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第二十五单元　阶段检测(七)　《生物技术与工程》第1~4章
(75分钟　100分)
考情分析
高考对接点 传统发酵、微生物培养、基因工程为高考常考点，细胞工程、胚胎工程为高考轮考点，生物技术的安全性和伦理问题为高考冷考点，常以选择题或非选择题的形式进行考查
单元疑难点 微生物的分离的操作，基因工程、细胞工程的综合应用
典型情境题 3、4、5、8、14、16、17、19
一、选择题(本大题共12小题，每小题2分，共24分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。)
1.火锅、串串香等美食深受全国人民喜爱。酸笋(与泡菜的制作方法类似)、腐乳是食用火锅时常用的小菜调味品。下列相关叙述正确的是
A.酸笋制作时表面长一层白膜是醋酸菌大量繁殖导致的
B.在制作酸笋时坛口要密封，主要是为了避免外界杂菌的污染
C.酸笋制作过程中检测亚硝酸盐含量的主要目的是了解乳酸菌的生长状况
D.制作腐乳和酸笋时，起主要作用的微生物的细胞结构和代谢类型均不同
2.某研究性学习小组以樱桃番茄为材料先进行果酒发酵，再进行果醋发酵。下列相关叙述正确的是
A.果酒发酵时温度宜控制在30~35 ℃，果醋发酵时温度宜控制在18~30 ℃
B.先果酒发酵再果醋发酵的整个过程需经历供氧→缺氧→供氧
C.果酒中的酒精可为醋酸菌发酵提供碳源、氮源和能源
D.醋酸菌利用果酒中的酒精进行醋酸发酵的过程中会产生大量气泡
3.VHP灭菌技术是一种新型的灭菌技术，全称为过氧化氢气体熏蒸灭菌技术，其原理是在常温下利用汽化的过氧化氢与病原微生物接触，破坏病原微生物的细胞膜、蛋白质和DNA等重要结构，以达到灭菌的目的。下列叙述错误的是
A.VHP灭菌技术最终残留物仅为水和氧气，不会造成环境污染
B.紫外线也能破坏微生物DNA的结构，常用其进行接种室消毒
C.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌
D.与紫外线相比，VHP灭菌技术的优点之一是能够对被遮挡到的角落进行灭菌
4.反刍动物肝脏产生的尿素有40%~80%返回胃肠道，特别是瘤胃，瘤胃中的尿素分解后产生的氨可用于合成微生物蛋白质。某人尝试从牛的瘤胃中分离出尿素分解菌。下列有关叙述正确的是
A.以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是能分解尿素的细菌
B.尿素分解菌产生的脲酶催化尿素分解产生的NH3、CO2，能为其提供氮源和碳源
C.以未接种的培养基作为对照组，可判断选择培养基是否具有选择作用
D.尿素分解菌和纤维素分解菌的鉴别不都是利用指示剂让菌落周围出现透明圈
5.许多植物提取物对致病菌有很好的抑制作用。某人为验证甲、乙两种植物提取物对金黄色葡萄球菌的抑制作用，进行了相关实验。下列有关实验操作的叙述，正确的是
A.配制培养基、接种等过程均需在无菌条件下进行
B.配制金黄色葡萄球菌培养基时，应先将pH调至酸性，再进行高压蒸汽灭菌
C.图示接种方法为稀释涂布平板法，用涂布器将菌液均匀涂布后立即倒置于适宜条件下培养
D.植物提取物乙对金黄色葡萄球菌的抑制作用更强，挑取抑菌圈边缘的菌落重复该实验，所得抑菌圈平均直径会变小
6.山药在生长过程中易受病毒侵害，导致品质和产量下降。采用组织培养技术得到脱毒苗，可恢复其原有的优质、高产特性，流程如下图所示。下列叙述正确的是
外植体愈伤组织丛生芽试管苗
A.取植物茎尖进行组织培养可获得抗病毒苗
B.①②过程使用的培养基中激素的种类和比例不都相同
C.外植体消毒时，用无菌水处理后再用次氯酸钠溶液冲洗即可
D.提高生长素和细胞分裂素的比值可促进愈伤组织形成丛生芽
7.大熊猫等珍稀动物的卵细胞稀少，异种核移植为大熊猫克隆带来了新的希望。研究者将大熊猫的体细胞核放入兔子的去核卵母细胞之中形成重构胚，之后使其成功发育成囊胚，并在黑熊的子宫内成功着床，遗憾的是胚胎在后续发育中死亡。下列说法正确的是
