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武安一中2024——2025学年第二学期4月期中考试
高二 生物
一、单项选择题（本题共有18小题，每题只有一个选项正确，每小题2分，共36分）
1.制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。 关于食用醋的发酵的叙述错误的是(　　)
A．菌种主要利用的是乳酸菌 B．需要在氧气充足条件下进行发酵
C．醋酸的合成发生在细胞质基质 D．糖源充足时，制醋的过程有气体产生
2.无菌操作是生物实验中的一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（ ）
A.传统泡菜的制作 B.酵母菌的纯培养
C.动物细胞的传代培养 D.花药离体培养
3.稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一。土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法错误的是(　　)
A.筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基
B.纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种
C.在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶
D.可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株
4.某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如图。下列相关操作或叙述正确的是(　　)
A.将细菌接种在固体培养基X上可采用平板划线法
B.根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
C.配制的培养基需经湿热灭菌后调整pH，冷却后倒平板
D.固体培养基X对菜品中的细菌没有选择性
5.聚苯乙烯是制造碗装泡面盒、发泡快餐盒的材料。某兴趣小组试图从土壤中分离能分解聚苯乙烯的细菌，相关流程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A.若稀释倍数都为10，则x应为8
B.接种时应在酒精灯火焰旁进行，可将培养皿皿盖完全打开
C.将涂布器放在火焰上燃烧后立即进行涂布
D.应至少涂布三个平板，求菌落数的平均值
6.下列关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，正确的是（ ）
A.植物通过光合作用自养，因此，在植物组织培养的培养基中不需要添加有机物
B.植物组织培养和动物细胞培养分别是植物细胞工程和动物细胞工程的基础
C.植物组织培养必须在无光条件下进行，动物细胞培养对光照无要求
D.植物组织培养和动物细胞培养均可用于检测有毒物质
7.甘草是中医使用最多的药材之一，其提取物中的黄酮具有抗衰老、抗炎等作用。如图表示利用悬浮培养生产甘草黄酮的过程。下列叙述正确的是( )
A.可用次氯酸钠和酒精对种子进行灭菌
B.图中添加果胶酶的主要目的是获得原生质体
C.对细胞悬液进行人工诱变，其变异率常高于对器官或个体进行诱变
D.图示过程能体现植物细胞的全能性
8.人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产等都离不开动物细胞培养。下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（　　）
A.动物细胞培养所需的气体条件是95%氧气加5%二氧化碳
B.动物细胞培养基中加入血清的主要目的是补充细胞所需的未知成分
C.动物细胞培养的原理和植物组织培养的原理相同
D.为保证培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，培养液和培养用具等需要进行消毒处理
9.PHA是一种重要的可降解材料，中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜或餐厨垃圾为原料在实验室发酵生产PHA，工艺流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ）
A.菌种扩大培养是发酵工程的中心环节
B.为避免杂菌污染，可适当降低发酵液中盐的浓度
C.发酵罐内发酵要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件
D.发酵结束之后，采取适当的过滤、沉淀措施获得PHA
10.黄桃精酿啤酒的制作工艺与普通啤酒有所不同，生产工艺流程为：麦芽→粉碎→糖化→过滤→煮沸→主发酵→后发酵(添加黄桃汁)→低温冷藏→成品→罐装。下列说法正确的是(　　)
A.利用大麦作原料时，淀粉是酵母菌的直接碳源
B.啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成都在后发酵阶段完成
C.糖化是让麦芽糖分解形成糖浆，煮沸能够使酶失活及对糖浆灭菌
D.“精酿”啤酒发酵完成后，通常不需要进行过滤和消毒处理
11.我国科学家成功地用iPS细胞克隆出了活体小鼠，部分流程如图所示，其中Kdm4d为组蛋白去甲基化酶，TSA为组蛋白去乙酰化酶抑制剂。下列说法正确的是( )
A.组蛋白去乙酰化和去甲基化有利于重构胚后续的胚胎发育过程
B.用电刺激、Ca2＋载体等方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程
C.过程③中诱导细胞融合体现了细胞膜的选择透过性
D.图示流程运用了重组DNA、体细胞核移植、胚胎移植等技术
12.水牛养殖是中国重要的农业产业之一。与传统繁殖方法相比，家畜胚胎工程技术可以挖掘动物的繁殖潜力，提升家畜种质资源质量。下列叙述正确的是( )
A.培养动物细胞时，培养基中除加入细胞所需各种营养物质外，还需加入琼脂
B.胚胎分割技术可以增加同卵多胚的数量，同时也提高了移植胚胎的成活率
C.收集胚胎在早期胚胎和子宫建立联系之前完成，这样可提高胚胎的成活率
D.克隆牛的培育过程中常采用注射性激素的方法对良种母牛做超数排卵处理
13.犬疱疹病毒病是一种由犬疱疹病毒引起的急性、全身出血性坏死的犬类传染病。gD蛋白是犬疱疹病毒囊膜的重要组成部分，可诱导机体产生免疫应答。研究人员首先利用转基因技术制备了gD蛋白，又以gD蛋白为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A.与小鼠骨髓瘤细胞融合前，细胞甲需要通过原代和传代培养扩大细胞数量
