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第2节　动物细胞工程
第1课时　动物细胞培养
1．阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
2．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
知识点1　动物细胞培养的条件和过程
1．动物细胞培养的概念
从动物体中取出相关的组织，将它分散成__________，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
2．动物细胞培养的条件
(1)营养
①合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。
②天然成分：______等。
③一般使用______培养基，即培养液。
(2)无菌、无毒的环境
①对培养液和所有培养用具进行______处理。
②在______环境下进行操作。
③培养液定期更换的目的：以便清除________，防止________________对细胞自身造成危害。
(3)温度、pH和渗透压
①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以_________________ ℃为宜。
②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为____________。
③适宜的渗透压。
(4)气体环境：95%空气和5%CO2的混合气体。
①O2的作用：__________________。
②CO2的主要作用：________________。
1．动物细胞的培养条件应与动物体内的哪种液体的成分和理化性质相同？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3．动物细胞培养的过程
(1)过程①的处理方法有：________或________________________等处理的方法。
(2)过程②为______培养，体外培养的动物细胞有两大类：
①能够悬浮在________中生长增殖；
②大多数细胞需要贴附于______________才能生长增殖。
(3)在进行过程③时，悬浮培养的细胞直接用________收集；贴壁细胞需要重新用__________等处理，使之分散成单个细胞，然后再用________收集。
(4)过程③为______培养，进行过程③的原因主要有：悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、____________积累、培养液中__________缺乏和__________等因素使分裂受阻。
2．制备细胞悬液时，常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶行吗？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
基于对动物细胞培养的条件和过程的认识，判断下列相关表述是否正确。
1．动物细胞培养需要定期更换培养液，其目的是便于清除代谢物，防止代谢物积累对细胞自身造成伤害。 (　　)
2．动物细胞培养技术的原理是动物细胞的全能性。 (　　)
3．制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理。 (　　)
4．培养动物细胞的第一代(即第一次细胞增殖)被称为原代培养。 (　　)
结合下图的动物细胞培养的过程，思考回答下列问题。
1．图中A→B是制备细胞悬液，其目的是什么？B→C和C→D分别表示的是什么培养过程？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2．为什么多数动物细胞培养中有贴壁生长的特性？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3．动物细胞培养过程中有接触抑制现象，这一现象说明了细胞膜具有什么功能？细胞膜接收信息后，细胞停止分裂又说明了什么？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4．根据癌细胞的特点，思考一下培养的癌细胞有没有接触抑制现象。
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5．动物细胞培养和植物组织培养的目的有什么不同？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
动物细胞培养与植物组织培养的比较
比较项目 动物细胞培养 植物组织培养
生物学原理 细胞增殖 植物细胞的全能性
培养基性质 液体 固体
培养结果 子代细胞 新的植株
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产等 ①快速繁殖 ②作物脱毒 ③培育作物新品种 ④细胞产物的工厂化生产
培养条件 无菌、适宜的温度和pH等
取材 新鲜的组织 植物器官、组织或细胞
培养对象 分散的单个细胞 离体的植物器官、组织或细胞
过程 原代培养、传代培养 脱分化、再分化
细胞分裂、生长、 分化特点 ①贴壁生长 ②接触抑制 ①脱分化：形成愈伤组织 ②再分化：形成根、芽等
1．在进行动物细胞培养时，需要(　　)
A．用胃蛋白酶处理以获得单细胞悬液
B．充入5%CO2以刺激细胞正常呼吸
C．加入经高压蒸汽灭菌的血清以提供营养
D．定期更换培养液以清除代谢物
2．实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述不正确的是(　　)
实验小鼠皮肤组织皮肤细胞细胞培养1细胞培养2
A．甲过程需要在无菌条件下进行，需要对小鼠进行消毒
B．乙过程需要将获得的皮肤细胞制成细胞悬液
C．丙过程是原代培养，会出现接触抑制现象
D．丁过程是传代培养，细胞增殖时一般不会贴附在瓶壁上
知识点2　干细胞培养及其应用
1．干细胞的功能和类型
(1)干细胞的功能：在一定条件下，可以分化成________________。
