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第52课时　动物细胞工程
课标要求 1.阐明动物细胞培养的条件和过程。2.阐明动物细胞核移植的原理和过程。3.阐明动物细胞融合的概念。4.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。5.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
考情分析 1.动物细胞培养技术 2024·黑吉辽·T14　2023·辽宁·T7　2022·江苏·T14　2022·湖北·T6
2.动物细胞融合和单克隆抗体的制备 2024·江西·T16　2023·北京·T12　2023·湖北·T22　2022·山东·T15 2022·福建·T13　2022·辽宁·T24
3.动物细胞核移植技术 2023·天津·T7　2021·辽宁·T13　2020·天津·T1
考点一　动物细胞培养
1．动物细胞培养的概念
从动物体中取出相关的组织，将它分散成________________，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞________________的技术。
2．动物细胞培养的条件
[提醒]　动物细胞培养一般用液体培养基，植物组织培养一般用固体培养基。
3．动物细胞培养的过程
(1)细胞贴壁：体外培养的大多数动物细胞往往________在培养瓶的瓶壁上。
(2)接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面__________________时，细胞通常会停止____________________。
(3)原代培养：________之前的细胞培养，即动物组织经处理后的______________。
(4)传代培养：________后的细胞培养。
4．干细胞培养及其应用
种类 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
来源 骨髓、脐带血和外周血 体细胞(如成纤维细胞等)
特点 能分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的组织和器官甚至____ 分化成____________ 能诱导分化成类似______的细胞
应用 分化成心肌细胞、神经元和造血干细胞等 造血干细胞用于治疗白血病等；神经干细胞用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病等 治疗小鼠的镰状细胞贫血、阿尔茨海默病、心血管疾病等
[教材隐性知识]　源于选择性必修3 P46“相关信息”科学家已尝试采用多种方法来制备iPS细胞，包括借助载体将________________导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用________________等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来的，后来发现已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。
(1)营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制(2023·海南，7A)(　　)
(2)进行动物细胞培养时，血清应经过高温处理后加入培养基(2022·湖北，6C)(　　)
(3)培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳(2022·江苏，14B)(　　)
考向一　动物细胞培养
1．(2024·黑吉辽，14)从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A．传代培养时，培养皿需密封防止污染
B．选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C．直接用离心法收集细胞进行传代培养
D．细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
2．(2025·福州一中模拟)干眼症是由泪液分泌减少导致的眼睛干涩的病症。将有关基因导入已分化的体细胞获得诱导多能干细胞(iPS细胞)，进而培养得到眼结膜组织，可分泌泪液成分“黏液素”，有望治疗干眼症。下列相关说法错误的是(　　)
A．导入的基因能促使已分化的体细胞恢复分裂能力
B．利用iPS细胞获得眼结膜组织时应加入分化诱导因子
C．iPS细胞核移植比体细胞核移植更容易表现全能性
D．利用ES细胞治疗人类疾病的前景优于iPS细胞
考点二　动物细胞融合技术与单克隆抗体
1．动物细胞融合技术
2．单克隆抗体的制备
(1)传统抗体的获得
①方法
②缺点：产量低、____________低、__________________差。
(2)单克隆抗体的制备及优点
①制备过程
②单克隆抗体的优点
a．能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生____________结合(特异性强、灵敏度高)。
b．可以________制备。
(3)单克隆抗体的应用
①被广泛用作________试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
②运载__________，形成抗体—药物偶联物，实现对肿瘤细胞的____________杀伤。
③用于______________。
(1)有的病毒经灭活处理后，可用于细胞工程中介导动物细胞的融合(2020·浙江6月选考，15A)(　　)
(2)将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞(2021·江苏，11D)(　　)
(3)甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，判断有关制备过程的叙述是否正确：
①利用抗原－抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞(2023·北京，12C)(　　)
②筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞(2023·北京，12D)(　　)
(4)我国科研团队研制出全球首个以尿液中的抗原为靶标的戊肝诊断试剂盒，该试剂盒还可用于其他类型病毒性肝炎的检测(　　)
理解单克隆抗体的制备过程及应用
长春新碱(VCR)能够干扰肿瘤细胞的有丝分裂，也会影响正常细胞的增殖和分裂，导致药物副作用的发生。H18杂交瘤细胞产生的抗人肝癌单克隆抗体HAb18对于人体肝癌的诊断和靶向治疗具有重要的意义。回答下列问题：
(1)抗人肝癌单克隆抗体HAb18的制备过程中，需要向小鼠体内注射肝癌细胞悬液，其目的是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)单克隆抗体被广泛用作诊断试剂的原因是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)资料：①细胞合成DNA包括D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。
②免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。
③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死亡。
根据上述资料，利用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞的具体方法是在培养基中加入____________________进行培养，一段时间后收集存活细胞。原理是______________可以阻断DNA的D合成途径，所以未融合的骨髓瘤细胞及融合的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞不能在该培养基生长，而未融合的B淋巴细胞及融合的B淋巴细胞和B淋巴细胞不能长期存活，只有________________________的细胞才可以在培养基中长期存活与繁殖。
(4)将VCR与抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过接头连接形成抗体—药物偶联物(ADC)，可实现对肝癌细胞的特异性杀伤，ADC的作用机制如图。据图分析，ADC的抗体可以____________________________________________；药物VCR通过__________________从而__________________，阻断肝癌细胞分裂，诱导肝癌细胞凋亡。
考向二　动物细胞融合技术与单克隆抗体
3．(2021·山东，15)一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗p72的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是(　　)
A．注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大
B．单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合
C．利用该小鼠只能制备出一种抗p72的单抗
D．p72部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况
4．(2023·湖北，22节选)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。
回答下列问题：
(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是___________________________________________________________。
(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对______________________和__________________生长具有抑制作用。
(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是_________________
_____________________________________________________________________________。
考点三　动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物细胞核移植技术的概念和类型