B.与诱导原生质体融合相比，①过程特有的方法是灭活病毒诱导法
C.仅有杂交瘤细胞能在第1次筛选使用的培养基上生长
D.体外培养经抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞是获得大量单克隆抗体的方法之一
14.目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ）
A.将外源基因整合到精子的染色体上，可保证外源基因稳定遗传
B.①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理
C.②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核的融合
D.精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小
15.如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述错误的是（　　）
A.①→②过程可用不同的限制酶分别切割Ti质粒和含抗虫基因的DNA
B.②→③过程可用Ca2+处理农杆菌细胞
C.③→④过程是将重组Ti质粒整合到受体植物细胞的染色体DNA上
D.④→⑤过程体现了植物细胞的全能性，不同阶段所需的培养条件不同
16.关于基因表达载体构建及其组件相关说法正确的是（ ）
A.启动子是与DNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录
B.构建基因表达载体时，一般要用同种限制酶切割含有目的基因的片段和载体
C.构建基因表达载体时，目的基因的转录模板链的5＇端应与启动子连接
D.基因上的终止密码子能够使转录在相应的位置停止
17.PCR引物的3′端有结合模板DNA的关键碱基，5′端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列。下列相关叙述错误的是(　　)
A.图中两条子链合成一定都是从5′端向3′端延伸
B.图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短有关
C.用图示引物扩增5次后，可以产生22个目标产物
D.PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过程中需要及时补充
18.关于DNA片段的扩增及电泳鉴定的实验，下列相关叙述错误的是(　　)
A.根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，加热到熔化，稍冷却后加入核酸染料混匀
B.电泳鉴定PCR产物时加样缓冲液中的指示剂可提示终止时刻
C.PCR技术中，提高复性的温度能有效减少反应非特异条带的产生
D.用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近
二、多项选择题（本题共有6小题，每题有两个或多个选项正确，每小题3分，漏答1分，错答0分，共18分）
19.柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂。如图为研究人员以红薯粉为原料经黑曲霉发酵生产柠檬酸的简要流程图。下列说法错误的是(　　)
A.黑曲霉与生产果醋和腐乳时所用主要微生物的代谢类型相同
B.将菌种接种至a培养基时，浸泡在酒精中的涂布器使用前需在火焰上灼烧
C.将菌种转接至b培养基的目的是增加黑曲霉菌种数量
D.若发酵罐c中的原料为大豆粉，可利用黑曲霉水解大豆中的淀粉制成酱油
20.如图为经过体外受精和胚胎分割、移植培育优质奶牛的过程，A、B表示结构。下列叙述错误的是（ ）
A.A为次级卵母细胞，B为内细胞团
B.囊胚的滋养层可用于性别鉴定
C.进行胚胎分割时，应选择发育良好的囊胚或原肠胚
D.胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
21.甲品种青花菜具有由核基因控制的多种优良性状，另一远缘植物乙的细胞质中存在抗除草剂基因，欲将乙细胞质中的抗性基因引入甲中。下列相关叙述正确的是( )
A.操作过程中生物材料、培养基、培养环境都要严格灭菌
B.过程a中取顶芽细胞进行体细胞杂交有利于获得脱毒苗
C.过程b中可以用物理法或化学法诱导原生质体融合
D.过程c中只有活性部位互补的融合细胞才可以正常生长
22.研究表明，髓系细胞触发受体2(TREM2)是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。如图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法错误的是( )
A.步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞
B.经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖
C.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原—抗体杂交
D.步骤⑥的细胞在体外分瓶培养时需要先用胰蛋白酶处理，再用离心法收集细胞
23.多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体才能获得后代。如图列举了几项技术成果。下列叙述不正确的是( )
A.无需考虑受体与供体是否是同一物种
B.①技术需获得M Ⅱ期的去核卵母细胞
C.②技术不能对动物100%的复制
D.③可通过②技术实现扩大化生产，①②可通过③技术实现性状改良
24.基因定点突变的目的是通过定向改变基因内一个或少数几个碱基来改变多肽链上一个或几个氨基酸。大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变仅需进行两轮PCR反应即可获得，第一轮加诱变引物和侧翼引物，第一轮产物作为第二轮PCR扩增的大引物，过程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．第一轮PCR过程中复性所用的温度应低于第二轮PCR复性的温度
B．第一轮PCR需进行3次循环才能得到目标产物
C．第一轮PCR的产物的两条DNA链作为第二轮PCR所用的引物
D．将某蛋白质的第21位组氨酸(CAC)改造成酪氨酸(UAC)，属于蛋白质工程
三、简答题（本题共有5个大题 。共46分）
25.（10分）研究发现，从活性污泥中能筛选出对蓝色的2BLN染料废水具有高效脱色能力的菌株，它们通过降解具有生物毒性的分散蓝2BLN而降低废水危害。图1表示目标菌株GN－1的筛选流程，图2表示GN－1菌株接种量对脱色效果影响的实验结果。回答下列问题：