(2)干细胞的类型：存在于__________、______和________等多种组织和器官中，包括______干细胞和______干细胞等。
2．胚胎干细胞
(1)存在：__________中。
(2)功能：具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有______和器官甚至______的潜能。
(3)局限：胚胎干细胞必须从______中获取，这涉及伦理问题，因而限制了它在医学上的应用。
3．成体干细胞
(1)存在：成体组织或器官内。
(2)类型：骨髓中的______干细胞、神经系统中的______干细胞和睾丸中的______干细胞等。
(3)特点：具有____________，只能分化成特定的细胞或组织，________发育成完整个体的能力。
(4)作用：有着自我更新能力及__________，与组织、器官的发育、再生和______等密切相关。
(5)应用
①造血干细胞：治疗________及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、__________功能障碍等疾病。
②神经干细胞：治疗神经__________和神经系统____________(如帕金森病、阿尔茨海默病等)。
4．诱导多能干细胞
(1)概念：通过体外诱导小鼠________细胞，获得了类似____________的一种细胞(简称iPS细胞)。
(2)应用：治疗小鼠的镰状细胞贫血；治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等。
(3)优点：诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免______________。
(选择性必修3 P46“相关信息”)制备iPS细胞的方法：借助______将特定______导入细胞中，直接将特定______导入细胞中或者用______________等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由________细胞转化而来的，后来发现已分化的___细胞、___细胞等也能被诱导为iPS细胞。
基于对干细胞的培养及其应用的认识，判断相关表述是否正确。
1．干细胞都是来源于早期胚胎。 (　　)
2．iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，可以避免免疫排斥反应。 (　　)
3．不同类型的干细胞，它们的分化潜能完全相同。 (　　)
下图为iPS细胞的培养和利用过程，请据图回答问题。
1．1→2过程的实质是什么？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2．诱导多能干细胞用于治疗人类的某些顽症的原理是什么？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3．诱导多能干细胞为什么可以解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题？
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
三种干细胞的比较
比较项目 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
来源 早期胚胎 成体组织或器官 诱导高度分化的组织细胞形成
特点 具有分化成为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能 具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力 诱导过程无须破坏胚胎，不涉及伦理问题，且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应
1．研究人员研究肥胖机理时发现了一种与脂肪细胞的分化形成有关的蛋白质M，其细胞分化过程如图所示。下列有关叙述错误的是(　　)
A．已分化的细胞不可能继续分化为其他类型的细胞
B．肌肉细胞与脂肪细胞中均含控制蛋白质M合成的基因
C．促进蛋白质M的合成是解决肥胖问题的一条途径
D．间充质细胞是一种成体干细胞，其分化过程具有组织特异性
2．下列关于ES细胞和iPS细胞及其应用的说法，正确的是(　　)
A．ES细胞存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内各种功能的细胞的潜能，但其不能形成生物个体
B．ES细胞存在于成体组织和器官内，能分化成特定的组织
C．iPS细胞存在于成体组织和器官内，能分化成特定的组织
D．iPS细胞是人工诱导产生的，也可诱导分化成为各种组织细胞
　
1．核心概念
(1)动物细胞培养：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
(2)干细胞：在一定条件下，可以分化成其他类型细胞的细胞。
2．结论语句
(1)动物细胞培养的培养基一般为液体培养基，含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素等成分，还要加入血清等一些天然成分。
(2)培养动物细胞的CO2培养箱中含有95%的空气和5%的CO2。
(3)培养的动物细胞有贴壁生长和接触抑制现象。
(4)体细胞经体外诱导能够形成类似胚胎干细胞的诱导多能干细胞。
1．下列哪项条件不是动物细胞培养所需要的(　　)
A．无菌、无毒的环境
B．充足的营养物质
C．适宜的温度和pH
D．95%的空气和5%的O2
2．动物细胞培养过程的顺序是(　　)
①原代培养　②传代培养　③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液
A．①②③ B．①③②
C．②①③ D．③①②
3．下列关于植物组织培养和动物细胞培养的叙述，正确的是(　　)
A．都需要无菌的条件
B．都从单个细胞开始
C．都使用液体培养基
D．都能实现细胞的全能性
4．关于iPS细胞及其应用的说法，正确的是(　　)
A．iPS细胞是从早期胚胎中获取的
B．造血干细胞是一种iPS细胞
C．采用不同的方法可将成纤维细胞诱导产生iPS细胞
D．iPS细胞诱导基因突变可分化成各种组织细胞