A.重构胚发育成囊胚的过程中，其营养物质主要由代孕动物提供
B.如果能够顺利生下大熊猫幼崽，其部分的性状和兔子相关
C.早期胚胎需放在CO2培养箱中培养，CO2的主要作用是促进细胞呼吸
D.选择卵母细胞是因为其具有体积大、易操作、物质运输效率高等优点
8.下图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程，在人—鼠杂种细胞中人的染色体会随机丢失，可通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列相关叙述错误的是
A.加入灭活的仙台病毒的作用是促进细胞融合
B.细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为人—人、人—鼠、鼠—鼠融合细胞
C.芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色体上
D.胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上
9.三白草和鱼腥草因疗效相近且具有叠加效应，常被中医用作“药对”。研究者欲利用原生质体融合技术将两种药物配合使用，并实现有效成分的工厂化生产，操作如图所示。下列有关叙述正确的是
A.可用聚乙二醇诱导三白草原生质体和鱼腥草原生质体融合和细胞壁再生
B.过程②通常在低渗溶液中采用PEG等方法诱导原生质体融合
C.杂种细胞形成愈伤组织的过程中，其特有功能丧失，结构也发生改变
D.过程④工厂化生产能提高单个细胞次生代谢产物的产量
10.关于新鲜洋葱细胞中“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是
A.将材料研磨后，离心研磨液是为了加速DNA的沉淀
B.过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止DNA被降解
C.离心后上清液中加入95%冷酒精，析出的是蛋白质等杂质
D.向DNA溶液中加入二苯胺试剂混匀，溶液即可呈现蓝色
11.某科学家将海鱼的抗冻蛋白基因(如图1)用PCR技术扩增。为寻找合适的载体，科学家对某载体用EcoRⅠ和SmaⅠ两种限制酶进行酶切后，再利用琼脂糖凝胶电泳得到图2所示图谱(其中1号泳道是标准DNA样品的电泳结果，2号、3号、4号泳道分别是用EcoRⅠ单独处理、SmaⅠ单独处理、两种限制酶共同处理后的电泳结果)。下列说法错误的是
A.PCR过程每次循环分为三步，其中温度最低的一步是第二步
B.扩增出抗冻蛋白基因并用于表达载体的构建，应选择引物Ⅰ和引物Ⅳ
C.由图2可知，该载体DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个
D.PCR技术的原理是DNA的半保留复制
12.天然胰岛素制剂容易形成二聚体或六聚体，皮下注射后其往往要逐渐解离为单体，才能发挥作用，在一定程度上延缓了疗效。科学家利用蛋白质工程(基本思路见下图)研发出速效胰岛素，已在临床上广泛应用。下列叙述正确的是
A.当前限制蛋白质工程发展的关键因素是基因工程技术还不成熟
B.从六聚体胰岛素解离为单体形式是将胰岛素水解为氨基酸
C.利用基因工程和蛋白质工程生产胰岛素都需要经历①②过程
D.利用蛋白质工程生产速效胰岛素要从推测b入手
二、选择题(本大题共4小题，每小题4分，共16分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项符合题目要求。全部选对的得4分，选对但不全的得2分，有选错的得0分。)
13.啤酒历史悠久，与黄酒、葡萄酒并称世界三大古酒。下列表述错误的是
A.啤酒发酵过程中，酵母菌以大麦中的淀粉为主要碳源
B.啤酒、黄酒、家庭酿造葡萄酒结束后都需进行消毒以延长保存期
C.啤酒、黄酒、葡萄酒发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期需要延长排气时间间隔
