切割后，有的产生黏性末端，有的产生平末端
B.不同类型的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端
C.用酶1和酶2分别切割目的基因和质粒后，连接形成重组DNA分子后，
重组DNA分子仍能被酶2识别
D.用酶3和酶4分别切割目的基因和质粒后，其产物经T4 DNA连接酶催化
不能连接形成重组DNA分子
√
单项选择题
单项选择题
不同类型的限制酶切割后，有的产生黏性末端(酶1和酶2)，有的产生平末端(酶3和酶4)，A正确；
不同类型的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端，如图中的酶1和酶2，B正确；
用酶3和酶4分别切割目的基因和质粒后，其产物经T4 DNA连接酶催化可以连接形成重组DNA分子，D错误。
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3.限制性内切核酸酶EcoRⅠ识别序列及酶切位点如图，用EcoRⅠ完全酶切果蝇基因组DNA，理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为
A.6 B.250
C.4 000 D.24 000
√
单项选择题
EcoRⅠ的酶切位点有6个碱基对，由于DNA分子的碱基组成为A、T、G、C，则某一位点出现该序列的概率为(1/4)6＝1/4 096，即4 096≈
4 000个碱基对可能出现一个限制酶EcoRⅠ的酶切位点，故理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为4 000，C符合题意。
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4.(2024·苏州高二期中)下列有关PCR的叙述，正确的是
A.PCR的过程主要包括变性→延伸→退火，且温度逐渐降低
B.PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过程中需要及时补充
C.PCR的原理是DNA半保留复制，解旋和复制是同时进行的
D.添加反应组分时，每吸取一种试剂都要更换微量取液器上的枪头
单项选择题
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PCR的过程主要包括变性(约94 ℃)→退火(约55 ℃)→延伸(约72 ℃)，可见温度并不是逐渐降低的，A错误；
PCR技术中的引物和原料是一次性添加的，不需要补充，B错误；
PCR的原理是DNA半保留复制，PCR操作过程中，先解旋后复制，解旋和复制不是同时进行的，C错误；
在PCR管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，微量取液器上的枪头都必须更换，避免造成污染，D正确。
5.下列关于PCR过程及结果的叙述，错误的是
A.相比细胞内DNA复制，PCR过程不需要解旋酶、DNA连接酶等
B.退火的温度设定与引物有关，延伸时间的设定与扩增片段的长度有关
C.若酶和引物都正常，但是未出现扩增带，其原因可能是核酸模板变性
不彻底
D.理论上推测，经n轮循环后的产物中只含1种引物的DNA片段占比为
1/(2n－1)
√
单项选择题
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单项选择题
DNA进行半保留复制，每次复制都需要两种引物结合在DNA的两端，经过n轮循环共产生2n个DNA片段，仅含有其中1种引物的DNA片段有2个，故理论上推测，经过n轮循环后的产物中只含有1种引物的DNA片段所占比例为2/2n＝1/2n－1，D错误。
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6.(2024·盐城高二月考)常规PCR只能扩增两引物间的DNA区段，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向PCR技术，扩增原理如图所示。下列叙述错误的是
A.酶切阶段，L中不能含有酶切时所选限制
酶的识别序列
B.PCR技术的操作步骤依次是高温变性、低
温退火、中温延伸
C.图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对
D.PCR扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA切割成线状
单项选择题
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单项选择题
在酶切阶段，已知序列L中不能含有酶切
时所选限制酶的识别序列，不然会将已知
序列L切断，造成序列识别混乱，A正确；
PCR技术的操作步骤依次是变性(约94 ℃)、
退火(约55 ℃)、延伸(约72 ℃)，B正确；
PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3′端通过碱基互补配对结合，为保证延伸的是已知序列两侧的未知序列，应该选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对，C正确；
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单项选择题
PCR的扩增只需要在第一次循环前加入足够的限制酶，并不需要每轮都加入，D错误。
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7.下列有关某兴趣小组进行“DNA的粗提取和鉴定”实验的叙述，正确的是
A.与鸡血相比，等体积的猪血提取DNA的量较高
B.等体积鸡(2n＝78)的血液和鸭(2n＝78)的血液提取的DNA量相等
C.DNA鉴定一般使用无色二苯胺试剂，颜色深浅主要与DNA含量有关
D.用棕色瓶收集并保存好剩余的二苯胺试剂，以备下一次实验时继续使用
单项选择题
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单项选择题
猪为哺乳动物，哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核和各种细胞器，而鸡属于鸟类，其红细胞内含有细胞核与各种细胞器，DNA含量较多，A错误；
等体积鸡(2n＝78)的血液和鸭(2n＝78)的血液中所含血细胞的数量不一定相同，所以提取到的DNA量也不一定相同，B错误；
二苯胺试剂无色，加入DNA提取液后在沸水浴加热的条件下会呈现蓝色，且蓝色的深浅与被鉴定的DNA含量有关，C正确；
二苯胺试剂应该现配现用，D错误。
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8.科学家利用质粒(如图)成功构建了蛛丝蛋白基因的重组质粒，并在家蚕丝腺细胞中获得大量蛛丝蛋白。下列有关说法错误的是
A.为防止目的基因自身环化，可以用限制酶
XbaⅠ和SacⅠ来切割目的基因
B.构建基因表达载体时选用蚕丝蛋白基因的
启动子利于基因在家蚕丝腺细胞中表达
C.启动子是DNA聚合酶的识别和结合部位，可以驱动遗传信息的转录
D.基因表达载体中的标记基因可以用来鉴别与选择含有蛛丝蛋白基因的
受体细胞
单项选择题
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单项选择题
启动子是RNA聚合酶的识别和结合部位，
C错误。
