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2024-2025学年高二生物学人教版（2019）下学期期中考试测试卷A卷
一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1.利用传统的纯粮固态发酵工艺生产高品质白酒过程中有多种微生物参与：将谷物中的大分子物质分解为小分子糖类等物质的a类菌种、将糖类发酵产生酒精的b类菌种、将酒精转化为醋酸的c类菌种、将酒精和酸性物质等转化为有香味酯的d类菌种。下列说法正确的是( )
A.可以使用以纤维素为唯一碳源的培养基来筛选a类菌种
B.产酒过程中需经常搅拌原料以增加b类菌种发酵所需氧气
C.控制温度在18~25℃有利于抑制c类菌种的生长而增加产酒量
D.不同白酒的品质差异只取决于d类菌种
2.刚果红能与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素水解后形成的纤维二糖和葡萄糖等发生这种反应，纤维素被纤维素分解菌分解后，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。某同学利用刚果红配制培养基，分离土壤中能分解纤维素的微生物并观察菌落数。下列叙述正确的是( )
A.用平板划线法接种后统计平板上的菌落数，统计值比活菌实际数低
B.透明圈出现的原因是菌落周围的纤维素被微生物产生的纤维素酶分解
C.应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化
D.以纤维素为唯一碳源且加入刚果红的培养基从功能上分属于选择培养基
3.滥用抗生素会导致“超级细菌”（对多种抗生素有高耐药性）的产生。某兴趣小组探究了细菌产生青霉素抗性与青霉素之间的关系，过程及结果见下图。下列相关的说法中，错误的是( )
A.细菌培养基在使用前、后都要经过严格的灭菌处理
B.结果表明细菌的青霉素抗性出现在接触青霉素之前
C.结果表明抗生素的使用是“超级细菌”产生的原因
D.提高青霉素的浓度，培养基上菌落的位置和数量可能不变
4.霉豆腐渣的原料是加工豆腐或豆浆后剩下的“副”产品——豆腐渣。采用传统发酵的办法，利用毛霉糖化淀粉和分解大豆蛋白的能力对豆腐渣进行加工，大致过程如图所示。下列说法正确的是( )
A.将豆腐渣烘干的主要目的是灭菌
B.拌霉即接种，与家庭酿制葡萄酒一样，都采用自然接种的方法
C.图中“ ”处的条件是密封无氧
D.在发酵过程中，豆腐渣中的蛋白质被分解成甘油和氨基酸
5.下列不属于发酵工程的应用的是( )
A.生产抗生素、维生素、药用氨基酸等 B.生产啤酒、果酒和食醋等
C.化学检测和水质监测 D.生产各种各样的食品添加剂
6.植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如图所示。下列叙述错误的是( )
A.过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异
B.过程②中常采用灭活的仙台病毒或PEG诱导原生质体融合
C.过程④和⑤的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素
D.可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株
7.迷迭香酸具有多种药理活性。进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错误的是( )
A.迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体
B.诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸
C.悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团
D.茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率
8.下列有关植物细胞全能性的说法，正确的是( )
A.高度分化的植物体细胞具有全能性，而配子不能表现出全能性
B.植物体细胞具有发育成完整个体所需的全部基因，因此高度分化的植物细胞随时能表现出全能性
C.在植物的生长发育过程中，并不是所有的细胞都表现出全能性
D.将花粉培育成单倍体植株、玉米种子发育成完整植株这两个过程均体现了细胞的全能性
