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(共44张PPT)
重点突破练(一)
第一章 发酵工程
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题组一　微生物的基本培养技术
1.下列有关多次连续平行划线操作的叙述，正确的是
A.使用灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B.打开含菌种的试管后需要将试管口通过火焰，蘸取菌种后需要马上塞
　上棉塞
C.培养皿皿盖打开后将蘸有菌液的接种环迅速伸入平板内，划三至五条
　平行线即可
D.待接种环冷却后再伸入菌液中蘸取一环菌液
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对点训练
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对点训练
平板划线过程中，接种环在每次划线之前和之后均需要灼烧灭菌，A错误；
打开含菌种的试管后需通过酒精灯火焰灭菌，取出菌种后还需通过酒精灯火焰灭菌，再塞上棉塞，B错误；
将蘸有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，灼烧接种环，冷却后从第一区域划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成后面区域内划线，注意不要将最后一区域的划线与第一区域的划线相连，C错误。
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2.下列关于微生物实验中仪器的使用，正确的是
A.在使用涂布器接种时，应将涂布器浸泡在75%的酒精中，接种前将表面
　残留少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧
B.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
C.接种环经灼烧灭菌后，可伸到试管内接触培养基达到冷却目的
D.接种微生物后，应及时在培养皿皿盖上做标记
对点训练
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接种后未长出菌落的培养基，要经过灭菌处理后才能丢弃，B错误。
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3.如图是利用平板划线法在培养基上获得微生物单菌落的实验操作，下列叙述错误的是
A.该接种过程一般需灼烧接种环5次
B.划线结束即可看到划线末端出现不连续单菌落
C.如果培养的是尿素分解菌，可加入酚红指示剂鉴定
D.该接种方法常用来纯化微生物但不能准确计数
对点训练
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对点训练
为了防止杂菌污染，每一次划线之前和划线操作结束
后都需要将接种环灼烧灭菌，图示中共有4个划线区
域，因此该接种过程一般需灼烧接种环5次，A正确；
划线结束后，将培养皿倒置放在一定温度的恒温培养箱中培养一定时间后，可看到划线末端出现不连续单菌落，B错误；
若培养的是尿素分解菌，因该菌合成的脲酶可将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，所以可加入酚红指示剂来鉴定，C正确；
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对点训练
该接种方法可以分离出单菌落，但不能准确计数培养液中微生物的数量，D正确。
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对点训练
4.黑茶是以肉食为主的中国边疆游牧民族的主要饮品。在一系列微生物的作用下，黑茶会产生一种对人体非常有益的金黄色颗粒“金花”。研究人员对“金花”中的微生物进行了分离和鉴定，过程如图。下列说法不正确的是
A.向“金花”样品中加入蒸馏水制
　成样品悬液
B.可根据菌落特征对菌种进行初步鉴定
C.涂布平板上长出的菌落可通过划线进一步纯化
D.可通过基因组测序对菌种进行准确鉴定
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应该向“金花”样品中加入无菌水制成样品悬液，而不能加入蒸馏水，A错误。
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选项 筛选出不需要亮氨酸的菌株 筛选出抗链霉素的菌株 筛选出不需要亮氨酸且抗链霉素的菌株
A L＋　S＋ L－　S－ L＋　S－
B L－　S－ L＋　S＋ L－　S＋
C L－　S＋ L＋　S＋ L－　S－
D L＋　S－ L－　S－ L＋　S＋
题组二　微生物的分离和计数
5.某种细菌菌株需要亮氨酸才能生长，但此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株，想筛选出表格中细菌菌株类型，则配制相应选择培养基类型正确的是
