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第1课时　微生物的基本培养技术
知识点一　培养基的配制和无菌技术
1.（2024·武汉高二期中）关于培养基的配制的说法，错误的是（　　）
A.配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例
B.合适的培养基可实现分离、鉴定微生物等不同目的
C.在培养尿素分解菌的培养基中，尿素既是氮源也是碳源
D.不同培养基的配方不同，但一般含有碳源、氮源、水和无机盐
2.（2024·河北衡水中学高二检测）下表是某同学培养微生物时配制的培养基，关于此培养基的说法，错误的是（　　）
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 （NH4）2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
A.此培养基可用来培养自养型微生物
B.此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源
C.表中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定
D.若除去①，此培养基可用于培养大肠杆菌
3.（2024·江苏南通高二期末）许多生物学实验十分重视无菌操作，防止杂菌污染。下列操作正确的是（　　）
A.对无菌室、超净台和实验员可采用紫外线杀菌
B.家庭制作酸奶时，要将容器和鲜牛奶进行灭菌
C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
D.灼烧灭菌法杀死微生物的营养体和芽孢
4.（2024·湖北黄冈高二检测）下列哪项不属于无菌技术（　　）
A.将培养皿、接种工具和培养基进行灭菌
B.实验操作应在酒精灯火焰附近进行
C.避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触
D.操作者的衣着和双手用纯净水洗干净
知识点二　微生物的纯培养
5.采用平板划线法能将单个微生物分散在固体培养基上，下列有关平板划线操作的叙述，错误的是（　　）
A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种
C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
D.划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免微生物污染环境和感染操作者
6.在培养基配制和微生物接种的过程中，确保无杂菌污染被称为无菌操作。下图中，符合无菌操作要求的有（　　）
①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿　②菌种试管口在火焰上灼烧　③接种前灼烧接种环　④接种前培养皿在火焰上灼烧　⑤靠近火焰接种
A.①②③④　　　　　　 B.①②③⑤
C.①③④⑤ D.②③④⑤
7.（2024·辽宁营口高二期中）下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作的说法，正确的是（　　）
A.培养酵母菌的试剂和器具都要进行湿热灭菌
B.称量、溶化和倒平板都需要在酒精灯火焰旁进行
C.倒好的平板要立即使用，以免表面干燥，影响酵母菌生长
D.将平板倒置放入适宜温度的恒温培养箱中培养
8.下列有关微生物的培养与应用的叙述，不正确的是（　　）
A.在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基是否灭菌合格
B.微生物纯培养时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法
C.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有一种细菌
D.培养微生物的培养基分装到培养皿后进行灭菌
9.菜籽粕中含有35％～45％的蛋白质，是畜禽饲料的重要原料，但其中的单宁等抗营养因子限制了菜籽粕的应用。研究者将不同菌种接种到菜籽粕与麸皮制成的固体培养基中发酵48 h，测定菜籽粕中单宁的含量，结果如下图。
下列相关叙述错误的是（　　）
A.菜籽粕与麸皮为微生物提供碳源和氮源
B.接种后需对培养基进行高压蒸汽灭菌
C.黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想
D.对照组为不接种微生物的固体培养基
10.（2024·江苏无锡高二期末）生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，某研究小组把该菌的悬浮液与不含任何特殊营养物质但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法错误的是（　　）
A.倒平板后直接培养可判断有无污染
B.将所有平板放置在适宜的37 ℃下倒置培养并观察
C.图示结果表明该菌需要特殊营养物质乙和丙
D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选
11.（2024·河北石家庄高二期末）扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢产物棒曲霉素（Pat）是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，取样分离的5 个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题：
（1）苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。两种微生物在结构上的主要区别是
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质划分该培养基属于　　　　培养基，其中能为扩展青霉的生长繁殖提供能源的是　　　　　；NaNO3的作用是　　　　　　　　　　　　　　（答两点）。
蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水
30 g 2 g 0.5 g 0.5 g 0.01 g 1 g 1 000 mL
（3）用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（4）接种扩展青霉前，应对苹果进行　　　　（填“消毒”或“灭菌”）。研究人员测定了病斑直径为1 cm、2 cm、3 cm 的苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　；　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
第1课时　微生物的基本培养技术
1.C　培养基有选择培养基、鉴别培养基和加富培养基等，可实现分离、鉴定微生物等不同目的，B正确；在培养尿素分解菌的培养基中，尿素是唯一的氮源，培养基中添加葡萄糖，葡萄糖作为碳源，C错误；微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等，D正确。
2.D　由表中成分可知，该培养基中未添加有机碳源，故此培养基可用来培养自养型微生物，A正确；分析表格可知，表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源，B正确；培养基中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定，C正确；大肠杆菌是异养型生物，且不能固氮，因此培养大肠杆菌还需要添加有机碳源，D错误。
3.D　对无菌室、超净台可采用紫外线杀菌，对实验员可用酒精擦拭双手进行消毒，A错误；家庭制作酸奶时，要将容器煮沸消毒，鲜牛奶不进行灭菌，B错误；加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，否则可能会污染培养基，C错误；灼烧灭菌法可杀死物体内外所有的微生物（包括微生物的营养体、芽孢和孢子），D正确。
4.D　为保证不被杂菌污染，应将培养皿、接种工具和培养基等进行灭菌，A不符合题意；酒精灯火焰附近可以形成一个相对无菌区，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行，B不符合题意；周围物品可能含有杂菌，为防止污染，实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触，C不符合题意；对实验操作的空间，操作者的衣着和双手，需进行清洁和消毒，仅用纯净水洗干净不属于无菌技术，D符合题意。
5.C　从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，C错误。
6.B　火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿，这是因为酒精灯火焰旁具有无菌区域，能够防止杂菌污染，①正确；菌种试管口在火焰上灼烧，这样能够防止杂菌污染，②正确；接种前灼烧接种环，能够杀死接种环上的杂菌，③正确；接种前培养皿不能在火焰上灼烧，灼烧会导致培养基熔化等，正确操作是接种时在酒精灯火焰旁进行操作，④错误；靠近火焰接种，这样能够防止杂菌污染，⑤正确。
7.D　接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用湿热灭菌法处理，A错误；倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，而称量、溶化不需要在酒精灯火焰旁进行，B错误；倒好的平板需要冷却后使用，C错误。
