四川省绵阳市涪城区四川省绵阳南山中学2024-2025学年高二下学期4月期中生物试题(有答案)

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四川省绵阳市涪城区四川省绵阳南山中学2024-2025学年高二下学期4月期中生物试题(有答案)

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绵阳南山中学高2023级高二下期半期考试试题
生物学
本试卷分为试题卷和答题卡两部分,其中试题卷共8页;答题卡共2页。满分100分,考试时间75分钟。
注意事项:
1.答题前,考生务必将自己的学校、班级、姓名用0.5毫米黑色签字笔填写清楚,同时用2B铅笔将考号准确填涂在“准考证号”栏目内。
2.选择题使用2B铅笔填涂在答题卡对应题目标号的位置上,如需改动,用橡皮擦擦干净后再选涂其它答案;非选择题用0.5毫米黑色签字笔书写在答题卡的对应框内,超出答题区域书写的答案无效;在草稿纸、试题卷上答题无效。
3.考试结束后将答题卡收回。
一、选择题(本题共25小题,每小题2分,共50分,每小题给出的四个选项中,只有一个选项是符合题目要求的)
1. 在集市上,摆满了各种传统发酵食品。色泽诱人的果酒散发着醉人的香气,果醋透着淡淡的果香与醋酸味。还有腐乳散发着独特的酱香,泡菜则有着清爽的酸辣口感。这些都是传统发酵技术的成果,下列叙述正确的是(  )
A. 泡菜腌制时间越长,亚硝酸盐含量越高,宜尽早食用
B. 腐乳味道鲜美,主要是毛霉等微生物产生的脂肪酶发挥了作用
C. 传统发酵以混合菌种的液体发酵为主,通常是家庭式或作坊式的
D. 家庭制作果酒、果醋、泡菜这三种产品时,发酵后期均为酸性环境
2. 防止杂菌污染,获得纯净微生物培养物是研究和应用微生物的前提,下列关于微生物的基本培养技术的叙述,错误的是(  )
A. 蛋白胨可以为微生物提供碳源、氮源和维生素等营养物质
B. 普通培养基中只要有对应所需的营养物质,就可以培养任何微生物
C. 在对接种室进行紫外线消毒前,适量喷洒苯酚溶液,可以加强消毒效果
D. 培养某些微生物时需要添加特殊营养物质是因为其自身不能合成该种物质
3. 为探究抗生素对细菌的选择作用,某兴趣小组将接种了大肠杆菌的平板培养基分为四个区域,分别放入经过处理的滤纸片(如下图),一段时间后部分滤纸片周围出现抑菌圈。兴趣小组测量并记录抑菌圈的直径,从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌扩大培养后再重复实验2~5次。下列有关该探究实验的叙述正确的是(  )
A. 重复实验2~5次后,抑菌圈的直径会变小
B. ②为实验中的对照组,①③④均为实验组
C. 图中的大肠杆菌是通过连续划线接种到固体培养基上的
D. 重复实验2~5次测量并记录数据是为了取平均值减小误差
4. 某研究小组为检验某水样中大肠杆菌数量,采用了滤膜法进行实验。EMB培养基上形成的不同菌落中,大肠杆菌菌落呈深紫色,并有金属光泽。操作流程和结果如下图所示,下列对该实验的分析正确的是(  )
A. 测定前,滤杯、滤膜、滤瓶、镊子和水样均需进行灭菌处理
B. 培养后的平板没有长出菌落,可能是滤膜孔径过小所致
C. 配制EMB培养基时应调节pH至中性或弱碱性再进行灭菌
D. 与细菌计数板计数结果相比,以上计数方法测得的细菌数目较多
5. 发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域都得到了广泛的应用,下列关于发酵工程的说法错误的是(  )
A. 啤酒生产中,后发酵阶段主要进行大部分糖分解和代谢物的生成
B. 味精是谷氨酸棒状杆菌发酵产生的谷氨酸经过一系列处理获得的
C. 将乙型肝炎病毒的抗原基因转入酵母菌中,可通过发酵生产乙型肝炎疫苗
D. 冷却水从发酵罐下方进入从上方流出的目的是使冷却更充分
6. 研究发现来自骆驼蓬的新型β-咔啉生物碱具有抗肿瘤作用。为了获取该生物碱,科研人员进行了如图所示的操作流程。下列相关叙述正确的是(  )
A. 骆驼蓬的外植体就是它离体的器官或组织
B. 进行①和③过程时培养基的成分不同,但其他外界培养条件都相同