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9.北极比目鱼体内含有抗冻基因。如图是培育转基因抗冻番茄植株的过程示意图，下列有关叙述正确的是
A.过程①获取的抗冻基因与直接从比目鱼体
内提取的抗冻基因的结构和功能相同
B.在重组质粒上，抗冻基因上、下游一定具有启动子和终止子，启动和终止翻
译过程
C.过程②常用的质粒是农杆菌的Ti质粒，Ti质粒能整合到受体细胞染色体的
DNA上
D.根据抗冻基因制作的DNA探针，可以用来检测转基因抗冻番茄植株中目的
基因的存在
单项选择题
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过程①通过逆转录获取的目的基因不含启动子、终止子等结构，与从比目鱼体内提取的抗冻基因的结构不同，A错误；
在重组质粒上，抗冻基因上、下游一定具有启动子和终止子，启动和终止转录过程，B错误；
过程②常用的质粒是农杆菌的Ti质粒，上面有一段转移DNA(T－DNA)，能进入受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上，C错误；
单项选择题
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检测目的基因是否导入受体细胞可采用DNA分子杂交技术，即用根据抗冻基因制作的DNA探针来检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在，D正确。
单项选择题
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10.(2023·连云港高二期中)某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列说法正确的是
单项选择题
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酶a　　　　　　　　酶b
5′－A↓GATC T－3′　　5′－G↓GATC C－3′
3′－T CTAG↑A－5′　　3′－C CTAG↑G－5′
酶a切割产物/bp 酶b再次切割产物/bp
1 600；1 100；300 800；300
单项选择题
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A.在该DNA分子中，酶a与酶b的切割位点分别有3个和2个
B.这两种酶切出的黏性末端不能相互连接
C.这两种酶切断的化学键分别为磷酸二酯键和氢键
D.用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若
干循环后，所得DNA分子中 序列会明显增多
√
酶a切割产物/bp 酶b再次切割产物/bp
1 600；1 100；300 800；300
单项选择题
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由表格可知，该线性DNA经酶a切割后得到了3个DNA片段，故在该DNA分子中，酶a的切割位点有2个，经酶b再次切割后得到3个800 bp和2个300 bp的DNA片段，则酶b的切割位点也有2个，且酶a和酶b的切割位点不同，A错误；
酶a切割产物/bp 酶b再次切割产物/bp
1 600；1 100；300 800；300
单项选择题
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图中显示这两种酶的识别序列不同，但是切割后形成的黏性末端可以相互连接，B错误；
酶a　　　　　　　　酶b
5′－A↓GATC T－3′　　5′－G↓GATC C－3′
3′－T CTAG↑A－5′　　3′－C CTAG↑G－5′
单项选择题
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这两种酶切断的化学键都是磷酸二酯键，C错误；
这两种酶切割后形成的黏性末端在DNA连接酶的作用下可以相互连接成 序列，所以用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所得DNA分子中
会明显增多，D正确。
11.科学家设法将生长激素基因导入其他生物体(细胞)内，从而获取大量的生长激素，应用于侏儒症的早期治疗，部分过程如图所示，下列分析错误的是
A.人的生长激素mRNA只能从人的垂体细胞中提取
B.过程①需要逆转录酶的参与
C.过程②之前可用同一种限制性内切核酸酶处理目
的基因和质粒
D.人的生长激素基因可以导入其他生物细胞内，
说明生物之间共用一套遗传密码
单项选择题
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单项选择题
人的生长激素基因可以导入其他生物细胞内并表达出人的生长激素，说明生物之间共用一套遗传密码，D错误。
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12.在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。某动物体内有科研人员所需要的目的基因，欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒上有EcoRⅠ、XhoⅠ、MunⅠ、SalⅠ和NheⅠ限制酶识别序列，相关结构的示意图如右。下列叙述错误的是
单项选择题
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注：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X－gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。
A.启动子位于基因的上游，是RNA聚
　合酶识别和结合的部位
B.操作过程宜保留氨苄青霉素抗性基
　因，将目的基因插入LacZ基因中
C.在设计PCR引物时，应在两种引物
　的5′端添加SalⅠ和NheⅠ限制酶
　识别序列
D.在添加氨苄青霉素和X－gal的培养基上生长的白色菌落为导入重组质
　粒的大肠杆菌
单项选择题
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单项选择题
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SalⅠ和NheⅠ会破坏目的基因，EcoRⅠ会将启动子切除，都不能选择，因此只能选择XhoⅠ和MunⅠ，但是目的基因没有这两种酶的识别序列，所以在设计PCR引物时，应在引物的5′端添加限制酶XhoⅠ和MunⅠ的识别序列，C错误。
13.有些膀胱上皮细胞可以产生一种称为尿血小板溶素的膜蛋白。科学家将人的生长激素基因插入小鼠基因组内制成膀胱生物反应器，使小鼠膀胱可以合成人的生长激素，并分泌到尿液中。下列有关说法正确的是
A.人的生长激素基因只存在于小鼠的膀胱上皮细胞中
B.需要将尿血小板溶素基因与生长激素基因的启动子重组在一起
C.需用显微注射法将基因表达载体导入膀胱上皮细胞中
D.只在小鼠细胞中检测到人的生长激素基因，不能说明该技术已获得成功
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单项选择题
人的生长激素基因存在于小鼠所有细胞中，但只在小鼠的膀胱上皮细胞中表达，A错误；
需要将生长激素基因与尿血小板溶素基因的启动子重组在一起，B错误；
需用显微注射法将基因表达载体导入小鼠的受精卵中，C错误。