对点训练
注：L代表亮氨酸，S代表链霉素；“＋”代表加入，“－”代表不加入。
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对点训练
由于某种细菌菌株需要亮氨酸才能生长，但此菌株对链霉素敏感，因此筛选不需要亮氨酸的菌株时，培养基中不需要添加亮氨酸和链霉素；筛选抗链霉素的菌株时，需要向培养基中添加亮氨酸和链霉素；筛选不需要亮氨酸且抗链霉素的菌株时需要向培养基中添加链霉素，但不添加亮氨酸，B正确。
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6.(2024·衢州高二期末)某生物兴趣小组从土壤中分离和计数分解尿素的微生物，如图示结果最能达到实验目的的是
对点训练
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对分解尿素的微生物进行分离和计数，其中平板划线法只能分离，不能计数，而稀释涂布平板法既能分离又能计数，A、B为稀释涂布平板法，但A菌液浓度过大，C、D为平板划线法，B符合题意。
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7.(2024·浙江大学附中高二期中)进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是
对点训练
A.KH2PO4和Na2HPO4既可为菌体提供无机盐，又可调节培养基的pH
B.尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用
C.琼脂糖一般不可以为尿素分解菌提供碳源，只起到凝固剂的作用
D.蒸馏水既可用于定容，又可用于稀释培养液
组分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂糖 H2O
含量 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容
1 000 mL
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KH2PO4和Na2HPO4两种无机盐既可以为细菌生长提供无机盐，又可作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH相对稳定，A正确；
培养基中除了尿素无其他含氮物质，只有尿素分解菌能通过分解尿素进行生长繁殖，故尿素既能为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用，B正确；
蒸馏水起定容作用，蒸馏水不能对培养液进行稀释，稀释所用的溶剂应为无菌水，D错误。
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8.如图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关的叙述中，不正确的是
A.实验中所用的培养基①②③④
　均属于选择培养基
B.图中Ⅰ、Ⅱ过程实现了对目标
　微生物的稀释
C.统计⑤处培养基中的菌落数并不一定代表接种到④上的活菌数
D.在⑤处培养基上形成菌落的微生物同化作用类型一般为异养型
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该实验的目的是从土壤中分离能
降解对羟基苯甲酸的微生物，所
以使用的培养基为选择培养基，
A正确；
图中Ⅰ、Ⅱ过程为选择培养，目的是增大所分离的微生物的浓度，B错误；
⑤处的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C正确；
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所分离的微生物利用现成的有机物生长繁殖，所以该微生物的同化作用类型为异养型，D正确。
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9.(2024·舟山高二期末)金黄色葡萄球菌(SAU)是细菌性肺炎的病原体之一，感染时常用红霉素、庆大霉素、万古霉素、氯霉素等抗生素治疗，研究人员分别将含上述等量抗生素的四张相同的滤纸片a、b、c、d置于SAU均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养48 h，药敏实验结果如图所示。下列关于金黄色葡萄球菌药敏实验的叙述，错误的是
A.需增加使用含等量无菌水的相同滤纸片作空白对照
B.结果显示金黄色葡萄球菌对红霉素的敏感性较强
C.测量抑菌圈直径时可直接在培养皿皿底上测量
D.可将菌液用接种环均匀涂布在LB培养基上制成试验菌平板
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为使实验结果更有说服力，可增加一组使用含等量无菌水的相同滤纸片作空白对照，A正确；
a处抑菌圈最大，说明红霉素对该菌的作用效果最佳，金黄色葡萄球菌对红霉素最敏感，B正确；
测量抑菌圈直径时，为避免沾染到微生物，可在培养皿皿底上测量，C正确；
