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(共66张PPT)
第2节 基因工程的基本操作程序
本节聚焦:
基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？
基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？
第三章 基因工程
二
某DNA片段
5’
3’
3’
你知道如何将Bt基因插入下面DNA片段中吗？
质粒和Bt基因正向连接
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
二
5’
3’
3’
质粒和Bt基因反向连接
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
二
某DNA片段
5’
3’
3’
你知道如何将Bt基因插入下面DNA片段中吗？
质粒和Bt基因正向连接
5’
3’
5’
3’
5’
ATCG
5’
3’
5’
3’
GCTA
3.将目的基因导入受体细胞
苏云金杆菌
与载体拼接
普通棉花细胞
抗虫棉
提取
表达Bt基因
导入
Bt基因
重组DNA分子
1.目的基因的筛选与获取
2.基因表达载体的构建
4.目的基因的 检测与鉴定
基因工程的基本操作程序
一、目的基因
用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。
主要是指编码蛋白质的基因
如：Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因
Bt抗虫蛋白
使棉花抗虫
导入人胰岛素基因的大肠杆菌
二、筛选合适的目的基因
序列数据库
序列比对工具
从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选目的基因
问题：筛选出来的目的基因，该怎么获得它呢？
细胞工程
植物细胞工程
动物细胞工程
植物组织培养
植物体细胞杂交
动物细胞培养
动物细胞融合
动物细胞核移植
应用
原理
步骤
原理
步骤
原理
步骤
原理
步骤
原理
步骤
三、利用PCR获取和扩增目的基因
提取
苏云金杆菌
PCR
PCR中文名称：聚合酶链式反应
PCR原理：DNA半保留复制
含Bt基因的DNA
Bt基因
Bt基因
Bt基因
Bt基因
【回顾】DNA复制的过程
参与的组分 在DNA复制中的作用
打开DNA双链
提供DNA复制的模板
合成DNA子链的原料
催化合成DNA子链
体内DNA复制所需的基本条件
解旋酶
DNA母链
4种脱氧核苷酸
DNA聚合酶
【回顾】DNA复制的过程
参与的组分 在DNA复制中的作用
打开DNA双链
提供DNA复制的模板
合成DNA子链的原料
催化合成DNA子链
体内DNA复制所需的基本条件
解旋酶
DNA母链
4种脱氧核苷酸
DNA聚合酶
三、利用PCR获取和扩增目的基因（阅读课本P77）
1
操作环境：
2
基本条件：
体外缓冲液（PCR扩增仪/PCR仪）
①模板：
②原料：
③酶：
④2种引物 ：
DNA母链
4种脱氧核苷酸
耐高温的DNA聚合酶
缓冲液中添加Mg2+
引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸
PCR过程
90
50
72
℃
延伸
90
50
72
℃
变性
90
50
72
℃
复性
90
50
72
℃
变性
变性 ：温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链
5`
3`
GGTC
GCTA
3`
5`
CCAG
CGAT
90
50
72
℃
复性
5`
3`
3`
5`
5`
5`
3`
3`
引物作用：使耐高温的DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。
复性：两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
GGTC
GCTA
CCAG
CGAT
CCAG
GCTA
两种引物能碱基互补配对吗？
90
50
72
℃
延伸
5`
3`
3`
5`
3`
5`
5`
3`
引物作用：使DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。
请同学们画出第2,3次循环
至少要循环 次，可以获取目的基因
3
延伸 ：耐高温的DNA聚合酶将4种脱氧核苷酸连接到引物的3`端