9.科研人员以青菜（2n=20）幼嫩花粉与甘蓝型油菜（2n=38）下胚轴细胞为材料,进行原生质体融合，结果如表。下列说法正确的是( )
下胚轴细胞原生质体密度（×104/mL）与花粉原生质体密度（×104/mL）的比例 异源融合
一对一融合（%） 一对二及以上融合（%）
1:1 18.5 8.3
1:3 24.6 16.2
1:6 34.5 18.2
1:9 33.0 17.1
A.可用胶原蛋白酶处理花粉和下胚轴细胞以获得原生质体
B.可用电击、PEG和灭活病毒等诱导上述原生质体的融合
C.两种原生质体密度的比例会影响异源融合的比例
D.上述一对一异源融合细胞中染色体数目为58条
10.植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，并取得了显著的社会效益和经济效益。下列关于植物细胞工程的应用的叙述，错误的是( )
选项 应用技术 原理或取材原因 优势
A 快速繁殖 植物细胞的全能性 繁殖快、保持亲本遗传特性
B 作物脱毒 植物顶端分生区几乎不含病毒 提高作物的产量和品质
C 单倍体育种 为适应培养条件发生新的突变 获得自然界没有的新物种
D 生产细胞产物 细胞可产生多种次生代谢产物 不受季节、天气等限制
A.A B.B C.C D.D
11.体外培养的动物细胞可以分为两大类：一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖;另一类则需要贴附于某些基质表面才能生长增殖。下列相关说法错误的是( )
A.进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞
B.用于培养动物细胞的培养基通常需加入血清
C.动物细胞培养中CO2的主要作用是维持培养液的pH
D.两类方法培养的细胞都会因为发生接触而停止分裂增殖
12.科学家利用供体生物DNA中的无限增殖调控基因制备单克隆抗体过程如下。下列叙述错误的是( )
A.Ⅰ是经特定抗原免疫过的B淋巴细胞
B.经限制酶处理后的目的基因与载体的黏性末端相同
C.经检测和筛选后的Ⅱ，既能无限增殖又可分泌单克隆抗体
D.此种制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术、核移植技术和动物细胞融合技术
13.体细胞核移植技术最初是用玻璃微型吸管将供体细胞的细胞核吸出，再注入去核卵母细胞内，后来发展出了另外一种方法，即直接将供体细胞注入去核卵母细胞透明带内，然后用病毒介导或者电脉冲等方式使两个细胞融合,下列有关叙述错误的是( )
A.与最初的方法相比,第二种方法操作简便，对卵母细胞和细胞核损伤较小
B.在最初的方法中，也需要利用某种方式诱导去核卵母细胞与体细胞核的融合
C.在第二种方法中，两个细胞融合形成的重构胚在体外可发育成克隆动物
D.用上述两种方法得到的克隆动物都不只具备一个亲本的遗传特性
14.下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是( )
A.过程①需要提供95%空气和5%CO2的混合气体
B.过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理
C.为避免代孕丙牛对植入胚胎产生排斥反应，应注射免疫抑制剂
D.后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物质共同决定
15.中国科学家首次利用嵌合胚胎成功构建了高比例胚胎干细胞的活嵌合体猴，部分过程如图所示。下列说法错误的是( )
A.不能用某种成体干细胞替代胚胎干细胞
B.嵌合胚发育至原肠胚期再进行胚胎移植
C.胚胎干细胞的培养液中应添加一定的抗生素
D.嵌合体猴的培育为遗传修饰模型猴的构建奠定了基础
16.聚合酶链式反应（PCR）是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它的最大特点是能将微量的DNA大幅增加，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。下列叙述错误的是( )
A.利用PCR技术能放大扩增特定DNA片段的特点，在基因工程中常用它获取目的基因
B.与细胞内DNA复制过程一样，PCR过程中需要四种脱氧核苷酸、解旋酶和DNA聚合酶
C.PCR过程中用到的引物在一定范围内片段越长，扩增出来的DNA片段的脱氧核苷酸序列差别就越小