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单项选择题
14.纸浆漂白需要在高温、碱性条件下进行，因此需要耐高温、耐碱的木聚糖酶。科学家利用蛋白质工程对已知氨基酸序列的木聚糖酶进行改造，获得了耐高温、耐碱的新木聚糖酶，提高了生产效率。下列叙述错误的是
A.新木聚糖酶是依据蛋白质的功能改造其结构得到的
B.木聚糖酶的基因可定向突变成耐高温、耐碱的木聚糖酶基因
C.已知木聚糖酶的氨基酸序列是预测其空间结构的重要基础
D.可通过基因工程将耐高温、耐碱的木聚糖酶基因传递和保存
√
单项选择题
基因突变具有不定向性，B错误。
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15.在基因工程操作中常用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不同DNA片段。科研人员利用EcoRⅠ和SamⅠ两种限制酶处理某DNA分子，得到如下电泳图谱。其中1号泳道是标准DNA样品，2号、3号、4号分别是EcoRⅠ单独处理、SamⅠ单独处理、EcoRⅠ和SamⅠ共同处理后的电泳结果。下列说法错误的是
A.该DNA可能是含1 000 bp的环状DNA分子
B.电泳图谱中DNA片段越小，距离起点越近
C.EcoRⅠ和SamⅠ能够催化DNA的氢键断裂
D.EcoRⅠ和SamⅠ的切点最短相距约200 bp
多项选择题
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据图可知，用EcoRⅠ单独处理(2号)或用SamⅠ单独处理(3号)都只得到一种大小为1 000 bp的DNA片段，说明该DNA最可能是含1 000 bp的环状DNA分子，A正确；
电泳图谱中DNA片段越小，距离起点越远，说明图上侧端为起始端，B错误；
EcoRⅠ和SamⅠ都是限制酶，限制酶切割DNA分子，破坏的是作用位点上两脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，C错误。
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16.研究人员通过PCR扩增质粒pDNR－LIB
中的sacB基因，该基因的产物对蔗糖敏感，
是一种常见的反选择标记基因。tetA是四
环素抗性基因，利用基因工程将sacB基因
插入质粒pAH162上，构建含有tetA－sacB
双重选择系统的重组质粒，即pAH162－sacB，具体过程如图所示。将pAH162－sacB导入大肠杆菌验证其双重选择作用。下列分析正确的是
多项选择题
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A.将sacB基因插入pAH162上需要的限制酶
　是BamHⅠ、EcoRⅠ
B.需用Ca2＋处理大肠杆菌细胞使其能主动
　吸收周围环境中的DNA分子
C.为保证正向连接，PCR时应在sacB基因
　上游引物的5′端添加BamHⅠ识别序列
D.大肠杆菌能在含四环素的培养基中生长说明双重选择系统的重组质粒
　构建成功
多项选择题
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多项选择题
由pAH162－sacB可知，将sacB基因插入pAH162上需要的限制酶是BamHⅠ、EcoRⅠ，A正确；
导入重组质粒前，需用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B正确；
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多项选择题
为保证正向连接，PCR时应在sacB基因上游引物的5′端添加BamHⅠ识别序列，在sacB基因下游引物的5′端添加EcoRⅠ识别序列，C正确；
大肠杆菌在含四环素的培养基中生长、在含蔗糖的培养基中不生长时才说明
双重选择系统的重组质粒构建成功，D错误。
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17.人呼吸道合胞病毒(HRSV)是一种单链
－RNA病毒，如图是构建人呼吸道合胞
病毒基因组载体的示意图，下表是相关
限制酶的识别序列及切割位点，下列叙
述正确的有
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多项选择题
限制酶 BclⅠ EcoRⅠ XbaⅠ Sau3AⅠ BamHⅠ
识别序列和切割位点 T↓GATCA G↓AATTC T↓CTAGA ↓GATC G↓GATCC
A.HRSV入侵细胞后在DNA聚合酶催化下
合成＋RNA
B.过程②需要逆转录酶和Taq酶的参与
C.过程③需要用XbaⅠ和BclⅠ酶切割质粒A
D.过程④将质粒B导入大肠杆菌，有利于质粒B准确复制、稳定保存
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多项选择题
限制酶 BclⅠ EcoRⅠ XbaⅠ Sau3AⅠ BamHⅠ
识别序列和切割位点 T↓GATCA G↓AATTC T↓CTAGA ↓GATC G↓GATCC
√
√
√
HRSV是一种单链－RNA病毒，侵染
人体后，以该链为模板合成RNA，而
DNA聚合酶是以DNA为模板合成DNA，
A错误；
BamHⅠ会切割复制原点，由表中限制酶的识别序列和切割位点可知，Sau3AⅠ也会切割复制原点，EcoRⅠ会切割标记基因，同种限制酶切割质粒和目的基因形成的黏性末端相同，为防止酶切后质粒和目的基因片段的自身环化，通常使用两种限制酶切割质粒和目的基因，故应该选择XbaⅠ和BclⅠ酶切割质粒A，C正确；
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多项选择题
过程④是将重组质粒导入大肠杆菌，目的是扩增重组DNA分子，有利于质粒B准确复制、稳定保存，D正确。
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多项选择题
18.抗凝血酶Ⅲ是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。如图表示培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ的流程。下列说法错误的是
多项选择题
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A.过程①是基因工程的核心，常用
的方法是显微注射法
B.如果要将抗凝血酶Ⅲ的第20位的
氨基酸和第24位的氨基酸变为半
胱氨酸，直接对蛋白质分子进行改造即可
C.如果检测发现抗凝血酶Ⅲ的基因导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ
的存在，有可能是启动子和终止子没有设计好
D.培养出的转基因奶牛的所有细胞都含有编码抗凝血酶Ⅲ的基因，故该奶牛有
性生殖产生的母牛也都能产生抗凝血酶Ⅲ
√
√
多项选择题
√
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多项选择题
图示过程①表示将目的基因
导入受体细胞，基因工程的
核心是基因表达载体的构建，
A错误；
对蛋白质进行改造应通过改造基因来完成，B错误；
目的基因在受体细胞中并不一定是成对的，所以该奶牛有性生殖产生的母牛体内可能没有目的基因，也就不能生产所需蛋白，D错误。