5’ 3’
3’ 5’
3’ 5’
5’ 3’
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
5’ 3’
3’ 5’
引物2
5’ 3’
引物1
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
3’ 5’
引物2
5’ 3’
引物1
目的基因
3’ 5’
3’ 5’
5’ 3’
引物1
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
3’ 5’
引物2
5’ 3’
引物1
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
1、引物在PCR中能重复利用吗？
不能
2、PCR循环n次，得到多少个DNA分子？ 消耗了多少个引物？
琼脂糖凝胶电泳
6
产物鉴定：
较小的DNA片段在凝胶中的移动容易，距离远，较大的DNA片段移动难，距离短
获得Bt基因后，靠什么运输进棉花细胞（受体细胞）？
PCR技术 DNA复制
相同点 模板 原料 不同点 解旋 方式
场所
酶
能量
结果
DNA的两条母链
四种脱氧核苷酸
DNA在高温下变性解旋
解旋酶催化
体外复制
细胞内（主要在细胞核内）
耐高温的DNA聚合酶
解旋酶、DNA聚合酶
大量的DNA片段
形成整个DNA分子
7
PCR技术与DNA复制过程比较
dNTP（原料）提供
细胞内的ATP提供
例1 下列有关PCR技术的叙述,错误的是 (　　)
A.每一次循环后目的基因的数量可以增加一倍
B.PCR反应过程中需要3个不同的温度范围
C.PCR反应过程中加入的酶的显著特性是耐高温
D.模板DNA和引物能在每一次扩增中重复使用
任 务 活 动
D
二
第二步：基因表达载体的构建
5‘
3‘
3‘
5‘
Bt基因
（目的基因）
PCR
Bt基因
EcoRⅠ酶切位点
EcoRⅠ酶切位点
二
第二步：基因表达载体的构建
cDNA文库
5‘
3‘
3‘
5‘
Bt基因
（目的基因）
PCR（设计引物）
Bt基因
EcoRⅠ酶切位点
EcoRⅠ酶切位点
质粒
EcoRⅠ酶切位点
二
第二步：基因表达载体的构建
cDNA文库
5‘
3‘
3‘
5‘
Bt基因
（目的基因）
PCR（设计引物）
Bt基因！
EcoRⅠ酶切位点
EcoRⅠ酶切位点
质粒
EcoRⅠ酶切位点
（目的基因）
Bt基因
二
第二步：基因表达载体的构建
Bt基因！
EcoRⅠ酶切位点
EcoRⅠ酶切位点
质粒
EcoRⅠ酶切位点
（目的基因）
Bt基因
二
第二步：基因表达载体的构建
Bt基因！
EcoRⅠ酶切位点
EcoRⅠ酶切位点
质粒
EcoRⅠ酶切位点
Bt基因
（目的基因）
重组DNA分子
基因表达载体构建：
复制原点
标记基因
用同种限制酶或
能产生相同末端的限制酶分别切割含有目的基因的DNA片段，质粒。
重组DNA复制所需结构
标记基因作用：便于重组DNA分子的筛选
启动子
位置：
功能：
RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA
基因的上游
本质：
DNA片段
二
第二步：基因表达载体的构建
Bt基因
（目的基因）
如果目的基因需要复制需要什么结构？
复制原点
如果目的基因需要表达需要什么条件？
需要启动子和终止子
启动子和终止子应该加在哪？
启动子
终止子
启动子类型：
诱导型启动子
组成型启动子
组织特异性启动子
诱导物
作用
诱导型启动子
激活或抑制
目的基因表达
如：光诱导表达基因启动子、真菌诱导表达基因启动子和共生细菌诱导表达基因启动子等。
二
第二步：基因表达载体的构建
Bt基因！
EcoRⅠ酶切位点
EcoRⅠ酶切位点
质粒
EcoRⅠ酶切位点
Bt基因
（目的基因）
重组DNA分子
基因表达载体构建：
复制原点
标记基因
重组DNA复制所需结构
标记基因作用：便于重组DNA分子的筛选
基因表达载体
启动子
位置：
功能：
RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA
基因的上游
终止子
位置：
功能：
基因的下游
转录的终止信号
本质：
DNA片段
本质：
DNA片段
启动(终止)转录
启动(终止)翻译
作用
位于DNA上
位于mRNA上
位置
DNA片段
三个相邻碱基
本质
启动(终止)子
启始(终止)密码子
归纳比较
阅读教材P80，回答下列问题：
1.获取Bt基因后，如果直接把目的基因导入受体细胞，可能会出现什么样的结果？