可将菌液用涂布器均匀涂布在LB培养基上制成试验菌平板，D错误。
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题组三　传统发酵食品与发酵工程
10.如图为传统黄酒酿制的主要工艺流程，其中加酒药后的10～12 h为前发酵，随后的6 d左右为主发酵，最后是30 d左右的后发酵。下列说法错误的是
A.蒸煮是为了严格灭菌，有利于酵母菌进行繁殖
B.加入的酒药中含有的霉菌可以促进淀粉糖化
C.主发酵阶段开耙搅拌，可以防止温度过高影响发酵
D.煎酒的目的是终止发酵，延长保存期
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大米蒸煮的目的是杀死杂菌(相当于消毒)并使淀粉糊化，有利于米曲中淀粉酶发挥作用，A错误；
加入的酒药中含有的霉菌可产生淀粉酶促进淀粉糖化，B正确；
酒精发酵需要适宜的温度，主发酵阶段开耙搅拌，可以防止温度过高影响发酵，C正确；
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煎酒的目的是杀死黄酒中的大多数微生物，终止发酵，减少有机物的消耗，以延长它的保存期，D正确。
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11.如图是苹果醋的制作流程简图，下列有关叙述错误的是
A.适当提高温度可提高①②过程微生物的发酵作用
B.图中需要通氧的是①过程的初期和②过程
C.pH是影响①②过程能否顺利完成的重要条件
D.制酒的装置无须严格灭菌的原因是发酵后期在缺氧、呈碱性的发酵液
　中，绝大多数微生物因无法适应这一环境而受到抑制
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制酒的装置无须严格灭菌的原因是发酵后期在缺氧、呈酸性的发酵液中，绝大多数微生物因无法适应这一环境而受到抑制，D错误。
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12.泡菜制作方便、口味独特，深受人们喜爱，下列叙述错误的是
A.泡菜腌制过程中，进行发酵的主要微生物属于原核生物
B.泡菜腌制过程中，需加入一定的抗生素来抑制杂菌的繁殖
C.泡菜腌制过程中，用水封住坛口以保证坛内发酵所需的无氧环境
D.泡菜腌制过程中，乳酸的含量先增加后保持稳定
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乳酸菌属于细菌，由于细菌对抗生素敏感，所以在泡菜的制作过程中，不能加入抗生素，否则会抑制乳酸菌的生长和繁殖，B错误。
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13.红酸汤是凯里地区苗族人民的传统食品，它颜色鲜红、气味清香、味道酸爽。以番茄和辣椒为原料的红酸汤制作流程如图。下列相关叙述正确的是
A.红酸汤制作过程中用到的微生物主要是醋酸菌
B.装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量
C.装坛时不装满的原因是促进微生物繁殖
D.红酸汤的制作中发酵时间越长，口味越纯正
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红酸汤制作过程中需密封发酵，用到的微生物主要是乳酸菌，A错误；
装坛时不装满的目的是防止发酵后液体外溢，C错误；
如果发酵时间过长，会影响口感，D错误。
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14.下列关于发酵工程的叙述，错误的是
A.发酵工程中的菌种在不同的发酵阶段要求的环境条件是不同的
B.分离或提纯发酵产品是工业发酵制取产品必经的步骤
C.分离后的生物产品还需要进一步提纯，经过质检合格后才能成为产品
D.传统发酵与发酵工业所用菌种、生产技术完全相同
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15.为探究不同糖源(蜂蜜、黄冰糖)对蓝莓酒发酵产物的影响，某研究小组研发出如图所示的蓝莓酒发酵工艺，其中“主发酵”时酵母菌会繁殖、大部分糖分解和代谢物会生成，“后发酵”是在低温、密闭的环境下进行的，此阶段蓝莓酒会成熟。下列叙述正确的是
A.菌种甲在产生CO2的同时会产生乙醇
B.切片后需对发酵液进行消毒然后再分组
C.倒罐均需保留空间以促进菌种需氧呼吸
D.主发酵要控制无氧，后发酵要控制有氧
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菌种甲是酵母菌，酵母菌需氧呼吸产生CO2，但不产生乙醇，A错误；
切片后对发酵液进行消毒，防止杂菌污染，再进行分组，B正确；
压榨倒罐(主发酵)需保留空间以促进酵母菌的需氧呼吸，二次倒罐(后发酵)时菌种进行厌氧呼吸产生果酒，C、D错误。
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16.无菌技术常采用消毒、灭菌措施，可有效防止外来杂菌的入侵，在生产生活和科学研究中广泛使用。回答下列问题：