D.常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR产物纯度，若鉴定结果出现多条条带，说明产物纯度不高
17.下图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次为( )
A.DNA连接酶、限制酶、解旋酶
B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶
C.限制酶、DNA连接酶、解旋酶
D.解旋酶、限制酶、DNA连接酶
18.科学家将苏云金杆菌中的Bt基因（抗虫基因）利用农杆菌转化法导入棉花的愈伤组织细胞，并进行组织培养获得棉花植株。下列相关检测方法与结果的分析错误的是( )
A.提取棉花细胞核DNA，利用PCR技术检测Bt基因是否插入T-DNA上
B.提取棉花细胞中的RNA，利用PCR技术检测Bt基因是否转录出了mRNA
C.提取棉花细胞中的蛋白质，利用抗原-抗体杂交技术检测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白
D.用棉花的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予棉花抗虫特性以及抗性程度
19.研究人员利用E.coli DNA连接酶将药用蛋白基因与一系列调控元件、质粒等构建成重组质粒后,将其导入哺乳动物的受精卵中,由该受精卵发育成的转基因动物进入泌乳期后,可通过分泌乳汁来生产药用蛋白。利用上述乳腺生物反应器,科学家已获得了种类繁多的医药产品。下列说法正确的是( )
A.质粒是一种只存在于原核细胞拟核DNA外、具有自我复制能力的环状DNA分子
B.E.coli DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率高于T4DNA连接酶
C.构建重组质粒时使用的启动子应能启动药用蛋白基因在乳腺中特异表达
D.“将重组质粒导入哺乳动物的受精卵中”是乳腺生物反应器制作的核心工作
20.下图表示应用基因工程技术生产干扰素的三条途径，下列相关叙述错误的是( )
A.途径甲中，过程Ⅰ应将干扰素基因和乳腺蛋白基因的启动子重组
B.途径乙中，过程Ⅱ一般采用的方法是农杆菌转化法
C.途径丙中，过程Ⅱ可用Ca2+处理大肠杆菌
D.三条途径中，过程Ⅲ依据的生物学原理相同
二、非选择题：本题共5小题，共60分。
21.（12分）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
（1）用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供________和维生素等。
（2）A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明________。
（3）为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样________后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现_____。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。
（4）为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱）。________。
22.（12分）药用植物麻花艽（QJ）和狭叶柴胡（CH）含有重要药效成分——齐墩果酸，因其在细胞中含量很低，从组织中提取会大量破坏植物资源。研究人员利用原生质体间融合技术培育杂种细胞，以期实现细胞产物的工厂化生产。请回答问题：
(1)先用_______________酶处理QJ和CH的细胞以获得原生质体，再用_______________（填化学法名称）诱导其融合得到杂种细胞（ZA、ZB、ZC）。上述过程需在与细胞液浓度相当的培养液中进行，避免原生质体吸水涨破或_______________。
(2)β-amyrin合成酶基因是齐墩果酸合成的关键基因，实验测得QJ和CH及杂种细胞（ZA、ZB、ZC）齐墩果酸含量如图示。
①ZA含有QJ和CH的正常β-amyrin合成酶基因，但齐墩果酸含量反而低于QJ和CH，可能的原因是_______________。
②根据上图实验结果，为大量获取齐墩果酸，后续操作是在适宜条件下选择_______________细胞进行细胞产物的工厂化生产。