游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，且游离的DNA片段不能稳定遗传。
为什么要构建基因表达载体？
1.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代
2.同时使目的基因能够表达和发挥作用。
基因表达载体构建是基因工程的核心工作。
判断：基因表达载体和载体是不同的（ ）
---基因工程的核心
问题探讨：
1、使用一种DNA限制酶进行切割，是否只会得到目的基因与载体结合的这一种重组DNA？
活动一：基因表达载体的构建
用Ecol RⅠ限制酶（识别GAATTC，切割GA之间）切割载体和目的基因。
目的基因能否自连？质粒能否自连？目的基因与质粒能否反向连接？
---基因工程的核心
问题探讨：
1、使用一种DNA限制酶进行切割，是否只会得到目的基因与载体结合的这一种重组DNA？
载体
目的基因
自连
片段间的连接
目的基因自连
质粒自连
目的基因与质粒连接
目的基因与目的基因连接
质粒与质粒连接
正向连接 反向连接
1
1’
2
2’
1
2
2’
1’
2
2’
1’
1
2.如何防止目的基因和质粒的自身环化以及目的基因的反向连接？
问题探讨：
活动二：基因表达载体的构建
用Ecol RⅠ（识别GAATTC，切割GA之间）和BglⅡ限制酶（识别AGATCT，切割AG之间），切割载体和目的基因，并将其连接。
双酶切
-G
-CTTAA
-A
-TCTAG
选择两种不同的限制酶同时对目的基因和载体切割，防止目的基因和载体的自身环化和反向连接。
【情境】目的基因导入受体细胞之前,需构建基因表达载体,图甲、乙表示质粒及目的基因所在DNA片段,图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
(1)构建基因表达载体时需要使用的工具酶为　　　　　　　　　　　　。
(2)用图中的质粒和DNA构建基因表达载体时,不能使用SmaⅠ切割,原因是　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　
　。
(3)构建基因表达载体时,可用EcoRⅠ同时切割质粒和DNA,但会导致
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　等问题,为避免以上问题出现,应使用 　　 　　　　　　　　　 两种限制酶。
SmaⅠ会破坏质粒的抗生素抗性基因和外源DNA中的目的基因
目的基因自身环化、目的基因不能定向连接
BamHⅠ和HindⅢ(或EcoRⅠ和HindⅢ)
限制酶和DNA连接酶
任务二　基因表达载体的构建(导学案P75)
【情境】目的基因导入受体细胞之前,需构建基因表达载体,图甲、乙表示质粒及目的基因所在DNA片段,图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
任务二　基因表达载体的构建(导学案P75)
(4)构建好的基因表达载体在目的基因前要加上　 　,其是　　 　识别和结合的部位。
(5)请简要描述基因表达载体的构建过程。

RNA聚合酶
用相同的限制酶分别切割载体和含目的基因的DNA片段,产生末端相同的切口,再用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处。
启动子
目的基因的筛选与获取
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
第一步
第二步
第三步
第四步
目的基因的检测与鉴定
基因工程的基本操作程序
自主思考：阅读课本相关内容（P80-81），总结将目的基因导入受体细胞的方法有哪些？各自适用于什么生物？
三
受体细胞类型
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
农杆菌转化法
花粉管通道法
我国科学家独创
常用
显微注射法
Ca2+处理法
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
植物细胞
花粉管通道法
方法一：用微量注射器将含目的基因的DNA 溶液直接注入子房中
含目的基因的DNA 溶液
（我国科学家独创）
一
将目的基因导入植物细胞
第三步：将目的基因导入受体细胞
（我国科学家独创）
三
植物细胞
花粉管通道法
方法二：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。
一
将目的基因导入植物细胞