(1)消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法等，人的双手常用_________消毒；与煮沸消毒法比较，巴氏消毒法对鲜牛奶消毒的优点是__________
__________________。
(2)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，____________________________________，培养基在丢弃前需要经过______处理。
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化学药剂
牛奶的营
养成分不被破坏
还能有效避免操作者自身被微生物感染
灭菌
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(3)科学研究发现培养某嗜盐、耐碱性强的细菌时，可配制___________
____培养基而不需灭菌操作，不需要灭菌的原因是__________________
___________________________________________________________________________________。
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高盐、碱性
强
在高盐、碱性强的培养基中，该细菌可以正常生长繁殖；大多数其他微生物因无法适应这一环境而受到抑制
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17.黑枸杞具有治疗心热病及心脏病、降低胆固醇、兴奋大脑神经、增强免疫功能等效果。请回答下列关于利用黑枸杞制作果酒和果醋的问题：
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(1)制作果酒时可选用图1的装置，为适当提高果酒的生产速率，进气口应______________；排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是________________________________________。
先打开后关闭
既可以放气，又可避免空气中微生物的污染
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制作果酒时为适当提高果酒的生产速率，进气口应先打开让酵母菌进行需氧呼吸以利于繁殖，然后关闭进气口让酵母菌进行厌氧呼吸以利于酒精发酵。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样既可以放气，又可以防止空气中微生物的污染。
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综合强化
(2)若是从混杂的微生物中分离酵母菌应使用______(功能)培养基，从微生物培养的角度分析，黑枸杞果汁能够为酵母菌的生长提供水、无机盐、____________、生长因子等。黑枸杞果汁发酵后是否有酒精产生，可以用__________________来检验。
选择
氮源、碳源
酸性重铬酸钾溶液
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综合强化
(3)图2乙过程中使用的微生物主要是________，若从食醋中分离纯化该菌种，常用的接种方法是_____________________________。
醋酸菌
稀释涂布平板法或平板划线法
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综合强化
18.(2023·温州高二联考)对生活垃圾进行分类处理，是提高垃圾的资源价值和改善生活环境的重要措施。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于处理湿垃圾，如剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物。回答下列问题：
(1)科研小组从土壤中筛选产脂肪酶的菌株时，配制的培养基需要以____为唯一碳源。
脂肪
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综合强化
(2)获得产脂肪酶的菌株后，在处理含油垃圾的同时，可获得单细胞蛋白(微生物菌体)，实现污染物资源化。现获得可产脂肪酶的甲、乙两种菌株，并进行了培养研究，结果如图1所示。据图分析，应选择菌株____进行后续相
乙
关研究，理由是________________________________________________
_______________________。
该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力强
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综合强化