(1)图中将菌液接种到含分散蓝2BLN的LB固体培养基上所用的接种方法是 ，该接种方法要求对菌液做充分的稀释，目的是 。
(2)图1中菌种①和③的周围出现透明圈，透明圈形成的原理是 。菌种①～④中，最符合要求的是 。
(3)据图2可知，GN－1菌株接种量对脱色效果的影响是 。
26.（7分）Rag 基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞，科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag 基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
(1)培养Rag 基因缺失小鼠上皮细胞时需满足以下条件：一定的营养、无菌无毒的环境、
、 。
(2)步骤①中，在核移植前需将采集到的卵母细胞培养至 期去“核”，该“核”实际是指 。
(3))过程②通常用去核卵细胞作受体细胞的原因除了它体积大易操作、营养物质丰富外，还因为它的细胞质中可能含有 。
(4)ES必须从 中获取，这涉及伦理问题，限制了它在医学上的应用。干细胞用于临床治疗还面临一些问题，如存在导致 发生的风险。
27.（8分）为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体一药物偶联物（ADC），过程如图1所示。
(1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自 。
(2)步骤①常用方法包括 融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。其中灭活病毒诱导融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与 发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
(3)步骤②的细胞必须经过步骤③ 才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，符合要求的杂交瘤细胞的特点是 。
(4)研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。
①单克隆抗体除可以运载药物外，还有 、 等作用。
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致 。
28.（9分）如图是构建基因表达载体的示意图，回答下列问题：
(1)基因工程操作中的核心步骤是 。重组质粒载体的核心部件有目的基因、启动子、 。
(2)引物是一小段能与 碱基互补配对的单链DNA。图中合成引物时，在引物5′端添加限制酶识别序列的原因是 。
(3)PCR扩增目的基因需在一定的缓冲溶液中进行，每一次循环过程包括94℃变性、50℃复性、
三个步骤。PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋，作用是 。PCR反应完成后，常采用 技术来鉴定PCR的产物。
(4)构建基因表达载体时，选用双酶切切割质粒载体和目的基因的目的有
（写出两点)，
图中的T4 DNA连接酶能使目的基因片段和质粒载体片段之间形成_ 键。
29.（12分）金属硫蛋白(MT)是一类具有金属结合能力的多肽，金属离子如Ag 、Hg ,Cd 等能够与 MT的半胱氨酸上的巯基共价结合而形成络合物，从而降低金属离子对细胞的毒害。研究人员获取了柽柳和星星草MT基因的 mRNA，并最终构建了具有两种植物的MT基因载体，导入烟草，研究转基因烟草对Cd 的耐受力，回答下列问题：
(1)由于 PCR 技术不能直接扩增mRNA,因此实验室常用“RT-PCR 技术”来实现目的基因的获取和扩增，据此可知在进行“RT-PCR 技术”时应当在仪器中添加 酶、 酶、 引物、dNTP、缓冲体系。
(2)下图是pROKII质粒、柽柳MT 基因(MTcI)和星星草 MT 基因(MTx) 的相关序列示意图。
将柽柳 MT 基因连接到 pROKⅡ质粒中，应选用的限制酶是 。 若甲和乙连接到同一个pROKII中，为了使重组质粒能够同时独立表达柽柳和星星草的MT，则 MTx还需要连接
序列进行优化。
(3)重组质粒进行转化后，提取烟草总DNA，用特异性引物进行扩增得到 序列，可检测目的基因是否已整合到烟草的基因组中。为研究转基因烟草对不同浓度 Cd 的耐受力，实验思路为：将转基因烟草幼苗分别移入 的MS 生根培养基中，观察烟草的生长状态。武安一中2024——2025学年第二学期4月期中考试
高二 生物
一、单项选择题（共18小题，每小题2分，共36分）
1.制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。 关于食用醋的发酵的叙述错误的是(　　)
A．菌种主要利用的是乳酸菌
B．需要在氧气充足条件下进行发酵
C．醋酸的合成发生在细胞质基质
D．糖源充足时，制醋的过程有气体产生
答案　A
解析　食用醋的发酵菌种为醋酸菌，A错误。醋酸菌为严格的异养需氧型原核生物，BC正确。糖源和氧气都充足时，醋酸菌将葡萄糖分解产生乙酸、CO2和水，D正确。
2．无菌操作是生物实验中的一项重要的基本操作。下列过程不需要严格无菌操作的是（ ）
A.传统泡菜的制作 B.酵母菌的纯培养 C.动物细胞的传代培养 D.花药离体培养
答案　A
3.稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最为严重的真菌病害之一。土壤中某些微生物能合成并分泌几丁质酶，能抑制稻瘟菌的生长，可用于稻瘟病的防治。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶。下列说法错误的是(　　)
A．筛选土壤中目的微生物时需用以几丁质为唯一碳源的培养基
B．纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种
C．在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落均能分泌几丁质酶
D．可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株
答案　C
解析　筛选土壤中目的微生物即降解几丁质的微生物时，应用几丁质为唯一碳源的培养基进行筛选，A正确；纯化培养时，可选择稀释涂布平板法或平板划线法接种，两种方法均可得到单菌落，B正确；在以几丁质为唯一碳源的培养基上生长的菌落不一定都能分泌几丁质酶，可能部分是以几丁质的分解产物为碳源的微生物，C错误；水解圈是微生物产生几丁质酶水解几丁质产生的，“水解圈直径/菌落直径”的值越大，说明该菌降解能力越强，故可依据单菌落周围“水解圈直径/菌落直径”的值来筛选目的菌株，D正确。