8.D　在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基是否灭菌合格，以确保实验的准确性，A正确；菌落是由一个细胞发育成的子细胞群体，只含有一种细菌，故在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有一种细菌，C正确；培养微生物的培养基需要先灭菌后再分装到培养皿，D错误。
9.B　菜籽粕中含有35％～45％的蛋白质，麸皮富含纤维素，菜籽粕与麸皮可为微生物提供碳源和氮源，A正确；对培养基灭菌应在接种前，若接种后再灭菌，菌种将被全部杀死，B错误；据图可知，与对照组相比，黑曲霉菌发酵菜籽粕中单宁含量最低，说明黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想，C正确；对照组为不接种微生物的固体培养基，目的是作为对照，D正确。
10.B　倒平板后不接种任何菌种直接进行培养观察有无菌落的出现，可以判断培养基有无污染，A正确；该菌为嗜热菌，应放置在其适宜的高温条件下培养，而不是37 ℃，B错误；图中嗜热菌在添加了乙、丙特殊营养物质的区域生长，故该菌需要的特殊营养物质是乙和丙，C正确；不同的菌种所需的特殊营养物质不同，利用生长图形法可用于某些菌种的筛选，菌种只会在提供其需要的生长因子的区域生长，D正确。
11.（1）扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无　（2）液体　蔗糖　为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压　（3）第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始　（4）消毒　相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低　相同部位病斑越大，Pat含量越高
解析：（2）活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝固剂，故根据物理性质划分该培养基属于液体培养基。（3）每次从上一次划线的末端开始，能使扩展青霉的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。若划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，可能是因为第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。（4）接种扩展青霉前，为了避免苹果上其他杂菌、病原微生物的污染，应对苹果进行消毒处理。由图可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测相同病斑情况下，①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低，相同部位病斑越大，Pat含量越高。
3 / 3第1课时　微生物的基本培养技术
导学 聚焦 1.基于对牛肉膏蛋白胨培养基的实例分析，说明培养基的概念、种类及营养成分的种类和作用。 2.对比分析消毒和灭菌方法的异同，认同灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。 3.运用微生物培养原理和无菌技术，通过平板划线接种并分离得到酵母菌单菌落，对实验结果进行分析与评价
知识点（一）　培养基的配制
1.培养基的配制
（1）培养基的概念、用途和类型
（2）培养基的配方
①主要营养物质：　　　　　　　　　　　。
②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表：
微生物 乳酸菌 霉菌 细菌 厌氧微生物
特殊需求 添加　　 pH调至　　 pH调至　　　　 无氧
小提醒：琼脂是一种微生物难以利用的多糖类物质，在44 ℃以下凝固，在常规培养条件下呈固态。
2.判断下列有关表述的正误
（1）在固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基。（　　）
（2）实验室培养硝化细菌时，培养基无须加入有机碳源。（　　）
（3）所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源。（　　）
（4）牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。（　　）
探讨　分析培养基的种类和营养构成
　下表是某培养基的配方，分析回答：
材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
用量 5 g 10 g 5 g 20 g 1 000 mL
（1）根据培养基的物理性质，该培养基属于　　　　培养基，理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）该培养基中提供碳源和氮源的物质是　　　　　。
（3）该培养基培养的微生物同化作用类型是　　　　　　，理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（4）培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？
1.培养基营养成分的作用和主要来源
2.培养基的种类和作用
1.（2024·江苏徐州高二检测）不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养型微生物所需营养的描述中，错误的是（　　）
A.氮源物质为该微生物提供必要的氮元素
B.碳源物质也是该微生物的能源物质
C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D.水是该微生物的营养要素之一
2.（2024·山东济南高二期中）下列有关微生物培养基种类及配制原则的叙述，正确的是（　　）
A.任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐及特殊的营养物质
B.液体培养基可用于观察菌落，固体培养基可用于工业生产
C.微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、O2、渗透压等的影响
D.淀粉可作为所有微生物的碳源
易错提醒
有关培养基营养物质的四点提醒
（1）培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。
①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
（2）对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。
（3）微生物需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。
（4）微生物需要量最大的是碳源。能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。
知识点（二）　无菌技术
1.消毒和灭菌
2.具体操作
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和　　　　。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行　　　　。
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上，并在　　　　　　附近进行。
④实验操作时应注意避免已经灭菌处理的材料用具与　　　　　　接触。
3.判断下列有关表述的正误
（1）消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。（　　）
（2）灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。（　　）
（3）只要是没有生物活性的材料均可进行高压蒸汽灭菌。（　　）
1.请完善表格中消毒和灭菌的主要方法及应用范围。
项目 主要方法 应用范围
消毒 巴氏消毒法 　　　　 ℃消毒30 min或　　 ℃处理15 s或80～85 ℃处理10～15 s 牛奶、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体
煮沸消毒法 100 ℃煮沸　　　　　 min 家庭餐具等生活用品
紫外线消毒 30 W紫外灯照射　　 min（损伤细菌的DNA） 　　　　　、 　　　　 或　　　　
化学药 物消毒 用体积分数为70％的　　　 擦拭实验者双手
水源
灭菌 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的　　　　　　层灼烧 接种工具，如　　　、　　　、　　　或其他金属用具、　　　或　　　等
干热灭菌 干热灭菌箱中，　　　 ℃的热空气中维持　　　　 　　　　　　　　的物品，如玻璃器皿、金属用具等
高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 　　　　的条件下，维持　　　　 　　　　等
2.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？
3.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？
　不同消毒方法的特点
1.（2024·杭州高二检测）在微生物的培养和分离实验操作中，无菌操作是实验成功的关键，下列可能造成污染的措施是（　　）
A.实验操作者双手用体积分数为70％的酒精消毒
B.试管高压蒸汽灭菌时加脱脂棉花
C.在超净台上完成操作
D.接种环需要灼烧灭菌
2.（2024·湖南长沙高二调研）消毒和灭菌是微生物培养中常用的操作方法。下列说法错误的是（　　）
A.接种疫苗前要对注射区域进行消毒
B.在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于灭菌方法，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢
C.微生物接种技术的方法不同，但核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度
D.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
知识点（三）　微生物的纯培养
1.微生物的纯培养
（1）概念
（2）过程：包括　　　　　　　　　　　　　　　　　　等步骤。
2.酵母菌的纯培养
（1）实验原理
①分散的微生物在适宜的　　　　　　　　表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的　　　　　　　　　，这就是菌落。
②采用　　　　　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由　　　　　　　　繁殖形成的纯培养物。
（2）方法步骤
3.倒平板和平板划线法的操作
（1）倒平板的具体操作
小提醒：倒平板是将熔化后的培养基倒入培养皿冷却凝固形成培养基固体平面的过程，而不只是将培养皿倒置。
（2）平板划线法的具体操作
4.判断下列有关表述的正误
（1）培养基分装到培养皿后再进行湿热灭菌。（　　）
（2）倒平板操作中，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置。（　　）
（3）平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下一个区域。（　　）
（4）为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。（　　）
（5）把一个不接种的培养基放在相同条件下培养可检验培养基的灭菌是否合格。（　　）
探讨一　分析倒平板的操作过程
　结合倒平板的操作程序请探究：
（1）如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
（2）如图二所示，从防止杂菌污染的角度思考，为什么培养基冷却凝固后将平板倒置？
（3）培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。可用什么办法来估计培养基的温度？
探讨二　分析平板划线操作过程，提高操作能力
　下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：
（1）用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤。
（2）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？请完善下方的表格。
灼烧时期 目的
取菌种前 杀死接种环上　　　　　
每次划线前 杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于　　　　　　　　，从而使　　　　　 　　　　　，直至得到　　 　　　　
接种结束后 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
（3）在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
（4）接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？
1.平板划线操作的注意事项
（1）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
（2）第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个菌种繁殖而来的菌落。
（3）划线时最后一区不要与第一区相连。
（4）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
2.实验结果的分析
（1）若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。
（2）在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。
（3）若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混入了其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。
1.（2024·江苏南京调研）下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（　　）
A.步骤①后需将培养基灭菌并调节pH
B.步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行
C.步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次
D.图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要
2.在分离、纯化酵母菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如图所示，且甲、乙的对应位置不变。下列相关叙述错误的是（　　）
A.配制培养基时需进行高压蒸汽灭菌
B.甲中a区域为划线的起始位置
C.连续划线的目的是获得单个微生物繁殖形成的菌落
D.图示接种过程中接种环灼烧了5次
易错提醒
倒平板操作的注意事项
（1）培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。
（2）培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。
（3）整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。
（4）平板冷凝后要倒置，防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。
（5）若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。
　
（1）培养基是指　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）消毒是指　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（3）纯培养物是指　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
1.某异养自生固氮菌能将大气中的氮还原成氨，若在实验室中分离土壤中的该菌，则配制培养基时，一般不需要加入的物质是（　　）
A.蒸馏水　　　　　　　　 B.葡萄糖
C.氯化钠 D.蛋白胨
2.（2024·山东潍坊高二检测）下列关于培养基的叙述，正确的是（　　）
A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B.培养基都含有水、碳源、氮源、无机盐等
C.牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面
D.微生物在培养基上生长，都需要将pH维持在中性
3.如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是（　　）
A.正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁
B.甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染
C.丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行
D.培养基应冷却到50 ℃左右时倒平板是因为该温度下不易受杂菌污染
4.微生物的实验室培养要进行严格的灭菌和消毒。下列关于灭菌和消毒的叙述，正确的是（　　）
A.煮沸消毒法中100 ℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子
B.培养皿用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的
C.灼烧灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具
D.消毒和灭菌的原理是相同的
5.如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5，下列操作方法叙述正确的是（　　）
A.在1、2、3、4、5区域中划线前都要对接种环灼烧灭菌，灼烧灭菌后立即进行划线
B.1和5划线可以如图所示，也可以相连在一起
C.在划线操作结束时，也要对接种环灼烧灭菌
D.在5区域中才可以得到单菌落
6.灭菌和无菌操作是获得微生物纯培养物的基础，在接种、培养、分离酵母菌时，下列操作正确的是（　　）
A.用浸泡在体积分数为70％的酒精中的涂布器直接涂布
B.将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌
C.为了防止污染，接种环经火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.倒平板时，应将培养皿的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
第1课时　微生物的基本培养技术
【核心要点·巧突破】
知识点（一）
自主学习
1.（1） 营养物质　 生长繁殖　 培养、分离、鉴定、保存　 代谢物　 液体　 固体　（2）①水、碳源、氮源、无机盐　②维生素　酸性　中性或弱碱性　
2.（1）×　提示：固体培养基中添加了凝固剂，加少量水不能制成液体培养基。
（2）√　提示：硝化细菌为自养型生物，可以二氧化碳为碳源合成有机物。
