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1.2.1微生物的培养技术及应用 同步课时作业
一、单项选择题
1.微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜高压蒸汽灭菌的是( )
A.移液管 B.锥形瓶和广口瓶
C.培养基 D.用于培养的微生物
2.微生物的培养，需配制培养基，以下叙述合理的是( )
A.培养基的成分都含有碳源、氮源、水、无机盐
B.因成分不同，培养基分为固体培养基和液体培养基
C.培养基中的氮源，能提供N元素，但不能作为能源物质
D.筛选自养型微生物时，培养基中不需要加碳源
3.图为微生物的实验室培养的有关操作，下列相关叙述错误的是( )
A.步骤①是灼烧灭菌，可以杀死接种环表面的所有微生物
B.步骤②的主要目的是防止接种时破坏培养基中的有效成分
C.步骤③中的方法只能用来分离微生物，不能用来计数
D.接种后的培养皿需要放到恒温培养箱中倒置培养
4.无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述正确的是( )
A.实验过程中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B.酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，无水乙醇比70％乙醇消毒效果更好
C.试管口、瓶口等易被污染的部位，接种时可通过火焰灼烧来灭菌
D.不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
5.下列关于酵母菌的纯培养实验的叙述，错误的是( )
A.将未接种的培养基一同进行培养，可作为对照观察培养基是否被污染
B.配制好的培养基放入干热灭菌箱内，在160～170℃灭菌2小时
C.利用平板划线法进行接种时，下一次划线需从上一次划线的末端开始
D.完成平板划线后，待菌液被培养基吸收后，再将平板倒置培养
6.甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是( )
粉状硫 10g K2HPO4 4g FeSO4 0.5g 蔗糖 10g （NH4）2SO4 0.4g H2O 100ml MgSO4 0.25g CaCl2 0.5g
Ⅰ + + + + - + + +
Ⅱ + + + - + + + +
Ⅲ + + + + + + + +
A.甲、乙、丙都是异养微生物
B.甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C.甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
D.甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
7.下列关于微生物纯培养的相关叙述中，正确的是( )
A.配制培养基、倒平板需在酒精灯火焰旁进行
B.为防止培养基脱落需将接种后的平板正置培养
C.用平板划线法能在固体培养基的表面形成单菌落
D.菌落的形状、颜色、数目都可作为菌种鉴定的依据
8.培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的叙述错误的是( )
A.制作固体培养基时可加入琼脂作为凝固剂
B.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素
C.培养霉菌时需要将培养基调至碱性
D.对培养基进行灭菌可以采用湿热灭菌
9.在培养基配制和微生物接种的过程中，确保无杂菌污染被称为无菌操作。图中，符合无菌操作要求的有( )
①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿
②菌种试管口在火焰上灼烧
③接种前灼烧接种环
④接种前培养皿在火焰上灼烧
⑤靠近火焰接种
A.①②③④ B.①②③⑤ C.①③④⑤ D.②③④⑤
10.消毒和灭菌在作用强度和作用效果方面差异显著，下列关于消毒和灭菌的说法错误的是( )
A.煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒是常用的消毒方法
B.消毒和灭菌均可消灭芽孢和孢子
C.湿热灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌是常用的灭菌方法
D.培养皿和金属器械的灭菌常采用干热灭菌
11.无菌技术在微生物培养中至关重要，下列相关叙述正确的是( )
A.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒不能灭菌
B.吸管、培养皿、金属用具等可放入干热灭菌箱进行灭菌
C.使用后的培养基应立即丢弃，以免污染实验室其他微生物
D.巴氏消毒法能杀死牛奶中所有微生物，且不破坏牛奶的营养成分
12.下列叙述正确的是( )
A.微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质
B.无菌技术包括对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌
C.微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、氧气、渗透压的影响
D.固体培养基中的琼脂可为微生物的生长提供能量
13.在微生物的培养过程中，离不开培养基的配制和灭菌技术。下列相关叙述正确的是( )
A.使用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，需在100kPa、121℃条件下维持15~30min