4.某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如图。下列相关操作或叙述正确的是(　　)
A．将细菌接种在固体培养基X上可采用平板划线法
B．根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
C．配制的培养基需经湿热灭菌后调整pH，冷却后倒平板
D．固体培养基X对菜品中的细菌没有选择性
答案　D
解析　据题意可知，在固体培养基X上接种后还需进行计数，故只能用稀释涂布平板法接种而不能用平板划线法，A错误；在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，B错误；配制的培养基需调整pH后经湿热灭菌，冷却后倒平板，C错误；固体培养基X没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，D正确。
5.聚苯乙烯是制造碗装泡面盒、发泡快餐盒的材料。某兴趣小组试图从土壤中分离能分解聚苯乙烯的细菌，相关流程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．若稀释倍数都为10，则x应为8
B．接种时应在酒精灯火焰旁进行，可将培养皿皿盖完全打开
C．将涂布器放在火焰上燃烧后立即进行涂布
D．应至少涂布三个平板，求菌落数的平均值
答案　D
解析　若稀释倍数都为10，则x应为18，A错误；接种时应在酒精灯火焰旁进行，但不能将培养皿皿盖完全打开，B错误；将涂布器放在火焰上燃烧，等冷却后再进行涂布，C错误。
6.下列关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，正确的是（ ）
A．植物通过光合作用自养，因此，在植物组织培养的培养基中不需要添加有机物
B．植物组织培养和动物细胞培养分别是植物细胞工程和动物细胞工程的基础
C．植物组织培养必须在无光条件下进行，动物细胞培养对光照无要求
D．植物组织培养和动物细胞培养均可用于检测有毒物质
答案 B
解析 植物组织培养：①原理：植物细胞的全能性；②培养基：MS培养基（固体），通常需要加入生长素和细胞分裂素诱导；③主要过程：脱分化和再分化；④培养目的：快速繁殖或获得脱毒苗等。
在分化形成叶片之前植物细胞不能进行光合作用，因此植物组织培养的培养基中需要加入蔗糖等有机物，A错误；植物组织培养是植物细胞工程的基础，动物细胞培养是动物细胞工程的基础，B正确；植物组织培养再分化阶段必须给予光照，但愈伤组织的形成一般不需要光照，动物细胞培养对光照无要求，C错误；植物组织培养不能用于检测有毒物质，动物细胞培养可用于检测有毒物质，D错误。
7.甘草是中医使用最多的药材之一，其提取物中的黄酮具有抗衰老、抗炎等作用。如图表示利用悬浮培养生产甘草黄酮的过程。下列叙述正确的是( )
A.可用次氯酸钠和酒精对种子进行灭菌
B.图中添加果胶酶的主要目的是获得原生质体
C.对细胞悬液进行人工诱变，其变异率常高于对器官或个体进行诱变
D.图示过程能体现植物细胞的全能性
答案　C
解析　可用酒精和次氯酸钠先后对外植体进行消毒，A错误；图中果胶酶的作用是细胞分散，B错误，悬浮培养的细胞分裂旺盛，受到外界因素的影响易发生突变，C正确；该过程没有得到完整的植物体，没有体现植物细胞的全能性。
8.人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产等都离不开动物细胞培养。下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（　　）
A．动物细胞培养所需的气体条件是95%氧气加5%二氧化碳
B．动物细胞培养基中加入血清的主要目的是补充细胞所需的未知成分
C．动物细胞培养的原理和植物组织培养的原理相同
D．为保证培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，培养液和培养用具等需要进行消毒处理
答案 B
解析 动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境：培养液和所有培养用具需要进行灭菌处理，以及在无菌环境下进行操作。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害；②营养：使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分；③温度、pH、渗透压：哺乳动物多是36.5℃左右，适宜pH为7.2-7.4；④气体环境：95%空气+5%CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。其具体流程为：接种外植体→诱导愈伤组织→诱导生芽→诱导生根→移栽成活。
【详解】 动物细胞培养所需的气体条件是95%空气加5%二氧化碳，A错误；动物细胞培养所需的培养基是合成培养基，其中含有水、无机盐、氨基酸等，除此之外还需要加入血清，补充动物细胞需要但还未知的一些成分，B正确；动物细胞培养的原理是细胞增殖（有丝分裂），而植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，C错误；动物细胞培养需要无菌、无毒的环境，对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素；定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害，D错误。
9.PHA是一种重要的可降解材料，中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜或餐厨垃圾为原料在实验室发酵生产PHA，工艺流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．菌种扩大培养是发酵工程的中心环节
B．为避免杂菌污染，可适当降低发酵液中盐的浓度
C．发酵罐内发酵要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件
D．发酵结束之后，采取适当的过滤、沉淀措施获得PHA
答案　C
解析　发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，A错误:嗜盐单胞菌H需要一定的盐浓度，其他微生物则不能在较高的盐浓度下生长，提高发酵液中盐的浓度-定程度上可以避免杂菌污染，B错误;在发酵过程中，需随时监测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程，还要及时添加必需的营养组分，严格控制温度、pH和溶解氧等条件C正确；发酵结束之后，对于菌体可采取适当的过滤、沉淀措施来分离:而对于菌体的代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品，D错误。