5．某研究小组进行药物实验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题。
(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。
(2)在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是____________________________________________________________________。细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的主要作用是_____________________________________________________________________。
(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长________。药物实验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_______。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需要用________________处理。
(4)为了防止细胞在培养过程中受到细菌的污染，可向培养液中加入适量的____________。
第1课时　动物细胞培养
知识点1
自主梳理
1．单个细胞　2．(1)血清　液体　(2)灭菌　无菌　代谢物　细胞代谢物积累　(3)(36.5±0.5)　7.2～7.4　(4)细胞代谢所必需的　维持培养液的pH　3．(1)机械法　用胰蛋白酶、胶原蛋白酶　(2)原代　培养液　某些基质表面　(3)离心法　胰蛋白酶　离心法　(4)传代　有害代谢物　营养物质　接触抑制
微思考
1．提示：细胞外液。
2．提示：说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶失去活性。多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。
基础诊断
1．√
2．×　提示：动物细胞培养技术的原理是细胞增殖。
3．×　提示：应该用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。
4．×　提示：原代培养指动物组织经处理后的初次培养。
合作探究
1．提示：目的是将组织分散成单个细胞，增大细胞与培养液的接触面积。B→C表示的是原代培养，C→D表示的是传代培养。
2．提示：动物细胞膜上有糖蛋白，使细胞具有黏着性。
3．提示：细胞培养过程中的接触抑制说明了细胞膜能进行细胞间的信息交流。细胞膜接收信息后，细胞停止分裂，说明了细胞膜接收的信息能够传递到细胞核。
4．提示：癌细胞细胞膜上的糖蛋白减少，细胞的黏着性降低，在适宜的条件下可以无限增殖，因此培养的癌细胞无接触抑制现象，在培养瓶中能够生长成多层。
5．提示：动物细胞培养是为了获得大量的动物细胞或细胞产物；植物组织培养是为了获得新个体或细胞产物。
对点练习
1．D　[用胰蛋白酶或胶原蛋白酶等处理动物组织，以获得单细胞悬液，A错误；充入5%CO2的目的是维持培养液的pH，B错误；加入血清为动物细胞提供营养，高压蒸汽灭菌会破坏血清中的活性成分，C错误。]
2．D　[对离体动物细胞进行培养需要提供无菌、无毒的环境，需要对实验小鼠进行消毒处理，A正确；乙过程表示对皮肤组织进行处理，使其分散成单个皮肤细胞，制成细胞悬液，B正确；丙过程表示原代培养，离体的动物细胞经过原代培养，生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖，出现接触抑制现象，C正确；丁过程表示传代培养，该过程皮肤细胞增殖时一般会出现贴壁生长的现象，D错误。]
知识点2
自主梳理
1．(1)其他类型的细胞　(2)早期胚胎　骨髓　脐带血　胚胎　成体　2.(1)早期胚胎　(2)组织　个体　(3)胚胎　3.(2)造血　神经　精原　(3)组织特异性　不具有　(4)分化潜能　修复　(5)白血病　免疫系统　组织损伤　退行性疾病
4．(1)成纤维　胚胎干细胞　(3)免疫排斥反应
教材隐性知识
载体　基因　蛋白　小分子化合物　成纤维　T　B
基础诊断
1．×　提示：干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等。
2．√
3．×　提示：不同类型的干细胞，它们的分化潜能是有差别的，如胚胎干细胞的分化潜能大于成体干细胞。
合作探究
1．提示：基因的选择性表达。
2．提示：诱导多能干细胞可以被诱导分化形成新的组织细胞，经移植可使坏死或退化部位得以修复并恢复正常功能。
3．提示：通过干细胞体外诱导分化，可以培育出人造器官，从而解决供体器官不足的问题。又由于人造器官是病人自身细胞经诱导分化形成的，所以可以避免免疫排斥反应。
对点练习
1．A　[已分化的细胞也可能继续分化为其他类型的细胞，如人体的干细胞可分化为间充质细胞，间充质细胞又分化为肌肉细胞或脂肪细胞，A错误。]
2．D　[ES细胞存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织、器官甚至生物个体的潜能，A、B错误；iPS细胞是分化的体细胞在体外经人工诱导培养形成的多能干细胞，在特定条件下可诱导分化成为各种组织细胞，C错误，D正确。]
课堂检测素养测评
1．D　[CO2培养箱的气体条件是95%的空气和5%的CO2。]
2．D　[动物细胞培养是用动物胚胎或幼龄动物器官通过胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理制成细胞悬液，再通过原代培养和传代培养得到细胞株。]
3．A　[植物组织培养和动物细胞培养都需要防止杂菌污染，即都需要无菌的条件，A正确；植物组织培养从外植体，即离体的植物器官、组织或细胞等开始，动物细胞培养从单个细胞开始，B错误；植物组织培养使用固体培养基，动物细胞培养使用液体培养基，C错误；植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理是细胞增殖，D错误。]