（3）×　提示：培养固氮微生物的培养基中可以不加入氮源。
（4）√
互动探究
　（1）提示：固体　该培养基的配方中含有凝固剂琼脂
（2）提示：牛肉膏和蛋白胨
（3）提示：异养型微生物　该微生物的碳源和氮源是有机物
（4）提示：不一定，例如培养自养微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。
学以致用
1.B　微生物生长繁殖需要氮源，氮源物质为该微生物提供必要的氮元素，A正确；该碳源物质是CO2，属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误；无机盐是微生物生长繁殖不可缺少的营养物质，C正确；生物的生命活动离不开水，水是该微生物的营养要素之一，D正确。
2.C　培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，培养自生固氮菌的培养基中不需加入氮源，A错误；一般固体培养基可用于观察菌落，液体培养基可用于工业生产，B错误；某些微生物不能利用淀粉，而只能利用葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖等糖类，D错误。
知识点（二）
自主学习
1. 杂菌污染　 温和的物理、化学　 巴氏消毒法　 所有的微生物　 湿热灭菌　 灼烧灭菌
2.①消毒　②灭菌　③酒精灯火焰　④周围的物品
3.（1）√　（2）√
（3）×　提示：没有生物活性的材料不一定要用高压蒸汽灭菌法灭菌，如玻璃器皿可用干热灭菌法灭菌。
互动探究
1.63～65　72～76　5～6　30　接种室　接种箱　超净工作台　酒精　氯气　充分燃烧　涂布器　接种环　接种针　试管口　瓶口　160～170　1～2 h　耐高温的和需要保持干燥　100 kPa、121 ℃　15～30 min　培养基
2.提示：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。
3.提示：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
学以致用
1.B　实验操作者双手用体积分数为70％的酒精消毒，可防止杂菌污染，A不符合题意；试管用高压蒸汽灭菌法灭菌前要加棉花堵塞，但不能用脱脂棉花，因脱脂棉易吸水，容易引起杂菌污染，B符合题意；在超净台上完成操作，可防止杂菌污染，C不符合题意；接种环需要灼烧灭菌，可保证接种时不会引起杂菌污染，D不符合题意。
2.B　在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于煮沸消毒法，B错误。
知识点（三）
自主学习
1.（1）微生物的群体　单一个体　纯培养物　（2）配制培养基、灭菌、接种、分离和培养
2.（1）①固体培养基　子细胞群体　②平板划线法　稀释涂布平板法　单个微生物　（2） 琼脂　 蒸馏水　 干热灭菌箱　 50 ℃　 酒精灯火焰　 单　 恒温
3.（1） 右手　 左手　 通过　 稍大于　 立即
倒过来　 下　 上　（2） 灼烧　 火焰旁　 火焰
接种环蘸取　 三至五条平行线　 接种环　 末端
第一次
4.（1）×　提示：培养基应灭菌后再分装到培养皿中。
（2）√　（3）√
（4）×　提示：接种环经火焰灭菌冷却后再挑取菌落。
（5）√
互动探究
1.（1）提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
（2）提示：可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（3）提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
2.（1）提示：d→b→f→a→e→c→h→g。
（2）原有的微生物　上次划线的末端　每次划线时菌种数目逐渐减少　单个细菌
（3）提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
（4）提示：培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。
学以致用
1.B　步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌，冷却后倒平板，A错误；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以步骤③到步骤④的过程中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，步骤③到④的过程中共需灼烧接种环6次，C错误；步骤④操作结束后需在培养皿的底上做好标记并倒置后放入培养箱中进行培养，D错误。
2.B　为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行高压蒸汽灭菌，A正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，甲中d区域为划线的起始位置，a区域为划线的结束位置，B错误；连续划线的目的是获得单个微生物繁殖形成的菌落，C正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌，图示甲中共有4次划线接种，故接种环灼烧了5次，D正确。
【过程评价·勤检测】
网络构建
　（1）按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质　（2）使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物　（3）由单一个体繁殖所获得的微生物群体
课堂演练
1.D　培养该菌时，需要加入蒸馏水；该微生物为异养生物，需要葡萄糖作为碳源；培养该微生物需要无机盐，故需要加入氯化钠；该微生物可以自己固氮，不需要加入氮源，故不需要加入蛋白胨，D符合题意。
2.A　培养基是为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源、水和无机盐等营养的基质，A正确；微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐等，有的自养型微生物的碳源是二氧化碳，固氮菌的氮源是氮气，此时培养基中不需要加碳源或氮源，B错误；牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；不同微生物生长的最适pH不同，如霉菌一般适合在酸性环境中生长，细菌一般适合在中性或弱碱性环境中生长，D错误。
3.D　倒平板正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁，A正确；将培养基倒入培养皿（甲），在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染，B正确；丁操作为将培养基倒置，必须要等待平板冷却凝固后才能进行，C正确；培养基冷却到50 ℃左右时既不烫手，也不发生凝固，适宜进行倒平板，而不是防止杂菌污染，D错误。
4.D　灭菌可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子，消毒只能杀死物体表面或内部一部分微生物，A错误；玻璃器皿等耐高温、需要保持干燥的实验器具，应采用干热灭菌法进行灭菌，而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的，B错误；灼烧灭菌的对象可以是金属器具，也可以是玻璃器具，C错误；消毒和灭菌的原理是相同的，都是使微生物的蛋白质变性，D正确。
5.C　灼烧接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却后再进行划线，A错误；划线时注意不要将最后一区5的划线与第一区1相连，B错误；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落，D错误。
6.B　将浸泡在体积分数为70％的酒精中的涂布器拿出后还需要经过灼烧灭菌及冷却后才能进行涂布，A错误；接种环经火焰灼烧灭菌之后还需要冷却后才能挑取菌落，C错误；倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20 mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖，D错误。
10 / 10(共95张PPT)
第1课时　微生物的基本培养技术
导
学 聚
焦 1.基于对牛肉膏蛋白胨培养基的实例分析，说明培养基的概念、
种类及营养成分的种类和作用。
2.对比分析消毒和灭菌方法的异同，认同灭菌是获得纯净的微生
物培养物的前提。
3.运用微生物培养原理和无菌技术，通过平板划线接种并分离得
到酵母菌单菌落，对实验结果进行分析与评价
核心要点·巧突破
01
过程评价·勤检测
02
课时训练·提素能
03
目录
CONTENTS
核心要点·巧突破
01
精准出击 高效学习
知识点（一）　培养基的配制
1. 培养基的配制
（1）培养基的概念、用途和类型
（2）培养基的配方
①主要营养物质： 。
水、碳源、氮源、无机盐　
②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表：
微生物 乳酸菌 霉菌 细菌 厌氧微
生物
特殊需求 添加
pH调至
pH调至
无氧
小提醒：琼脂是一种微生物难以利用的多糖类物质，在44 ℃
以下凝固，在常规培养条件下呈固态。
维生
素　
酸
性　
中性
或弱碱性　
2. 判断下列有关表述的正误
（1）在固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基。
（　×　）
提示：固体培养基中添加了凝固剂，加少量水不能制成液体
培养基。
（2）实验室培养硝化细菌时，培养基无须加入有机碳源。
（　√　）
提示：硝化细菌为自养型生物，可以二氧化碳为碳源合成有
机物。