10.黄桃精酿啤酒的制作工艺与普通啤酒有所不同，生产工艺流程为：麦芽→粉碎→糖化→过滤→煮沸→主发酵→后发酵(添加黄桃汁)→低温冷藏→成品→罐装。下列说法正确的是(　　)
A．利用大麦作原料时，淀粉是酵母菌的直接碳源
B．啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成都在后发酵阶段完成
C．糖化是让麦芽糖分解形成糖浆，煮沸能够使酶失活及对糖浆灭菌
D．“精酿”啤酒发酵完成后，通常不需要进行过滤和消毒处理
答案　D
解析　利用大麦作原料时，葡萄糖是酵母菌的直接碳源，A错误。啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵；大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成，B错误。糖化是让淀粉分解形成糖浆，C错误。
10（备选）．抗体-药物偶联物（ADC）通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。下列说法不正确的是（ ）
A．单克隆抗体可用于疾病的治疗和运载药物，具有位置准确、疗效高、毒副作用小的优点
B．制备单克隆抗体时，可将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中，从小鼠腹水中获取
C．ADC发挥作用后引起细胞中相关基因表达，进而引起细胞被动死亡
D．ADC中的抗体起靶向识别肿瘤细胞的作用，连接的药物起到杀伤肿瘤细胞的作用
答案 C
解析 ADC最终引起细胞凋亡，细胞凋亡是基因所决定的细胞自动结束生命的过程，C错误。
11.我国科学家成功地用iPS细胞克隆出了活体小鼠，部分流程如图所示，其中Kdm4d为组蛋白去甲基化酶，TSA为组蛋白去乙酰化酶抑制剂。下列说法正确的是( )
A.组蛋白去乙酰化和去甲基化有利于重构胚后续的胚胎发育过程
B.用电刺激、Ca2＋载体等方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程
C.过程③中诱导细胞融合体现了细胞膜的选择透过性
D.图示流程运用了重组DNA、体细胞核移植、胚胎移植等技术
答案　B
解析　结合题图，重构胚在加入中Kdm4d的mRNA和TSA后，发育成克隆鼠，而Kdm4d的mRNA表达产物为组蛋白去甲基化酶，可以使组蛋白去甲基化，TSA为组蛋白脱乙酰酶抑制剂，抑制组蛋白脱乙酰酶的作用，保持组蛋白乙酰化，即组蛋白乙酰化和去甲基化有利于重构胚后续的胚胎发育过程，A错误;在体细胞核移植过程中，用物理方法或化学方法(如电刺激、钙离子载体、乙醇、蛋白质合成酶抑制剂等)激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，B正确;③为动物细胞融合的过程，现了细胞膜的流动性C错误;图示流程运用了体细胞核移植、胚胎移植等技术并未运用重组 DNA技术，D错误。
12.水牛养殖是中国重要的农业产业之一。与传统繁殖方法相比，家畜胚胎工程技术可以挖掘动物的繁殖潜力，提升家畜种质资源质量。下列叙述正确的是( )
A.培养动物细胞时，培养基中除加入细胞所需各种营养物质外，还需加入琼脂
B.胚胎分割技术可以增加同卵多胚的数量，同时也提高了移植胚胎的成活率
C.收集胚胎在早期胚胎和子宫建立联系之前完成，这样可提高胚胎的成活率
D.克隆牛的培育过程中常采用注射性激素的方法对良种母牛做超数排卵处理
答案　C
解析　动物细胞培养用培养液，不需要加入琼脂，A错误；胚胎分割次数越多，胚胎移植成活率越低，B错误，可用促性腺激素对良种母牛做超数排卵处理，用性激素可能会造成性腺萎缩，D错误。
13.犬疱疹病毒病是一种由犬疱疹病毒引起的急性、全身出血性坏死的犬类传染病。gD蛋白是犬疱疹病毒囊膜的重要组成部分，可诱导机体产生免疫应答。研究人员首先利用转基因技术制备了gD蛋白，又以gD蛋白为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，细胞甲需要通过原代和传代培养扩大细胞数量
B．与诱导原生质体融合相比，①过程特有的方法是灭活病毒诱导法
C．仅有杂交瘤细胞能在第1次筛选使用的培养基上生长
D．体外培养经抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞是获得大量单克隆抗体的方法之一
答案 A
解析 细胞甲是B细胞，从小鼠脾脏分离得到，所以不需要通过原代培养扩大细胞数量，A错误；与诱导原生质体融合（电刺激、聚乙二醇诱导）相比，①过程特有的方法是灭活病毒诱导法，B正确；仅有杂交瘤细胞能在第1次筛选使用的培养基（HAT培养基）上生长，C正确；经抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体，D正确。
14.目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ）
A．将外源基因整合到精子的染色体上，可保证外源基因稳定遗传
B．①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理
C．②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核的融合
D．精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小
答案 B
【分析】分析题图：图示表示培育转基因鼠的基本流程，其中①是筛选获得导入外源基因的精子的过程，②是体外受精过程，③是早期胚胎培养过程，④是胚胎移植过程。
解析 受精卵中几乎不含精子的细胞质，将外源基因整合到精子的染色体上，是保证外源基因稳定遗传的关键，A正确；①过程需将成熟的精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体溶液中，用化学药物诱导精子获能，获能是指获得受精的能力而不是获得能量，因此不是放在ATP溶液中，B错误；受精是精子和卵细胞的结合，②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合，C正确；与显微注射法相比，精子载体法对受精卵中核的影响会更小，理由是不需要穿过核膜，雌雄原核自动融合（通过受精作用完成整合），D正确。
15.如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述错误的是（　　）
A．①→②过程可用不同的限制酶分别切割Ti质粒和含抗虫基因的DNA