C. 过程③的原理主要是植物细胞具有全能性,过程④的原理是细胞增殖
D. β-咔啉生物碱属于骆驼蓬的次生代谢产物,它是植物的生命活动所必需的物质
7. 非对称细胞融合技术是指利用射线照射某原生质体,去除其细胞核,用蕊香红6G处理另一原生质体,使其细胞质失活,然后诱导两原生质体融合。研究者通过该技术,利用野生雄性不育稻(2n=24,雄性不育基因为细胞质基因)和优良水稻(2n=24)培育优良水稻雄性不育系已获得成功。下列说法错误的是(  )
A. 应用射线照射优良水稻原生质体,用蕊香红6G处理野生雄性不育稻原生质体
B. 需在等渗或微高渗环境下用纤维素酶和果胶酶处理两种植物细胞获得原生质体
C. 可用聚乙二醇融合法诱导原生质体融合,成功融合的细胞染色体组成为2n=24
D. 原生质体融合成功的标志是形成新的植物细胞壁,该过程与高尔基体有关
8. 下列关于植物组织培养、微生物培养、动物细胞培养过程的描述,正确的是(  )
A. 马铃薯琼脂培养基的碳源一般是马铃薯滤液和葡萄糖,MS培养基的碳源通常是蔗糖
B. 哺乳动物细胞培养的温度在36.5℃左右,多数动物细胞生存的适宜pH为7.1-7.4
C. 纯化微生物、植物组织培养和动物细胞培养所用的都是固体培养基
D. 植物组织培养过程中,愈伤组织细胞的代谢类型为自养需氧型
9. 再生医学领域在2019年首次利用异源诱导多能干细胞(iPS细胞)培养出的眼角膜组织,移植到病人体内,成功治疗一名失明患者,且未发生免疫排斥反应。下列叙述正确的是(  )
A. iPS细胞存在于早期胚胎、外周血和脐带血中,分化程度低于造血干细胞
B. 神经干细胞和iPS细胞在治疗阿尔茨海默病等方面有重要价值
C. 体外培养iPS细胞的培养基中需添加糖类、氨基酸、血清、激素、维生素等成分
D. 患者未发生免疫排斥反应是因为移植细胞与其自身细胞的基因相同
10. 某些肿瘤细胞表面的PD-L1与细胞毒性T细胞(CTL)表面的PD-1结合,能抑制CTL的免疫活性,导致肿瘤细胞免疫逃逸。将化疗药物与PD-L1单克隆抗体结合,形成抗PD-L1的偶联药物(抗PD-L1—ADC),既可阻断PD-1与PD-L1结合,恢复CTL的活性,又能使化疗药物靶向肿瘤细胞,从而达到治疗目的,流程如图所示。下列说法错误的是( )
A. 通过步骤①诱导形成的细胞可能有部分不能产生抗体
B. 通过步骤②筛选后能生长的细胞是异种核融合的细胞
C. 步骤③中进行克隆化培养和抗原检测,可获得目的细胞
D. 通过步骤④得到的单克隆抗体可使化疗药物靶向肿瘤细胞
11. 体细胞核移植技术是将供体细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中,培养一段时间后,再把发育中的重构胚移植到动物体内的方法。下列相关叙述错误的是(  )
A. 体细胞核移植技术可培育转基因克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白
B. 体细胞核移植技术得到的克隆动物拥有供体、受体和代孕母体三亲的遗传物质
C. 核移植得到的绝大多数克隆动物存在健康问题,许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷
D. 非人灵长类动物体细胞核移植技术困难的原因之一是供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态
12. 下列有关哺乳动物精子、卵子的发生及受精作用的叙述,正确的是(  )
A. 可将精子培养在人工配制的获能液中使其获能,获能液的有效成分有肝素、Ca +等
B. 胚胎工程操作中,常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精完成的标志
C. 精子入卵后,卵细胞膜会迅速发生生理反应,阻止其他精子入卵
D. 体型大的动物产生的精子也大,同种动物的雄原核比雌原核大
13. 如图为受精作用及早期胚胎发育示意图,下列叙述正确的是(  )
A. ①过程的完成需要依赖细胞膜的选择透过性,精子会释放出特殊的水解酶
B. ②过程表示卵裂,该时期细胞的核质比逐渐变大,细胞相对表面积逐渐变小
C. ③过程胚胎进一步发育,除了存在细胞的分裂,还存在细胞的分化