B.不同微生物生长所需的pH不同，配制完成的培养基在灭菌后按需要调节相应的pH
C.为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置
D.进行接种工作前，需用紫外线对接种室、接种箱、工作台及人的双手进行消毒处理
二、非选择题
14.利用下表所示配方制备的培养基可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。回答下列问题：
成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O
含量 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0 15.0 定容至1000mL
（1）根据物理形态划分，该培养基是_________，判断依据是_________。该配方中尿素主要作为_________。
（2）利用该配方表制备培养基的具体操作步骤是：配制培养基→_________（用“→”和文字表示）。
（3）在分离纯化微生物时，若要统计细菌数量，接种方法宜采用_________，该过程所用接种工具常用的灭菌操作是将该接种工具浸在酒精中，然后放在_________。
15.请回答在细菌培养与选择方面的相关问题。
（1）在细菌培养时，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_____。硝化细菌在没有碳源的培养基上_____（填“能够”或“不能”）生长，原因是_____。
（2）在配制培养基时除了要满足营养物质的需求外，还需满足微生物生长对__________的要求。（写出3个，顺序可变）
（3）获得纯净目的菌种的关键是________________，对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_______________________。
（4）在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置放置，这样做的目的是_______________________。
（5）甲同学采用平板划线法接种，获得单个菌落后继续筛选，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因是_______________________。
（6）在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_____。
答案以及解析
1.答案：D
解析：A、移液管可用高压蒸汽灭菌，A不符合题意；B、锥形瓶和广口瓶玻璃器皿也可用高压蒸汽灭菌，B不符合题意；C、发芽培养基和生根培养基需要保持水分，适用高压蒸汽灭菌，C不符合题意；D、用于培养的微生物不能用高压蒸汽灭菌，D符合题意；故选D。
2.答案：D
解析：A、自养型的微生物可以直接利用空气中的CO2作碳源，不需要在培养基中额外添加碳源，A错误；B、根据物理性质不同，培养基可分为固体培养基和液体培养基，B错误；C、培养基中的氮源，能提供N元素，但有机氮源也能作为能源物质，如蛋白胨，C错误；D、筛选自养型微生物时，可以直接利用空气中的CO2作碳源，培养基中不需要加碳源，D正确。故选D。
3.答案：B
解析：A、步骤①是灼烧灭菌，可以杀死接种环表面的所有微生物，避免杂菌污染，A正确；B、步骤②的主要目的是冷却接种环，这样可以防止接种时烫死菌种，B错误；C、步骤③中的方法是平板划线法，该方法只能用来分离微生物，不能用来计数，C正确；D、接种后的培养皿需要放到恒温培养箱中倒置培养，这样可以避免冷凝水滴落到培养基表面造成污染，D正确。故选B。
4.答案：C
解析：A、微生物培养的器皿、接种用具和培养基等均需要灭菌，生物材料依据情况消毒或灭菌，A错误；B、酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，70%的酒精效果更好，B错误；C、将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌，C正确；D、消毒是指用比较温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程，不耐高温的牛奶使用巴氏消毒法可以避免牛奶中营养物质丢失过多，D错误。故选C。
5.答案：B
解析：A、将未接种的培养基一同进行培养，可作为对照观察培养基是否被污染，A正确；B、培养基一般选择高压蒸汽灭菌，属于湿热灭菌，B错误；C、利用平板划线法进行接种时，下一次划线需从上一次划线的末端开始，以达到纯化的目的，C正确；D、完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将平板倒置培养，D正确。故选B。
6.答案：D
解析：Ⅰ培养基缺少无N源，而甲能在此培养基中生长，说明甲能固氮，属于固氮微生物；Ⅱ培养基中缺少C源，而乙能在此培养基中生长，说明乙能合成有机物，属于自养微生物；丙是不能在I、Ⅱ培养基生长，可以在Ⅲ培养基生长，因此是异养微生物。故选D。
7.答案：C
解析：A、需要在酒精灯火焰旁进行的是倒平板、接种的操作，而配制培养基则不需要，A错误；B、为防止培养皿盖上的冷凝水滴落到培养基上造成污染，应将接种后的平板和未接种的空白培养基放在恒温保温箱中倒置培养，B错误；C、用接种环在平板培养基表面通过分区划线逐步稀释菌种，以得到较多独立分布的单个细胞，经培养后可在固体培养基的表面形成单菌落，C正确；D、菌种鉴定的依据可以是形状、颜色、大小、隆起程度等，菌落数目多少跟接种的菌液浓度有关，故不能作为菌种鉴定的依据，D错误。故选C。
8.答案：C