×
√
（3）所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源。 （　×　）
提示：培养固氮微生物的培养基中可以不加入氮源。
（4）牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营
养物质。 （　√　）
×
√
探讨　分析培养基的种类和营养构成
　下表是某培养基的配方，分析回答：
材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
用量 5 g 10 g 5 g 20 g 1 000 mL
（1）根据培养基的物理性质，该培养基属于 　　培养基，理由
是 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
提示：固体　该培养基的配方中含有凝固剂琼脂
（2）该培养基中提供碳源和氮源的物质是 　　。
提示：牛肉膏和蛋白胨
（3）该培养基培养的微生物同化作用类型是 　　，理由
是 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
提示：异养型微生物　该微生物的碳源和氮源是有机物
（4）培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？
提示：不一定，例如培养自养微生物时，一般不需要添加碳
源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，
一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。
1. 培养基营养成分的作用和主要来源
2. 培养基的种类和作用
　　
1. （2024·江苏徐州高二检测）不同的微生物对营养物质的需求各不
相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养型微生物所需营养的
描述中，错误的是（　　）
A. 氮源物质为该微生物提供必要的氮元素
B. 碳源物质也是该微生物的能源物质
C. 无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D. 水是该微生物的营养要素之一
解析：　微生物生长繁殖需要氮源，氮源物质为该微生物提供必
要的氮元素，A正确；该碳源物质是CO2，属于无机物，不能作为
微生物的能源物质，B错误；无机盐是微生物生长繁殖不可缺少的
营养物质，C正确；生物的生命活动离不开水，水是该微生物的营
养要素之一，D正确。
2. （2024·山东济南高二期中）下列有关微生物培养基种类及配制原
则的叙述，正确的是（　　）
A. 任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐及特殊的营养物
质
B. 液体培养基可用于观察菌落，固体培养基可用于工业生产
C. 微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、O2、渗透压等的影
响
D. 淀粉可作为所有微生物的碳源
解析： 　培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物
的培养基中不需加入碳源，培养自生固氮菌的培养基中不需加入氮
源，A错误；一般固体培养基可用于观察菌落，液体培养基可用于
工业生产，B错误；某些微生物不能利用淀粉，而只能利用葡萄
糖、果糖、蔗糖和麦芽糖等糖类，D错误。
易错提醒
有关培养基营养物质的四点提醒
（1）培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。
①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
（2）对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又
是氮源。
（3）微生物需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的
酶或合成能力有限。
（4）微生物需要量最大的是碳源。能合成含碳有机物的是自养型，
反之则为异养型。
知识点（二）　无菌技术
1. 消毒和灭菌
2. 具体操作
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和 。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上，
并在 附近进行。
④实验操作时应注意避免已经灭菌处理的材料用具与
接触。
消毒　
灭菌　
酒精灯火焰　
周围的物
品　
3. 判断下列有关表述的正误
（1）消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细
胞的伤害。 （　√　）
（2）灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。 （　√　）
（3）只要是没有生物活性的材料均可进行高压蒸汽灭菌。
（　×　）
提示：没有生物活性的材料不一定要用高压蒸汽灭菌法灭
菌，如玻璃器皿可用干热灭菌法灭菌。
√
√
×
1. 请完善表格中消毒和灭菌的主要方法及应用范围。
项目 主要方法 应用范围
消
毒 巴氏消
毒法 ℃消毒30 min
或 ℃处理15 s或
80～85 ℃处理10～15 s 牛奶、啤酒、果酒和酱油
等不耐高温的液体
煮沸消
毒法 100 ℃煮沸 min 家庭餐具等生活用品
63～65　
72～76　
5～6　
项目 主要方法 应用范围
消
毒 紫外线
消毒 30 W紫外灯照射 min
（损伤细菌的DNA） 、
或
化学药
物消毒 用体积分数为70％的 擦拭实验者双手
水源
30　
接种室　
接种箱　
超净工作台　
酒精　
氯气
项目 主要方法 应用范围
灭
菌 灼烧灭
菌 直接在酒精灯火焰的
层灼烧 接种工具，如
、 、
或其他金属用
具、 或
等
充分燃
烧　
涂布
器　
接种环　
接
种针　
试管口　
瓶
口　
项目 主要方法 应用范围
灭
菌 干热灭
菌 干热灭菌箱中，
℃的热空气中维持
的物品，如玻璃器
皿、金属用具等
高压蒸
汽灭菌
（湿热
灭菌） 的条件
下，维持 等
160～170　
1～2 h　
耐高温的和需要保持干
燥　
100 kPa、121 ℃　
15～30 min　
培养基　
2. 牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相
比，这两种方法的优点是什么？
提示：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。
3. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，
还有什么作用？
提示：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
　不同消毒方法的特点
　　
1. （2024·杭州高二检测）在微生物的培养和分离实验操作中，无菌
操作是实验成功的关键，下列可能造成污染的措施是（　　）
A. 实验操作者双手用体积分数为70％的酒精消毒
B. 试管高压蒸汽灭菌时加脱脂棉花
C. 在超净台上完成操作
D. 接种环需要灼烧灭菌
解析： 　实验操作者双手用体积分数为70％的酒精消毒，可防止
杂菌污染，A不符合题意；试管用高压蒸汽灭菌法灭菌前要加棉花
堵塞，但不能用脱脂棉花，因脱脂棉易吸水，容易引起杂菌污染，
B符合题意；在超净台上完成操作，可防止杂菌污染，C不符合题
意；接种环需要灼烧灭菌，可保证接种时不会引起杂菌污染，D不
符合题意。
2. （2024·湖南长沙高二调研）消毒和灭菌是微生物培养中常用的操
作方法。下列说法错误的是（　　）
A. 接种疫苗前要对注射区域进行消毒
B. 在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于灭菌方法，可以杀死微生物的营
养细胞和一部分芽孢
C. 微生物接种技术的方法不同，但核心都是要防止杂菌污染，保证
培养物的纯度
D. 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
解析：　在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于煮沸消毒法，B错误。
知识点（三）　微生物的纯培养
1. 微生物的纯培养
（1）概念
（2）过程：包括 等
步骤。
配制培养基、灭菌、接种、分离和培养　
（1）实验原理
①分散的微生物在适宜的 表面或内部可以繁
殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的 ，这
就是菌落。
②采用 和 能将单个微生
物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是
由 繁殖形成的纯培养物。
固体培养基　
子细胞群体　
平板划线法　
稀释涂布平板法　
单个微生物　
2. 酵母菌的纯培养
（2）方法步骤
3. 倒平板和平板划线法的操作
（1）倒平板的具体操作
小提醒：倒平板是将熔化后的培养基倒入培养皿冷却凝固形成培养基固体平面的过程，而不只是将培养皿倒置。
（2）平板划线法的具体操作
4. 判断下列有关表述的正误
（1）培养基分装到培养皿后再进行湿热灭菌。 （　×　）
提示：培养基应灭菌后再分装到培养皿中。
（2）倒平板操作中，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置。
（　√　）
（3）平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下
一个区域。 （　√　）
（4）为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。
（　×　）
提示：接种环经火焰灭菌冷却后再挑取菌落。