(3)综合分析，利用原生质体间融合技术开发药用植物细胞产物的工厂化生产的意义有_______________（答出2点即可）。
23.（12分）图示方案为人们通过单克隆抗体技术、基因工程技术进行相应的实验，请回答下列问题：
（1）甲代表_____（填物质），A细胞的名称是_____，T基因的作用是_____。
（2）图示A细胞还需经过_____和_____，经过多次筛选，才能获得足够_____的能分泌所需抗体的细胞。
（3）图示体外培养过程中，通常需将培养皿置于含有_____的空气和_____的二氧化碳混合气体的二氧化碳培养箱中进行培养，其中前者的主要作用是_____。
（4）单克隆抗体技术的应用除了能起到运载药物外，还可以作为_____。
24.（12分）君迁子原产于亚洲西部，在中国各地分布广泛,对冬季低温胁迫抵抗能力强,是栽培柿的重要砧木,但果实品质优良的小果甜柿，与君迁子嫁接后表现出早期成活率低、生长慢或后期不亲和的问题，导致该类品种未能在中国规模生产。科研人员利用君迁子抗寒基因DlCBF1在小果甜柿再生植株中超表达,可为培育嫁接亲和性和环境适用性均强的甜柿砧木新品种提供科学依据。请回答下列问题：
(1)从君迁子实生苗叶片中提取RNA,逆转录成CDNA,设计DlCBF1基因特异引物后进行PCR扩增DlCBF1基因，以上过程中用到的酶有_____。PCR过程中氢键和磷酸二酯键的形成分别是在_____和_________阶段。
(2)将DlCBF1基因导入小果甜柿叶片细胞采用的是农杆菌转化法，为了获得含重组Ti质粒的农杆菌,首先将DlCBF1基因插入农杆菌Ti质粒的__________中,并且用________处理使农杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态，然后将重组Ti质粒导入其中。
(3)将小果甜柿叶片用次氯酸钠溶液消毒处理后,立即用_______清洗。新鲜的叶片与农杆菌共培养，利用选择培养基筛选转化细胞,其中转化是指____。
(4)上述流程图中，②③阶段的不同之处在于______。
(5)为了检测转基因小果甜柿是否抗冻，从个体生物学水平上鉴定的对照实验思路是________。
25.（12分）采矿污染和不当使用化肥导致重金属镉（Cd）在土壤中过量积累。利用植物修复技术将土壤中的Cd富集到植物体内，进行后续处理（例如，收集植物组织器官异地妥善储存），可降低土壤中Cd的含量。为提高植物对Cd污染土壤的修复能力，研究者将酵母液泡Cd转运蛋白（YCF1）基因导入受试植物，并检测了相关指标。回答下列问题：
（1）为获取YCF1基因，将酵母细胞的全部DNA提取、切割后与载体连接，导入受体菌的群体中储存，这个群体称为________。
（2）将DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时，所需要的两种酶是________。构建的重组基因表达载体中必须含有标记基因，其作用是________。
（3）进行前期研究时，将含有YCF1基因的重组载体导入受试双子叶植物印度芥菜，采用最多的方法是________。研究者进一步获得了转YCF1基因的不育杨树株系，采用不育株系作为实验材料的目的是_________。
（4）将长势一致的野生型和转基因杨树苗移栽到Cd污染的土壤中，半年后测定植株干重（图1）及不同器官中Cd含量（图2）。据图1可知，与野生型比，转基因植株对Cd具有更强的__________（填“耐性”或“富集能力”）；据图2可知，对转基因植株的________进行后续处理对于缓解土壤Cd污染最为方便有效。
（5）已知YCF1特异定位于转基因植物细胞的液泡膜上。据此分析，转基因杨树比野生型能更好地适应高Cd环境的原因是_________。相较于草本植物，采用杨树这种乔木作为Cd污染土壤修复植物的优势在于_________（写出两点即可）。
答案以及解析
1.答案：C
解析：A、分析题意可知，a类菌种可将谷物中的大分子物质分解为小分子糖，并以此作为碳源，故可以使用以谷物为唯一碳源的培养基来筛选a类菌种，A错误；
B、b类菌种可将糖类发酵为酒精，该过程应营造无氧环境，搅拌会增加发酵液中的溶氧量，B错误；
C、结合分析可知，c类菌种主要是醋酸菌，醋酸菌发酵适宜的温度是30~35℃，而b类菌种酒精发酵所需的适宜温度是18~25℃，故控制温度在18~25℃有利于抑制c类菌种的生长而增加产酒量，C正确；
D、据题意可知，白酒最终产生需要四类菌种的参与，故不同白酒的品种取决于4类菌种，D错误。