(3)科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色
后，选择培养基上出现了A、B和C三种菌落(如图2所
示)。若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择____
菌落进一步纯化。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培养基上生长且没有形成透明圈的原因是_______________________________________
_____________________________________________________________。
B
硝化细菌为自养型细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透明圈
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科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色后，选择培养基上出现了A、B和C三种菌落，淀粉遇碘液会变蓝，而淀粉酶能够分解淀粉，则不同产酶活力的菌株
周围会形成不同直径的透明圈，若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择B菌落进一步纯化，这是因为B菌落的透明圈直径与菌落直径比值最大。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培养基上生长且没有形成透明圈的原因是硝化细菌为自养型细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透明圈。
对点训练
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综合强化
(4)在微生物分解处理垃圾的过程中，纤维素分解菌能够分泌纤维素酶，若科研小组检测土壤样品中的纤维素分解菌的数量，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各涂布3个平板，分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数约为_________个。
5.8×106
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计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，所以根据计算，每升土壤溶液中的活菌数约为(59＋57＋58)÷3÷0.1×10×1 000＝5.8×106(个)。
对点训练
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18作业6　重点突破练(一)
(分值：100分)
第1～4题，每题3分；第5～15题，每题4分，共56分。
题组一　微生物的基本培养技术
1．下列有关多次连续平行划线操作的叙述，正确的是(　　)
A．使用灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管后需要将试管口通过火焰，蘸取菌种后需要马上塞上棉塞
C．培养皿皿盖打开后将蘸有菌液的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D．待接种环冷却后再伸入菌液中蘸取一环菌液
2．下列关于微生物实验中仪器的使用，正确的是(　　)
A．在使用涂布器接种时，应将涂布器浸泡在75%的酒精中，接种前将表面残留少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧
B．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
C．接种环经灼烧灭菌后，可伸到试管内接触培养基达到冷却目的
D．接种微生物后，应及时在培养皿皿盖上做标记
3.如图是利用平板划线法在培养基上获得微生物单菌落的实验操作，下列叙述错误的是(　　)
A．该接种过程一般需灼烧接种环5次
B．划线结束即可看到划线末端出现不连续单菌落
C．如果培养的是尿素分解菌，可加入酚红指示剂鉴定
D．该接种方法常用来纯化微生物但不能准确计数
4．黑茶是以肉食为主的中国边疆游牧民族的主要饮品。在一系列微生物的作用下，黑茶会产生一种对人体非常有益的金黄色颗粒“金花”。研究人员对“金花”中的微生物进行了分离和鉴定，过程如图。下列说法不正确的是(　　)
A．向“金花”样品中加入蒸馏水制成样品悬液
B．可根据菌落特征对菌种进行初步鉴定
C．涂布平板上长出的菌落可通过划线进一步纯化
D．可通过基因组测序对菌种进行准确鉴定
题组二　微生物的分离和计数
5．某种细菌菌株需要亮氨酸才能生长，但此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株，想筛选出表格中细菌菌株类型，则配制相应选择培养基类型正确的是(　　)
选项 筛选出不需要亮氨酸的菌株 筛选出抗链霉素的菌株 筛选出不需要亮氨酸且抗链霉素的菌株