（5）把一个不接种的培养基放在相同条件下培养可检验培养基的
灭菌是否合格。 （　√　）
×
√
√
×
√
探讨一　分析倒平板的操作过程
　结合倒平板的操作程序请探究：
（1）如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
（2）如图二所示，从防止杂菌污染的角度思考，为什么培养基冷却
凝固后将平板倒置？
提示：可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（3）培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。可
用什么办法来估计培养基的温度？
提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚
刚不烫手即可。
探讨二　分析平板划线操作过程，提高操作能力
　下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：
（1）用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤。
提示：d→b→f→a→e→c→h→g。
（2）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在
划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？请完善下
方的表格。
灼烧时期 目的
取菌种前 杀死接种环上
每次划线
前 杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接
来源于 ，从而使
，直至得到
接种结束
后 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操
作者
原有的微生物　
上次划线的末端　
每次划线时菌种
数目逐渐减少　
单个细菌　
（3）在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的
末端开始划线？
提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次
从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增
加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
（4）接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的
培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，
说明了什么？
提示：培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒
温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。
若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，
需要重新制备。
1. 平板划线操作的注意事项
（1）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死
菌种。
（2）第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能
使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到
由单个菌种繁殖而来的菌落。
（3）划线时最后一区不要与第一区相连。
（4）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
2. 实验结果的分析
（1）若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，
应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。
（2）在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在
颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈
乳白色。
（3）若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混
入了其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。
1. （2024·江苏南京调研）下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中
的部分操作步骤，下列说法正确的是（　　）
A. 步骤①后需将培养基灭菌并调节pH
B. 步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行
C. 步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次
D. 图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要
解析： 　步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌，冷却
后倒平板，A错误；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼
烧来灭菌，所以步骤③到步骤④的过程中5次划线操作前都要灼烧
灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，
步骤③到④的过程中共需灼烧接种环6次，C错误；步骤④操作结
束后需在培养皿的底上做好标记并倒置后放入培养箱中进行培养，
D错误。
2. 在分离、纯化酵母菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如
图所示，且甲、乙的对应位置不变。下列相关叙述错误的是
（　　）
A. 配制培养基时需进行高压蒸汽灭菌
B. 甲中a区域为划线的起始位置
C. 连续划线的目的是获得单个微生物繁殖形成的
菌落
D. 图示接种过程中接种环灼烧了5次
解析： 　为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行高压蒸汽灭菌，
A正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，甲中d区域为划线的
起始位置，a区域为划线的结束位置，B错误；连续划线的目的是获
得单个微生物繁殖形成的菌落，C正确；由于每次使用接种环前后
都要灼烧灭菌，图示甲中共有4次划线接种，故接种环灼烧了5次，
D正确。
易错提醒
倒平板操作的注意事项
（1）培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂
在44 ℃以下凝固。
（2）培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。
（3）整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。
（4）平板冷凝后要倒置，防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成
污染。
（5）若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应
丢弃。
过程评价·勤检测
02
反馈效果 筑牢基础
（1）培养基是指
。
（2）消毒是指
。
（3）纯培养物是指 。
按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其
生长繁殖的营养基质　
使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体
表面或内部一部分微生物　
由单一个体繁殖所获得的微生物群体　
1. 某异养自生固氮菌能将大气中的氮还原成氨，若在实验室中分离土
壤中的该菌，则配制培养基时，一般不需要加入的物质是（　　）
A. 蒸馏水 B. 葡萄糖
C. 氯化钠 D. 蛋白胨
解析： 　培养该菌时，需要加入蒸馏水；该微生物为异养生物，
需要葡萄糖作为碳源；培养该微生物需要无机盐，故需要加入氯化
钠；该微生物可以自己固氮，不需要加入氮源，故不需要加入蛋白
胨，D符合题意。
2. （2024·山东潍坊高二检测）下列关于培养基的叙述，正确的是
（　　）
A. 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B. 培养基都含有水、碳源、氮源、无机盐等
C. 牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面
D. 微生物在培养基上生长，都需要将pH维持在中性
解析： 　培养基是为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源、水和无
机盐等营养的基质，A正确；微生物培养基的主要营养物质有碳
源、氮源、水和无机盐等，有的自养型微生物的碳源是二氧化碳，
固氮菌的氮源是氮气，此时培养基中不需要加碳源或氮源，B错
误；牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；不
同微生物生长的最适pH不同，如霉菌一般适合在酸性环境中生
长，细菌一般适合在中性或弱碱性环境中生长，D错误。
3. 如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是（　　）
A. 正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁
B. 甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染
C. 丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行
D. 培养基应冷却到50 ℃左右时倒平板是因为该温度下不易受杂菌
污染
解析： 　倒平板正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁，A正
确；将培养基倒入培养皿（甲），在酒精灯火焰附近进行可以避免
杂菌污染，B正确；丁操作为将培养基倒置，必须要等待平板冷却
凝固后才能进行，C正确；培养基冷却到50 ℃左右时既不烫手，也
不发生凝固，适宜进行倒平板，而不是防止杂菌污染，D错误。
4. 微生物的实验室培养要进行严格的灭菌和消毒。下列关于灭菌和消
毒的叙述，正确的是（　　）
A. 煮沸消毒法中100 ℃煮沸5～6 min可以杀死全部微生物的细胞和芽
孢、孢子
B. 培养皿用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的
C. 灼烧灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具
D. 消毒和灭菌的原理是相同的
解析： 　灭菌可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子，
消毒只能杀死物体表面或内部一部分微生物，A错误；玻璃器皿等
耐高温、需要保持干燥的实验器具，应采用干热灭菌法进行灭菌，
而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的，B错误；灼烧灭菌的对
象可以是金属器具，也可以是玻璃器具，C错误；消毒和灭菌的原
理是相同的，都是使微生物的蛋白质变性，D正确。
5. 如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5，下
列操作方法叙述正确的是（　　）
A. 在1、2、3、4、5区域中划线前都要对接种环灼烧
灭菌，灼烧灭菌后立即进行划线
B. 1和5划线可以如图所示，也可以相连在一起
C. 在划线操作结束时，也要对接种环灼烧灭菌
D. 在5区域中才可以得到单菌落
解析： 　灼烧接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却后再进行划
线，A错误；划线时注意不要将最后一区5的划线与第一区1相连，
B错误；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所
需菌落，D错误。
6. 灭菌和无菌操作是获得微生物纯培养物的基础，在接种、培养、分
离酵母菌时，下列操作正确的是（　　）
A. 用浸泡在体积分数为70％的酒精中的涂布器直接涂布
B. 将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌
C. 为了防止污染，接种环经火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落
D. 倒平板时，应将培养皿的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
解析： 　将浸泡在体积分数为70％的酒精中的涂布器拿出后还需
要经过灼烧灭菌及冷却后才能进行涂布，A错误；接种环经火焰灼
烧灭菌之后还需要冷却后才能挑取菌落，C错误；倒平板时，用拇
指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20
mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖，D错误。
课时训练·提素能
03
分级练习 巩固提升
　　
知识点一　培养基的配制和无菌技术
1. （2024·武汉高二期中）关于培养基的配制的说法，错误的是
（　　）
A. 配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例
B. 合适的培养基可实现分离、鉴定微生物等不同目的
C. 在培养尿素分解菌的培养基中，尿素既是氮源也是碳源
D. 不同培养基的配方不同，但一般含有碳源、氮源、水和无机盐
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
解析： 　培养基有选择培养基、鉴别培养基和加富培养基等，可
实现分离、鉴定微生物等不同目的，B正确；在培养尿素分解菌的
培养基中，尿素是唯一的氮源，培养基中添加葡萄糖，葡萄糖作为
碳源，C错误；微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机
盐等，D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
2. （2024·河北衡水中学高二检测）下表是某同学培养微生物时配制
的培养基，关于此培养基的说法，错误的是（　　）
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 （NH4）2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
A. 此培养基可用来培养自养型微生物
B. 此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源
C. 表中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定
D. 若除去①，此培养基可用于培养大肠杆菌
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解析：　由表中成分可知，该培养基中未添加有机碳源，故此培
养基可用来培养自养型微生物，A正确；分析表格可知，表中的营
养成分共有三类，即水、无机盐、氮源，B正确；培养基中各成分
的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定，C正确；大肠杆菌
是异养型生物，且不能固氮，因此培养大肠杆菌还需要添加有机碳
源，D错误。
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3. （2024·江苏南通高二期末）许多生物学实验十分重视无菌操作，
防止杂菌污染。下列操作正确的是（　　）
A. 对无菌室、超净台和实验员可采用紫外线杀菌
B. 家庭制作酸奶时，要将容器和鲜牛奶进行灭菌
C. 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
D. 灼烧灭菌法杀死微生物的营养体和芽孢
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解析：　对无菌室、超净台可采用紫外线杀菌，对实验员可用
酒精擦拭双手进行消毒，A错误；家庭制作酸奶时，要将容器煮
沸消毒，鲜牛奶不进行灭菌，B错误；加入培养基中的指示剂和
染料也需要灭菌，否则可能会污染培养基，C错误；灼烧灭菌法
可杀死物体内外所有的微生物（包括微生物的营养体、芽孢和
孢子），D正确。
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4. （2024·湖北黄冈高二检测）下列哪项不属于无菌技术（　　）
A. 将培养皿、接种工具和培养基进行灭菌
B. 实验操作应在酒精灯火焰附近进行
C. 避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触
D. 操作者的衣着和双手用纯净水洗干净
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解析： 　为保证不被杂菌污染，应将培养皿、接种工具和培养基
等进行灭菌，A不符合题意；酒精灯火焰附近可以形成一个相对无
菌区，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰
附近进行，B不符合题意；周围物品可能含有杂菌，为防止污染，
实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触，C
不符合题意；对实验操作的空间，操作者的衣着和双手，需进行清
洁和消毒，仅用纯净水洗干净不属于无菌技术，D符合题意。
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知识点二　微生物的纯培养
5. 采用平板划线法能将单个微生物分散在固体培养基上，下列有关平
板划线操作的叙述，错误的是（　　）
A. 第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培
养物
B. 每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上
残留的菌种
C. 在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
D. 划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免微
生物污染环境和感染操作者
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解析：　从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来
源于上次划线的末端，C错误。
6. 在培养基配制和微生物接种的过程中，确保无杂菌污染被称为无菌
操作。下图中，符合无菌操作要求的有（　　）
①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿
②菌种试管口在火焰上灼烧
③接种前灼烧接种环
④接种前培养皿在火焰上灼烧
⑤靠近火焰接种
A. ①②③④ B. ①②③⑤
