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主干知识排查
一、细胞培养是动物细胞工程的基础
1．动物细胞培养需要适宜的温度、湿度、pH和________条件；____________的条件；充足的________________________________________________________________________。
2．保证无菌、无毒条件的措施：
(1)培养材料、培养基、培养环境、操作过程严格控制无菌；
(2)在培养基中加入________，抑制细菌和真菌的生长，从而预防污染；
(3)定期____________。
3．培养动物细胞的培养基通常为________培养基，其基本成分包括水、无机盐、氨基酸、________、糖类、生长因子等。另外，培养基中还要添加一定比例的________或其他天然成分。
4．动物细胞培养前需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶消化组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个细胞的细胞悬液，培养过程分______培养和________培养。
5. 体外培养的动物细胞往往具有____________和接触抑制等特点。由于细胞之间有接触抑制的特性，一般的正常细胞会________生长。癌细胞____接触抑制。
6．需要将原培养瓶内的细胞分离并稀释后转到多个培养瓶中的原因：细胞发生____________或培养空间的限制及__________的消耗枯竭。
7．原代培养物经首次传代成功后即成__________；通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有____________的细胞称为细胞株。
二、 通过细胞核移植克隆动物
1．动物细胞核移植是指将体细胞核移入一个________________中，并使其发育成________的过程。动物细胞核移植体现了________________________。
2．____________核的全能性比体细胞核更容易体现，低等动物细胞的全能性一般比高等动物容易体现。
3．动物细胞核移植的结论：
(1)__________的细胞经过一定技术处理，也可回复到类似受精卵时期的功能，表现出________________________________________________________________________。
(2)在胚胎和个体发育中，________具有调控细胞核发育的作用。
4．动物细胞核移植的应用价值：
(1)研究胚胎细胞的________。
(2)在药物生产、________的培育和繁殖、拯救________、________克隆等方面，具有令人期待的实际应用价值。
5．通过核移植技术克隆动物存在着________低、某些克隆动物________等问题。
三、通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
1．动物细胞融合的原理：________________。结果：产生具有新特性的细胞。
2．诱导动物细胞融合的方法：____________处理、电脉冲融合、________诱导等。
3．单克隆抗体：由一个____________增殖形成的细胞群所产生的________抗体分子。
4．单克隆抗体的制备过程：诱导骨髓瘤细胞和______________融合，筛选后可获得既能产生________________、又能在正常培养条件下进行________的________细胞。通过对________细胞进行____________，就能得到单克隆抗体。
5．单克隆抗体的优点：纯度高，可____________，在应用时具有____________________的特点。
6．单克隆抗体的应用：
(1)作为特异性的________，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及功能。
(2)快捷、准确地________和________一些疾病。
(3)运载药物。
7．将________连接到专门识别某种肿瘤细胞的单克隆抗体上，单克隆抗体就会像“生物导弹”一样携带抗癌药物________地聚集到肿瘤细胞，________地杀死肿瘤细胞。
四、对动物早期胚胎或配子进行处理可获得目标个体
1．哺乳动物的精子________、卵子________后，可进行受精作用形成受精卵。
2．受精的标志：观察到________极体或________________；受精完成的标志：雌、雄原核的染色体会合形成新核。
3．哺乳动物早期胚胎发育依次经过受精卵、__________、________(开始出现细胞分化)、________阶段。
4．卵裂本质是有序的________分裂，产生的细胞越来越____，但总体积____________，________ 细胞期的每一个细胞都具有全能性，均可以发育成一个完整的个体。
5．囊胚的内细胞团不断增殖分化，将发育成____________；滋养层发育成胚胎的附属结构或胚外结构如______________等。
6．原肠胚期，三个胚层逐渐分化形成各种器官原基，最先形成的是____和脊髓原基——神经管。
7．胚胎工程的常见技术手段包括体外受精、胚胎体外培养、胚胎移植、胚胎分割等。
8．体外受精：哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。过程：人工采集精子(采集到的精子需________处理)→采集卵细胞(使用______________进行超数排卵)→人工体外受精(在体外合适的环境下共同培养一段时间)。
9．检验合格的胚胎一般情况下应移植到________的、生理状态________的受体子宫内，在移植前应对受体进行____________处理。
10．胚胎体外培养培养液成分：________、有机物、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、________等。
11．胚胎移植：将雌性动物的____________或通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到________的、生理状态________的其他雌性动物的体内，使之继续发育为个体的技术。移植是胚胎工程的最后一道“工序”。
12．胚胎分割：借助____________技术将早期胚胎切割成几等份，再移植到代孕动物子宫中发育，产生____________后代的技术。胚胎分割时选择发育良好的早期胚胎(囊胚或囊胚期以前的胚胎)，属于________生殖。