(1)概念
将动物一个细胞的______________移入去核的__________________中，使这个重新组合的细胞发育成____________，继而发育为________________的技术。
(2)原理：______________________。
(3)类型：哺乳动物核移植可分为____________________核移植和________________核移植，其中______________核移植较易成功。
2．体细胞核移植的过程
[提醒]　目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。
3．体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题
前景 畜牧业 加速家畜__________进程、促进优良畜群繁育
医药卫生 ①作为________生产医用蛋白； ②________________的细胞、组织或器官可以用于异种移植； ③人核移植________经过诱导分化形成相应的细胞、组织或器官，可用于器官移植
科学研究 ①研究克隆动物可使人类更深入地了解________及衰老过程；②克隆一批遗传背景相同的动物，可以通过它们之间的对比来分析________；③克隆特定疾病模型的动物，为研究________和开发相应的药物提供帮助
保护濒危物种 增加濒危物种的存活数量
问题 ①成功率________；②绝大多数克隆动物存在________问题，表现出________
理解动物体细胞核移植的过程及应用
培育克隆猴的流程如图所示。请结合图示回答问题：
(1)在将体细胞的核移植到卵母细胞之前，必须先对卵母细胞进行去核操作的原因是什么？
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
(2)上述体细胞核移植技术培育的克隆猴没有实现对体细胞供体动物进行100%的复制，其原因是克隆动物绝大部分DNA来自体细胞供体(核供体)动物的细胞核，但其线粒体中的DNA同时来自核供体细胞和______________________。所以，克隆猴不是对核供体动物进行完全相同的复制。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的发育及一些行为、习性的形成与__________________也有很大关系。
(3)在此过程中，灭活的仙台病毒所起的作用是__________________。
(4)为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，Kdm4d的mRNA翻译的组蛋白去甲基化酶能___________；同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理了它，TSA可以抑制组蛋白脱乙酰酶的作用，从而________________________________________________________________________。
考向三　动物体细胞核移植技术和克隆动物
5．(2021·辽宁，13)如图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是(　　)
A．后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物质共同决定
B．过程①需要提供95%空气和5%CO2的混合气体
C．过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理
D．过程③将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植
6．(2024·武汉模拟)如图为体细胞克隆猴“中中”和“华华”的培育流程，为建立动物模型、研究疾病机理带来光明前景。下列叙述错误的是(　　)
A．过程①将成纤维细胞注射到去核的卵母细胞中，说明细胞膜的控制作用是相对的
B．卵子细胞质中含有促使成纤维细胞核全能性表达的物质
C．中中、华华的性别由成纤维细胞的遗传物质决定
D．“去核”去除的是纺锤体—染色体复合物
一、过教材
1．实验小鼠皮肤成纤维细胞培养的基本过程如图所示。科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞获得一种类似胚胎干细胞的细胞，称为诱导多能干细胞(简称iPS 细胞)。下列叙述正确的是(　　)
A．应使用加入血清等一些天然成分的液体培养基来培养皮肤细胞
B．培养液需要定期更换，以便提供营养和清除代谢废物
C．应在95%的O2和5%的 CO2培养箱中培养，培养液中的CO2用于维持pH
D．图中丙和丁分别表示的是原代培养和传代培养，其培养原理不同
E．体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，都会发生接触抑制现象
F．传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集，不需要再用酶处理
G．iPS细胞是只能由成纤维细胞诱导形成的类似胚胎干细胞的一种细胞
H．利用iPS 细胞分化形成的器官进行自体移植后将引发机体产生细胞免疫
I．iPS 细胞较传统胚胎干细胞，具有细胞来源广泛、较少涉及伦理道德问题等优点
2．下列关于动物细胞融合、单克隆抗体的制备及应用的叙述中，不正确的是(　　)
A．动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核膜的融合
B．用灭活的病毒诱导融合利用了细胞膜的流动性
C．单克隆抗体可对目的基因是否成功表达进行检测与鉴定
D．单抗制备时至少需要2次筛选，第2次筛选常用选择培养基进行
E．杂交瘤细胞在培养过程中有接触抑制现象，需要用胰蛋白酶处理
F．可以从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体
G．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，产量高
H．抗体—药物偶联物可定向清除肿瘤细胞，发挥杀伤作用的主要是单克隆抗体
3．下列关于动物细胞核移植技术的叙述，正确的是(　　)
A．哺乳动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植
B．卵母细胞需要培养至M Ⅱ期再去核
C．卵母细胞去核的实质是去除细胞中的纺锤体—染色体复合物
D．梯度离心是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核的
E．用物理或化学方法激活重构胚，使其完成分裂和发育进程
F．克隆动物的遗传物质全部来自供体的体细胞核
G．用体细胞核移植技术克隆出大熊猫，体现了动物细胞核具有全能性
H．核移植技术培育动物可在保持优良性状的同时提高遗传的多样性
二、过高考
(2020·全国Ⅰ，38节选)为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。
回答下列问题：
(1)上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于_________________，使用该培养基进行细胞培养的结果是_________________。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是___________________。
答案精析
考点一　整合
1．单个细胞　生长和增殖
2．血清　培养液和培养用具　培养液　7.2～7.4　维持培养液的pH
3．胰蛋白　胶原蛋白　单个细胞　细胞悬液　原代　悬浮　贴壁　分裂受阻或停止　传代培养　(1)贴附　(2)相互接触　分裂增殖　(3)分瓶　初次培养　(4)分瓶
4．早期胚胎　个体　特定的细胞或组织　胚胎干细胞
教材隐性知识　特定基因　小分子化合物
判断正误
(1)×　[传代培养的胚胎干细胞会发生接触抑制。]
(2)×　[血清经过高温处理后，其中的活性成分变性，失去原有功能。]
(3)√
评价
1．D　[传代培养时需要营造无菌、无毒以及95%空气＋5%CO2的气体环境，而非密封，A错误；①的细胞还未快速增长，此时进行传代培养没有意义，应选②的细胞进行传代培养，B错误；对于贴壁生长的细胞进行传代培养时，先需要用胰蛋白酶等处理，使之分散为单个细胞，然后再用离心法收集，之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养，C错误。]
2．D　[因为诱导过程不需要破坏胚胎，不涉及伦理问题，而且iPS细胞来自病人自身的体细胞，还可以避免免疫排斥，故利用iPS细胞治疗人类疾病的前景优于ES细胞，D错误。]
考点二　整合
1．PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法　细胞膜的流动性
2．(1)①抗体　血清　②纯度　特异性　(2)①B淋巴细胞　选择　杂交瘤细胞　②a.特异性　b．大量　(3)①诊断　②药物　选择性　③治疗疾病
判断正误
(1)√
(2)×　[若仅考虑细胞两两融合的情况，将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等。]
(3)①√
②×　[由于一个B细胞经分化后只能分泌一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞也只能产生一种抗体。]
(4)×　[抗体具有特异性，所以戊肝诊断试剂盒只能用于戊肝的检测，不能用于其他类型病毒性肝炎的检测。]
提升
(1)刺激机体发生免疫应答，从而得到能产生特定抗体的B淋巴细胞
(2)单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备
(3)氨基蝶呤　氨基蝶呤　B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合
(4)发挥靶向运输作用，携带VCR与肝癌细胞特异性结合　抑制微管蛋白聚合　抑制纺锤体的形成
评价
3．D　[单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，因此抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A错误；单抗制备过程中通常是免疫后将脾脏破碎，然后用离心法将脾脏细胞(包含各种产生或不产生抗体的B细胞)和红细胞分开，然后用脾细胞与骨髓瘤细胞融合，而不能直接分离出浆细胞，B错误；非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72上有多种抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，所以向小鼠体内注入p72后，可以刺激小鼠产生多种抗p72的单抗，C错误；p72部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D正确。]