A L＋　S＋ L－　S－ L＋　S－
B L－　S－ L＋　S＋ L－　S＋
C L－　S＋ L＋　S＋ L－　S－
D L＋　S－ L－　S－ L＋　S＋
注：L代表亮氨酸，S代表链霉素；“＋”代表加入，“－”代表不加入。
6．(2024·衢州高二期末)某生物兴趣小组从土壤中分离和计数分解尿素的微生物，如图示结果最能达到实验目的的是(　　)
7．(2024·浙江大学附中高二期中)进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是(　　)
组分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂糖 H2O
含量 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容1 000 mL
A.KH2PO4和Na2HPO4既可为菌体提供无机盐，又可调节培养基的pH
B．尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用
C．琼脂糖一般不可以为尿素分解菌提供碳源，只起到凝固剂的作用
D．蒸馏水既可用于定容，又可用于稀释培养液
8．如图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关的叙述中，不正确的是(　　)
A．实验中所用的培养基①②③④均属于选择培养基
B．图中Ⅰ、Ⅱ过程实现了对目标微生物的稀释
C．统计⑤处培养基中的菌落数并不一定代表接种到④上的活菌数
D．在⑤处培养基上形成菌落的微生物同化作用类型一般为异养型
9．(2024·舟山高二期末)金黄色葡萄球菌(SAU)是细菌性肺炎的病原体之一，感染时常用红霉素、庆大霉素、万古霉素、氯霉素等抗生素治疗，研究人员分别将含上述等量抗生素的四张相同的滤纸片a、b、c、d置于SAU均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养48 h，药敏实验结果如图所示。下列关于金黄色葡萄球菌药敏实验的叙述，错误的是(　　)
A．需增加使用含等量无菌水的相同滤纸片作空白对照
B．结果显示金黄色葡萄球菌对红霉素的敏感性较强
C．测量抑菌圈直径时可直接在培养皿皿底上测量
D．可将菌液用接种环均匀涂布在LB培养基上制成试验菌平板
题组三　传统发酵食品与发酵工程
10．如图为传统黄酒酿制的主要工艺流程，其中加酒药后的10～12 h为前发酵，随后的6 d左右为主发酵，最后是30 d左右的后发酵。下列说法错误的是(　　)
A．蒸煮是为了严格灭菌，有利于酵母菌进行繁殖
B．加入的酒药中含有的霉菌可以促进淀粉糖化
C．主发酵阶段开耙搅拌，可以防止温度过高影响发酵
D．煎酒的目的是终止发酵，延长保存期
11．如图是苹果醋的制作流程简图，下列有关叙述错误的是(　　)
A．适当提高温度可提高①②过程微生物的发酵作用
B．图中需要通氧的是①过程的初期和②过程
C．pH是影响①②过程能否顺利完成的重要条件
D．制酒的装置无须严格灭菌的原因是发酵后期在缺氧、呈碱性的发酵液中，绝大多数微生物因无法适应这一环境而受到抑制
12．泡菜制作方便、口味独特，深受人们喜爱，下列叙述错误的是(　　)
A．泡菜腌制过程中，进行发酵的主要微生物属于原核生物
B．泡菜腌制过程中，需加入一定的抗生素来抑制杂菌的繁殖
C．泡菜腌制过程中，用水封住坛口以保证坛内发酵所需的无氧环境
D．泡菜腌制过程中，乳酸的含量先增加后保持稳定
13．红酸汤是凯里地区苗族人民的传统食品，它颜色鲜红、气味清香、味道酸爽。以番茄和辣椒为原料的红酸汤制作流程如图。下列相关叙述正确的是(　　)
A．红酸汤制作过程中用到的微生物主要是醋酸菌
B．装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量
C．装坛时不装满的原因是促进微生物繁殖
D．红酸汤的制作中发酵时间越长，口味越纯正
14．下列关于发酵工程的叙述，错误的是(　　)
A．发酵工程中的菌种在不同的发酵阶段要求的环境条件是不同的
B．分离或提纯发酵产品是工业发酵制取产品必经的步骤
C．分离后的生物产品还需要进一步提纯，经过质检合格后才能成为产品
D．传统发酵与发酵工业所用菌种、生产技术完全相同
15．为探究不同糖源(蜂蜜、黄冰糖)对蓝莓酒发酵产物的影响，某研究小组研发出如图所示的蓝莓酒发酵工艺，其中“主发酵”时酵母菌会繁殖、大部分糖分解和代谢物会生成，“后发酵”是在低温、密闭的环境下进行的，此阶段蓝莓酒会成熟。下列叙述正确的是(　　)
A．菌种甲在产生CO2的同时会产生乙醇
B．切片后需对发酵液进行消毒然后再分组
C．倒罐均需保留空间以促进菌种需氧呼吸
D．主发酵要控制无氧，后发酵要控制有氧
16．(14分)无菌技术常采用消毒、灭菌措施，可有效防止外来杂菌的入侵，在生产生活和科学研究中广泛使用。回答下列问题：
(1)消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法等，人的双手常用________消毒；与煮沸消毒法比较，巴氏消毒法对鲜牛奶消毒的优点是______________________________________________。