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
花粉管通道法
农杆菌转化法
农杆菌
农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。
一
将目的基因导入植物细胞
第三步：将目的基因导入受体细胞
裸子植物
三
植物细胞
花粉管通道法
农杆菌转化法
转化：
目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。实质是基因重组。
农杆菌
农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。
Ti质粒
T-DNA
（可转移的DNA）
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
农杆菌转化法
农杆菌
Ti质粒
T-DNA
（可转移的DNA）
目的基因
构建表达载体
含目的基因的
重组 Ti 质粒
转入农杆菌
含重组 Ti 质粒的农杆菌
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
农杆菌转化法
农杆菌
Ti质粒
T-DNA
（可转移的DNA）
目的基因
构建表达载体
含目的基因的
重组 Ti 质粒
转入农杆菌
含重组 Ti 质粒的农杆菌
导入植物细胞
将目的基因插入
染色体 DNA 中
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
农杆菌转化法
农杆菌
Ti质粒
T-DNA
（可转移的DNA）
目的基因
构建表达载体
含目的基因的
重组 Ti 质粒
转入农杆菌
含重组 Ti 质粒的农杆菌
导入植物细胞
将目的基因插入
染色体 DNA 中
表现出新性状的植株
第三步：将目的基因导入受体细胞
转化：
目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
三
农杆菌转化法
农杆菌
Ti质粒
T-DNA
（可转移的DNA）
目的基因
构建表达载体
含目的基因的
重组 Ti 质粒
转入农杆菌
含重组 Ti 质粒的农杆菌
导入植物细胞
将目的基因插入
染色体 DNA 中
第一次拼接
第二次拼接
第一次导入
第二次导入
该过程涉及两次拼接和两次导入，你能总结吗？
第三步：将目的基因导入受体细胞
目的基因
Ti质粒
表
达
载
体
农杆菌
植物细胞
植物细胞
染色体DNA
新性状植株
构建
转入
导入
插入
表达
农杆菌转化法小结
三
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
受体细胞为受精卵
受体细胞为体细胞
（利用植物细胞的全能性）
方法一
方法二
农杆菌的溶液
基因表达载体
农杆菌
三
受体细胞类型
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
农杆菌转化法
花粉管通道法
我国科学家独创
常用
显微注射法
Ca2+处理法
第三步：将目的基因导入受体细胞
三
受体细胞类型
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
农杆菌转化法
花粉管通道法
我国科学家独创
常用
显微注射法
Ca2+处理法
第三步：将目的基因导入受体细胞
1、导入方法：
2、受体细胞:
显微注射法
受精卵
为什么常选用受精卵作为受体细胞呢？
①体积大，易操作。
②受精卵全能性很高。
3、过程：
构建基因表达载体并提纯
利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中
体外胚胎培养
胚胎移植
获得具有新性状的动物
二
将目的基因导入动物细胞
三
第三步：将目的基因导入受体细胞
受体细胞类型
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
农杆菌转化法
花粉管通道法
我国科学家独创
常用
显微注射法
Ca2+处理法
1、常用方法：
Ca2+处理
原核细胞（大肠杆菌应用最广）
可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
2、受体细胞：
三
将目的基因导入微生物细胞
吸收
Ca2+
基因表达载体
成熟mRNA
相应酶去除内含子
转录
翻译
真核基因：编码区（外显子+内含子）
多肽链
前体mRNA
蛋白质
加工
如果把一个真核生物的基因导入原核细胞中表达，一定会产生原来的蛋白质吗？
提示：一般不能产生原来的蛋白质