4．(1)不需要　使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合　(2)未融合的亲本细胞　融合的具有同种核的细胞　(3)通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞
解析　(1)浆细胞是高度分化的细胞，不能增殖，所以不能通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原—抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。
考点三　整合
1．(1)细胞核　卵母细胞　新胚胎　动物个体　(2)动物体细胞核具有全能性　(3)胚胎细胞　体细胞　胚胎细胞
2．MⅡ　重构胚
3．遗传改良　生物反应器　转基因克隆动物　胚胎干细胞　胚胎发育　致病基因　致病机制　非常低　健康　遗传和生理缺陷
提升
(1)为了使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自体细胞供体动物。
(2)受体卵母细胞　所处环境
(3)诱导细胞融合
(4)降低组蛋白的甲基化水平　提高组蛋白的乙酰化水平
评价
5．B　[后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自乙，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物质共同决定，A错误；动物细胞培养中需要提供95%空气(保证细胞的有氧呼吸)和5%CO2(维持培养液的pH)的混合气体，B正确；过程②常使用显微操作去核法对卵母细胞进行处理，C错误；过程③将激活后的重组细胞培养至囊胚或桑葚胚后移植，D错误。]
6．A　[过程①将成纤维细胞注射到去核的卵母细胞中是在人为操作下进行的，不能说明细胞膜的控制作用是相对的，A错误。]
查落实固基础
一、
1．ABFI　[应在95%的空气和5%的 CO2培养箱中培养，培养液中的 CO2用于维持培养液的pH，C错误；丙培养细胞1是原代培养，丁培养细胞2是传代培养，二者培养原理相同，都为细胞的增殖，D错误；体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，能贴壁生长的细胞会发生接触抑制现象，悬浮生长的细胞不会，E错误；iPS细胞可由成纤维细胞诱导形成，也可由其他的细胞诱导形成，如已分化的T细胞、B细胞，G错误；利用iPS细胞分化形成的器官进行自体移植，可避免机体产生细胞免疫，H错误。]
2．DEH　[单克隆抗体制备过程中至少需要2次筛选，第1次筛选通常用特定的选择培养基筛选，第2次筛选利用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，D错误；杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞无限增殖的特征，培养过程中一般无接触抑制现象，不需要用胰蛋白酶处理，E错误；抗体—药物偶联物作用机制是利用单克隆抗体寻找到癌细胞后，药物作用于癌细胞，使癌细胞被清除，H错误。]
3．ABCDEG　[克隆动物的遗传物质大部分来自供体的体细胞核，其细胞质中的遗传物质还有一部分来自去核的卵母细胞，F错误；核移植技术培育动物可保持优良性状，但不能提高遗传的多样性，H错误。]
二、
(1)诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞
(2)选择培养基　只有杂交瘤细胞能够生存　抗原与抗体的反应具有特异性(共100张PPT)
动物细胞工程
生物
大
一
轮
复
习
第52课时
课标要求
1.阐明动物细胞培养的条件和过程。
2.阐明动物细胞核移植的原理和过程。
3.阐明动物细胞融合的概念。
4.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。
5.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
考情分析
1.动物细胞培养技术 2024·黑吉辽·T14　2023·辽宁·T7　2022·江苏·T14　2022·湖北·T6
2.动物细胞融合和单克隆抗体的制备 2024·江西·T16　2023·北京·T12　2023·湖北·T22　2022·山东·T15
2022·福建·T13　2022·辽宁·T24
3.动物细胞核移植技术 2023·天津·T7　2021·辽宁·T13　2020·天津·T1
考点三　动物体细胞核移植技术和克隆动物
内容索引
课时精练
考点一　动物细胞培养
考点二　动物细胞融合技术与单克隆抗体
动物细胞培养
< 考点一 >
必备知识
整合
1.动物细胞培养的概念
从动物体中取出相关的组织，将它分散成 ，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞 的技术。
单个细胞
生长和增殖
2.动物细胞培养的条件
血清
培养液和培养用具
培养液
7.2～7.4
维持培养液的pH
动物细胞培养一般用液体培养基，植物组织培养一般用固体培养基。
3.动物细胞培养的过程
胰蛋白
胶原蛋白
单个细胞
细胞悬液
原代
悬浮
贴壁
分裂受阻或停止
传代培养
(1)细胞贴壁：体外培养的大多数动物细胞往往 在培养瓶的瓶壁上。
(2)接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面 时，细胞通常会停止
。
(3)原代培养： 之前的细胞培养，即动物组织经处理后的 。
(4)传代培养： 后的细胞培养。
贴附
相互接触
分裂增殖
分瓶
初次培养
分瓶
种类 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
来源 _________ 骨髓、脐带血和外周血 体细胞(如成纤维细胞等)
特点 能分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的组织和器官甚至____ 分化成__________ ______ 能诱导分化成类似
的细胞
4.干细胞培养及其应用
早期胚胎
个体
特定的细胞
或组织
胚胎干细胞
种类 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
应用 分化成心肌细胞、神经元和造血干细胞等 造血干细胞用于治疗白血病等；神经干细胞用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病等 治疗小鼠的镰状细胞贫血、阿尔茨海默病、心血管疾病等
源于选择性必修3 P46“相关信息”科学家已尝试采用多种方法来制备iPS细胞，包括借助载体将 导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用 等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来的，后来发现已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。
教材隐性知识
特定基因
小分子化合物
(1)营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制
(2023·海南，7A)(　　)
提示　传代培养的胚胎干细胞会发生接触抑制。
×
判断正误
(2)进行动物细胞培养时，血清应经过高温处理后加入培养基
(2022·湖北，6C)(　　)
提示　血清经过高温处理后，其中的活性成分变性，失去原有功能。
×
(3)培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳
(2022·江苏，14B)(　　)
√
考向一　动物细胞培养
1.(2024·黑吉辽，14)从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是
A.传代培养时，培养皿需密封防止污染
B.选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C.直接用离心法收集细胞进行传代培养
D.细胞增长进入平台期可能与细胞密度过
大有关
√
迁移应用
评价
传代培养时需要营造无菌、无毒以及95%空气＋5%CO2的气体环境，而非密封，A错误；
①的细胞还未快速增长，此时进行传代培养没有意义，应选②的细胞进行传代培养，B错误；
对于贴壁生长的细胞进行传代培养时，先需要
用胰蛋白酶等处理，使之分散为单个细胞，然后再用离心法收集，之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养，C错误。
2.(2025·福州一中模拟)干眼症是由泪液分泌减少导致的眼睛干涩的病症。将有关基因导入已分化的体细胞获得诱导多能干细胞(iPS细胞)，进而培养得到眼结膜组织，可分泌泪液成分“黏液素”，有望治疗干眼症。下列相关说法错误的是
A.导入的基因能促使已分化的体细胞恢复分裂能力
B.利用iPS细胞获得眼结膜组织时应加入分化诱导因子
C.iPS细胞核移植比体细胞核移植更容易表现全能性
D.利用ES细胞治疗人类疾病的前景优于iPS细胞
√
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因为诱导过程不需要破坏胚胎，不涉及伦理问题，而且iPS细胞来自病人自身的体细胞，还可以避免免疫排斥，故利用iPS细胞治疗人类疾病的前景优于ES细胞，D错误。
动物细胞融合技术与单克隆抗体
< 考点二 >
1.动物细胞融合技术
必备知识
整合
PEG融合法、电融合法和灭活
细胞膜的流动性
病毒诱导法
2.单克隆抗体的制备
(1)传统抗体的获得
①方法
抗体
血清
②缺点：产量低、 低、 差。
纯度
特异性
(2)单克隆抗体的制备及优点
①制备过程
B淋巴细胞
选择
杂交瘤细胞
②单克隆抗体的优点
a.能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生 结合(特异性强、灵敏度高)。
b.可以 制备。
(3)单克隆抗体的应用
①被广泛用作 试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
②运载 ，形成抗体—药物偶联物，实现对肿瘤细胞的 杀伤。
③用于 。
特异性
大量
诊断
药物
选择性
治疗疾病
(1)有的病毒经灭活处理后，可用于细胞工程中介导动物细胞的融合
(2020·浙江6月选考，15A)(　　)
(2)将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞(2021·江苏，11D)(　　)
√
判断正误