D.啤酒发酵时酵母菌繁殖在主发酵阶段完成，大部分糖的分解和代谢物的生成在后发酵阶段完成
14.含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中的甲菌、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，某研究人员用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基中进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是
A.乙菌的运动能力比甲菌的强
B.为不影响细菌的运动，需选用液体培养基
C.该实验能比较出两种菌产生硫化氢的量
D.甲菌、乙菌均能在培养基内部生长，故两种菌属于厌氧菌
15.一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗p72的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法错误的是
A.注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大
B.融合后的杂交瘤细胞经细胞培养即可获得大量抗病毒衣壳蛋白的单抗
C.治疗癌症的“生物导弹”就是以单克隆抗体作为抗癌药物定向杀死癌细胞的
D.p72部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况
16.为使水稻获得抗盐性状，某科学家利用XbaⅠ和SacⅠ两种限制酶及农杆菌转化法，进行如图所示的操作，其中抗盐基因编码区共含579个碱基对(bp)，Ti质粒上含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，其正确表达产物能催化无色物质M呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在高盐的培养基中生长。下列叙述正确的是
A.基因表达载体用SacⅠ和HindⅢ切割后能得到1200 bp的片段，这表明目的基因正确插入Ti质粒
B.利用物质M和氨苄青霉素进行筛选1，可获得农杆菌的蓝色菌落
C.利用物质M和高盐进行筛选2，更易于获得抗盐的转基因水稻
D.被转化成功的水稻细胞具有抗氨苄青霉素和抗盐特性
三、非选择题(本大题共5小题，共60分。)
17.(12分)小麦B淀粉因含有杂质无法用于商品淀粉制作，研究人员以小麦B淀粉为原料，使用α-淀粉酶和糖化酶组成复合酶对小麦B淀粉进行酶解，利用增殖能力强的酵母菌菌株发酵上述酶解液来生产酒精，提高小麦B淀粉的利用价值，过程如图1所示。请回答下列有关问题：
(1)欲优化上述复合酶酶解的工艺，可对　　　　(至少答两点)等因素进行实验设计，以确定酶解的最佳条件。
(2)操作过程中，若在培养基中出现图2所示的结果，推测该同学接种的操作失误可能是　　　　。接种工具在接种前需要进行灭菌，常用的方法是　　　　。接种后需将培养皿倒置，这样做的目的是　　　　　　　　　　　　。培养24 h后，挑选　　　　的菌落，以获得增殖能力强的高产酵母菌。
(3)为了让酵母菌发酵过程中获得最高产量，对发酵过程的通气控制为　　　　　　　　。小麦酒酿制过程中，出现酒变酸现象，而且变酸的酒表面会出现一层菌膜，请解释原因：
　　　　　　　　　　　　。
18.(12分)油菜容易被胞囊线虫侵染而造成减产，而萝卜具有抗胞囊线虫病基因。研究人员利用下图所示的方法获得了抗胞囊线虫病的杂种萝卜—油菜植株。请回答下列问题：
(1)图中采用的植物细胞工程技术有植物体细胞融合和　　　　。图中的甲过程不可以省略，原因是　　　　　　 　　　　　　　，该过程通常利用　　　　酶进行处理。乙过程用到的物理方法为电融合法和　　　　法等。
(2)丙过程为　　　　，丙过程中会在培养基中加入蔗糖，蔗糖的作用是　　　　。