C. ①③④⑤ D. ②③④⑤
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解析：　火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿，这是
因为酒精灯火焰旁具有无菌区域，能够防止杂菌污染，①正确；菌
种试管口在火焰上灼烧，这样能够防止杂菌污染，②正确；接种前
灼烧接种环，能够杀死接种环上的杂菌，③正确；接种前培养皿不
能在火焰上灼烧，灼烧会导致培养基熔化等，正确操作是接种时在
酒精灯火焰旁进行操作，④错误；靠近火焰接种，这样能够防止杂
菌污染，⑤正确。
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7. （2024·辽宁营口高二期中）下列关于实验室培养和纯化酵母菌过
程中的部分操作的说法，正确的是（　　）
A. 培养酵母菌的试剂和器具都要进行湿热灭菌
B. 称量、溶化和倒平板都需要在酒精灯火焰旁进行
C. 倒好的平板要立即使用，以免表面干燥，影响酵母菌生长
D. 将平板倒置放入适宜温度的恒温培养箱中培养
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解析：　接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干
热灭菌法处理，培养基及多种器材用湿热灭菌法处理，A错误；倒
平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，而称量、溶化不需要在酒精
灯火焰旁进行，B错误；倒好的平板需要冷却后使用，C错误。
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8. 下列有关微生物的培养与应用的叙述，不正确的是（　　）
A. 在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时
间，这样做的目的是检测培养基是否灭菌合格
B. 微生物纯培养时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有平板划
线法和稀释涂布平板法
C. 在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有一种细菌
D. 培养微生物的培养基分装到培养皿后进行灭菌
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解析：　在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养
一段时间，这样做的目的是检测培养基是否灭菌合格，以确保实验
的准确性，A正确；菌落是由一个细胞发育成的子细胞群体，只含
有一种细菌，故在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有一种细
菌，C正确；培养微生物的培养基需要先灭菌后再分装到培养皿，
D错误。
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9. 菜籽粕中含有35％～45％的蛋白质，是畜禽饲料的重要原料，但其
中的单宁等抗营养因子限制了菜籽粕的应用。研究者将不同菌种接
种到菜籽粕与麸皮制成的固体培养基中发酵48 h，测定菜籽粕中单
宁的含量，结果如下图。
下列相关叙述错误的是（　　）
A. 菜籽粕与麸皮为微生物提供碳源和氮源
B. 接种后需对培养基进行高压蒸汽灭菌
C. 黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想
D. 对照组为不接种微生物的固体培养基
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解析：　菜籽粕中含有35％～45％的蛋白质，麸皮富含纤维素，
菜籽粕与麸皮可为微生物提供碳源和氮源，A正确；对培养基灭菌
应在接种前，若接种后再灭菌，菌种将被全部杀死，B错误；据图
可知，与对照组相比，黑曲霉菌发酵菜籽粕中单宁含量最低，说明
黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想，C正确；对照组为不接种微
生物的固体培养基，目的是作为对照，D正确。
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10.（2024·江苏无锡高二期末）生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，某研究小组把该菌的悬浮液与不含任何特殊营养物质但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法错误的是（　　）
A. 倒平板后直接培养可判断有无污染
B. 将所有平板放置在适宜的37 ℃下倒置培养并观察
C. 图示结果表明该菌需要特殊营养物质乙和丙
D. 生长图形法还可用于某些菌种的筛选
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解析： 　倒平板后不接种任何菌种直接进行培养观察有无菌落的出现，可以判断培养基有无污染，A正确；该菌为嗜热菌，应放置在其适宜的高温条件下培养，而不是37 ℃，B错误；图中嗜热菌在添加了乙、丙特殊营养物质的区域生长，故该菌需要的特殊营养物质是乙和丙，C正确；不同的菌种所需的特殊营养物质不同，利用生长图形法可用于某些菌种的筛选，菌种只会在提供其需要的生长因子的区域生长，D正确。
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11. （2024·河北石家庄高二期末）扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生
物之一，其次级代谢产物棒曲霉素（Pat）是一种具有致突变作用
的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示
的实验，其中“病健交界处”为腐
烂部位与未腐烂部位的交界处，
取样分离的5 个部位分别为①号、
②号、③号、④号、⑤号。请回
答下列问题：
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（1）苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。两种
微生物在结构上的主要区别是
。
扩展青霉有以核膜为界限的
细胞核，枯草杆菌无　
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（2）活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质
划分该培养基属于 培养基，其中能为扩展青霉的生
长繁殖提供能源的是 ；NaNO3的作用是
（答两
点）。
蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水
30 g 2 g 0.5 g 0.5 g 0.01 g 1 g 1 000 mL
液体　
蔗糖　
为扩展青霉的
生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压　
解析：活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝
固剂，故根据物理性质划分该培养基属于液体培养基。
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（3）用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一
划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线
上却均无菌落。操作失误的原因可能是
。
第一区域划线结
束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始　
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解析：每次从上一次划线的末端开始，能使扩展青霉的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。若划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，可能是因为第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。
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（4）接种扩展青霉前，应对苹果进行 （填“消毒”或“灭
菌”）。研究人员测定了病斑直径为1 cm、2 cm、3 cm 的
苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果：
；
。
消毒　
相
同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低　
相同部
位病斑越大，Pat含量越高　
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解析：接种扩展青霉前，为了避免苹果上其他杂菌、病原微生物的污染，应对苹果进行消毒处理。由图可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测相同病斑情况下，①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低，相同部位病斑越大，Pat含量越高。
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