提示　若仅考虑细胞两两融合的情况，将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等。
×
(3)甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，判断有关制备过程的叙述是否正确：
①利用抗原－抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞(2023·北京，12C)(　　)
②筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞(2023·北京，12D)(　　)
√
判断正误
提示　由于一个B细胞经分化后只能分泌一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞也只能产生一种抗体。
×
(4)我国科研团队研制出全球首个以尿液中的抗原为靶标的戊肝诊断试剂盒，该试剂盒还可用于其他类型病毒性肝炎的检测(　　)
判断正误
提示　抗体具有特异性，所以戊肝诊断试剂盒只能用于戊肝的检测，不能用于其他类型病毒性肝炎的检测。
×
理解单克隆抗体的制备过程及应用
长春新碱(VCR)能够干扰肿瘤细胞的有丝分裂，也会影响正常细胞的增殖和分裂，导致药物副作用的发生。H18杂交瘤细胞产生的抗人肝癌单克隆抗体HAb18对于人体肝癌的诊断和靶向治疗具有重要的意义。回答下列问题：
(1)抗人肝癌单克隆抗体HAb18的制备过程中，需要向小鼠体内注射肝癌细胞悬液，其目的是 。
(2)单克隆抗体被广泛用作诊断试剂的原因是______________________________
_____________________________________________________。
关键能力
提升
刺激机体发生免疫应答，从而得到能产生特定抗体的B淋巴细胞
单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备
(3)资料：①细胞合成DNA包括D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。
②免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。
③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死亡。
根据上述资料，利用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞的具体方法是在培养基中加入 进行培养，一段时间后收集存活细胞。原理是 可以阻断DNA的D合成途径，所以未融合的骨髓瘤细胞及融合的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞不能在该培养基生长，而未融合的B淋巴细胞及融合的B淋巴细胞和B淋巴细胞不能长期存活，只有 的细胞才可以在培养基中长期存活与繁殖。
氨基蝶呤
氨基蝶呤
B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合
(4)将VCR与抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过接头连接形成抗体—药物偶联物(ADC)，可实现对肝癌细胞的特异性杀伤，ADC的作用机制如图。据图分析，ADC的抗体可以_______________________________________
；药物VCR通过 从而 ，阻断肝癌细胞分裂，诱导肝癌细胞凋亡。
发挥靶向运输作用，携带 VCR 与肝癌细胞特
异性结合
抑制微管蛋白聚合
抑制纺锤体的形成
考向二　动物细胞融合技术与单克隆抗体
3.(2021·山东，15)一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗p72的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是
A.注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大
B.单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合
C.利用该小鼠只能制备出一种抗p72的单抗
D.p72部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况
√
迁移应用
评价
单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，因此抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A错误；
单抗制备过程中通常是免疫后将脾脏破碎，然后用离心法将脾脏细胞(包含各种产生或不产生抗体的B细胞)和红细胞分开，然后用脾细胞与骨髓瘤细胞融合，而不能直接分离出浆细胞，B错误；
非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 上有多种抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，所以向小鼠体内注入p72 后，可以刺激小鼠产生多种抗p72的单抗，C错误；
p72 部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D正确。
4.(2023·湖北，22节选)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。
回答下列问题：
(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)______(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是_____________________
_______________________________________。
不需要
分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
使细胞接触处的磷脂
浆细胞是高度分化的细胞，不能增殖，所以不能通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对___________________和_______________________生长具有抑制作用。
未融合的亲本细胞
融合的具有同种核的细胞
在杂交瘤细胞筛选过程中，常用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是_________________________________________________。
通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞
单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原—抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。
返回
动物体细胞核移植技术和克隆动物
< 考点三 >
必备知识
整合
1.动物细胞核移植技术的概念和类型
(1)概念
将动物一个细胞的 移入去核的 中，使这个重新组合的细胞发育成 ，继而发育为 的技术。
(2)原理： 。
(3)类型：哺乳动物核移植可分为 核移植和 核移植，其中
核移植较易成功。
细胞核
卵母细胞
新胚胎
动物个体
动物体细胞核具有全能性
胚胎细胞
体细胞
胚胎细胞
2.体细胞核移植的过程
MⅡ
重构胚
目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。
前景 畜牧业 加速家畜 进程、促进优良畜群繁育
医药 卫生 ①作为 生产医用蛋白；
② 的细胞、组织或器官可以用于异种移植；
③人核移植 经过诱导分化形成相应的细胞、组织或器官，可用于器官移植
科学 研究 ①研究克隆动物可使人类更深入地了解 及衰老过程；②克隆一批遗传背景相同的动物，可以通过它们之间的对比来分析______
；③克隆特定疾病模型的动物，为研究 和开发相应的药物提供帮助
保护濒危物种 增加濒危物种的存活数量
问题 ①成功率 ；②绝大多数克隆动物存在 问题，表现出______________
3.体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题
遗传改良
生物反应器
转基因克隆动物
胚胎干细胞
胚胎发育
致病
基因
致病机制
非常低
健康
遗传和生理缺陷
理解动物体细胞核移植的过程及应用
培育克隆猴的流程如图所示。请结合图示回答问题：
(1)在将体细胞的核移植到卵母细胞之前，必须先对卵母细胞进行去核操作的原因是什么？
关键能力
提升
提示　为了使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自体细胞供体动物。
(2)上述体细胞核移植技术培育的克隆猴没有实现对体细胞供体动物进行100%的复制，其原因是克隆动物绝大部分DNA来自体细胞供体(核供体)动物的细胞核，但其线粒体中的DNA同时来自核供体细胞和___________
。所以，克隆猴不是对核供体动物进行完全相同的复制。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的发育及一些行为、习性的形成与
也有很大关系。
(3)在此过程中，灭活的仙台病毒所起的作用是 。
受体卵母细
胞
所处环境
诱导细胞融合
(4)为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶 Kdm4d的mRNA注入了重构胚，Kdm4d的mRNA翻译的组蛋白去甲基化酶能 ；同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理了它，TSA可以抑制组蛋白脱乙酰酶的作用，从而
。
降低组蛋白的甲基化水平
提高组蛋白的乙酰化水平
考向三　动物体细胞核移植技术和克隆动物
5.(2021·辽宁，13)如图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是
A.后代丁的遗传性状由甲和
丙的遗传物质共同决定
B.过程①需要提供95%空气
和5%CO2的混合气体
C.过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理
D.过程③将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植
√
迁移应用
评价
后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自乙，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物质共同决定，A错误；