(3)已知萝卜体细胞内有18条染色体，白菜体细胞内共有38条染色体，则在“萝卜—油菜”细胞分裂过程中最多可以观察到　　　　条染色体。
(4)下列对流程图的描述，正确的是　　　　(填序号)。
①融合的原生质体重新长出细胞壁，表明植物体细胞杂交成功
②对杂种植株接种胞囊线虫属于个体水平上的鉴定
③可通过观察是否含有叶绿体来对融合细胞进行初步筛选
④过程丁中需要进行适当的光照以促进细胞中叶绿素的合成
19.(12分)某病毒A对养殖业有严重危害，科学家以该病毒外壳蛋白为抗原来制备单克隆抗体，正常细胞中合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断，S途径进行DNA合成时，细胞中的次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)可将培养基中的6-硫代鸟嘌呤转变成相应的核苷酸形式参与DNA合成而发生毒性作用，使细胞死亡。诱变产生的缺陷型(HGPRT-)细胞由于HGPRT活性丧失，不能使用6-硫代鸟嘌呤，主要技术路线如图所示。请回答下列有关问题：
(1)据图可知，抗病毒A的单克隆抗体的制备过程应用了　　　　(写出两个)等技术手段。
(2)筛选2的培养基中应添加一定浓度的　　　　。筛选2的培养基对　　　　　　　　　　　　细胞生长具有抑制作用。
(3)经筛选2得到的杂交瘤细胞要进行筛选3，即将其放在多孔培养板上进行培养，吸取细胞培养孔中的　　　　(填“上清液”或“沉淀细胞”)，利用　　　　技术进行抗体检测，从中选择　　　　的杂交瘤细胞，经过稀释、检验、克隆化培养，最终获得理想的单克隆抗体。单克隆抗体的优点有　 。
20.(13分)北方白犀牛曾经广泛分布于非洲，由于猖獗的盗猎和自然栖息地的丧失，它们的数量不断减少，濒临灭绝。在此之前，研究人员已设法保存了北方白犀牛的精子。请回答下列问题：
(1)若通过胚胎工程对北方白犀牛进行繁殖，则操作步骤应为对雌性个体注射　　　　，进行超数排卵处理→体外受精→早期胚胎培养→　　　　→是否妊娠检查→产生北方白犀牛后代。
(2)在体外受精前要对精子进行获能处理，目的是　　　　　　　　　　　　　。体外受精形成的受精卵需要进行早期胚胎培养。早期胚胎培养需要在特定的培养液中进行，该培养液除含有无机盐、激素、血清外，还含有的营养成分有　　　　　　　　　(答出两种即可)。
(3)为了提高胚胎利用率，可以对早期胚胎进行胚胎分割，操作时应选择的对象是　　　　，对囊胚期的胚胎进行分割时，要特别注意将内细胞团均等分割，以免影响　　　　。胚胎分割所需要的主要仪器设备为　　　　。
(4)除上述建立精子库的保护措施外，保护生物多样性的措施还有　　　　(答出一点即可)。
21.(11分)某科研团队利用农杆菌转化法将抗除草剂基因导入甘蓝，过程如图1所示，①~④为操作步骤，限制酶BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ酶切位点唯一，BamHⅠ和EcoRⅠ之间的距离为20 kb，BamHⅠ和BglⅡ之间的距离为25 kb，识别序列和切割位点如下表所示。请回答下列有关问题：
限制酶 识别序列和切割位点
BamHⅠ -G↓GATCC-
BglⅡ -A↓GATCT-
EcoRⅠ -G↓AATTC-
(1)图1中步骤①为　　　　，其目的是　　　　　　　　　　　　。步骤④的培养基中添加　　　　，以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。
(2)目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切，质粒用BamHⅠ剪切，剪切后的目的基因和质粒能连接在一起，原因是　　　　　　　　　　　，酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用限制酶　　　　对两种重组质粒进行剪切，通过凝胶电泳分析产物大小(如图2所示)，图2中　　　　(填“样品1”或“样品2”)为所需基因表达载体。