D. 孵化是指胚胎进一步扩大,透明带破裂,桑葚胚从透明带中伸展出来的过程
14. 一对姐弟被确认为全球第二对半同卵双胞胎,该对半同卵双胞胎的受精及胚胎发育过程如图所示。一般情况下,图2受精卵无法发育,但该受精卵能进行有丝分裂,如图3;染色单体分离后分别移向细胞的三个不同方向,从而分裂成三个细胞,如图4,其中两个细胞正常发育成姐弟二人。下列说法正确的是(  )
A. 图1表示卵子的异常受精过程,此时的卵子为初级卵母细胞
B. 该卵子与2个精子受精,表明透明带和卵细胞膜在阻止多精入卵的过程中不起作用
C. 若图4中细胞A包含父系和母系染色体组各1个,则细胞C含2个母系染色体组
D. 这对姐弟来源于母亲的染色体一般相同,来源于父亲的染色体不同
15. 下表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点(箭头表示相关酶的切割位点)。如图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是(  )
限制酶 AluI BamHI SmaI Sau3AI
识别序列切割位点 AG↓CT TC↑GA G↓GATCC CCTAG↑G CCC↓GGG GGG↑CCC ↓GATC CTAG↑
A. BamHI和AluI切割的是相应识别序列中的所有磷酸二酯键
B. Sau3AI和BamHI切割产生的片段能够相连,连接后的片段两者都能再切割
C. ②④⑤对应的识别序列均能被Sau3AI识别并切割
D. T4DNA连接酶既能连接①③,也能连接②⑤,但前者连接效率高
16. 构建重组质粒需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是(  )
A. B.
C. D.
17. 用限制酶EcoRV单独切割某普通质粒,可产生14kb(1kb即1000个碱基对)的长链,而同时用限制酶EcoRV、MboI联合切割该质粒,可得到三种长度的DNA片段,见下图(其中*表示EcoRV限制酶切割后的一个黏性末端)。下列关于质粒的叙述,正确的是(  )
A. 农杆菌内含有Ti质粒,在自然条件下可侵染某些植物
B. 质粒是真核细胞或原核细胞中只能在细胞质中进行自我复制的小型环状DNA分子
C. 若用MboI限制酶单独切割该普通质粒,则产生的DNA片段的长度为5.5kb和8.5kb
D. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
18. 基因工程需要用到多种酶,通常还需要用人工改造的质粒作为载体。下列相关叙述正确的是(  )
A. 限制酶主要是从真核生物中分离纯化出来的,具有特异性
B. PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
C. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因
D. DNA连接酶、RNA聚合酶和逆转录酶都能催化磷酸二酯键的形成
19. 下列有关“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述,错误的是(  )
A. 洋葱切碎加研磨液研磨过滤后,滤液中含有DNA、蛋白质等物质
B. 向DNA溶液中加入二苯胺试剂,摇匀后静置一段时间,可观察到溶液变蓝
C. 使用电泳鉴定DNA时,通常要留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物
D. 引物设计不合理可能导致琼脂糖凝胶电泳鉴定结果不止一条条带
20. 如图是利用基因工程技术生产疫苗的部分过程,其中PstI、SmaI、EcoRI、ApaI为四种限制酶,且它们切割DNA分子,形成的末端均不同。下列有关说法正确的是(  )
A. 图示中构建基因表达载体时可以用限制酶SmaI切割质粒
B. 利用PCR扩增抗原基因是利用基因工程技术生产疫苗的核心工作
C. 限制酶切割DNA分子时,氢键断裂,结果是形成两条DNA单链
D. 卡那霉素抗性基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来