原因：
①原核生物细胞里没有相应的酶来去除内含子；
②原核生物没有真核的蛋白质加工系统（如内质网、高尔基体等）
提取
如果把真核基因导入原核细胞中表达，不考虑蛋白质加工的问题，如何产生与原来结构相同的蛋白质吗？
mRNA单链
逆转录酶
DNA
单链
DNA双链
酶
这种双链DNA是不含内含子的DNA，叫做cDNA
成熟mRNA
去除内含子
转录
真核基因：编码区（外显子+内含子）
前体mRNA
相应酶
提示：把真核基因的cDNA导入到原核细胞中表达。（具体做法，如图）
将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，效果会怎样？
有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行基因表达载体的构建。这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定哪些基因导入了受体植物。
基因工程第四步：目的基因的检测与鉴定
思考：基因表达载体是否成功导入棉花细胞？Bt基因是否可以在棉花细胞中稳定维持并表达出Bt蛋白？表达出的Bt蛋白是否具有杀虫的功效？
Bt
Bt
棉花细胞
抗虫棉植株
1.分子水平检测
2.个体生物学水平
③检测目的基因是否翻译成Bt抗虫蛋白
采摘抗虫棉叶片饲喂棉铃虫，观察棉铃虫的生理状况，从而判断是否抗虫及抗虫程度等
②检测目的基因是否转录出了mRNA
①检测棉花染色体的DNA上是否插入了目的基因
思考：Bt基因是否可以在棉花细胞中稳定维持并表达出Bt蛋白？
表达出的Bt蛋白是否具有杀虫的功效？
3’ 5’
3’ 5’
5’ 3’
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
5’ 3’
3’ 5’
引物2
5’ 3’
引物1
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
3’ 5’
引物2
5’ 3’
引物1
5’ 3’
Bt(目的基因)
3’ 5’
3’ 5’
5’ 3’
引物1
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
3’ 5’
引物2
5’ 3’
引物1
5’ 3’
引物1
3’ 5’
引物2
①检测棉花染色体DNA上是否插入了目的基因
PCR技术
棉花细胞的所有染色体DNA
准备工作：根据目的基因的序列合成2种引物
提取转基因生物全部DNA
根据目的基因的序列设计PCR引物
PCR
是否扩增出目的基因
琼脂糖凝胶电泳
过程：
四
②检测目的基因是否转录出了mRNA
（一）分子水平检测
转基因生物
PCR
逆转录
逆转录酶
cDNA
提取全部RNA
RNA作为模板
PCR技术
第四步：目的基因的检测与鉴定
5`CGATAGGCTTTAC3`
3`GCTATCCGAAATG5`
模板链—
5`CGAUAGGCUUUAC3`
mRNA—
PCR技术不可以扩增mRNA
目的基因
是否扩增出目的基因
琼脂糖凝胶电泳
DNA片段
基因1 基因2 基因3
放大
终止子
非编码区
非编码区
编码区
编码区上游
编码区下游
启动子
知识拓展：基因结构：
mRNA
3`
5`
3`
5`
逆转录
cDNA
cDNA上没有启动子和终止子
构建基因表达载体时，要在目的基因（ cDNA ）上游添加启动子，下游添加终止子
四
③检测目的基因是否翻译出Bt抗虫蛋白
方法：
抗原— 抗体杂交
苏云金杆菌
提取
Bt抗虫蛋白
注射小鼠体内
抗体
标记抗体
提取蛋白
抗原
抗体
杂交
转基因生物
（杂交带）
四
（一）分子水平检测
第四步：目的基因的检测与鉴定
抗原
转基因生物 鉴定方法 成功标志
抗虫植物
抗病毒（菌）植物
抗盐植物
抗除草剂植物
饲喂害虫（抗虫接种实验）
害虫死亡
病毒（菌）感染（抗病接种实验）
未出现病斑
盐水浇灌
正常生长
喷洒除草剂
正常生长
个体水平鉴定：
转基因生
物的DNA
目的基因探针
32P
变性
变性
32P
杂交DNA分子
（杂交带）
5`CGATAGGCTTTAC3`
3`GCTATCCGAAATG5`
5`-------CGATAGGCTTTAC--------- 3`
3`-------GCTATCCGAAATG--------- 5`
CGATAGGCTTTAC
GCTATCCGAAATG
CGATAGGCTTTAC
GCTATCCGAAATG
5`-------CGATAGGCTTTAC--------- 3`
3`-------GCTATCCGAAATG--------- 5`