B．②→③过程可用Ca2+处理农杆菌细胞
C．③→④过程是将重组Ti质粒整合到受体植物细胞的染色体DNA上
D．④→⑤过程体现了植物细胞的全能性，不同阶段所需的培养条件不同
答案 C
【分析】图示是利用基因工程培育抗虫植物的示意图，其中①为质粒，作为运载体；②为重组质粒；③为含有重组质粒的农杆菌；④为含有目的基因的植物细胞；⑤为转基因植株。
【详解】①→②过程是构建基因表达载体，可用相同或不同的限制酶分别切割Ti质粒和含抗虫基因的DNA，Ti质粒和含抗虫基因的DNA能产生相同的末端即可，A正确；②→③过程是将重组Ti质粒转入农杆菌，农杆菌是细菌，可用Ca2+处理农杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境DNA分子的生理状态，从而将重组Ti质粒转入农杆菌，B正确；③→④过程是将重组Ti质粒导入植物细胞，重组Ti质粒上的T DNA才能整合到受体植物细胞的染色体DNA上，C错误；④→⑤过程是植物组织培养，体现了植物细胞的全能性，不同阶段所需的光照、营养条件等不同，D正确。
16.关于基因表达载体构建及其组件相关说法正确的是（ ）
A.启动子是与DNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录
B.Taq DNA聚合酶能使DNA子链从5＇端向3＇端延伸
C.构建基因表达载体时，目的基因的转录模板链的5＇端应与启动子连接
D.基因上的终止密码子能够使转录在相应的位置停止
答案 B
16.（备选）将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因Pin-Ⅱ导入杨树细胞，培育抗虫杨树。如图表示利用含目的基因的DNA分子和Ti质粒构建基因表达载体的过程，图中AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，NeoR表示新霉素抗性基因，箭头表示限制酶的酶切位点，相关酶的识别序列如表所示。下列叙述正确的是（ ）

A．利用PCR扩增目的基因时，应该选择引物2和引物3并在引物3′端添加相应酶切位点
B．为使目的基因与质粒高效重组，选用KpnI和HindII比选用KpnI和SmaI效果更好
C．为将表达载体导入农杆菌，可以使用离心法或PEG融合法处理受体细胞
D．成功导入目的基因的杨树细胞既具有氨苄青霉素抗性，又有新霉素抗性
答案 B
【分析】基因工程包括四个基本程序：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细 胞、目的基因的检测与鉴定。
【详解】DNA聚合酶只能从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，利用PCR扩增目的基因时，应该选择引物2和引物3，但应该在引物5'端添加相应酶切位点，A错误；为使目的基因与质粒高效重组，选用KpnⅠ和HindⅢ比选用KpnⅠ和SmaⅠ效果更好，因为SmaI切割DNA后形成平末端，T4DNA连接酶连接平末端的效率相对较低，B正确；为将表达载体导入农杆菌，可以使用Ca2+处理受体细胞，使其处于能吸收周围环境中DNA分子的状态，然后再将重组质粒导入其中；而离心法或PEG融合法是诱导植物细胞融合的方法，C错误；只有T-DNA区段会导入植物受体细胞，因此氨苄青霉素抗性基因不会导入植物受体细胞中，即成功导入目的基因的杨树细胞只能表现出新霉素抗性，D错误。
17.PCR引物的3′端有结合模板DNA的关键碱基，5′端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列。下列相关叙述错误的是(　　)
A．图中两条子链合成一定都是从5′端向3′端延伸
B．图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短有关
C．用图示引物扩增5次后，可以产生22个目标产物
D．PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过程中需要及时补充
答案 D
解析 TaqDNA聚合酶只能从引物的3'端开始延伸DNA子链，所以两条子链合成一定都是从5端向3'端延伸，A正确:图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短、碱基组成等有关，引物长度越长或者GC含量越高，则复性的温度设置越高，B正确:经过5次循环后会产生25=32个，其中只有2个DNA分子含有最初的模板链，另仅含有第一次复制产生的单链参与形成的DNA分子有8个，因此经过5次复制产生等长的目的基因片段32-10=22个，C正确;PCR所需要的引物和原料是一次性添加的，在实验过程中不需要补充，D错误。
18.关于DNA片段的扩增及电泳鉴定的实验，下列相关叙述错误的是(　　)
A． 根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，加热到熔化，稍冷却后加入核酸染料混匀（ ）
B.电泳鉴定PCR产物时加样缓冲液中的指示剂可提示终止时刻（ ）
C.PCR技术中，提高复性的温度能有效减少反应非特异条带的产生（ ）
D.用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近（ ）
答案　D
二、多项选择题（本大题共有6小题，每小题3分，有两个或多个选项正确，漏答1分，错答0分）
19.柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂。如图为研究人员以红薯粉为原料经黑曲霉发酵生产柠檬酸的简要流程图。下列说法错误的是(　　)
A．黑曲霉与生产果醋和腐乳时所用主要微生物的代谢类型相同
B．将菌种接种至a培养基时，浸泡在酒精中的涂布器使用前需在火焰上灼烧
C．将菌种转接至b培养基的目的是增加黑曲霉菌种数量
D．若发酵罐c中的原料为大豆粉，可利用黑曲霉水解大豆中的淀粉制成酱油
答案　BD
解析　由培养时需要通气振荡可知，黑曲霉生长需要氧气，因此其代谢类型为异养需氧型，制作果醋利用的是醋酸菌，制作腐乳利用的是毛霉，它们的代谢类型均为异养需氧型，A正确；将菌种接种至a培养基时，平板划线法的接种工具接种环在使用前需在火焰上灼烧灭菌，B错误；将菌种转接至b培养基是将菌种转接至新的培养基，目的是进行扩大培养，从而增加菌种的数量，C正确；以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌(如黑曲霉)，将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制可以制成酱油产品，D错误。
20.如图为经过体外受精和胚胎分割、移植培育优质奶牛的过程，A、B表示结构。下列叙述错误的是（ ）