1．动物细胞培养需要添加血清的原因：________________________________________
________________________________________________________________________。
2．动物细胞培养时所需的气体环境是__________________________________，95%的空气是保证________________________，5%的CO2的主要作用是______________________。
3．动物细胞培养时定期更换培养液，目的是____________________________________
________________________________________________________________________。
4．幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较，________________________________更易培养，原因是___________________________
________________________________________________________________________。
5．进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，用胃蛋白酶可以吗？为什么？________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
6．动物细胞培养时，要将动物组织分散成单个细胞的原因是___________________
________________________________________________________________________。
7．动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶，第一次使用的目的是________________；贴壁细胞传代培养时使用的目的是________________________
________________________________________________________________________。
8．在将体细胞的细胞核移植到卵细胞之前，必须先对卵细胞进行去核操作的目的是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
9．选择卵细胞作为受体细胞的原因：_______________________________________
________________________________________________________________________。
10．克隆动物不是对体细胞供体动物100%的复制，原因有_____________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
11．诱导因素诱导动物细胞融合的原因：____________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
12．单克隆抗体制备过程中，首先给小鼠注射特定抗原的目的是________________
________________________________________________________________________。
13．单克隆抗体制备过程中涉及两次筛选：第一次筛选的目的是______________________，方法是________________________；第二次筛选的目的是___________________________，
方法是_______________________________________________________________________。
14．筛选出来的杂交瘤细胞的特点：_____________________________________________。
15．采集的精子需进行获能处理，目的是_________________________________________。
16．胚胎移植实际上是_________________________________________________________。
17．进行胚胎移植的优势：_____________________________________________________
____________________________________________________________________________。
18．鉴定性别时，常取囊胚的滋养层细胞进行DNA分析的原因：___________________。
19．胚胎在受体内能存活的原因：______________________________________________。
20．胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一，其原因是__________________。
答案精析
知识梳理
一、
1．气体　无菌、无毒　营养物质
2．(2)抗生素　(3)更换培养液
3．液体　维生素　血清
4．原代　传代
5．贴壁生长　单层　无
6．接触抑制　营养物质
7．细胞系　特殊性质
二、
1．去核的卵母细胞　动物个体　动物细胞核的全能性
2．胚胎细胞
3．(1)高度分化　全能性　(2)细胞质
4．(1)分化　(2)优良种畜　濒危动物　治疗性
5．成功率　早衰
三、
1．细胞膜的流动性
2．聚乙二醇　病毒
3．B淋巴细胞　单一型
4．B淋巴细胞　特异性抗体　无限增殖　杂交瘤　杂交瘤　传代培养
5．大量制备　特异性强、灵敏度高
6．(1)探针　(2)诊断　治疗
7．抗癌药物　准确　专一
四、
1．获能　成熟
2．两个　雌、雄原核
3．桑葚胚　囊胚　原肠胚
4．有丝　小　基本不变　2～8
5．完整的胚胎　绒毛膜、胎盘
6．脑
8．获能　促性腺激素
9．同种　相同　同期发情
10．无机盐　血清
11．早期胚胎　同种　相同
12．显微操作　同卵多仔　无性
长句表达
1．血清中含有尚未全部研究清楚的细胞所需的营养物质
2．95%的空气和5%的CO2　细胞呼吸对氧气的需要　调节pH的相对稳定
3．防止细胞代谢产生的有毒物质危害细胞