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19.基因工程可以按照人们的意愿赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。如图是基因工程的基本操作流程，回答下列问题：
(1)图中①过程所需的酶是__________，②过程所需的酶是____________
_________________。
非选择题
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逆转录酶
限制性内切
核酸酶(或限制酶)
非选择题
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①过程为逆转录，需要逆转录酶催化。②过程是将DNA切割形成一定大小范围的DNA片段，需要限制性内切核酸酶(或限制酶)。
(2)若图中④过程为将目的基因导入植物细胞，则最常用的方法是______
__________。
(3)图中⑤过程是________________________________，要检测目的基因是否成功表达，首先从转基因生物个体中提取蛋白质，用相应的抗体进行____________杂交。
非选择题
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菌转化法　
农杆
目的基因及其表达产物的检测鉴定
抗原—抗体
(4)图中③过程需要借助PCR技术，DNA的合成方向总是从子链的_______向_______延伸，若利用PCR技术扩增目的基因的过程中消耗了126个引物分子，则该过程DNA扩增了____次。
非选择题
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5′端
3′端
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非选择题
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PCR技术中的DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸，若扩增过程中消耗126个引物分子，说明通过DNA复制产生(126＋2) ÷2＝64＝26个DNA分子，因此DNA扩增了6次。
非选择题
20.科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。如图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答相关问题：
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(1)基因工程的核心是_________
___________，铁结合蛋白基因被称为_____基因。
目的
基因表达
载体的构建
非选择题
(2)为筛选出含重组Ti质粒的愈伤组织，应在培养基2中添加适量的________，图中由开花后水稻未成熟的胚转变为愈伤组织的过程为________。
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潮霉素
脱分化
非选择题
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质粒上存在潮霉素抗性基因，应在培养基2中添加适量的潮霉素，导入重组质粒(或普通质粒)的愈伤组织才能在培养基上存活；由开花后水稻未成熟的胚转变为愈伤组织的过程为脱分化。
非选择题
(3)检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻________
__________________________。
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的铁含量(写出铁含量即可)
种子中
非选择题
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本实验中，目的基因为铁结合蛋白基因，若转基因技术操作成功，则大米内铁含量将大大增加，因此检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻种子中的铁含量。
非选择题
21.如图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因(Tetr)和氨苄青霉素抗性基因(Ampr)。请回答下列问题：
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(1)EcoRⅤ酶切位点为 ，EcoRⅤ酶切出来的线性载体P1为____
末端。
平
非选择题
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(2)已知目的基因的两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加一个碱基为____________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在__________酶的作用下，形成重组质粒P3。
胸腺嘧啶(T)
DNA连接
非选择题
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(3)为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如表(“＋”代表生长，“－”代表不生长)。根据表中结果判断，应选择的菌落是_____(填表中字母)类，另外两类菌落质粒导入情况分别是____________________、____________________。
平板类型 菌落类型
A B C
无抗生素 ＋ ＋ ＋
氨苄青霉素 ＋ ＋ －
四环素 ＋ － －
氨苄青霉素＋四环素 ＋ － －
B
A类菌落导入的是P0
C类菌落未导入质粒
非选择题
22.(2024·盐城高二质检)虾青素可由β-胡萝卜素在β-胡萝卜素酮化酶(BKT)和β-胡萝卜素羟化酶(CRTR－B)的作用下转化而来，具有抗衰老、增强免疫、保护心血管等功能，杜氏盐藻是单细胞浮游植物，生长快、易培养，能大量合成β-胡萝卜素，科研人员将BKT基因和CRTR－B基因导入杜氏盐藻，构建杜氏盐藻细胞工厂高效生产虾青素。回答下列问题：
(1)获取目的基因：雨生红球藻是天然虾青素重要来源，提取雨生红球藻的总DNA为模板，设计特异性引物扩增BKT基因和CRTR－B基因，此过程需要______________________酶的催化。
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热稳定的DNA聚合(Taq)
非选择题
(2)构建转化载体：“无缝克隆法”是构建重组质粒的新方法，指利用同源重组酶将末端具有一致同源序列的线性化载体和目的基因连接形成重组质粒，图1表示利用“无缝克隆法”向质粒中插入抗除草剂基因的基本过程。
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非选择题
Ⅰ.PCR获取抗除草剂基因过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在引物的_____端添加对应的同源序列。若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，还需要在基因两侧加入限制酶识别序列，则所需引物(5′－3′)的序列应为_____。