21. 目的基因的其中一条单链DNA片段(α链)可作为探针,在科研和医学检测等方面有重要应用。利用不对称PCR技术可制作大量的探针(a链),其基本原理是采用数量或浓度不同的一对引物(引物①和引物②),经若干次循环后,低浓度的引物首先被消耗完毕,之后的循环只能产生高浓度引物的延伸产物,结果产生了大量的α链,下列有关叙述错误的是(  )
A. 设计引物时需要参考被扩增片段的部分脱氧核苷酸序列
B. 若引物②与α链结合,则PCR仪中引物①的数量大于引物②的数量
C. 经PCR扩增后,可通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定得到单链DNA
D. 在反应缓冲液中需加入Mg2+、解旋酶、TaqDNA聚合酶等物质
22. CD163蛋白是PRRSV病毒感染家畜的受体。为实时监控CD163蛋白的表达和转运过程,将红色荧光蛋白RFP基因与CD163基因拼接在一起,使其表达成一条多肽。下图是基因表达载体的一部分,下列叙述错误的是(  )
A. 若该拼接基因在受体内成功表达,则可直观显示PRRSV病毒易感部位
B. 该拼接过程需除去CD163基因中编码终止密码子的序列
C. 基因表达载体中必须含有目的基因、启动子、终止子等
D. 终止子的作用是使翻译在所需要的地方停下来
23. 下列有关将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定的叙述,正确的是(  )
A. 可通过显微注射法直接将目的基因导入动物的受精卵中
B. 用高Ca2+—高pH溶液预先处理植物细胞,有利于目的基因导入
C. 转基因抗虫棉是否培育成功需要进行分子水平的检测和个体生物学水平的鉴定
D. 若受体细胞表现出标记基因的相应性状,表明重组载体成功导入受体细胞
24. 如图为一种常用的大肠杆菌质粒pUC18的结构示意图,其中ori为复制原点,AmpR为氨苄青霉素抗性基因,lacZ基因能指导合成酶1,该酶能将无色染料X-gal变成蓝色。若目的基因插入的位点如下图所示,且将含有重组质粒的大肠杆菌用含有氨苄青霉素和无色染料X-gal的培养基培养,下列分析正确的是(  )
A. 所用限制酶的切割位点一般位于质粒的启动子和终止子之间
B. 插入目的基因时,破坏了lacZ基因,不利于后续筛选目的菌株
C. 含有该重组质粒的大肠杆菌在上述培养基上生长出的菌落呈蓝色
D. 若大肠杆菌细胞内导入了不含目的基因的空质粒,则不会形成菌落
25. 基因工程在农牧业、医药卫生领域、食品工业方面都有广泛的应用,以下叙述错误的是(  )
A. 目前利用基因工程技术可以生产细胞因子、抗体和疫苗等
B. 将药用蛋白基因导入奶牛乳腺细胞可构建乳腺生物反应器
C. 用基因工程技术获得的工业用酶纯度高、生产成本显著降低
D. 将来源于某些病毒、真菌的抗病基因导入植物中,可培育转基因抗病植物
二、非选择题(4个小题,共50分)
26. 产脂肪酶酵母可用于含油废水的处理,为筛选产脂肪酶酵母菌株,科研人员开展了相关研究。请回答下列问题:
(1)在分离纯化酵母菌种时,配制好的培养基常采用________法进行灭菌。倒平板操作中,待培养基冷凝后通常需要将平板________,以免造成平板污染。
(2)下图是在3个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.2mL后,培养一段时间所得到的结果示意图,该操作过程中所用接种工具为_________。培养一段时间后,平板上的菌落数分别为254个、260个、266个,则每升原菌液样品中的细菌数为________个。
(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力,对分离所得的菌株,采用射线辐照进行诱变育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以________为唯一碳源的固体培养基上。培养一段时间后,向该培养基中加入苏丹Ⅲ染液,选择_________的菌落,纯化后获得了A、B两突变高产菌株。因为发酵罐的体积较大,所以在发酵之前还需要对菌株进行______。