(2)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，__________________，培养基在丢弃前需要经过________处理。
(3)(6分)科学研究发现培养某嗜盐、耐碱性强的细菌时，可配制______________培养基而不需灭菌操作，不需要灭菌的原因是____________________________________________。
17．(14分)黑枸杞具有治疗心热病及心脏病、降低胆固醇、兴奋大脑神经、增强免疫功能等效果。请回答下列关于利用黑枸杞制作果酒和果醋的问题：
(1)制作果酒时可选用图1的装置，为适当提高果酒的生产速率，进气口应________________；排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是_____________________。
(2)若是从混杂的微生物中分离酵母菌应使用________(功能)培养基，从微生物培养的角度分析，黑枸杞果汁能够为酵母菌的生长提供水、无机盐、______________、生长因子等。黑枸杞果汁发酵后是否有酒精产生，可以用________________________来检验。
(3)图2乙过程中使用的微生物主要是______________________________________，若从食醋中分离纯化该菌种，常用的接种方法是______________________________________。
18．(16分)(2023·温州高二联考)对生活垃圾进行分类处理，是提高垃圾的资源价值和改善生活环境的重要措施。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于处理湿垃圾，如剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物。回答下列问题：
(1)科研小组从土壤中筛选产脂肪酶的菌株时，配制的培养基需要以________为唯一碳源。
(2)(6分)获得产脂肪酶的菌株后，在处理含油垃圾的同时，可获得单细胞蛋白(微生物菌体)，实现污染物资源化。现获得可产脂肪酶的甲、乙两种菌株，并进行了培养研究，结果如图1所示。据图分析，应选择菌株________进行后续相关研究，理由是___________________。
(3)(6分)科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色后，选择培养基上出现了A、B和C三种菌落(如图2所示)。若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择________菌落进一步纯化。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培养基上生长且没有形成透明圈的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(4)在微生物分解处理垃圾的过程中，纤维素分解菌能够分泌纤维素酶，若科研小组检测土壤样品中的纤维素分解菌的数量，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各涂布3个平板，分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数约为____________个。
答案精析
1．D　[平板划线过程中，接种环在每次划线之前和之后均需要灼烧灭菌，A错误；打开含菌种的试管后需通过酒精灯火焰灭菌，取出菌种后还需通过酒精灯火焰灭菌，再塞上棉塞，B错误；将蘸有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，灼烧接种环，冷却后从第一区域划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成后面区域内划线，注意不要将最后一区域的划线与第一区域的划线相连，C错误。]
2．A　[接种后未长出菌落的培养基，要经过灭菌处理后才能丢弃，B错误。]
3．B　[为了防止杂菌污染，每一次划线之前和划线操作结束后都需要将接种环灼烧灭菌，图示中共有4个划线区域，因此该接种过程一般需灼烧接种环5次，A正确；划线结束后，将培养皿倒置放在一定温度的恒温培养箱中培养一定时间后，可看到划线末端出现不连续单菌落，B错误；若培养的是尿素分解菌，因该菌合成的脲酶可将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，所以可加入酚红指示剂来鉴定，C正确；该接种方法可以分离出单菌落，但不能准确计数培养液中微生物的数量，D正确。]
4．A　[应该向“金花”样品中加入无菌水制成样品悬液，而不能加入蒸馏水，A错误。]
5．B　[由于某种细菌菌株需要亮氨酸才能生长，但此菌株对链霉素敏感，因此筛选不需要亮氨酸的菌株时，培养基中不需要添加亮氨酸和链霉素；筛选抗链霉素的菌株时，需要向培养基中添加亮氨酸和链霉素；筛选不需要亮氨酸且抗链霉素的菌株时需要向培养基中添加链霉素，但不添加亮氨酸，B正确。]