A.同源序列＋特异性扩增引物序列＋限制酶识别
序列
B.同源序列＋限制酶识别序列＋特异性扩增引物
序列
C.特异性扩增引物序列＋限制酶识别序列＋同源序列
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5′
B
非选择题
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根据PCR扩增的原理，在PCR过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在5′端添加对应的同源序列；若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，则所需引物(5′－3′)的序列应为“同源序列＋限制酶识别序列＋特异性扩增引物序列”，故选B。
非选择题
Ⅱ.科研人员利用“无缝克隆法”同时将BKT基因和CRTR－B基因插入质粒，形成的重组质粒对应部位如图2所示，推测此过程扩增BKT基因所用的引物为_______；扩增CRTR－B基因所用的引物为_______。
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①③
⑥⑧
非选择题
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由图2可知，要通过“无缝克隆法”同时将BKT基因和CRTR－B基因插入质粒，则要保证BKT基因一侧有一致同源序列，另一侧能带上CRTR－B基因，因此扩增BKT基因所用的引物为①③。同理，扩增CRTR－B基因所用的引物为⑥⑧。
非选择题
Ⅲ.最终形成的重组质粒如图3所示，其中atpA启动子和psbA启动子均为杜氏盐藻叶绿体启动子，选用内源性启动子的目的是___________________。
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确保目的基因能表达
启动子是转录的起始信号，选用内源性启动子的目的是防止基因沉默，确保目的基因能表达。
非选择题
Ⅳ.与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法”具备的优势有____________________________________________________________________________________。
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可同时导入多个外源基因；不受限制酶识别序列的限制，可在载体的任意位点插入目的基因
与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法”具备的优势是可同时导入多个外源基因、不受限制酶识别序列的限制、可在载体的任意位点插入目的基因等。
非选择题
(3)目的基因导入及相关检测：采用基因枪法将重组质粒导入杜氏盐藻叶绿体，一段时间后，用含________的培养基筛选已转化的杜氏盐藻，通过相关技术检测目的基因是否成功表达。
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除草剂
筛选已转化的杜氏盐藻的培养基是选择培养基，其中应含除草剂。
非选择题
(4)叶绿体转化是植物基因工程的新热点，叶绿体的诸多特点为叶绿体转化提供优势，如叶绿体基因组小、功能清晰，基因操作方便；叶绿体具有自我复制功能，一个植物细胞可含有多个叶绿体，每个叶绿体中含有多个基因组，可大大提高__________________。
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目的基因的表达量章末检测试卷(三)
(分值：100分)　
一、单项选择题：共14小题，每小题2分，共28分。每小题只有一个选项符合题意。
1．近年来，基因工程的发展非常迅速，科学家可以用DNA探针和外源基因导入的方法进行遗传病的诊断和治疗。下列做法错误的是(　　)
A．用DNA探针检测镰状细胞贫血
B．用DNA探针检测病毒性肝炎
C．用导入外源基因的方法治疗镰状细胞贫血
D．用基因替换的方法治疗21三体综合征
2．如图表示4种限制酶的识别序列及酶切位点，下列叙述错误的是(　　)
A．不同类型的限制酶切割后，有的产生黏性末端，有的产生平末端
B．不同类型的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端
C．用酶1和酶2分别切割目的基因和质粒后，连接形成重组DNA分子后，重组DNA分子仍能被酶2识别
D．用酶3和酶4分别切割目的基因和质粒后，其产物经T4 DNA连接酶催化不能连接形成重组DNA分子
3．限制性内切核酸酶EcoRⅠ识别序列及酶切位点如图，用EcoRⅠ完全酶切果蝇基因组DNA，理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为(　　)
A．6 B．250 C．4 000 D．24 000
4．(2024·苏州高二期中)下列有关PCR的叙述，正确的是(　　)
A．PCR的过程主要包括变性→延伸→退火，且温度逐渐降低
B．PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过程中需要及时补充
C．PCR的原理是DNA半保留复制，解旋和复制是同时进行的
D．添加反应组分时，每吸取一种试剂都要更换微量取液器上的枪头
5．下列关于PCR过程及结果的叙述，错误的是(　　)
A．相比细胞内DNA复制，PCR过程不需要解旋酶、DNA连接酶等
B．退火的温度设定与引物有关，延伸时间的设定与扩增片段的长度有关
C．若酶和引物都正常，但是未出现扩增带，其原因可能是核酸模板变性不彻底
D．理论上推测，经n轮循环后的产物中只含1种引物的DNA片段占比为1/(2n－1)
6．(2024·盐城高二月考)常规PCR只能扩增两引物间的DNA区段，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向PCR技术，扩增原理如图所示。下列叙述错误的是(　　)
A．酶切阶段，L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列
B．PCR技术的操作步骤依次是高温变性、低温退火、中温延伸
C．图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对
D．PCR扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA切割成线状
7．下列有关某兴趣小组进行“DNA的粗提取和鉴定”实验的叙述，正确的是(　　)
A．与鸡血相比，等体积的猪血提取DNA的量较高
B．等体积鸡(2n＝78)的血液和鸭(2n＝78)的血液提取的DNA量相等
C．DNA鉴定一般使用无色二苯胺试剂，颜色深浅主要与DNA含量有关
D．用棕色瓶收集并保存好剩余的二苯胺试剂，以备下一次实验时继续使用
8．科学家利用质粒(如图)成功构建了蛛丝蛋白基因的重组质粒，并在家蚕丝腺细胞中获得大量蛛丝蛋白。下列有关说法错误的是(　　)
A．为防止目的基因自身环化，可以用限制酶XbaⅠ和SacⅠ来切割目的基因
B．构建基因表达载体时选用蚕丝蛋白基因的启动子利于基因在家蚕丝腺细胞中表达
C．启动子是DNA聚合酶的识别和结合部位，可以驱动遗传信息的转录
D．基因表达载体中的标记基因可以用来鉴别与选择含有蛛丝蛋白基因的受体细胞