故选C。
2.答案：B
解析：平板划线法不能用于菌落的计数，A错误；刚果红染料能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌产生的纤维素酶分解后，红色复合物消失，在菌落周围会出现透明圈，B正确；菌落周围形成的透明圈的直径与菌落直径的比值可反映菌落分解纤维素的能力，该值越大，说明该菌分解纤维素的能力越强，故应选择周围透明圈直径与菌落直径比值大的菌落进行纯化，C错误；以纤维素为唯一碳源的培养基可以筛选能分解纤维素的微生物，属于选择培养基，而在该培养基中加入刚果红则可以鉴别能产生纤维素酶的微生物，从功能上分属于鉴别培养基，D错误。
3.答案：C
解析：A、细菌培养基在使用前要经过严格的灭菌处理，防止杂菌的污染，在使用后要经过严格的灭菌处理，防止对环境造成污染，A正确；
B、由图可知，多个含青霉素的培养基在相同的位置长出了细菌，说明细菌的青霉素抗性出现在接触青霉素之前，B正确；
C、抗生素的使用是对“超级细菌”进行选择，不是“超级细菌”产生的原因，C错误；
D、经过抗生素的长期选择，使得有的细菌已不再受抗生素的影响，提高青霉素的浓度，培养基上菌落的位置和数量可能不变，D正确。
故选C。
B、培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板．操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基，B正确；C、未接种的培养基作为空白对照，可以排除无关变量对实验的干扰，C正确；
D、实验使用过的培养基应该放在专门的回收地方，防止污染，D错误。
4.答案：B
解析：结合题干可知，将豆腐渣烘干的主要目的是散失适量的水分，不一定能达到
灭菌效果，A错误；流程图中的拌霉是将干净的稻草覆盖在豆腐渣上面，利用空气中和稻草上附带的毛霉进行发酵，家庭酿制葡萄酒时利用葡萄皮上自带的菌种进行发酵，都采用了自然接种的方法，B正确：毛霉为好氧微生物，霉豆腐渣制作的发酵阶段不需要密封，C错误；在发酵过程中，豆腐渣中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，D错误。
5.答案：C
解析：生产抗生素、维生素、药用氨基酸等为发酵工程在医药工业上的应用；生产啤酒、果酒和食醋等，生产各种各样的食品添加剂，都是发酵工程在食品工业上的应用；化学检测和水质监测不属于发酵工程的应用。
故选C。
6.答案：B
解析：过程①中酶处理的时间不同，可能是两种亲本植物的细胞壁结构有差异造成的，A正确；诱导原生质体融合的方法有高Ca2+一高pH融合法、聚乙二醇（PEG）融合法、电融合法等，灭活病毒诱导法是诱导动物细胞融合的常用方法，B错误；添加不同浓度和比例的生长素和细胞分裂素能诱导愈伤组织的形成和分化，C正确；植物丙是植物甲和植物乙体细胞杂交形成的个体，应具备两者的遗传物质，因此可通过对植物丙的染色体进行分析，来鉴定其是否为杂种植株，D正确。
7.答案：B
解析：迷迭香顶端幼嫩的茎段细胞分裂旺盛且病毒较少，适合用作外植体，A正确；植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素，它们的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向，NAA（α-萘乙酸）是生长素类调节剂，诱导愈伤组织时可以加入NAA，但不能加入脱落酸，B错误；悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团，以提高其与营养物质的接触面积，从而提高迷迭香酸的产量，C正确；由题意可知，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高迷迭香酸的产量，据此推测，茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率，D正确。
8.答案：C
解析：配子也具有发育成完整个体所必需的全部基因，花药离体培养证明配子也能表现出全能性，A错误；植物体细胞具有发育成完整个体所需的全部基因，但高度分化的植物细胞只有在离体状态下才可能表现出全能性，B错误；在植物的生长发育过程中，并不是所有的细胞都表现出全能性，如高度分化的细胞没有表现出全能性， C正确；花粉培育成单倍体植株体现了细胞的全能性，但玉米种子中有植物体的幼体，发育成完整植株不能体现细胞的全能性，D错误。