6．B　[对分解尿素的微生物进行分离和计数，其中平板划线法只能分离，不能计数，而稀释涂布平板法既能分离又能计数，A、B为稀释涂布平板法，但A菌液浓度过大，C、D为平板划线法，B符合题意。]
7．D　[KH2PO4和Na2HPO4两种无机盐既可以为细菌生长提供无机盐，又可作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH相对稳定，A正确；培养基中除了尿素无其他含氮物质，只有尿素分解菌能通过分解尿素进行生长繁殖，故尿素既能为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用，B正确；蒸馏水起定容作用，蒸馏水不能对培养液进行稀释，稀释所用的溶剂应为无菌水，D错误。]
8．B　[该实验的目的是从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物，所以使用的培养基为选择培养基，A正确；图中 Ⅰ、Ⅱ 过程为选择培养，目的是增大所分离的微生物的浓度，B错误；⑤处的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C正确；所分离的微生物利用现成的有机物生长繁殖，所以该微生物的同化作用类型为异养型，D正确。]
9．D　[为使实验结果更有说服力，可增加一组使用含等量无菌水的相同滤纸片作空白对照，A正确；a处抑菌圈最大，说明红霉素对该菌的作用效果最佳，金黄色葡萄球菌对红霉素最敏感，B正确；测量抑菌圈直径时，为避免沾染到微生物，可在培养皿皿底上测量，C正确；可将菌液用涂布器均匀涂布在LB培养基上制成试验菌平板，D错误。]
10．A　[大米蒸煮的目的是杀死杂菌(相当于消毒)并使淀粉糊化，有利于米曲中淀粉酶发挥作用，A错误；加入的酒药中含有的霉菌可产生淀粉酶促进淀粉糖化，B正确；酒精发酵需要适宜的温度，主发酵阶段开耙搅拌，可以防止温度过高影响发酵，C正确；煎酒的目的是杀死黄酒中的大多数微生物，终止发酵，减少有机物的消耗，以延长它的保存期，D正确。]
11．D　[制酒的装置无须严格灭菌的原因是发酵后期在缺氧、呈酸性的发酵液中，绝大多数微生物因无法适应这一环境而受到抑制，D错误。]
12．B　[乳酸菌属于细菌，由于细菌对抗生素敏感，所以在泡菜的制作过程中，不能加入抗生素，否则会抑制乳酸菌的生长和繁殖，B错误。]
13．B　[红酸汤制作过程中需密封发酵，用到的微生物主要是乳酸菌，A错误；装坛时不装满的目的是防止发酵后液体外溢，C错误；如果发酵时间过长，会影响口感，D错误。]
14．D
15．B　[菌种甲是酵母菌，酵母菌需氧呼吸产生CO2，但不产生乙醇，A错误；切片后对发酵液进行消毒，防止杂菌污染，再进行分组，B正确；压榨倒罐(主发酵)需保留空间以促进酵母菌的需氧呼吸，二次倒罐(后发酵)时菌种进行厌氧呼吸产生果酒，C、D错误。]
16．(1)化学药剂　牛奶的营养成分不被破坏　(2)还能有效避免操作者自身被微生物感染　灭菌　(3)高盐、碱性强　在高盐、碱性强的培养基中，该细菌可以正常生长繁殖；大多数其他微生物因无法适应这一环境而受到抑制
17．(1)先打开后关闭　既可以放气，又可避免空气中微生物的污染　(2)选择　氮源、碳源　酸性重铬酸钾溶液
(3)醋酸菌　稀释涂布平板法或平板划线法
解析　(1)制作果酒时为适当提高果酒的生产速率，进气口应先打开让酵母菌进行需氧呼吸以利于繁殖，然后关闭进气口让酵母菌进行厌氧呼吸以利于酒精发酵。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样既可以放气，又可以防止空气中微生物的污染。
18．(1)脂肪　(2)乙　该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力强　(3)B　硝化细菌为自养型细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透明圈　(4)5.8×106
解析　(3)科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色后，选择培养基上出现了A、B和C三种菌落，淀粉遇碘液会变蓝，而淀粉酶能够分解淀粉，则不同产酶活力的菌株周围会形成不同直径的透明圈，若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择B菌落进一步纯化，这是因为B菌落的透明圈直径与菌落直径比值最大。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培养基上生长且没有形成透明圈的原因是硝化细菌为自养型细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透明圈。(4)计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，所以根据计算，每升土壤溶液中的活菌数约为(59＋57＋58)÷3÷0.1×10×1 000＝5.8×106(个)。

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