动物细胞培养中需要提供95%空气(保证细胞的有氧呼吸)和5%CO2(维持培养液的pH)的混合气体，B正确；
过程②常使用显微操作去核法对卵母细胞进行处理，C错误；
过程③将激活后的重组细胞培养至囊胚或桑葚胚后移植，D错误。
6.(2024·武汉模拟)如图为体细胞克隆猴“中中”和“华华”的培育流程，为建立动物模型、研究疾病机理带来光明前景。下列叙述错误的是
A.过程①将成纤维细胞
注射到去核的卵母细
胞中，说明细胞膜的
控制作用是相对的
B.卵子细胞质中含有促使成纤维细胞核全能性表达的物质
C.中中、华华的性别由成纤维细胞的遗传物质决定
D.“去核”去除的是纺锤体—染色体复合物
√
过程①将成纤维细胞注射到去核的卵母细胞中是在人为操作下进行的，不能说明细胞膜的控制作用是相对的，A错误。
A.应使用加入血清等一些天然成分的液体培养基来培养皮肤细胞
B.培养液需要定期更换，以便提供营养和清除代谢废物
C.应在95%的O2和5%的 CO2培养箱中培养，培养液中的CO2用于维持pH
一、过教材
1.实验小鼠皮肤成纤维细胞培养的基本过程如图所示。科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞获得一种类似胚胎干细胞的细胞，称为诱导多能干细胞(简称iPS 细胞)。下列叙述正确的是
√
√
D.图中丙和丁分别表示的是原代培养和传代培养，其培养原理不同
E.体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，都会发生接触抑制现象
F.传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集，不需要再用酶处理
G.iPS细胞是只能由成纤维细胞诱导形成的类似胚胎干细胞的一种细胞
H.利用iPS细胞分化形成的器官进行自体移植后将引发机体产生细胞免疫
I.iPS细胞较传统胚胎干细胞，具有细胞来源广泛、较少涉及伦理道德问
题等优点
√
√
应在95%的空气和5%的 CO2培养箱中培养，培养液中的 CO2用于维持培养液的pH，C错误；
丙培养细胞1是原代培养，丁培养细胞2是传代培养，二者培养原理相同，都为细胞的增殖，D错误；
体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，能贴壁生长的细胞会发生接触抑制现象，悬浮生长的细胞不会，E错误；
iPS细胞可由成纤维细胞诱导形成，也可由其他的细胞诱导形成，如已分化的T细胞、B细胞，G错误；
利用iPS细胞分化形成的器官进行自体移植，可避免机体产生细胞免疫，H错误。
2.下列关于动物细胞融合、单克隆抗体的制备及应用的叙述中，不正确的是
A.动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核膜的融合
B.用灭活的病毒诱导融合利用了细胞膜的流动性
C.单克隆抗体可对目的基因是否成功表达进行检测与鉴定
D.单抗制备时至少需要2次筛选，第2次筛选常用选择培养基进行
E.杂交瘤细胞在培养过程中有接触抑制现象，需要用胰蛋白酶处理
F.可以从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体
G.单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，产量高
H.抗体—药物偶联物可定向清除肿瘤细胞，发挥杀伤作用的主要是单克隆抗体
√
√
√
单克隆抗体制备过程中至少需要2次筛选，第1次筛选通常用特定的选择培养基筛选，第2次筛选利用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，D错误；
杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞无限增殖的特征，培养过程中一般无接触抑制现象，不需要用胰蛋白酶处理，E错误；
抗体—药物偶联物作用机制是利用单克隆抗体寻找到癌细胞后，药物作用于癌细胞，使癌细胞被清除，H错误。
3.下列关于动物细胞核移植技术的叙述，正确的是
A.哺乳动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植
B.卵母细胞需要培养至M Ⅱ期再去核
C.卵母细胞去核的实质是去除细胞中的纺锤体—染色体复合物
D.梯度离心是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核的
E.用物理或化学方法激活重构胚，使其完成分裂和发育进程
F.克隆动物的遗传物质全部来自供体的体细胞核
G.用体细胞核移植技术克隆出大熊猫，体现了动物细胞核具有全能性
H.核移植技术培育动物可在保持优良性状的同时提高遗传的多样性
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√
√
√
克隆动物的遗传物质大部分来自供体的体细胞核，其细胞质中的遗传物质还有一部分来自去核的卵母细胞，F错误；
核移植技术培育动物可保持优良性状，但不能提高遗传的多样性，H错误。
二、过高考
(2020·全国Ⅰ，38节选)为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。
回答下列问题：
(1)上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是_____________
。
诱导小鼠甲产
生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞
(2)为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于 ，使用该培养基进行细胞培养的结果是 。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是 。
选择培养基
只有杂交瘤细胞能够生存
抗原与抗体的反应具有特异性
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课时精练
对一对
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答案
题号 1 2 3 4 5 6 7 8
答案 A B B C D A B D
题号 9 10 11 12 13 14
答案 D D B B C B
(1)一种抗原中包含多种抗原决定簇　
(2)既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体　PEG(或聚乙二醇)　相同　特定的选择培养基　克隆化培养　纯度高、特异性强、灵敏度高　
(3)选用腺瘤细胞、鳞状细胞瘤细胞分别与B淋巴细胞融合后选择能产生单一抗体的杂交瘤细胞，取等量的杂交瘤细胞在体外培养相同的时间，检测抗体的数量
15.
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答案
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一、选择题
1.(2024·武汉模拟)体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，培养方式可分为悬浮培养和贴壁培养。下列叙述正确的是
A.悬浮培养一般使用液体培养基
B.贴壁培养一般使用固体培养基
C.悬浮培养会发生接触抑制现象
D.血液中淋巴细胞适合贴壁培养
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动物细胞培养均采用液体培养基，B错误；
贴壁培养会发生接触抑制现象，悬浮培养不会发生接触抑制现象，C错误；
体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，因此血液中淋巴细胞适合悬浮培养，D错误。
答案
2.(2024·张家口模拟)科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞(简称iPS细胞)，iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是
A.体外培养小鼠成纤维细胞
和iPS细胞时，定期更换
培养液可以清除细胞的代
谢物
B.选取的小鼠成纤维组织需经胃蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液
C.iPS细胞用于疾病治疗时存在分化为肿瘤细胞的风险
D.若iPS细胞取自病人，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应
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选取的小鼠成纤维组织需经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液，由于动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，B错误。
3.(2024·安阳一模)研究人员诱导肺上皮干细胞增殖分化可生成不同肺类器官。肺类器官可自组装或与成熟体细胞组装成肺类装配体，过程如图所示。下列叙述正确的是
A.为提供无菌的环境，培养肺类装配
体时应对细胞进行灭菌处理
B.在培养肺上皮干细胞和体细胞时，
培养液中通常需要加入血清
C.培养肺类装配体时，需提供含95%
O2和5%CO2的气体环境
D.在组装肺类装配体的培养过程中，
运用了动物细胞融合技术
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灭菌会导致细胞失活，A错误；
肺类装配体需要在95%空气和5%CO2的气体环境中培养，C错误；
由图可知，肺类装配体形成过程中没有利用动物细胞融合技术，仅是将不同类型的细胞组装起来，D错误。
4.(2024·孝感模拟)新开发药物X具有抗癌效果好、副作用小等优点，某小组拟通过培养小鼠肝癌细胞(甲)和正常肝细胞(乙)对其抗癌效果进行验证。下列说法正确的是
A.培养甲和乙时均会出现明显的接触抑制现象
B.在进行细胞培养时，应拧紧培养瓶盖进行培养
C.需另设一种抗癌药物进行实验才能达到实验目的
D.在培养液中不加抗生素对实验结果没有影响
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甲是癌细胞，培养时不会出现接触抑制，A错误；
培养细胞时，需要适宜的空气，不能拧紧培养瓶盖，B错误；
需另设一种抗癌药物进行实验(作对照)才能达到实验目的，以证明新开发药物X具有抗癌效果好、副作用小等优点，C正确；
在培养液中不加抗生素会因污染而对实验结果造成影响，D错误。
答案
5.据报道，我国科研人员在太空中进行细胞电融合实验，获得烟草黄花品种叶肉细胞与烟草革新一号叶肉细胞的杂交细胞，又成功完成小鼠淋巴细胞和人骨髓瘤细胞杂交实验。下列相关叙述不正确的是