9.答案：C
解析：胶原蛋白酶用于将动物组织分散成单个细胞,应用纤维素酶和果胶酶分解细胞壁得到植物原生质体,A错误;灭活病毒不能用于诱导植物原生质体的融合,B错误;由实验结果可知,两种原生质体密度的比例不同时,异源融合的比例也不同,C正确;一对一异源融合细胞中染色体数目为48条即青菜幼嫩花粉(n=10)+甘蓝型油菜下胚轴细胞(2n=38),D错误。
10.答案：C
解析：A、快速繁殖，用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，也叫微型繁殖，微型繁殖技术可以使作物保持优良品种的遗传特性，可以高效、快速地实现种苗的大量繁殖，其原理是植物细胞的全能性，A正确；B、由于植物顶端分生区几乎不含病毒，利用植物组织培养技术培育脱毒苗可以提高作物的产量和品质，B正确；C、单倍体育种花药离体培养环节涉及植物组织培养技术，体现了植物细胞具有全能性，其优点是能明显缩短育种年限，C错误；D、细胞的工厂化生产利用的是细胞次生代谢产物的产生，不受季节、天气等限制，D正确。故选C。
11.答案：D
解析：由于人们对动物细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚,因此在使用合成培养基时,通常需要加入血清等一些天然成分,B正确。动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2,其中O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH,C正确。
12.答案：D
解析：Ⅰ代表受体细胞，要具有分泌抗体的能力，则为已免疫的B淋巴细胞，A正确；在同一种限制性内切酶作用，使无限增殖调控基因与质粒具有相同的黏性末端，B正确；Ⅱ是含有无限增殖调控基因的效应B细胞，既有无限增殖的能力，又能分泌特异性抗体，C正确；该过程涉及基因工程和动物细胞培养，但是没有动物细胞融合技术，D错误。
13.答案：C
解析：直接将供体细胞注入去核卵母细胞透明带内,然后用病毒介导或者电脉冲等方式使两个细胞融合,避免了吸取细胞核和注入去核卵母细胞内等操作,故与最初的方法相比,第二种方法操作简便,对卵母细胞和细胞核损伤较小,A正确。在最初的方法中,需要利用某种方式诱导体细胞核与去核卵母细胞的融合,B正确。利用核移植技术获得的重构胚需要移植给受体,才能发育成克隆动物,C错误。最初的方法获得的重组细胞中存在供体细胞细胞核中的遗传物质和卵母细胞细胞质中的遗传物质;第二种方法获得的重组细胞中存在供体细胞中的遗传物质和卵母细胞细胞质中的遗传物质,故用这两种方法得到的克隆动物都不只具备一个亲本的遗传特性,D正确。
14.答案：A
解析：A、动物细胞培养中需要提供95%空气（保证细胞的有氧呼吸）和5%CO2（维持培养液的pH）的混合气体，A正确；B、过程②（去核）常使用显微操作去核法对卵母细胞进行处理，B错误；C、受体子宫一般不会对植入胚胎产生排斥反应，因此不需要给代孕牛注射免疫抑制剂，C错误；D、后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自于乙牛，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物质共同决定，D错误。故选A。
15.答案：B
解析：A、胚胎干细胞具有发育的全能性，而成体干细胞的分化潜能相对较低，不能替代胚胎干细胞，A正确；
B、通常进行胚胎移植的时期是桑葚胚或囊胚期，而不是原肠胚期，B错误；
C、在胚胎干细胞的培养液中添加一定的抗生素可以防止杂菌污染，保证细胞培养的正常进行，C正确；
D、嵌合体猴的培育成功为进一步进行遗传修饰模型猴的构建提供了技术和经验等方面的基础，D正确。
故选B。
16.答案：B
解析：A、利用PCR技术能放大扩增特定DNA片段的特点，在基因工程中常用它获取目的基因，这是PCR技术在基因工程中的常见应用之一，A正确；
B、在细胞内DNA复制过程中需要解旋酶解开双链，而在PCR过程中是通过高温变性使DNA双链解开，不需要解旋酶。PCR过程中需要四种脱氧核苷酸作为原料、耐高温的DNA聚合酶以及引物等条件，B错误；
C、PCR过程中用到的引物在一定范围内片段越长，对目的基因的特异性就越强，扩增出来的DNA片段的脱氧核苷酸序列差别就越小，C正确；
D、常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR产物纯度，若鉴定结果出现多条条带，说明产物中含有不同长度的DNA片段，即产物纯度不高，D正确。