4．幼龄动物的细胞和分化程度低的细胞　这些细胞的分裂能力强
5．不可以；多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶(适宜pH为2左右)在此环境中没有活性
6．分散后的单个细胞能与培养液充分接触，更容易进行物质交换
7．使组织细胞分散开　使细胞从瓶壁上脱离下来，分散成单个细胞，便于分瓶培养
8．使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自提供体细胞的动物
9．卵细胞的细胞质具有调控细胞核发育的作用
10．克隆动物细胞核中的遗传物质来自供体动物，但细胞质中的遗传物质基本来自受体卵细胞；生物性状还受环境因素的影响等
11．在诱导因素的作用下，细胞膜会发生一定程度的损伤，细胞就可以实现相互粘连而融合在一起
12．诱导小鼠产生能够分泌特定抗体的B淋巴细胞
13．筛选出杂交瘤细胞　用HAT选择培养基进行筛选　筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞　通过抗体检测进行筛选
14．既能产生特异性抗体，又能无限增殖
15．使其具备与卵细胞受精的能力
16．生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程
17．充分发挥优良母畜的繁殖潜力，在短期内获得大量目标个体
18．囊胚的内细胞团将发育成完整的胚胎，滋养层将来发育成绒毛膜和胎盘等，对胚胎发育影响更小
19．受体对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应
20．来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质(共17张PPT)
主干知识排查
第三章 动物细胞工程
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一、细胞培养是动物细胞工程的基础
1.动物细胞培养需要适宜的温度、湿度、pH和 条件； 的条件；充足的 。
2.保证无菌、无毒条件的措施：
(1)培养材料、培养基、培养环境、操作过程严格控制无菌；
(2)在培养基中加入 ，抑制细菌和真菌的生长，从而预防污染；
(3)定期 。
知识梳理
气体
无菌、无毒
营养物质
抗生素
更换培养液
3.培养动物细胞的培养基通常为 培养基，其基本成分包括水、无机盐、氨基酸、 、糖类、生长因子等。另外，培养基中还要添加一定比例的 或其他天然成分。
4.动物细胞培养前需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶消化组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个细胞的细胞悬液，培养过程分 培养和 培养。
5.体外培养的动物细胞往往具有 和接触抑制等特点。由于细胞之间有接触抑制的特性，一般的正常细胞会 生长。癌细胞 接触抑制。
液体
维生素
血清
原代
传代
贴壁生长
单层
无
6.需要将原培养瓶内的细胞分离并稀释后转到多个培养瓶中的原因：细胞发生 或培养空间的限制及 的消耗枯竭。
7.原代培养物经首次传代成功后即成 ；通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有 的细胞称为细胞株。
接触抑制
营养物质
细胞系
特殊性质
二、通过细胞核移植克隆动物
1.动物细胞核移植是指将体细胞核移入一个 中，并使其发育成 的过程。动物细胞核移植体现了 。
2. 核的全能性比体细胞核更容易体现，低等动物细胞的全能性一般比高等动物容易体现。
3.动物细胞核移植的结论：
(1) 的细胞经过一定技术处理，也可回复到类似受精卵时期的功能，表现出 。
(2)在胚胎和个体发育中， 具有调控细胞核发育的作用。
去核的卵母细胞
动物个体
动物细胞核的全能性
胚胎细胞
高度分化
全能性
细胞质
4.动物细胞核移植的应用价值：
(1)研究胚胎细胞的 。
(2)在药物生产、 的培育和繁殖、拯救 、 克隆等方面，具有令人期待的实际应用价值。
5.通过核移植技术克隆动物存在着 低、某些克隆动物 等问题。
分化
优良种畜
濒危动物
治疗性
成功率
早衰
三、通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
1.动物细胞融合的原理： 。结果：产生具有新特性的
细胞。
2.诱导动物细胞融合的方法： 处理、电脉冲融合、 诱导等。
3.单克隆抗体：由一个 增殖形成的细胞群所产生的 抗体分子。
4.单克隆抗体的制备过程：诱导骨髓瘤细胞和 融合，筛选后可获得既能产生 、又能在正常培养条件下进行 的
细胞。通过对 细胞进行 ，就能得到单克隆抗体。
细胞膜的流动性
聚乙二醇
病毒
B淋巴细胞
单一型
B淋巴细胞
特异性抗体
无限增殖
杂交瘤
杂交瘤
传代培养
5.单克隆抗体的优点：纯度高，可 ，在应用时具有__________
_________的特点。
6.单克隆抗体的应用：
(1)作为特异性的 ，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及功能。
(2)快捷、准确地 和 一些疾病。
(3)运载药物。
7.将 连接到专门识别某种肿瘤细胞的单克隆抗体上，单克隆抗体就会像“生物导弹”一样携带抗癌药物 地聚集到肿瘤细胞，_____地杀死肿瘤细胞。
大量制备
特异性强、
灵敏度高
探针
诊断
治疗
抗癌药物
准确
专一
四、对动物早期胚胎或配子进行处理可获得目标个体
1.哺乳动物的精子 、卵子 后，可进行受精作用形成受精卵。
2.受精的标志：观察到 极体或 ；受精完成的标志：雌、雄原核的染色体会合形成新核。
3.哺乳动物早期胚胎发育依次经过受精卵、 、 (开始出现细胞分化)、 阶段。
4.卵裂本质是有序的 分裂，产生的细胞越来越 ，但总体积_____
_____， 细胞期的每一个细胞都具有全能性，均可以发育成一个完整的个体。
获能
成熟
两个
雌、雄原核
桑葚胚
囊胚
原肠胚
有丝
小
基本
不变
2～8
5.囊胚的内细胞团不断增殖分化，将发育成 ；滋养层发育成胚胎的附属结构或胚外结构如 等。
6.原肠胚期，三个胚层逐渐分化形成各种器官原基，最先形成的是 和脊髓原基——神经管。
7.胚胎工程的常见技术手段包括体外受精、胚胎体外培养、胚胎移植、胚胎分割等。
8.体外受精：哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。过程：人工采集精子(采集到的精子需 处理)→采集卵细胞(使用 进行超数排卵)→人工体外受精(在体外合适的环境下共同培养一段时间)。