A.两个电融合实验中，融合前都需用一定浓度的特定酶预处理实验材料
B.细胞经电融合处理后，需进一步筛选，以淘汰未融合细胞和多核细胞
C.电融合处理后的烟草细胞经组织培养，可获得具双亲优良性状的植株
D.经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞，培养过程中体现了细胞的全能性
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经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞，培养过程中没有体现细胞的全能性，D错误。
答案
A.已免疫的B淋巴细胞在HAT培养基中可大量增殖
B.用该培养基筛选出的能产抗体的杂交瘤细胞有多种
C.HAT培养基是选择培养基，可以满足部分细胞的生存
D.杂交瘤细胞中，“核苷酸→DNA”主要发生于分裂间期
6.(2024·毕节一模)如图所示，核苷酸合成有两条途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入了H、A、T三种物质的HAT培养基来筛选杂交瘤细胞。下列相关说法错误的是
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免疫的B淋巴细胞因高度分化而不能大量增殖，A错误；
用该培养基筛选出的能产抗体的杂交瘤细胞有多种，所以需进一步筛选后才能获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，B正确；
HAT培养基是选择培养基，可以满足部分细胞的生存，如杂交瘤细胞，C正确；
杂交瘤细胞中，“核苷酸→DNA”即DNA复制过程，主要发生于分裂间期，D正确。
7.(2025·唐山开学考试)在某药物研发过程中，需制备抗细胞膜蛋白N的抗体，流程如图所示。下列叙述错误的是
A.取脾组织之前应用蛋白N对
健康小鼠进行免疫
B.将培养B 淋巴细胞的培养瓶
置于培养箱并通入无菌氧气
C.将杂交瘤细胞转入96孔板时，
每个孔中尽量只接种一个细胞
D.将药物与抗蛋白N的单克隆抗体结合，可实现特异性治疗
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将培养B 淋巴细胞的培养瓶置于二氧化碳培养箱中进行培养，其中存在氧气，不需要专门通入无菌氧气，B错误。
8.(2024·邢台一模)为解决杂交瘤细胞在传代培养过程中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失问题，研究者将抗原刺激后的B淋巴细胞用EBV(一种病毒颗粒)感染，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷(Oua)敏感，骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活，但对Oua不敏感。如图表示操作过程，下列有关分析错误的是
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A.B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的脾脏
B.HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的
骨髓瘤细胞
C.杂交瘤细胞染色体丢失可能会导致抗体的产生能力下降
D.杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力
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答案
抗原刺激可引起机体产生相应的B淋巴细胞，且B淋巴细胞可分布于淋巴结和脾脏等处，故B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等，A正确；
据“EBV转化细胞能够在
HAT培养基中存活，但对
Oua敏感，骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活，但对Oua不敏感”可知，HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞，B正确；
杂交瘤细胞具有持续产生针对特定抗原而不是EBV的抗体的能力，D错误。
9.(2022·山东，15)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是
A.双抗可同时与2种抗原结合
B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D.同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
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根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A正确；
根据抗原与抗体能够发生特异性结合的特性，
利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从
而使药物发挥相应的作用，B正确；
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由于双抗是在两种不同的抗原刺激下，B细胞增殖、分化产生不同的浆细胞分泌形成的，因此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的
2种抗原来进行抗原－抗体检测，从而实现对
双抗的筛选，C正确；
同时注射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同
的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，
D错误。
10.(2024·海南，7)海南龙血树具有药用和观赏价值，可利用植物组织培养技术产生愈伤组织，进而获得该种植株。动物细胞融合技术可将骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，进而制备单克隆抗体。下列有关这两种技术的叙述，正确的是
A.利用的原理均是细胞的全能性
B.使用的培养基均需添加葡萄糖和血清
C.培养时的温度和pH均相同
D.产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力
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利用植物组织培养技术获得海南龙血树，利用的原理是细胞的全能性；制备单克隆抗体使用了动物细胞培养技术和细胞融合技术，这两种技术利用的原理分别是细胞的增殖和细胞膜的流动性，A错误；
利用植物组织培养技术获得海南龙血树，使用的培养基中添加的是蔗糖，不需添加葡萄糖和血清，B错误；
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由于植物细胞和动物细胞生长所需的适宜温度和pH存在差异，所以培养时的温度和pH均不相同，C错误；
愈伤组织是外植体(离体的植物器官、组织或细胞)经脱分化形成的，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合后形成的，因此产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力，D正确。
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11.(2025·芜湖检测)乳腺癌化疗的药物在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，为降低药物对患者的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物(ADC)，过程如图所示。下列相关说法正确的是
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A.对过程①形成的融合细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，
就可以获得能分泌所需抗体的细胞
B.ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，ADC起作用时会被细胞吞
噬，并在溶酶体内被分解后释放药物
C.经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞具有的特点是能准确识别抗原的细微
差异并能大量制备
D.ADC能降低乳腺癌治
疗药物的副作用，原
因是药物能特异性地
作用于乳腺癌细胞，避免其他细胞受损
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经过程①形成的融合细胞有同种核两两融合和不同核融合细胞，需要经过特定的选择性培养基筛选，A错误；
步骤③是抗体检测，得到的杂交瘤细胞既能大量增殖又能产生专一性抗体，C错误；
ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是抗体能特异性地作用于
乳腺癌(靶)细胞，避免其他细胞受损，D错误。
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12.(2024·天津北辰模拟)治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义，流程如图。下列相关叙述错误的是
A.核移植前需将卵母细胞培
养到M Ⅱ期
B.题述过程体现出动物细胞
具有全能性
C.获得的组织器官移植给个体B一般不发生免疫排斥反应
D.胚胎干细胞需经过基因的选择性表达才能产生出所需的组织器官
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图示表示的是治疗性克隆的过程，该过程能体现出动物体细胞核具有全能性，B错误。
13.(2024·新余一模)如图为培育体细胞克隆猴的流程。据图分析，下列叙述错误的是
A.将成纤维细胞注入去核卵母细胞前，
用灭活的仙台病毒短暂处理的目的
是利于细胞融合
B.图中克隆猴的细胞质基因来自猴A
和猴B
C.组蛋白的甲基化和乙酰化不利于重
构胚完成细胞分裂和发育过程
D.体细胞克隆猴的成功便于建立某些
疾病模型和药物筛选
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灭活的仙台病毒具有促融的作用，因此，将成纤维细胞注入去核卵母细胞前，用灭活的仙台病毒短暂处理的目的是利于细胞融合，A正确；