(4)在处理含油废水的同时,可获得单细胞蛋白,实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能,进行了培养研究,结果如下图。据图分析,应选择菌株______进行后续相关研究,理由是_______。
27. 下图为利用甲、乙两种远缘二倍体植物培育丙植物的基本流程。请据图回答下列问题:
(1)图中③代表_______过程,在过程③中应将植物组织培养瓶置于_______℃的培养箱中培养,形成的试管苗用流水清洗掉根部的培养基后,移栽到消过毒的__________等环境中,待其长壮后再移载入土。
(2)若要进行突变体育种,应该对图中的_______进行诱变处理(填图中的文字或字母),该育种方式所依据的原理是__________。
(3)丙植物的培育过程与脱毒草莓培育过程都包含的技术流程是_______(用图中数字序号表示),其中需要提供适宜光照的是________(用图中数字序号表示)。
(4)甲植物细胞具有放线菌素抗性,但在MS培养基上不能增殖。乙植物对放线菌素敏感,但能在MS培养基上增殖。将过程②所得的融合细胞置于__________中培育可筛选出杂种细胞A。
(5)甲植物和乙植物的某些性状并没有在丙植物中表现出来,可能的原因是___________。
28. 我国科学家利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和体细胞核移植(SCNT)技术,成功构建了体细胞BMAL1基因(产生昼夜节律必需的基因)敲除的生物节律紊乱猕猴,为相关疾病研究提供了新型动物模型。其中BMAL1基因敲除猴的基本构建流程如图所示。回答下列相关问题:
(1)为了让母猴超数排卵,以便采集更多的卵母细胞,需要给它注射_________。采集卵母细胞后,在体外培养到_________期才去核,去除的“核”实际上是指________。除了使用图中的显微操作法去核,还可使用梯度离心、_________和化学物质处理等方法去核。
(2)一次核移植技术后,需要获得更多的基因敲除猴,可在囊胚期对早期胚胎进行胚胎分割。胚胎分割的主要仪器设备为_______和显微操作仪。胚胎分割是指采用_________方法将早期胚胎进行切割,在分割囊胚阶段的胚胎时,要注意将_________。若想要对移植前的胚胎进行性别鉴定,应选择囊胚期的_____细胞。
(3)将早期胚胎移植到代孕母猴子宫内,为了使代孕母猴生理状况更适合完成该操作,要对代孕母猴进行_________处理,以提高成功率。移植一段时间后,应对代孕母猴进行_________检查,以确定是否移植成功。
(4)不考虑基因突变,利用A6的成纤维细胞进行克隆获得的多只第二代基因敲除猴的基因型________(填“相同”或“不相同”)。与第一代BMAL1基因敲除猴模型相比,第二代猕猴模型用于研究生物节律紊乱及相关药物研发的优势是________。
29. 科学家将北极比目鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄植株的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长。构建基因表达载体的质粒上有PstI、SmaI、HindⅢ、AluI等四种限制酶切割位点,下图1是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(Amp为抗氨苄青霉素基因),其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤,甲表示重组质粒、乙表示番茄植株的体细胞,请据图作答:
(1)提取北极比目鱼的总DNA,利用PCR扩增抗冻蛋白基因时,需要向反应体系中加入引物,引物的作用是_________。若反应体系中,初始的含有抗冻蛋白基因的模板DNA为n个,则进行第4轮复制需要引物________对。
(2)构建基因表达载体时,可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,在此实例中,应该选用_________酶分别对目的基因和质粒进行切割。构建的基因表达载体中必须有启动子,它是________识别和结合的部位,能驱动基因的转录。