(3)若要检测甘蓝是否具有抗除草剂的性状，还需要进行个体水平的检测。请以甘蓝的生长状况为检测指标，设计实验方案，简要写出实验思路：　　　　　　　　　　　　　　　
　　 。
参考答案
1.D
【解析】由于酵母菌是兼性厌氧型微生物，酸笋发酵液营养丰富，其表面氧气含量也丰富，适合酵母菌繁殖，因此在腌制过程中，产膜酵母菌的繁殖会导致酸笋发酵液的表面长一层白膜，A项错误。在制作酸笋时坛口要密封，主要是为了创造无氧环境，便于乳酸发酵，B项错误。亚硝酸盐含量过高不利于身体健康，酸笋发酵过程中亚硝酸盐的含量会先升高后降低，检测亚硝酸盐含量主要是为了确定酸笋的取食时间，C项错误。腐乳的制作过程中，起主要作用的微生物是毛霉，其是真核生物，代谢类型为异养需氧型；酸笋的制作过程中，起主要作用的微生物是乳酸菌，其是原核生物，代谢类型为异养厌氧型，D项正确。
2.B
【解析】果酒发酵时温度宜控制在18~30 ℃，果醋发酵时温度宜控制在30~35 ℃，A项错误；先制果酒再制果醋，一般先供氧使酵母菌大量繁殖，然后在无氧条件下进行果酒发酵，最后供氧进行果醋发酵，B项正确；果酒中的酒精可以为醋酸菌发酵提供碳源和能源，不能提供氮源，C项错误；醋酸菌利用果酒中的酒精进行醋酸发酵的过程中不会产生气体，没有气泡产生，D项错误。
3.C
【解析】VHP灭菌技术主要利用汽化的过氧化氢进行灭菌，过氧化氢分解后的产物为水和氧气，不会造成环境污染，A项正确；紫外线消毒主要依靠紫外线的辐射破坏细菌的DNA结构，从而达到杀菌效果，常用其进行接种室消毒，B项正确；无菌技术中，若处理对象为液体，可以用高压蒸汽法灭菌，C项错误；紫外线只能对直接照射到的表面进行消毒，对于遮挡物后的表面无法进行有效消毒，VHP灭菌技术主要利用汽化的过氧化氢对室内空间环境进行全面彻底的灭菌，能够对被遮挡到的角落进行灭菌，D项正确。
4.D
【解析】以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，还有可能是自生固氮菌，A项错误；尿素分解菌属于异养型微生物，其碳源为有机碳源，CO2不能作为其碳源，B项错误；以未接种的培养基作为对照组，能判断培养基是否被杂菌污染，不能判断选择培养基是否有选择作用，C项错误；纤维素分解菌的鉴别是利用指示剂让菌落周围出现透明圈，尿素分解菌可将尿素分解，培养基pH升高，加入酚红指示剂后，培养基呈红色，D项正确。
5.D
【解析】因为培养基配制好后还需要进行灭菌处理，所以配制培养基不需要在无菌条件下进行，A项错误；配制金黄色葡萄球菌培养基时，应先将pH调至中性或弱碱性，再进行高压蒸汽灭菌，B项错误；图示接种方法为稀释涂布平板法，用涂布器将菌液均匀涂布后，需等待菌液被培养基吸收后，再倒置培养，C项错误；据图可知，植物提取物甲的抑菌圈比植物提取物乙的抑菌圈小，纸片大小相同，故植物提取物乙对细菌的抑制作用更强，挑取抑菌圈边缘的菌落重复该实验，耐药菌的比例增大，在连续培养几代后，抑菌圈的平均直径会变小，D项正确。
6.B
【解析】脱毒苗不等同于抗病毒苗，培育脱毒苗时，一般选取茎尖(芽尖或根尖)作为外植体，因为植物分生区附近病毒极少，甚至无病毒，A项错误；①过程为脱分化，②过程为再分化，脱分化和再分化使用的培养基中的激素种类是相同的，浓度和比例是不同的，B项正确；外植体消毒时，需将经流水充分冲洗后的外植体用酒精消毒30 s，后立即用无菌水清洗2~3次，再用次氯酸钠溶液处理30 min后，立即用无菌水冲洗2~3次，冲洗掉次氯酸钠，以免其长时间作用破坏细胞，C项错误；提高生长素和细胞分裂素的比值可促进愈伤组织形成根而不是芽，D项错误。
7.B
【解析】重构胚发育成囊胚的过程中，其营养物质主要来源于去核的卵母细胞，A项错误；如果能够顺利生下大熊猫幼崽，其细胞质基因来源于兔子，故其部分的性状和兔子相关，B项正确；早期胚胎需放在CO2培养箱中培养，CO2的主要作用是维持培养液的pH，C项错误；卵母细胞体积大，但物质运输效率低，D项错误。
8.B