据图可知，体细胞克隆猴是由去核卵母细胞和成纤维细胞融合而成的重构胚发育而来的，故体细胞克隆猴的线粒体DNA来自去核卵母细胞和成纤维细胞，即图中克隆猴的细胞质基因来自猴A和猴B，B正确；
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结合题图，重构胚在加入Kdm4d的mRNA和TSA后，发育成克隆猴，而Kdm4d的mRNA表达产物为组蛋白去甲基化酶，可以使组蛋白去甲基化，TSA为组蛋白去乙酰化酶抑制剂，抑制组蛋白去乙酰化酶的作用，保持组蛋白乙酰化，即组蛋白乙酰化和去甲基化有利于重构胚完成细胞分裂和发育过程，C错误；
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克隆特定疾病模型的动物，可为研究该疾病的致病机制和开发相应的药物提供帮助，因此体细胞克隆猴的成功便于建立某些疾病模型和药物筛选，D正确。
14.(2024·邯郸月考)体细胞核移植技术在畜牧业、医药卫生、拯救濒危动物等方面有着广泛的应用前景。下列关于动物细胞核移植技术应用的叙述，错误的是
A.哺乳动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植的
B.克隆动物与供核动物的遗传性状完全相同，原因是遗传物质主要分布
在细胞核中
C.利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物，可作为生物反应器生
产医用蛋白
D.以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相
应的细胞、组织或器官，将它们移植给患者时可避免发生免疫排斥反应
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二、非选择题
15.(2024·商丘一模)抗原决定簇特指抗原分子上能够与抗体结合位点发生特异性结合并决定抗原特异性的部位。现用某种抗原处理小鼠(出生后即在无菌室中生存)获得多克隆抗体和单克隆抗体的过程如图所示。回答下列问题：
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(1)一种抗原刺激小鼠使其产生免疫反应，从脾脏获取的B淋巴细胞可分泌多种抗体的原因是_____________
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答案
一种抗原中包
含多种抗原决定簇
(2)在单克隆抗体的制备过程中，利用了杂交瘤细胞________________________________________的特点，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合时，常采用的方法为灭活病毒诱导法、电融合法和______________
融合法，动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理______(填“相同”或“不同”)。由融合细胞到产生单克隆抗体需要多次筛选，第一次筛选通常采用_________________筛选出杂交瘤细胞，对上述过程得到的杂交瘤细胞要进行___________和抗体检测，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的优势为____
_______________________(写出2点)。
既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体
PEG(或聚乙二醇)
相同
特定的选择培养基
克隆化培养
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(3)现有腺瘤细胞和鳞状细胞瘤细胞两种瘤细胞，某同学欲探究选用不同种的瘤细胞与B淋巴细胞杂交对产生单克隆抗体数量的影响，请写出实验思路：_____________________
______________________________________________________________________________________________________________________。
选用腺瘤细胞、鳞状细胞瘤细胞分别与B淋巴细胞融合后选择能产生单一抗体的杂交瘤细胞，取等量的杂交瘤细胞在体外培养相同的时间，检测抗体的数量
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实验目的是探究选用不同种的瘤细胞与B淋巴细胞杂交对产生单克隆抗体数量的影响，自变量是不同种的瘤细胞，因变量是对产生单克隆抗体数量的影响，因此实验可以设计为选用腺瘤细胞、鳞状细胞瘤细胞分别与B淋巴细胞融合后选择能产生单一抗体的杂交瘤细胞，取等量的杂交瘤细胞在体外培养相同的时间，检测抗体的数量。第十单元　课时练52　动物细胞工程
选择题1～14题，每小题6分，共84分。
一、选择题
1．(2024·武汉模拟)体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，培养方式可分为悬浮培养和贴壁培养。下列叙述正确的是(　　)
A．悬浮培养一般使用液体培养基
B．贴壁培养一般使用固体培养基
C．悬浮培养会发生接触抑制现象
D．血液中淋巴细胞适合贴壁培养
2．(2024·张家口模拟)科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞(简称iPS细胞)，iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是(　　)
A．体外培养小鼠成纤维细胞和iPS细胞时，定期更换培养液可以清除细胞的代谢物
B．选取的小鼠成纤维组织需经胃蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液
C．iPS细胞用于疾病治疗时存在分化为肿瘤细胞的风险
D．若iPS细胞取自病人，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应
3．(2024·安阳一模)研究人员诱导肺上皮干细胞增殖分化可生成不同肺类器官。肺类器官可自组装或与成熟体细胞组装成肺类装配体，过程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．为提供无菌的环境，培养肺类装配体时应对细胞进行灭菌处理
B．在培养肺上皮干细胞和体细胞时，培养液中通常需要加入血清
C．培养肺类装配体时，需提供含95%O2和5%CO2的气体环境
D．在组装肺类装配体的培养过程中，运用了动物细胞融合技术
4．(2024·孝感模拟)新开发药物X具有抗癌效果好、副作用小等优点，某小组拟通过培养小鼠肝癌细胞(甲)和正常肝细胞(乙)对其抗癌效果进行验证。下列说法正确的是(　　)
A．培养甲和乙时均会出现明显的接触抑制现象
B．在进行细胞培养时，应拧紧培养瓶盖进行培养
C．需另设一种抗癌药物进行实验才能达到实验目的
D．在培养液中不加抗生素对实验结果没有影响
5．据报道，我国科研人员在太空中进行细胞电融合实验，获得烟草黄花品种叶肉细胞与烟草革新一号叶肉细胞的杂交细胞，又成功完成小鼠淋巴细胞和人骨髓瘤细胞杂交实验。下列相关叙述不正确的是(　　)
A．两个电融合实验中，融合前都需用一定浓度的特定酶预处理实验材料
B．细胞经电融合处理后，需进一步筛选，以淘汰未融合细胞和多核细胞
C．电融合处理后的烟草细胞经组织培养，可获得具双亲优良性状的植株
D．经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞，培养过程中体现了细胞的全能性
6．(2024·毕节一模)如图所示，核苷酸合成有两条途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入了H、A、T三种物质的HAT培养基来筛选杂交瘤细胞。下列相关说法错误的是(　　)
A．已免疫的B淋巴细胞在HAT培养基中可大量增殖
B．用该培养基筛选出的能产抗体的杂交瘤细胞有多种
C．HAT培养基是选择培养基，可以满足部分细胞的生存
D．杂交瘤细胞中，“核苷酸→DNA”主要发生于分裂间期
7．(2025·唐山开学考试)在某药物研发过程中，需制备抗细胞膜蛋白N的抗体，流程如图所示。下列叙述错误的是(　　)
A．取脾组织之前应用蛋白N对健康小鼠进行免疫
B．将培养B 淋巴细胞的培养瓶置于培养箱并通入无菌氧气
C．将杂交瘤细胞转入96孔板时，每个孔中尽量只接种一个细胞
D．将药物与抗蛋白N的单克隆抗体结合，可实现特异性治疗
8．(2024·邢台一模)为解决杂交瘤细胞在传代培养过程中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失问题，研究者将抗原刺激后的B淋巴细胞用EBV(一种病毒颗粒)感染，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷(Oua)敏感，骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活，但对Oua不敏感。如图表示操作过程，下列有关分析错误的是(　　)
A．B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的脾脏
B．HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞
C．杂交瘤细胞染色体丢失可能会导致抗体的产生能力下降
D．杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力
9.(2022·山东，15)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是(　　)
A．双抗可同时与2种抗原结合
B．利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
C．筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D．同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
10．(2024·海南，7)海南龙血树具有药用和观赏价值，可利用植物组织培养技术产生愈伤组织，进而获得该种植株。动物细胞融合技术可将骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，进而制备单克隆抗体。下列有关这两种技术的叙述，正确的是(　　)
A．利用的原理均是细胞的全能性
B．使用的培养基均需添加葡萄糖和血清
C．培养时的温度和pH均相同
D．产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力