9．北极比目鱼体内含有抗冻基因。如图是培育转基因抗冻番茄植株的过程示意图，下列有关叙述正确的是(　　)
A．过程①获取的抗冻基因与直接从比目鱼体内提取的抗冻基因的结构和功能相同
B．在重组质粒上，抗冻基因上、下游一定具有启动子和终止子，启动和终止翻译过程
C．过程②常用的质粒是农杆菌的Ti质粒，Ti质粒能整合到受体细胞染色体的DNA上
D．根据抗冻基因制作的DNA探针，可以用来检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在
10．(2023·连云港高二期中)某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列说法正确的是(　　)
酶a切割产物/bp 酶b再次切割产物/bp
1 600；1 100；300 800；300
酶a　　　　　　　　　　　　酶b
5′－A↓GATC T－3′　　　　5′－G↓GATC C－3′
3′－T CTAG↑A－5′　　　　3′－C CTAG↑G－5′
A．在该DNA分子中，酶a与酶b的切割位点分别有3个和2个
B．这两种酶切出的黏性末端不能相互连接
C．这两种酶切断的化学键分别为磷酸二酯键和氢键
D．用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所得DNA分子中序列会明显增多
11.科学家设法将生长激素基因导入其他生物体(细胞)内，从而获取大量的生长激素，应用于侏儒症的早期治疗，部分过程如图所示，下列分析错误的是(　　)
A．人的生长激素mRNA只能从人的垂体细胞中提取
B．过程①需要逆转录酶的参与
C．过程②之前可用同一种限制性内切核酸酶处理目的基因和质粒
D．人的生长激素基因可以导入其他生物细胞内，说明生物之间共用一套遗传密码
12．在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。某动物体内有科研人员所需要的目的基因，欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒上有EcoRⅠ、XhoⅠ、MunⅠ、SalⅠ和NheⅠ限制酶识别序列，相关结构的示意图如下。下列叙述错误的是(　　)
注：LacZ基因编码产生的β 半乳糖苷酶可以分解X－gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。
A．启动子位于基因的上游，是RNA聚合酶识别和结合的部位
B．操作过程宜保留氨苄青霉素抗性基因，将目的基因插入LacZ基因中
C．在设计PCR引物时，应在两种引物的5′端添加SalⅠ和NheⅠ限制酶识别序列
D．在添加氨苄青霉素和X－gal的培养基上生长的白色菌落为导入重组质粒的大肠杆菌
13．有些膀胱上皮细胞可以产生一种称为尿血小板溶素的膜蛋白。科学家将人的生长激素基因插入小鼠基因组内制成膀胱生物反应器，使小鼠膀胱可以合成人的生长激素，并分泌到尿液中。下列有关说法正确的是(　　)
A．人的生长激素基因只存在于小鼠的膀胱上皮细胞中
B．需要将尿血小板溶素基因与生长激素基因的启动子重组在一起
C．需用显微注射法将基因表达载体导入膀胱上皮细胞中
D．只在小鼠细胞中检测到人的生长激素基因，不能说明该技术已获得成功
14．纸浆漂白需要在高温、碱性条件下进行，因此需要耐高温、耐碱的木聚糖酶。科学家利用蛋白质工程对已知氨基酸序列的木聚糖酶进行改造，获得了耐高温、耐碱的新木聚糖酶，提高了生产效率。下列叙述错误的是(　　)
A．新木聚糖酶是依据蛋白质的功能改造其结构得到的
B．木聚糖酶的基因可定向突变成耐高温、耐碱的木聚糖酶基因
C．已知木聚糖酶的氨基酸序列是预测其空间结构的重要基础
D．可通过基因工程将耐高温、耐碱的木聚糖酶基因传递和保存
二、多项选择题：共4小题，每小题3分，共12分。每小题有不止一个选项符合题意。
15．在基因工程操作中常用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不同DNA片段。科研人员利用EcoRⅠ和SamⅠ两种限制酶处理某DNA分子，得到如下电泳图谱。其中1号泳道是标准DNA样品，2号、3号、4号分别是EcoRⅠ单独处理、SamⅠ单独处理、EcoRⅠ和SamⅠ共同处理后的电泳结果。下列说法错误的是(　　　　)
A．该DNA可能是含1 000 bp的环状DNA分子
B．电泳图谱中DNA片段越小，距离起点越近
C．EcoRⅠ和SamⅠ能够催化DNA的氢键断裂
D．EcoRⅠ和SamⅠ的切点最短相距约200 bp
16．研究人员通过PCR扩增质粒pDNR－LIB中的sacB基因，该基因的产物对蔗糖敏感，是一种常见的反选择标记基因。tetA是四环素抗性基因，利用基因工程将sacB基因插入质粒pAH162上，构建含有tetA－sacB双重选择系统的重组质粒，即pAH162－sacB，具体过程如图所示。将pAH162－sacB导入大肠杆菌验证其双重选择作用。下列分析正确的是(　　　　)
A．将sacB基因插入pAH162上需要的限制酶是BamHⅠ、EcoRⅠ
B．需用Ca2＋处理大肠杆菌细胞使其能主动吸收周围环境中的DNA分子
C．为保证正向连接，PCR时应在sacB基因上游引物的5′端添加BamHⅠ识别序列
D．大肠杆菌能在含四环素的培养基中生长说明双重选择系统的重组质粒构建成功
17．人呼吸道合胞病毒(HRSV)是一种单链－RNA病毒，如图是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图，下表是相关限制酶的识别序列及切割位点，下列叙述正确的有(　　)
限制酶 BclⅠ EcoRⅠ XbaⅠ Sau3AⅠ BamHⅠ
识别序列和切割位点 T↓GATCA G↓AATTC T↓CTAGA ↓GATC G↓GATCC
A.HRSV入侵细胞后在DNA聚合酶催化下合成＋RNA
B．过程②需要逆转录酶和Taq酶的参与
C．过程③需要用XbaⅠ和BclⅠ酶切割质粒A
D．过程④将质粒B导入大肠杆菌，有利于质粒B准确复制、稳定保存
18．抗凝血酶Ⅲ是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。如图表示培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ的流程。下列说法错误的是(　　　　)
A．过程①是基因工程的核心，常用的方法是显微注射法
B．如果要将抗凝血酶Ⅲ的第20位的氨基酸和第24位的氨基酸变为半胱氨酸，直接对蛋白质分子进行改造即可
C．如果检测发现抗凝血酶Ⅲ的基因导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ的存在，有可能是启动子和终止子没有设计好
D．培养出的转基因奶牛的所有细胞都含有编码抗凝血酶Ⅲ的基因，故该奶牛有性生殖产生的母牛也都能产生抗凝血酶Ⅲ
三、非选择题：共4小题，共60分。
19．(16分)基因工程可以按照人们的意愿赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。如图是基因工程的基本操作流程，回答下列问题：
(1)图中①过程所需的酶是________，②过程所需的酶是___________________________。
(2)若图中④过程为将目的基因导入植物细胞，则最常用的方法是________________。
(3)图中⑤过程是____________________________，要检测目的基因是否成功表达，首先从转基因生物个体中提取蛋白质，用相应的抗体进行________________杂交。
