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(共18张PPT)
如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢
AJI
DNA
DNA
1.掌握DNA粗提取与鉴定的实验原理
2.理解并掌握DNA粗提取的过程与鉴定的方法
学习目标
自学指导：阅读课本P74-75内容，回答下列问题(4min )
1.该实验的实验目的、实验原理、实验材料、试剂及其作用分别是
2.该实验的方法步骤可以简单的归纳为哪四步
3.研磨的目的是
4.如何取上清液(两种方法)
5.上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质 低温放置几分钟的作用是
6.搅拌时应轻缓、并沿一个方向的目的是
与蛋白质。 最低。利用这一原理，可以使
(2)DNA 在不同浓度的NaCl 溶液中的溶解度不同， DNA 在盐溶液中溶解或析出。
溶解度
2.鉴定DNA 的原理
在一定温度下( 沸 水 浴 ) , DNA 遇_二苯胺试剂会呈现蓝 色
0.14mol/L 2mol/L NaCl浓 度
1.提取DNA 的原理
利用DNA、RNA、 蛋白质和脂质等在物理和化学性 当NaCl 浓度为 2 mol/L 时，
DNA 的溶解度最大，浓度为
0.14 mol/L时 ，DNA的溶解度
探究和实践
一、实验原理
(1)DNA 不溶于_酒精，某些蛋白质_溶于酒精，利
DNA 的粗提取与鉴定
探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定
二 、目的要求： 1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA 粗提取和鉴定的原理。
2.学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA 进行鉴定。
三 、材料用具 ：
1.材料：DNA 含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。 (注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核 和线粒体，几乎不含DNA。)
猪肝
洋葱
菠菜
花菜
香蕉
探究和实践 的粗提取与鉴定
2.试剂及作用 (1)研磨液 ——溶解并提取DNA
(2)体积分数为95%的酒精 — 析 出DNA
(3)2mol/L的NaCl溶液 — 溶 解DNA
(4)二苯胺试剂 — 鉴定DNA, 要现配现用
(5)蒸馏水 滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L, 从而
研磨液成分
作用
SDS
使蛋白质变性
EDTA
抑制DNA酶
Tris-HCl缓冲液
稳定DNA
研磨液、二苯胺的配制方法在课本P117
析出DNA
DNA
通 "
烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、 离心机 电子天平
试管、试管架、剪刀
探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定
探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定
四 、方 法 步 骤 ( 四 目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
1.研磨洋葱： 称 取 约 3 0 总，切碎，然后放入研钵中，倒入 10mL_ 研磨液 ，充分研磨。
2.去除杂质，取上清液： 上清液中除DNA之外，可能含有核蛋白、多糖等杂质
方案一：在漏斗中垫上纱布，将洋 仅过滤到烧杯中，在4℃
冰箱中放置几分钟后，再取 上清液 。
方案二：也 直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min 的
转速下离心 上清液放入烧杯中。
抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制
DNA 分子运动，使DNA 易形成沉淀析出； 过滤取上清液
方案一： 在上清液中加入体积相等的、 预冷的酒精 溶液(体积分
数为95%),静置2～3min, 溶液中出现的白色丝状物 就是粗提取 的DNA 。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去 上面的水分； 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
方案二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心
5min, 弃上清液，将管底的沉 淀 物 ( 粗 提 取 的DNA) 晾 干。
DNA 的粗提取与鉴定
低温可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； 低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。
探究和实践
四 、方 法 步 骤 ：
3.析出DNA:
用冷却的酒精析出DNA
取两支20mL 的试管，各加入2 mol/L的NaCl 溶液5mL。 将丝状物
或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中 各加入4mL 的_二苯胺试剂 。混合均匀后，将试管置于沸 水 中 加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
空白对照组如何设计
在等体积的NaCl 溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min。
的粗提取与鉴定
溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关
水浴 加热
DNA 的鉴定
四、方法步骤： 提取物颜色与DNA的纯度有关
探究和实践
4.DNA的鉴定：
对照组
实验组
DNA
探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定
(1)选什么样的材料实验更易成功 用洋葱做材料，为什么要充分研磨
含DNA的生物材料都可以，选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。
充分研磨，可以破坏细胞壁，裂解细胞，释放DNA。
(2)猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA 的材料 操作时如何防止血液凝
固
猪血(哺乳动物的成熟红细胞)无细胞核，不适合；
鸡血中红细胞有核DNA, 且核DNA的量较多，适合。
鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。
(3)如果用鸡血动物细胞做材料，也需要研磨裂解释放细胞中的DNA 吗
加入清水，让细胞吸水胀破，释放DNA。 那 猪 肝 呢
1、操作提示
(1)以血液为实验材料时，每100 mL 血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止 血
液凝固
O
(2)加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧 DNA 分子的断裂 导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
2、关键点拨
1.利用动物细胞提取DNA 时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可 直接_使其吸水涨破。
2.不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟 的红细胞 无_细胞核。
3.提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95% 的冷酒精纯效果 更佳。
3、操作注意事项：
(1)研磨液的作用为溶解并提取 DNA;体积分数为95%的酒精的作用为析 出DNA, 使DNA与杂质分开；浓度为2mol/L的NaCl溶液的作用为溶解丝状 物用于DNA的鉴定。
(2)在将待鉴定的提取物加入浓度为2mol/L的NaCl溶液中溶解时， 需要不 断搅拌以增加溶解的 DNA 的量，建议搅拌3min 以上。
(3)二苯胺试剂要现配现用，以保证实验效果。同时，加入二苯胺试剂后沸水 浴处理的时间要在5min 及以上，且要等到冷却后再观察效果，这样才可 以观察到较为明显的显色反应。
整理背诵
1.该实验的实验目的、实验原理、实验材料、试剂及其作用分别是
I 2. 该实验的方法步骤可以简单的归纳为哪四步
3.研磨的目的
4.取上清液(两种方法)
5.上清液中除DNA 之外，含有的杂质
低温放置几分钟的作用
6.搅拌时应轻缓、并沿一个方向的目的
当堂检测
1. 下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的原理的叙述，错误的是( ) R
A. 利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白质能溶于酒精溶液，可将DNA与蛋白质 分离
B. 利用高温能使蛋白质变性，却对DNA 没有影响的特性，可将DNA 与蛋白质 分离
C. 在用预冷的酒精沉淀DNA 时，要用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA断裂
D. 利用DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，可将提取的丝状物或沉淀物溶解于 NaCl溶 液 中
2. 下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，正确的是( )
A. 取材时可选用鸡血、洋葱、香蕉等富含DNA的材料进行实验
B. 将白色丝状物置于2mol/L的NaCl溶液中，离心后弃去上清液
C. 可将洋葱置于清水中，细胞吸水破裂后将DNA释放出来
D. 鉴定DNA 时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中并进行沸水浴
4. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是( )A · 羊的 成熟红细胞可作为提取DNA 的材料
B. 提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的研磨液
C. 预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解
D. 在沸水浴条件下， DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色
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