【解析】动物细胞融合过程中，可以利用灭活的仙台病毒促进细胞融合，A项正确；细胞Ⅲ中保留了人的X染色体及11、17号染色体，故其不会是鼠—鼠融合细胞，B项错误；Ⅰ保留了X染色体及11号染色体，Ⅱ保留了2、11号染色体，具有芳烃羟化酶活性，Ⅲ保留了X染色体及11、17号染色体，具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性，所以支配芳烃羟化酶合成的基因位于2号染色体上，支配胸苷激酶合成的基因位于17号染色体上，支配磷酸甘油酸激酶合成的基因位于X染色体上，支配乳酸脱氢酶合成的基因位于11号染色体上，C、D两项正确。
9.C
【解析】聚乙二醇可以诱导原生质体融合，不能诱导细胞壁再生，细胞壁再生是杂种细胞生长的结果，A项错误；过程②通常在等渗或略高渗溶液中进行，不能用低渗溶液，否则，原生质体会吸水涨破，可以采用化学法(PEG融合法、高Ca2+—高pH融合法)或物理法诱导原生质体融合，B项错误；植物细胞的脱分化就是让已分化的细胞经过诱导后，失去其特有的结构和功能，而转变为未分化的细胞——愈伤组织的过程，因此杂种细胞形成愈伤组织的过程中，其特有功能丧失，结构也发生改变，C项正确；利用植物组织培养技术获得愈伤组织或细胞，从中直接提取次生代谢产物，实现工厂化生产，但工厂化生产不能提高单个细胞次生代谢产物的产量，D项错误。
10.B
【解析】研磨后，离心研磨液是为了分离出含有DNA的上清液，此时沉淀物为细胞碎片，A项错误；过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行可以使酶的活性降低，防止DNA被降解，B项正确；DNA不溶于酒精，蛋白质溶于酒精，在提取液中加入体积分数为95%的冷酒精，则DNA会与蛋白质分离并析出，得到的是粗提取的DNA，C项错误；将提取到的丝状物先溶解到2 mol/L的氯化钠溶液中，再加入二苯胺试剂，沸水浴加热后，溶液变为蓝色，D项错误。
11.B
【解析】PCR过程每次循环分为变性、复性和延伸三步，其中温度最低的一步是第二步复性，A项正确；引物结合在模板链的3'端，使子链从5'→3'延伸，扩增出抗冻蛋白基因并用于表达载体的构建，应选择引物Ⅱ和引物Ⅲ，B项错误；当仅用一种限制酶切割载体时，图中的2号、3号泳道仅产生一种长度的DNA片段，说明该载体DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个，C项正确；DNA半保留复制是PCR技术的原理，D项正确。
12.C
【解析】当前限制蛋白质工程发展的关键因素是蛋白质发挥功能必须依赖正确的高级结构，而这种高级结构往往很复杂，人们对蛋白质的高级结构了解太少，A项错误；由题干信息可知，经过蛋白质工程改造后，发挥作用的仍是胰岛素分子，所以从六聚体胰岛素解离为单体形式是将六个胰岛素形成的六聚体水解为单个胰岛素的过程，B项错误；利用基因工程和蛋白质工程生产胰岛素都需要经历找到对应的脱氧核苷酸序列(基因)→转录(①)形成mRNA(c)→翻译(②)获得所需要的蛋白质的过程，C项正确；蛋白质工程中，首先根据预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构，D项错误。
13.ABD
【解析】淀粉须分解成葡萄糖才能被酵母菌利用，故酵母菌以葡萄糖为主要碳源，A项错误；家庭酿造葡萄酒不需要进行消毒，B项错误；由于酵母菌无氧呼吸会产生CO2，因此啤酒、黄酒、葡萄酒发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期由于糖类物质不充足，产生的气体变少，可以延长排气时间间隔，C项正确；啤酒发酵时酵母菌繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成在主发酵阶段完成，主发酵结束后，发酵液还要在低温、密闭的环境下储存一段时间，这是后发酵阶段，D项错误。
14.BCD