(4)图中③过程需要借助PCR技术，DNA的合成方向总是从子链的______向__________延伸，若利用PCR技术扩增目的基因的过程中消耗了126个引物分子，则该过程DNA扩增了__________次。
20．(12分)科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。如图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答相关问题：
(1)基因工程的核心是________________，铁结合蛋白基因被称为________基因。
(2)为筛选出含重组Ti质粒的愈伤组织，应在培养基2中添加适量的________，图中由开花后水稻未成熟的胚转变为愈伤组织的过程为__________。
(3)(4分)检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻__________________。
21．(14分)如图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因(Tetr)和氨苄青霉素抗性基因(Ampr)。请回答下列问题：
(1)EcoRⅤ酶切位点为，EcoRⅤ酶切出来的线性载体P1为________末端。
(2)已知目的基因的两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加一个碱基为__________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在____________酶的作用下，形成重组质粒P3。
(3)(8分)为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如表(“＋”代表生长，“－”代表不生长)。根据表中结果判断，应选择的菌落是______(填表中字母)类，另外两类菌落质粒导入情况分别是__________________、___________________________。
平板类型 菌落类型
A B C
无抗生素 ＋ ＋ ＋
氨苄青霉素 ＋ ＋ －
四环素 ＋ － －
氨苄青霉素＋四环素 ＋ － －
22.(18分)(2024·盐城高二质检)虾青素可由β 胡萝卜素在β 胡萝卜素酮化酶(BKT)和β 胡萝卜素羟化酶(CRTR－B)的作用下转化而来，具有抗衰老、增强免疫、保护心血管等功能，杜氏盐藻是单细胞浮游植物，生长快、易培养，能大量合成β 胡萝卜素，科研人员将BKT基因和CRTR－B基因导入杜氏盐藻，构建杜氏盐藻细胞工厂高效生产虾青素。回答下列问题：
(1)获取目的基因：雨生红球藻是天然虾青素重要来源，提取雨生红球藻的总DNA为模板，设计特异性引物扩增BKT基因和CRTR－B基因，此过程需要__________________酶的催化。
(2)构建转化载体：“无缝克隆法”是构建重组质粒的新方法，指利用同源重组酶将末端具有一致同源序列的线性化载体和目的基因连接形成重组质粒，图1表示利用“无缝克隆法”向质粒中插入抗除草剂基因的基本过程。
Ⅰ.PCR获取抗除草剂基因过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在引物的__________端添加对应的同源序列。若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，还需要在基因两侧加入限制酶识别序列，则所需引物(5′－3′)的序列应为________。
A．同源序列＋特异性扩增引物序列＋限制酶识别序列
B．同源序列＋限制酶识别序列＋特异性扩增引物序列
C．特异性扩增引物序列＋限制酶识别序列＋同源序列
Ⅱ.科研人员利用“无缝克隆法”同时将BKT基因和CRTR－B基因插入质粒，形成的重组质粒对应部位如图2所示，推测此过程扩增BKT基因所用的引物为__________；扩增CRTR－B基因所用的引物为__________。
Ⅲ.最终形成的重组质粒如图3所示，其中atpA启动子和psbA启动子均为杜氏盐藻叶绿体启动子，选用内源性启动子的目的是____________________________________________。
Ⅳ.与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法”具备的优势有________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)目的基因导入及相关检测：采用基因枪法将重组质粒导入杜氏盐藻叶绿体，一段时间后，用含__________的培养基筛选已转化的杜氏盐藻，通过相关技术检测目的基因是否成功表达。
(4)叶绿体转化是植物基因工程的新热点，叶绿体的诸多特点为叶绿体转化提供优势，如叶绿体基因组小、功能清晰，基因操作方便；叶绿体具有自我复制功能，一个植物细胞可含有多个叶绿体，每个叶绿体中含有多个基因组，可大大提高______________________。
答案精析
1．D　[21三体综合征属于染色体遗传病，患者的21号染色体比正常人多一条，无法从基因水平上对其进行治疗，D错误。]
2．D　[不同类型的限制酶切割后，有的产生黏性末端(酶1和酶2)，有的产生平末端(酶3和酶4)，A正确；不同类型的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端，如图中的酶1和酶2，B正确；用酶3和酶4分别切割目的基因和质粒后，其产物经T4 DNA连接酶催化可以连接形成重组DNA分子，D错误。]
3．C　[EcoRⅠ的酶切位点有6个碱基对，由于DNA分子的碱基组成为A、T、G、C，则某一位点出现该序列的概率为(1/4)6＝1/4 096，即4 096≈4 000个碱基对可能出现一个限制酶EcoRⅠ的酶切位点，故理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为4 000，C符合题意。]
4．D　[PCR的过程主要包括变性(约94 ℃)→退火(约55 ℃)→延伸(约72 ℃)，可见温度并不是逐渐降低的，A错误；PCR技术中的引物和原料是一次性添加的，不需要补充，B错误；PCR的原理是DNA半保留复制，PCR操作过程中，先解旋后复制，解旋和复制不是同时进行的，C错误；在PCR管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，微量取液器上的枪头都必须更换，避免造成污染，D正确。]
5．D　[DNA进行半保留复制，每次复制都需要两种引物结合在DNA的两端，经过n轮循环共产生2n个DNA片段，仅含有其中1种引物的DNA片段有2个，故理论上推测，经过n轮循环后的产物中只含有1种引物的DNA片段所占比例为2/2n＝1/2n－1，D错误。]
6．D　[在酶切阶段，已知序列L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列，不然会将已知序列L切断，造成序列识别混乱，A正确；PCR技术的操作步骤依次是变性(约94 ℃)、退火(约55 ℃)、延伸(约72 ℃)，B正确；PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3′端通过碱基互补配对结合，为保证延伸的是已知序列两侧的未知序列，应该选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对，C正确；PCR的扩增只需要在第一次循环前加入足够的限制酶，并不需要每轮都加入，D错误。]