(3)研究人员在进行步骤②时,一般应采用________法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。
(4)将一个长度为450bp的目的基因通过构建重组质粒导入农杆菌受体细胞后,为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行PCR鉴定。甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置如图2所示(图中甲、乙、丙旁的“→”表示进行PCR时子链延伸方向,1bp=1个碱基对),PCR鉴定时应选择的一对引物是__________,某学生尝试用图2中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了570bp片段,原因是_________。
绵阳南山中学高2023级高二下期半期考试试题
生物学
本试卷分为试题卷和答题卡两部分,其中试题卷共8页;答题卡共2页。满分100分,考试时间75分钟。
注意事项:
1.答题前,考生务必将自己的学校、班级、姓名用0.5毫米黑色签字笔填写清楚,同时用2B铅笔将考号准确填涂在“准考证号”栏目内。
2.选择题使用2B铅笔填涂在答题卡对应题目标号的位置上,如需改动,用橡皮擦擦干净后再选涂其它答案;非选择题用0.5毫米黑色签字笔书写在答题卡的对应框内,超出答题区域书写的答案无效;在草稿纸、试题卷上答题无效。
3.考试结束后将答题卡收回。
一、选择题(本题共25小题,每小题2分,共50分,每小题给出的四个选项中,只有一个选项是符合题目要求的)
【1题答案】
【答案】D
【2题答案】
【答案】B
【3题答案】
【答案】A
【4题答案】
【答案】C
【5题答案】
【答案】A
【6题答案】
【答案】C
【7题答案】
【答案】A
【8题答案】
【答案】A
【9题答案】
【答案】B
【10题答案】
【答案】C
【11题答案】
【答案】B
【12题答案】
【答案】C
【13题答案】
【答案】C
【14题答案】
【答案】D
【15题答案】
【答案】C
【16题答案】
【答案】B
【17题答案】
【答案】A
【18题答案】
【答案】D
【19题答案】
【答案】B
【20题答案】
【答案】D
【21题答案】
【答案】D
【22题答案】
【答案】D
【23题答案】
【答案】C
【24题答案】
【答案】A
【25题答案】
【答案】B
二、非选择题(4个小题,共50分)
【26题答案】
【答案】(1) ①. 高压蒸汽灭菌(湿热灭菌) ②. 倒置
(2) ① 涂布器 ②. 1.3×109
(3) ①. 脂肪 ②. 周围出现透明圈(或周围橘黄色变浅) ③. 扩大培养
(4) ①. B ②. 菌株B增殖速度快,单细胞蛋白的产量高;同时降解脂肪的能力强,净化效果更好
【27题答案】
【答案】(1) ①. 脱分化 ②. 18~22 ③. 蛭石或珍珠岩
(2) ①. B ②. 基因突变和植物细胞的全能性(或“突变和植物细胞的全能性”、或“基因突变、染色体变异、植物细胞的全能性”)
(3) ①. ③④⑤ ②. ④⑤
(4)含放线菌素的MS培养基
(5)在同一个体内,甲植物和乙植物遗传物质的表达相互干扰,不能像之前一样有序表达(或生物体内基因的表达不是孤立的,它们之间是相互调控、相互影响的)
【28题答案】
【答案】(1) ①. 外源促性腺激素 ②. MII(减数分裂Ⅱ中期) ③. 纺锤体—染色体复合物 ④. 紫外线短时间照射
(2) ①. 体视显微镜 ②. 机械 ③. 内细胞团均等分割 ④. 滋养层
(3) ①. 同期发情 ②. 妊娠
(4) ①. 相同 ②. 遗传背景相同
【29题答案】
【答案】(1) ①. 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 ②. 8n
(2) ①. PstI和SmaI ②. RNA聚合酶
(3)农杆菌转化 (4) ①. 乙和丙 ②. 目的基因反向连接

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