目的基因的筛选和获取
利用PCR获取和扩增
基因表达载体的构建-核心
目的基因、启动子、终止子、标记基因
将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法(植物)、显微注射法(动物) 、Ca2+处理(微生物);
目的基因的检测与鉴定
分子检测：是否插入、转录、翻译
个体水平：是否具有抗性以及抗性强度等。
基因工程的基本操作程序（4个步骤）
1.研究人员将一种海鱼的抗冻蛋白基因afp整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染番茄细胞，获得了抗冻的番茄品种。判断下列相关表述是否正确。
（1）afp基因是培育抗冻番茄用到的目的基因。 （ ）
（2）构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶和核酸酶（ ）
（3）只要检测出番茄细胞中含有afp基因，就代表抗冻番茄培育成功（ ）
2.利用PCR既可以快速扩增特定基因，也可以检测基因的表达。下列有关PCR的叙述错误的是 （ ）
A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温酶
B.变性过程中双链DNA的解开不需要解旋酶
C.复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则
D.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和 4种核糖核苷酸
√
×
×
练习与应用（P83）
一.概念检测
D
1.研究人员在研究转基因烟草中外源卡那霉素抗性基因的遗传稳定性时，发现44株转基因烟草中有4株该基因的遗传不符合孟德尔遗传规律，在它们的自交后代中出现了较多的没有卡那霉素抗性的植株。请查找相关资料，尝试对这个问题作出解释。
外源基因插入基因组中可能为单位点插入，或者同一染色体多位点插入，或者不同染色体多位点插入。大多数情况下，插入的位点难以做到定点插入；插入的拷贝数也是随机的。因此，外源基因在转基因植物中的遗传是很复杂的。例如，科研人员在对转GUS基因(β-葡糖醛酸糖苷酶基因)的烟草进行基因表达分析时，发现部分转基因植株的染色体DNA中整合了多个拷贝的基因，从而导致GUS基因失活。除此之外，外源基因丢失、基因重排等也都可能影响外源基因的稳定性。
练习与应用（P83）
二、拓展应用
2.八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示） 和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtⅠ表示）参与β-胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtⅠ基因转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素，由此生产出的大米称为 “黄金大米”。请根据以上信息回答下列问题。
练习与应用（P83）
二、拓展应用
（1）科学家在培育“黄金大米”时，将ctrⅠ和psy基因导入含pmi基因的质粒中，构建了质粒pSYN12424。该项研究的目的基因是______ ，标记基因是_____ ，质粒pSYN12424的作用是______ 。
ctrⅠ基因和psy基因
pmi基因
将目的基因送入水稻细胞
（2）在构建质粒载体时，目的基因序列中能否含有用到的限制酶的识别序列？为什么？
不能。限制酶可能将它切断。
(3)请查找相关资料，了解科学家为什么 要培育“黄金大米”以及当前关于“是否要推广 '黄金大米’”的各种争论。你还可以提出自己的看法，并与同学交流讨论。
维生素A在人体内具有非常重要的生理功能，对视力、骨骼生长、免疫功能等都有调节作用。但是，人体不能合成维生素A，需要从食物中摄取。维生素A缺乏症是南亚地区常见的由营养不良导致的疾病，该地区的居民一般以籼稻作为主食。β-胡萝ト素是维生素A的前体，在人体内它可以转化为维生素A。因此，科学家将两个参与β-胡萝ト素合成的酶的基因转入了籼稻中，使其胚乳中富含β-胡萝ト素，期望让人们通过日常食用主食就能补充足够量的维生素A，从而降低维生素A缺乏症的患病率。关于“是否要推广'黄金大米'”的争论主要围绕其安全性、有效性等方面展开
练习与应用（P83）
二、拓展应用

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