7．C　[猪为哺乳动物，哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核和各种细胞器，而鸡属于鸟类，其红细胞内含有细胞核与各种细胞器，DNA含量较多，A错误；等体积鸡(2n＝78)的血液和鸭(2n＝78)的血液中所含血细胞的数量不一定相同，所以提取到的DNA量也不一定相同，B错误；二苯胺试剂无色，加入DNA提取液后在沸水浴加热的条件下会呈现蓝色，且蓝色的深浅与被鉴定的DNA含量有关，C正确；二苯胺试剂应该现配现用，D错误。]
8．C　[启动子是RNA聚合酶的识别和结合部位，C错误。]
9．D　[过程①通过逆转录获取的目的基因不含启动子、终止子等结构，与从比目鱼体内提取的抗冻基因的结构不同，A错误；在重组质粒上，抗冻基因上、下游一定具有启动子和终止子，启动和终止转录过程，B错误；过程②常用的质粒是农杆菌的Ti质粒，上面有一段转移DNA(T－DNA)，能进入受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上，C错误；检测目的基因是否导入受体细胞可采用DNA分子杂交技术，即用根据抗冻基因制作的DNA探针来检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在，D正确。]
10．D　[由表格可知，该线性DNA经酶a切割后得到了3个DNA片段，故在该DNA分子中，酶a的切割位点有2个，经酶b再次切割后得到3个800 bp和2个300 bp的DNA片段，则酶b的切割位点也有2个，且酶a和酶b的切割位点不同，A错误；图中显示这两种酶的识别序列不同，但是切割后形成的黏性末端可以相互连接，B错误；这两种酶切断的化学键都是磷酸二酯键，C错误；这两种酶切割后形成的黏性末端在DNA连接酶的作用下可以相互连接成序列，所以用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所得DNA分子中会明显增多，D正确。]
11．D　[人的生长激素基因可以导入其他生物细胞内并表达出人的生长激素，说明生物之间共用一套遗传密码，D错误。]
12．C　[SalⅠ和NheⅠ会破坏目的基因，EcoRⅠ会将启动子切除，都不能选择，因此只能选择XhoⅠ和MunⅠ，但是目的基因没有这两种酶的识别序列，所以在设计PCR引物时，应在引物的5′端添加限制酶XhoⅠ和MunⅠ的识别序列，C错误。]
13．D　[人的生长激素基因存在于小鼠所有细胞中，但只在小鼠的膀胱上皮细胞中表达，A错误；需要将生长激素基因与尿血小板溶素基因的启动子重组在一起，B错误；需用显微注射法将基因表达载体导入小鼠的受精卵中，C错误。]
14．B　[基因突变具有不定向性，B错误。]
15．BC　[据图可知，用EcoRⅠ单独处理(2号)或用SamⅠ单独处理(3号)都只得到一种大小为1 000 bp的DNA片段，说明该DNA最可能是含1 000 bp的环状DNA分子，A正确；电泳图谱中DNA片段越小，距离起点越远，说明图上侧端为起始端，B错误；EcoRⅠ和SamⅠ都是限制酶，限制酶切割DNA分子，破坏的是作用位点上两脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，C错误。]
16．ABC　[由pAH162－sacB可知，将sacB基因插入pAH162上需要的限制酶是BamHⅠ、EcoRⅠ，A正确；导入重组质粒前，需用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B正确；为保证正向连接，PCR时应在sacB基因上游引物的5′端添加BamHⅠ识别序列，在sacB基因下游引物的5′端添加EcoRⅠ识别序列，C正确；大肠杆菌在含四环素的培养基中生长、在含蔗糖的培养基中不生长时才说明双重选择系统的重组质粒构建成功，D错误。]
17．BCD　[HRSV是一种单链－RNA病毒，侵染人体后，以该链为模板合成RNA，而DNA聚合酶是以DNA为模板合成DNA，A错误；BamHⅠ会切割复制原点，由表中限制酶的识别序列和切割位点可知，Sau3AⅠ也会切割复制原点，EcoRⅠ会切割标记基因，同种限制酶切割质粒和目的基因形成的黏性末端相同，为防止酶切后质粒和目的基因片段的自身环化，通常使用两种限制酶切割质粒和目的基因，故应该选择XbaⅠ和BclⅠ酶切割质粒A，C正确；过程④是将重组质粒导入大肠杆菌，目的是扩增重组DNA分子，有利于质粒B准确复制、稳定保存，D正确。]
18．ABD　[图示过程①表示将目的基因导入受体细胞，基因工程的核心是基因表达载体的构建，A错误；对蛋白质进行改造应通过改造基因来完成，B错误；目的基因在受体细胞中并不一定是成对的，所以该奶牛有性生殖产生的母牛体内可能没有目的基因，也就不能生产所需蛋白，D错误。]
19．(1)逆转录酶　限制性内切核酸酶(或限制酶)　(2)农杆菌转化法　(3)目的基因及其表达产物的检测鉴定　抗原—抗体　(4)5′端　3′端　6
解析　(1)①过程为逆转录，需要逆转录酶催化。②过程是将DNA切割形成一定大小范围的DNA片段，需要限制性内切核酸酶(或限制酶)。(4)PCR技术中的DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸，若扩增过程中消耗126个引物分子，说明通过DNA复制产生(126＋2)÷2＝64＝26个DNA分子，因此DNA扩增了6次。
20．(1)基因表达载体的构建　目的　(2)潮霉素　脱分化　(3)种子中的铁含量(写出铁含量即可)
解析　(2)质粒上存在潮霉素抗性基因，应在培养基2中添加适量的潮霉素，导入重组质粒(或普通质粒)的愈伤组织才能在培养基上存活；由开花后水稻未成熟的胚转变为愈伤组织的过程为脱分化。(3)本实验中，目的基因为铁结合蛋白基因，若转基因技术操作成功，则大米内铁含量将大大增加，因此检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻种子中的铁含量。
21．(1)平　(2)胸腺嘧啶(T)　DNA连接　(3)B　A类菌落导入的是P0　C类菌落未导入质粒
22．(1)热稳定的DNA聚合(Taq)　(2)Ⅰ.5′　B　Ⅱ.①③　⑥⑧　Ⅲ.确保目的基因能表达　Ⅳ.可同时导入多个外源基因；不受限制酶识别序列的限制，可在载体的任意位点插入目的基因　(3)除草剂　(4)目的基因的表达量
解析　(2)Ⅰ.根据PCR扩增的原理，在PCR过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在5′端添加对应的同源序列；若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，则所需引物(5′－3′)的序列应为“同源序列＋限制酶识别序列＋特异性扩增引物序列”，故选B。Ⅱ.由图2可知，要通过“无缝克隆法”同时将BKT基因和CRTR－B基因插入质粒，则要保证BKT基因一侧有一致同源序列，另一侧能带上CRTR－B基因，因此扩增BKT基因所用的引物为①③。同理，扩增CRTR－B基因所用的引物为⑥⑧。Ⅲ.启动子是转录的起始信号，选用内源性启动子的目的是防止基因沉默，确保目的基因能表达。Ⅳ.与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法”具备的优势是可同时导入多个外源基因、不受限制酶识别序列的限制、可在载体的任意位点插入目的基因等。(3)筛选已转化的杜氏盐藻的培养基是选择培养基，其中应含除草剂。

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