【解析】从图中可以看出，甲菌在试管中的分布范围小于乙菌，说明乙菌的运动能力比甲菌的强，A项正确；液体培养基中细菌会分散，为了研究两种菌的运动能力，穿刺接种所用的培养基不能选用液体培养基，一般选用半固体培养基，B项错误；根据题意，黑色区域的面积大小反映两种菌运动能力的强弱，而不能表示二者产生硫化氢的量，C项错误；甲菌、乙菌在培养基内部生长，但两种菌未必属于厌氧菌，有可能是兼性厌氧型微生物，D项错误。
15.ABC
【解析】单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，因此抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A项错误；融合后的杂交瘤细胞在抗体检验后，经细胞培养可获得大量抗病毒衣壳蛋白的单抗，B项错误；治疗癌症的“生物导弹”就是以单克隆抗体+抗癌药物定向杀死癌细胞的，其中单克隆抗体起识别作用，C项错误；p72部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D项正确。
16.C
【解析】由于重组质粒上移除了1850 bp而补充了抗盐基因的579个碱基对(bp)，加上未移除的821 bp，所以用SacⅠ和HindⅢ切割重组质粒后，可得到821+579=1400 bp的新片段，据此可确定目的基因正确插入了Ti质粒，A项错误；农杆菌属于原核生物，含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，故利用物质M和氨苄青霉素进行筛选1不会出现农杆菌的蓝色菌落，B项错误；根据题意可知，报告基因的产物能催化无色物质M呈现蓝色，而愈伤组织表面残留的农杆菌会导致未转化的愈伤组织可能在高盐的培养基中生长，因此利用物质M和高盐进行筛选2，更易于获得抗盐的转基因水稻，C项正确；氨苄青霉素抗性基因存在于T-DNA外，经农杆菌转化后未插入水稻染色体上，故被转化成功的水稻细胞不具有抗氨苄青霉素特性，D项错误。
17.(1)复合酶用量、酶解温度、酶解时间及pH(至少答两点，2分)
(2)涂布不均匀(1分) 灼烧灭菌法(合理即可，1分) 既可防止皿盖上冷凝的水滴滴入培养基造成污染，又可防止培养基表面的水分过快蒸发(2分) 直径最大(2分)
(3)先通气后密封(2分) 醋酸菌在氧气充足的情况下能将乙醇转化为乙酸，同时能大量增殖，在发酵液表面形成一层菌膜(2分)
18.(1)植物组织培养(1分) 若不去掉细胞壁，细胞壁会阻碍原生质体融合(2分) 纤维素酶和果胶(2分) 离心(1分)
(2)脱分化(1分) 提供碳源、能源(或提供营养)和维持渗透压(2分)
(3)112(1分)
(4)②③④(2分)
19.(1)动物细胞培养、动物细胞融合(2分)
(2)氨基蝶呤(1分) 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的(2分)
(3)上清液(1分) 抗原—抗体杂交(2分) 专一抗体检验呈阳性(或能产生特定抗体)(1分) 能准确地识别抗原的细微差异；与特定抗原发生特异性结合；可以大量制备(3分)
20.(1)促性腺激素(1分) 胚胎移植(1分)
(2)让精子具有与卵细胞受精的能力(2分) 维生素、氨基酸、核苷酸等(2分)
(3)发育良好的、形态正常的桑葚胚或囊胚(2分) 胚胎的恢复和进一步发育(2分) 体视显微镜和显微操作仪(2分)
(4)建立自然保护区以及风景名胜区等(1分)
21.(1)基因表达载体的构建(1分) 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用(2分) 潮霉素(1分)
(2)BamHⅠ和BglⅡ切割DNA后产生相同的黏性末端(2分) BamHⅠ和EcoRⅠ(2分) 样品2(1分)
(3)选取长势相似的野生型和转基因甘蓝，分别喷施等量的适宜浓度的除草剂，一段时间后，观察野生型和转基因甘蓝的长势(2分)
一轮单元素养练

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