解析：A、向液体培养基中加入琼脂可以制作成固体培养基，A正确；B、培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，B正确；C、培养霉菌时需要将培养基调至酸性环境，C错误；D、对培养基进行灭菌可以利用高压蒸汽灭菌，属于湿热灭菌，D正确。故选C。
9.答案：B
解析：①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿，这是因为酒精灯火焰旁具有无菌区域，能够防止杂菌污染，①正确；
②菌种试管口在火焰上灼烧，这样能够防止杂菌污染，②正确；
③接种前灼烧接种环，能够杀死接种环上的杂菌，③正确；
④接种前培养皿不能在火焰上灼烧，灼烧会导致培养基融化等，正确操作是接种时在酒精灯火焰旁进行操作，④错误；
⑤靠近火焰接种，这样能够防止杂菌污染，⑤正确。
综上所述，①②③⑤正确。故选B。
10.答案：B
解析：A、消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程，煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒是常用的消毒方法，A正确；B、灭菌才能杀死一切的微生物，包括芽孢和孢子，消毒不能杀灭芽孢和孢子，B错误；C、灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程，湿热灭菌（如高压蒸汽灭菌）、干热灭菌、灼烧灭菌是常用的灭菌方法，C正确；D、能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌，都可用干热灭菌，D正确。故选B。
11.答案：B
解析：A、无菌技术中，若处理对象为液体，可以采用高压蒸汽灭菌，A错误；B、吸管、培养皿、金属用具等可以使用干热灭菌法，将灭菌物品放入干热灭菌箱进行灭菌，B正确；C、使用后的培养基应进行灭菌处理后再丢弃，以免污染环境，C错误；D、巴氏消毒法大约是70°C，巴氏消毒法可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，基本不破坏牛奶的营养成分，D错误。故选B。
12.答案：C
解析：A、培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中，不需加入氮源，A错误；B、操作者的衣着和手只能进行消毒，不能灭菌，要考虑物体的耐受程度，B错误；C、对于微生物的生长来说，在营养物质供应充分的基础上，pH适宜、渗透压浓度适宜及适宜的氧气对于其生长繁殖都是有利的，C正确；D、琼脂属于凝固剂，不能为微生物提供能量，D错误。故选C。
13.答案：A
解析：A、对培养基灭菌效果较好的方法是高压蒸汽灭菌，该方法需将培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在100kPa、121℃条件下维持15~30min，A正确；
B、不同微生物生长所需的pH不同，配制完成的培养基需在灭菌之前根据培养的微生物种类调节相应的pH，B错误；
C、刚灭菌的培养基需冷却到50℃左右才能倒平板，C错误；
D、工作人员的双手不能用紫外线进行消毒，D错误。
故选A。
14.答案：（1）固体；含有琼脂；氮源
（2）灭菌→倒平板
（3）稀释涂布平板法；酒精灯火焰上灼烧
解析：（1）分析表格，该培养基中含有凝固剂琼脂，故依据物理形态分，该培养基是固体培养基；尿素的元素组成含有N，故可作为氮源。
（2）配制培养基的具体操作步骤是计算→称量→溶化→调pH→分装→灭菌，故利用该配方表制备培养基的具体操作步骤是：配制培养基→灭菌→倒平板。
（3）微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，在分离纯化微生物时，若要统计细菌数量，接种方法宜采用稀释涂布平板法；该过程所用接种工具常用的灭菌操作是将该接种工具浸在酒精中，然后放在酒精灯火焰上灼烧。
15.答案：（1）不同；能够；硝化细菌可以利用空气中的CO2作为能源
（2）pH、特殊营养物质、氧气
（3）防止杂菌入侵；湿热灭菌或高压蒸汽灭菌
（4）防止皿盖上的水珠落入培养基而造成污染
（5）杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境或感染操作者
（6）将未接种的培养基在适宜的温度下；培养适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
解析：（1）由于不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同，故制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH；硝化细菌属于自养生物，可以利用空气中的二氧化碳作为碳源，故在没有碳源的培养基上能够生长。
（2）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
（3）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，对培养基采用湿热灭菌或高压蒸汽灭菌。
（4）倒平板可以防止皿盖上的水珠落入培养基而造成污染，因此在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置放置。
（5）在划线操作结束时，为杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境或感染操作者，仍然需要灼烧接种环。
（6）在接种前需要检测培养基是否被污染，应是把不接着任何菌种的培养基放在恒温箱中培养，一段时间后若有菌落说明培养基被污染，若无菌落说明培养基没有被污染。

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