11．(2025·芜湖检测)乳腺癌化疗的药物在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，为降低药物对患者的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物(ADC)，过程如图所示。下列相关说法正确的是(　　)
A．对过程①形成的融合细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可以获得能分泌所需抗体的细胞
B．ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，ADC起作用时会被细胞吞噬，并在溶酶体内被分解后释放药物
C．经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞具有的特点是能准确识别抗原的细微差异并能大量制备
D．ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是药物能特异性地作用于乳腺癌细胞，避免其他细胞受损
12．(2024·天津北辰模拟)治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义，流程如图。下列相关叙述错误的是(　　)
A．核移植前需将卵母细胞培养到M Ⅱ期
B．上述过程体现出动物细胞具有全能性
C．获得的组织器官移植给个体B一般不发生免疫排斥反应
D．胚胎干细胞需经过基因的选择性表达才能产生出所需的组织器官
13．(2024·新余一模)如图为培育体细胞克隆猴的流程。据图分析，下列叙述错误的是(　　)
A．将成纤维细胞注入去核卵母细胞前，用灭活的仙台病毒短暂处理的目的是利于细胞融合
B．图中克隆猴的细胞质基因来自猴A和猴 B
C．组蛋白的甲基化和乙酰化不利于重构胚完成细胞分裂和发育过程
D．体细胞克隆猴的成功便于建立某些疾病模型和药物筛选
14．(2024·邯郸月考)体细胞核移植技术在畜牧业、医药卫生、拯救濒危动物等方面有着广泛的应用前景。下列关于动物细胞核移植技术应用的叙述，错误的是(　　)
A．哺乳动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植的
B．克隆动物与供核动物的遗传性状完全相同，原因是遗传物质主要分布在细胞核中
C．利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物，可作为生物反应器生产医用蛋白
D．以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或器官，将它们移植给患者时可避免发生免疫排斥反应
二、非选择题
15．(16分)(2024·商丘一模)抗原决定簇特指抗原分子上能够与抗体结合位点发生特异性结合并决定抗原特异性的部位。现用某种抗原处理小鼠(出生后即在无菌室中生存)获得多克隆抗体和单克隆抗体的过程如图所示。回答下列问题：
(1)一种抗原刺激小鼠使其产生免疫反应，从脾脏获取的B淋巴细胞可分泌多种抗体的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)在单克隆抗体的制备过程中，利用了杂交瘤细胞______________________________的特点，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合时，常采用的方法为灭活病毒诱导法、电融合法和________融合法，动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理______(填“相同”或“不同”)。由融合细胞到产生单克隆抗体需要多次筛选，第一次筛选通常采用________________筛选出杂交瘤细胞，对上述过程得到的杂交瘤细胞要进行________和抗体检测，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的优势为________________________ ____________________________________________________________________(写出2点)。
(3)现有腺瘤细胞和鳞状细胞瘤细胞两种瘤细胞，某同学欲探究选用不同种的瘤细胞与B淋巴细胞杂交对产生单克隆抗体数量的影响，请写出实验思路：_____________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案精析
1．A　[动物细胞培养均采用液体培养基，B错误；贴壁培养会发生接触抑制现象，悬浮培养不会发生接触抑制现象，C错误；体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，因此血液中淋巴细胞适合悬浮培养，D错误。]
2．B　[选取的小鼠成纤维组织需经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液，由于动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，B错误。]
3．B　[灭菌会导致细胞失活，A错误；肺类装配体需要在95%空气和5%CO2的气体环境中培养，C错误；由图可知，肺类装配体形成过程中没有利用动物细胞融合技术，仅是将不同类型的细胞组装起来，D错误。]
4．C　[甲是癌细胞，培养时不会出现接触抑制，A错误；培养细胞时，需要适宜的空气，不能拧紧培养瓶盖，B错误；需另设一种抗癌药物进行实验(作对照)才能达到实验目的，以证明新开发药物X具有抗癌效果好、副作用小等优点，C正确；在培养液中不加抗生素会因污染而对实验结果造成影响，D错误。]
5．D　[经电融合获得的人、鼠杂交瘤细胞，培养过程中没有体现细胞的全能性，D错误。]
6．A　[免疫的B淋巴细胞因高度分化而不能大量增殖，A错误；用该培养基筛选出的能产抗体的杂交瘤细胞有多种，所以需进一步筛选后才能获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，B正确；HAT培养基是选择培养基，可以满足部分细胞的生存，如杂交瘤细胞，C正确；杂交瘤细胞中，“核苷酸→DNA”即DNA复制过程，主要发生于分裂间期，D正确。]
7．B　[将培养B 淋巴细胞的培养瓶置于二氧化碳培养箱中进行培养，其中存在氧气，不需要专门通入无菌氧气，B错误。]
8．D　[抗原刺激可引起机体产生相应的B淋巴细胞，且B淋巴细胞可分布于淋巴结和脾脏等处，故B淋巴细胞来源于抗原刺激后动物的淋巴结和脾脏等，A正确；据“EBV转化细胞能够在HAT培养基中存活，但对Oua敏感，骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活，但对Oua不敏感”可知，HAT培养基可去除未与EBV转化细胞融合的骨髓瘤细胞和自身融合的骨髓瘤细胞，B正确；杂交瘤细胞具有持续产生针对特定抗原而不是EBV的抗体的能力，D错误。]
9．D　[根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A正确；根据抗原与抗体能够发生特异性结合的特性，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使药物发挥相应的作用，B正确；由于双抗是在两种不同的抗原刺激下，B细胞增殖、分化产生不同的浆细胞分泌形成的，因此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来进行抗原－抗体检测，从而实现对双抗的筛选，C正确；同时注射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，D错误。]
10．D　[利用植物组织培养技术获得海南龙血树，利用的原理是细胞的全能性；制备单克隆抗体使用了动物细胞培养技术和细胞融合技术，这两种技术利用的原理分别是细胞的增殖和细胞膜的流动性，A错误；利用植物组织培养技术获得海南龙血树，使用的培养基中添加的是蔗糖，不需添加葡萄糖和血清，B错误；由于植物细胞和动物细胞生长所需的适宜温度和pH存在差异，所以培养时的温度和pH均不相同， C错误；愈伤组织是外植体(离体的植物器官、组织或细胞)经脱分化形成的，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合后形成的，因此产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力，D正确。]
11．B　[经过程①形成的融合细胞有同种核两两融合和不同核融合细胞，需要经过特定的选择性培养基筛选，A错误；步骤③是抗体检测，得到的杂交瘤细胞既能大量增殖又能产生专一性抗体，C错误；ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是抗体能特异性地作用于乳腺癌(靶)细胞，避免其他细胞受损，D错误。]
12．B　[图示表示的是治疗性克隆的过程，该过程能体现出动物体细胞核具有全能性，B错误。]
13．C　[灭活的仙台病毒具有促融的作用，因此，将成纤维细胞注入去核卵母细胞前，用灭活的仙台病毒短暂处理的目的是利于细胞融合，A正确；据图可知，体细胞克隆猴是由去核卵母细胞和成纤维细胞融合而成的重构胚发育而来的，故体细胞克隆猴的线粒体DNA来自去核卵母细胞和成纤维细胞，即图中克隆猴的细胞质基因来自猴A和猴B，B正确；结合题图，重构胚在加入Kdm4d的mRNA和TSA后，发育成克隆猴，而Kdm4d的mRNA表达产物为组蛋白去甲基化酶，可以使组蛋白去甲基化，TSA为组蛋白去乙酰化酶抑制剂，抑制组蛋白去乙酰化酶的作用，保持组蛋白乙酰化，即组蛋白乙酰化和去甲基化有利于重构胚完成细胞分裂和发育过程，C错误；克隆特定疾病模型的动物，可为研究该疾病的致病机制和开发相应的药物提供帮助，因此体细胞克隆猴的成功便于建立某些疾病模型和药物筛选，D正确。]
14．B
15．(1)一种抗原中包含多种抗原决定簇　(2)既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体　PEG(或聚乙二醇)　相同　特定的选择培养基　克隆化培养　纯度高、特异性强、灵敏度高　(3)选用腺瘤细胞、鳞状细胞瘤细胞分别与B淋巴细胞融合后选择能产生单一抗体的杂交瘤细胞，取等量的杂交瘤细胞在体外培养相同的时间，检测抗体的数量
解析　(3)实验目的是探究选用不同种的瘤细胞与B淋巴细胞杂交对产生单克隆抗体数量的影响，自变量是不同种的瘤细胞，因变量是对产生单克隆抗体数量的影响，因此实验可以设计为选用腺瘤细胞、鳞状细胞瘤细胞分别与B淋巴细胞融合后选择能产生单一抗体的杂交瘤细胞，取等量的杂交瘤细胞在体外培养相同的时间，检测抗体的数量。

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