A．A为次级卵母细胞，B为内细胞团
B．囊胚的滋养层可用于性别鉴定
C．进行胚胎分割时，应选择发育良好的囊胚或原肠胚
D．胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
答案A　C
21.甲品种青花菜具有由核基因控制的多种优良性状，另一远缘植物乙的细胞质中存在抗除草剂基因，欲将乙细胞质中的抗性基因引入甲中。下列相关叙述正确的是( )
A.操作过程中生物材料、培养基、培养环境都要严格灭菌
B.过程a中取顶芽细胞进行体细胞杂交有利于获得脱毒苗
C.过程b中可以用物理法或化学法诱导原生质体融合
D.过程c中只有活性部位互补的融合细胞才可以正常生长
答案　BCD
解析　操作过程中生物材料需要进行消毒，培养基、培养环境需要灭菌，培养时也要定期消毒，A错误;茎尖或芽尖(分生组织)病毒极少甚至无病毒，进行植物组织培养有利于获得脱毒苗，B正确; 过程B为诱导原生质体融合，诱导方法有物理法和化学法，如聚乙二醇、离心等，C正确: 据图分析，原生质体甲细胞质经处理失活，原生质体乙经处理细胞核失活，因此过程C中只有活性部位互补的融合细胞具有完整的细胞结构，可以正常生长，D正确。22.研究表明，髓系细胞触发受体2(TREM2)是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。如图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法错误的是( )
A.步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞
B.经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖
C.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原—抗体杂交
D.步骤⑥的细胞在体外分瓶培养时需要先用胰蛋白酶处理，再用离心法收集细胞
答案　BCD
解析　单克隆抗体的制备过程:
(1)制备产生抗体的B淋巴细胞:向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞:
(2)获得杂交瘤细胞:①将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合;②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体
(3)克隆化培养和抗体检测:
(4)将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖;
(5)提取单克隆抗体:从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。
【详解】步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞:步骤向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A正确:经步骤②诱导后融合的细胞只有杂交瘤细胞才能既能分泌TREM2抗体又可无限增殖，B错误:步骤③是特定培养基筛选杂交瘤细胞，步骤④是抗原-抗体杂交，C错误:步骤⑥为杂交瘤细胞，在体外培养时不会发生接触抑制，悬浮培养的细胞直接用离心法收集，D错误。
23.多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体才能获得后代。如图列举了几项技术成果。下列叙述不正确的是( )
A.无需考虑受体与供体是否是同一物种
B.①需获得M Ⅱ期的去核卵母细胞
C.②不能对动物100%的复制
D.③可通过②技术实现扩大化生产，①②可通过③技术实现性状改良
答案　AB
解析　受体和供体需同种生理状态相同。A错误。①为体外受精和胚胎移植的产物，卵母细胞不需要去核，B错误。
24.基因定点突变的目的是通过定向改变基因内一个或少数几个碱基来改变多肽链上一个或几个氨基酸。大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变仅需进行两轮PCR反应即可获得，第一轮加诱变引物和侧翼引物，第一轮产物作为第二轮PCR扩增的大引物，过程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．第一轮PCR过程中复性所用的温度应低于第二轮PCR复性的温度
B．第一轮PCR需进行3次循环才能得到目标产物
C．第一轮PCR的产物的两条DNA链作为第二轮PCR所用的引物
D．将某蛋白质的第21位组氨酸(CAC)改造成酪氨酸(UAC)，属于蛋白质工程
答案 AD
解析　第一轮所用引物较短，所用复性温度较第二轮低，A正确；第一轮PCR需要进行2次循环才能得到目标产物，B错误；第一轮PCR产物中的一条链作为第二轮PCR的一种引物，C错误。
三、简答题（共46分）
25.研究发现，从活性污泥中能筛选出对蓝色的2BLN染料废水具有高效脱色能力的菌株，它们通过降解具有生物毒性的分散蓝2BLN而降低废水危害。图1表示目标菌株GN－1的筛选流程，图2表示GN－1菌株接种量对脱色效果影响的实验结果。回答下列问题：
(1)图中将菌液接种到含分散蓝2BLN的LB固体培养基上所用的接种方法是__________________，该接种方法要求对菌液做充分的稀释，目的是_____________。
(2)图1中菌种①和③的周围出现透明圈，透明圈形成的原理是_________________。菌种①～④中，最符合要求的是__________。
(3)据图2可知，GN－1菌株接种量对脱色效果的影响是_______________________。
答案　(1)稀释涂布平板法　使细菌分散成单个细胞，在平板上获得单菌落　(2)菌种①和③可降解分散蓝2BLN，分散蓝2BLN被降解后蓝色消失形成透明圈　菌种③　(3)随着接种量的增大，GN－1菌株对分散蓝2BLN的脱色率逐渐提高
解析　(1)根据培养基中菌落的分布可知，向含分散蓝2BLN的LB固体培养基上进行接种的方法是稀释涂布平板法。用稀释涂布平板法接种时，要对菌液进行充分的稀释，可以使细菌分散成单个细胞，在平板上获得单菌落。(2)图1中的菌种①和③可以降解分散蓝2BLN，从而使菌落周围的蓝色消失，形成透明圈。菌种③周围透明圈直径与菌落直径的比值较大，所以菌种③降解分散蓝2BLN的能力较强。(3)分析图2可知，随着GN－1菌株接种量的增大，GN－1菌株对分散蓝2BLN的脱色率逐渐提高。