故选B。
17.答案：D
解析：①处为氢键，是解旋酶的作用部位；②处为磷酸二酯键，是限制酶的作用部位；③处为两个DNA片段的缺口，是DNA连接酶的作用部位，催化磷酸二酯键的形成，即D正确。故选D。
18.答案：A
解析：A、提取棉花细胞核DNA，利用目的基因来设计引物进行PCR扩增，根据扩增是否出现的目条带，检测Bt基因是否插入棉花的染色体DNA上，A错误；B、提取棉花细胞中的RNA，通过逆转录获得cDNA，利用目的基因来设计引物进行PCR扩增，根据扩增是否出现的目条带，检测Bt基因是否转录出了mRNA，B正确；C、提取细胞中的蛋白质，采用抗原-抗体分子杂交技术进行检测，根据是否出现杂交带，检测测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白，C正确；D、用棉花的叶片饲喂棉铃虫，根据棉铃虫的死亡情况来确定Bt基因是否赋予棉花抗虫特性以及抗性程度，D正确。故选A。
19.答案：C
解析：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞(如酵母菌)的细胞核或原核细胞(如细菌)拟核之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子,A错误;E.coli DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率低于T4DNA连接酶,B错误；构建重组质粒时使用的启动子等调控元件应能启动药用蛋白基因在乳腺细胞中特异表达,C正确;基因表达载体的构建是乳腺生物反应器制作的核心工作,D错误。
20.答案：D
解析：A、途径甲中，要想使目的基因在乳腺中表达，过程Ⅰ应将干扰素基因和乳腺蛋白基因的启动子重组，A正确；B、途径乙中，过程Ⅱ将目的基因导入植物细胞时，一般所采用的方法是农杆菌转化法，B正确；C、途径丙中，过程Ⅱ将目的基因导入大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为易吸收周围环境中DNA的感受态细胞，C正确；D、三条途径中，过程Ⅲ依据的生物学原理不相同，途径甲是利用了受精卵的全能性，途径乙是利用了植物细胞的全能性，途径丙是利用了大肠杆菌增殖快的特点，D错误。故选D。
21.答案：（1）氮源、碳源
（2）A菌能在培养平板中生长繁殖
（3）梯度稀释；溶菌圈（或透明圈）
（4）P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂
解析：（1）蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。
（2）将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。
（3）将含菌量较高的湖泊水样梯度稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。
（4）根据实验材料和设备，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。
22.答案：(1)纤维素酶和果胶酶；聚乙二醇融合法；失水皱缩
(2)QJ和CH的遗传信息表达时可能相互干扰，导致β-amyrin合成酶含量降低；ZB
(3)几乎不受季节、天气等因素限制；生产周期短，保护野生中草药资源，提高药效成分含量及产量
解析：(1)原生质体为去除了植物细胞壁后的结构，要获得原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶处理QJ和CH的细胞，再用聚乙二醇诱导其融合，上述过程需在与细胞液浓度相当的培养液中进行，避免原生质体吸水涨破或失水皱缩;
(2)①ZA含有QJ和CH的正常-amyrin合成酶基因，但齐墩果酸含量反而低于QJ和CH，可能的原因是QJ和CH的遗传信息表达时可能相互干扰，导致B-amyrin合成酶含量降低;②由图可知，ZB细胞中齐墩果酸含量最高，因此为大量获取齐墩果酸，后续操作是在适宜条件下选择ZB细胞进行细胞产物的工厂化生产;
(3)利用原生质体间融合技术开发药用植物细胞产物的工厂化生产的意义有几乎不受季节、天气等因素限制;生产周期短，保护野生中草药资源，提高药效成分含量及产量。
23.答案：（1）特定抗原；经过特异性免疫后的B淋巴细胞；调控细胞无限增殖