完整的胚胎
绒毛膜、胎盘
脑
促性腺激素
获能
9.检验合格的胚胎一般情况下应移植到 的、生理状态 的受体子宫内，在移植前应对受体进行 处理。
10.胚胎体外培养培养液成分： 、有机物、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、 等。
11.胚胎移植：将雌性动物的 或通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到 的、生理状态 的其他雌性动物的体内，使之继续发育为个体的技术。移植是胚胎工程的最后一道“工序”。
12.胚胎分割：借助 技术将早期胚胎切割成几等份，再移植到代孕动物子宫中发育，产生 后代的技术。胚胎分割时选择发育良好的早期胚胎(囊胚或囊胚期以前的胚胎)，属于 生殖。
同种
相同
同期发情
无机盐
血清
早期胚胎
同种
相同
显微操作
同卵多仔
无性
1.动物细胞培养需要添加血清的原因：_____________________________
___________________。
2.动物细胞培养时所需的气体环境是 ,95%的空气是保证 ，5%的CO2的主要作用是_____________
______。
3.动物细胞培养时定期更换培养液，目的是_________________________
____________。
长句表达
血清中含有尚未全部研究清楚的
细胞所需的营养物质
95%的空气和5%的CO2
细胞呼吸对氧气的需要
调节pH的相对
稳定
防止细胞代谢产生的有毒物
质危害细胞
4.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较， 更易培养，原因是 。
5.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，用胃蛋白酶可以吗？为什么？_______________________________________________________
________________________________。
6.动物细胞培养时，要将动物组织分散成单个细胞的原因是___________
_____________________________________________。
幼龄动物的细胞和分化程度低的细胞
这些细胞的分裂能力强
不可以；多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶(适宜pH为2左右)在此环境中没有活性
个细胞能与培养液充分接触，更容易进行物质交换
分散后的单
7.动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶，第一次使用的目的是 ；贴壁细胞传代培养时使用的目的是 。
8.在将体细胞的细胞核移植到卵细胞之前，必须先对卵细胞进行去核操作的目的是_____________________________________________________
_____。
9.选择卵细胞作为受体细胞的原因：_______________________________
_________。
使组织细胞分散开
使细胞从瓶壁上脱离下来，分散成单个细胞，便于分瓶培养
使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自提供体细胞的动物
卵细胞的细胞质具有调控细胞核发
育的作用
10.克隆动物不是对体细胞供体动物100%的复制，原因有_____________
___________________________________________________________________________________________________。
11.诱导因素诱导动物细胞融合的原因：____________________________
__________________________________________________________。
12.单克隆抗体制备过程中，首先给小鼠注射特定抗原的目的是________
___________________________________。
克隆动物细胞核中的遗传物质来自供体动物，但细胞质中的遗传物质基本来自受体卵细胞；生物性状还受环境因素的影响等
在诱导因素的作用下，细胞膜会发生一定程度的损伤，细胞就可以实现相互粘连而融合在一起
诱导小鼠产生能够分泌特定抗体的B淋巴细胞
13.单克隆抗体制备过程中涉及两次筛选：第一次筛选的目的是________
_________，方法是 ；第二次筛选的目的是
__________________________________，方法是 。
14.筛选出来的杂交瘤细胞的特点： 。
15.采集的精子需进行获能处理，目的是 。
16.胚胎移植实际上是____________________________________________
_____。
筛选出杂
交瘤细胞
用HAT选择培养基进行筛选
筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通过抗体检测进行筛选
既能产生特异性抗体，又能无限增殖
使其具备与卵细胞受精的能力
生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的
过程
17.进行胚胎移植的优势：________________________________________
_______________。
18.鉴定性别时，常取囊胚的滋养层细胞进行DNA分析的原因：________
______________________________________________________________________________。
19.胚胎在受体内能存活的原因：__________________________________
________。
20.胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一，其原因是______
__________________________________。
充分发挥优良母畜的繁殖潜力，在短期内获得大量目标个体
囊胚的内细胞团将发育成完整的胚胎，滋养层将来发育成绒毛膜和胎盘等，对胚胎发育影响更小
受体对外来胚胎基本上不发生免疫排
斥反应
同一胚胎的后代具有相同的遗传物质
来自

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