26.Rag 基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞，科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag 基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
(1)培养Rag 基因缺失小鼠上皮细胞时需满足以下条件：营养、无菌无毒的环境、
、 。
(2)步骤①中，在核移植需将采集到的卵母细胞培养至 期去核，该“核”具体是指 。
(3))过程②通常用去核卵细胞作受体细胞的原因除了它体积大易操作、营养物质丰富外，还因为它的细胞质中可能含有 。
(4)ES必须从 中获取，这涉及伦理问题，限制了它在医学上的应用。干细胞用于临床治疗还面临一些问题，如存在导致 发生的风险。
【答案】
(1)适宜的温度和pH 气体环境
(2) MⅡ 纺锤体-染色体复合物
(3) )促进细胞核全能性表达的物质
(5) （早期） 胚胎 肿瘤
27.为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体一药物偶联物（ADC），过程如图1所示。
(1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自 。
(2)步骤①常用方法包括 融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。其中灭活病毒诱导融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与 发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
(3)步骤②的细胞必须经过步骤③ 才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，符合要求的杂交瘤细胞的特点是 。
(4)研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。
①单克隆抗体除可以运载药物外，还有 、 等作用。
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致 。
【答案】(1)人的乳腺癌细胞
PEG/聚乙二醇 细胞膜上的糖蛋白
克隆化培养和抗体检测 既能大量增殖，又能产生特定抗体
(4) 作为诊断试剂 治疗疾病 癌细胞凋亡
28.如图是构建基因表达载体的示意图，回答下列问题：
(1)基因工程操作中的核心步骤是 。重组质粒载体的核心部件有目的基因、启动子、 、 、复制原点等。
(2)引物是一小段能与 碱基互补配对的单链DNA。图中合成引物时，在引物5′端添加限制酶识别序列的原因是 。
(3)PCR扩增目的基因需在一定的缓冲溶液中进行，每一次循环过程包括94℃变性、50℃复性、 三个步骤。PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋，作用是 。PCR反应完成后，常采用 技术来鉴定PCR的产物。
(4)构建基因表达载体时，选用双酶切切割质粒载体和目的基因的目的有
写出两点)，图中的T4 DNA连接酶能使目的基因片段和质粒载体片段之间形成_ 键。
答案
(1)构建基因表达载体　终止子　标记基因
(2)目的基因(或DNA母链)　使扩增的目的基因含有限制酶的识别序列，便于切割后与载体连接并且不影响目的基因的复制　
(3)72℃延伸 激活DNA聚合酶　琼脂糖凝胶电泳　
(4)保证目的基因片段插入的方向正确、防止质粒载体或目的基因的自连　磷酸二酯
29.金属硫蛋白(MT)是一类具有金属结合能力的多肽，金属离子如Ag 、Hg ,Cd 等能够与 MT的半胱氨酸上的巯基共价结合而形成络合物，从而降低金属离子对细胞的毒害。研究人员获取了柽柳和星星草 MT基因的 mRNA，并最终构建了具有两种植物的MT基因载体，导入烟草，研究转基因烟草对Cd 的耐受力，回答下列问题：
(1)由于 PCR 技术不能直接扩增mRNA,因此实验室常用“RT-PCR 技术”来实现目的基因的获取和扩增，据此可知在进行“RT-PCR 技术”时应当在仪器中添加 酶、 酶、 引物、dNTP、缓冲体系。
(2)下图是pROKII质粒、柽柳MT 基因(MTcI)和星星草 MT 基因(MTx) 的相关序列示意图。
将柽柳 MT 基因连接到 pROKⅡ质粒中，应选用的限制酶是 。 若甲和乙连接到同 个pROKII中，为了使重组质粒能够同时独立表达柽柳和星星草的MT，则 MTx还需要连接 序列进行优化。
(3)重组质粒进行转化后，提取烟草总DNA，用特异性引物进行扩增得到 序列，可检测目的基因是否已整合到烟草的基因组中。为研究转基因烟草对不同浓度 Cd 的耐受力，实验思路为：将转基因烟草幼苗分别移入 的MS 生根培养基中，观察烟草的生长状态。
【答案】(1) 逆转录酶(或反转录酶) 耐高温的DNA聚合酶
(2) Xbal和Kpnl 终止子、PstI、sphI、HindⅡ识别序列
(3) MTcl(Tcl或MTcl和Tcl)和MTx 含不同浓度Cd2+高二期中考试
生物答案
一、单选（36分） 1-18. AACDD BCBCD BCABC BDD
二、多选（18分） 19.BD 20.AC 21.BCD 22.BCD 23.AB 24.AD
三、简答（46分）
25.【答案】（每空2分，共10分）　
(1)稀释涂布平板法　使细菌分散成单个细胞，在平板上获得单菌落　
(2)菌种①和③可降解分散蓝2BLN，分散蓝2BLN被降解后蓝色消失形成透明圈　
菌种③　
(3)随着接种量的增大，GN－1菌株对分散蓝2BLN的脱色率逐渐提高
26.【答案】（每空1分，共7分）
(1)适宜的温度和pH 气体环境（或95%空气和5%CO2混合气体） (2) MⅡ 纺锤体-染色体复合物(3) 促进细胞核全能性表达的物质 (4) （早期） 胚胎 肿瘤
27.【答案】（每空1分，共8分）
(1)人的乳腺癌细胞 (2)PEG/聚乙二醇 细胞膜上的糖蛋白
(3)克隆化培养和抗体检测（答全得分） 既能大量增殖，又能产生特定抗体
(4) 作为诊断试剂 治疗疾病 癌细胞凋亡
28.【答案】 （每空1分，共9分）
(1)构建基因表达载体　终止子、标记基因和复制原点（缺一不得分）
(2)目的基因(或DNA母链)　使扩增的目的基因含有限制酶的识别序列，便于与载体连接
(3)72℃延伸 激活DNA聚合酶　 琼脂糖凝胶电泳　
(4)保证目的基因片段插入的方向正确、防止质粒载体或目的基因的自连　磷酸二酯
29.【答案】（每空2分，共12分）
(1) 逆转录酶(或反转录酶) 耐高温的DNA聚合酶
(2) Xbal和Kpnl 终止子、PstI、sphI、HindⅡ识别序列
(3) MTcl(Tcl或MTcl和Tcl)和MTx 含不同浓度Cd2+

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