（2）克隆化培养；抗体检测；数量
（3）95%；5%；有利于细胞代谢的正常进行
（4）体外诊断试剂
解析：（1）由题“单克隆抗体技术”可知，该过程利用的原理是特异性免疫，故甲代表特定的抗原；A细胞代表经过特异性免疫的B淋巴细胞；由于题图中未出现“骨髓瘤细胞”，但导入T基因的A细胞具有无限增殖的能力，故可推测T基因的作用是调控细胞无限增殖。
（2）A细胞至B细胞过程中，涉及检测和筛选，需要通过克隆化培养到一定的数量，再通过抗体检测，完成A细胞至B细胞的筛选。
（3）体外培养过程中，通常需将培养皿置于含有95%的空气和5%的二氧化碳混合气体的二氧化碳培养箱中进行培养；95%的空气有利于使细胞生活的直接环境处于稳态，保障细胞代谢的正常进行。
（4）单克隆抗体技术的应用包括运载药物、治疗疾病和作为体外诊断试剂。
24.答案：（1）逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶；复性、延伸；延伸
（2）T-DNA；Ca2+
（3）无菌水；目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程
（4）培养基中植物激素比例不同且③阶段需要光照
（5）将生长状况一致的转基因小果甜柿和野生型株系置于低温培养箱中进行低温处理，观察二者的生长状况
解析：（1）RNA逆转录形成cDNA的过程需要逆转录酶，PCR扩增DlCBF1基因的过程中需用到耐高温的DNA聚合酶。PCR过程包括变性、复性和延伸。复性过程中两种引物通过碱基互补配对形成氢键与两条单链DNA结合延伸过程中脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA链，该过程有氢键和磷酸二酯键的形成。
（2）农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。根据农杆菌的这种特点，将DlCBF1基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，并且用Ca2+处理使农杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态，然后将重组Ti质粒导入其中。
（3）将小果甜柿叶片用次氯酸钠溶液消毒处理后，立即用无菌水清洗。新鲜的叶片与农杆菌共培养，利用选择培养基筛选转化细胞，其中转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
（4）题述流程图中，②③阶段分别是脱分化和再分化，不同之处在于培养基中植物激素的比例不同且③阶段需要光照。
（5）具体实验思路见答案。
25、（1）答案：基因组文库
解析：本题考查基因工程的相关知识。
将酵母细胞的全部DNA提取、切割后与载体连接，导入受体菌的群体中储存，这个群体含有酵母菌的全部基因，因此称为基因组文库。
（2）答案：限制酶和DNA连接酶；便于筛选含有重组基因表达载体的受体细胞
解析：构建重组载体时，需要用限制酶切割供体DNA和质粒以产生相应的黏性末端，然后用DNA连接酶进行连接。构建的重组基因表达载体中的标记基因，可用于检测目的基因是否导入受体细胞，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
（3）答案：农杆菌转化法；防止外源基因传给其他植物，造成基因污染
解析：将重组载体导入双子叶植物，采用最多的方法是农杆菌转化法。采用不育株系作为实验材料可防止外源基因传给其他植物，造成基因污染。
（4）答案：耐性；叶
解析：由题图1可知，与野生型相比，转基因植株地上部分、地下部分和植株干重均增加，即转基因植株在Cd污染的土壤中生长较好，说明转基因植株对Cd具有更强的耐性。由题图2可知，转基因植株的叶中Cd含量最高，对其进行后续处理对于缓解土壤Cd污染最为方便有效。
（5）答案：转基因杨树细胞把Cd运入液泡中，防止Cd破坏细胞核以及各种细胞器，减少Cd对细胞的损伤；相比于草本植物，杨树更高大，吸收的Cd更多；杨树为多年生植物，可以源源不断从土壤中吸收Cd
解析：由于YCFl特异定位于转基因植物细胞的液泡膜上，可推测转基因杨树能特异性的将Cd转运至液泡中，适应高Cd环境。相较于草本植株，杨树的根系发达，有利于吸收土壤中的Cd，且杨树属于多年生木本植物，可多次收集叶片对Cd进行处

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