4．C　[iPS细胞是诱导多能干细胞，由体细胞诱导而来，不是从早期胚胎中获取的，A错误；造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，B错误；成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，可以诱导成iPS细胞，C正确；iPS细胞是由体细胞诱导而来的，iPS细胞可分化形成多种组织细胞是基因选择性表达的结果，D错误。]
5．解析：癌细胞具有无限增殖的特点，故相同培养条件下，肝肿瘤细胞数量多于正常肝细胞数量。动物细胞培养需提供无菌环境，如向培养液中加入适量的抗生素可防止细菌的污染；需提供一定的营养，如向培养基中加入适量血清，以便补充合成培养基中缺乏的物质；需提供一定的气体环境，如向恒温培养箱中加入5%的CO2，主要目的是维持培养液的pH。
答案：(1)多　(2)血清可以补充合成培养基中缺乏的物质　维持培养液的pH　(3)停止　多　胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)　(4)抗生素
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第1课时　动物细胞培养
第2章　细胞工程
第2节　动物细胞工程
1．阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
2．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
课标要求
对应学生用书第42页
1．动物细胞培养的概念
从动物体中取出相关的组织，将它分散成__________，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
知识点1　动物细胞培养的条件和过程
单个细胞
2．动物细胞培养的条件
(1)营养
①合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。
②天然成分：______等。
③一般使用______培养基，即培养液。
血清
液体
(2)无菌、无毒的环境
①对培养液和所有培养用具进行______处理。
②在______环境下进行操作。
③培养液定期更换的目的：以便清除______，防止____________ ______对细胞自身造成危害。
(3)温度、pH和渗透压
①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以______________ ℃为宜。
②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为____________。
③适宜的渗透压。
灭菌
无菌
代谢物
积累
(36.5±0.5)
7.2～7.4
细胞代谢物
(4)气体环境：95%空气和5%CO2的混合气体。
①O2的作用：__________________。
②CO2的主要作用：________________。
细胞代谢所必需的
维持培养液的pH
1．动物细胞的培养条件应与动物体内的哪种液体的成分和理化性质相同？
提示：细胞外液。
3．动物细胞培养的过程
(1)过程①的处理方法有：________或________________________等处理的方法。
(2)过程②为______培养，体外培养的动物细胞有两大类：
①能够悬浮在________中生长增殖；
②大多数细胞需要贴附于______________才能生长增殖。
(3)在进行过程③时，悬浮培养的细胞直接用________收集；贴壁细胞需要重新用__________等处理，使之分散成单个细胞，然后再用________收集。
机械法
用胰蛋白酶、胶原蛋白酶
原代
培养液
某些基质表面
离心法
胰蛋白酶
离心法
(4)过程③为______培养，进行过程③的原因主要有：悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、____________积累、培养液中__________缺乏和__________等因素使分裂受阻。
传代
有害代谢物
营养物质
接触抑制
2．制备细胞悬液时，常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶行吗？
提示：说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶失去活性。多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。
基于对动物细胞培养的条件和过程的认识，判断下列相关表述是否正确。
1．动物细胞培养需要定期更换培养液，其目的是便于清除代谢物，防止代谢物积累对细胞自身造成伤害。 (　　)
2．动物细胞培养技术的原理是动物细胞的全能性。 (　　)
提示：动物细胞培养技术的原理是细胞增殖。
√
×
3．制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理。
(　　)
提示：应该用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。
4．培养动物细胞的第一代(即第一次细胞增殖)被称为原代培养。
(　　)
提示：原代培养指动物组织经处理后的初次培养。
×
×
结合下图的动物细胞培养的过程，思考回答下列问题。
1．图中A→B是制备细胞悬液，其目的是什么？B→C和C→D分别表示的是什么培养过程？
提示：目的是将组织分散成单个细胞，增大细胞与培养液的接触面积。B→C表示的是原代培养，C→D表示的是传代培养。
2．为什么多数动物细胞培养中有贴壁生长的特性？
提示：动物细胞膜上有糖蛋白，使细胞具有黏着性。
3．动物细胞培养过程中有接触抑制现象，这一现象说明了细胞膜具有什么功能？细胞膜接收信息后，细胞停止分裂又说明了什么？
提示：细胞培养过程中的接触抑制说明了细胞膜能进行细胞间的信息交流。细胞膜接收信息后，细胞停止分裂，说明了细胞膜接收的信息能够传递到细胞核。
4．根据癌细胞的特点，思考一下培养的癌细胞有没有接触抑制现象。
提示：癌细胞细胞膜上的糖蛋白减少，细胞的黏着性降低，在适宜的条件下可以无限增殖，因此培养的癌细胞无接触抑制现象，在培养瓶中能够生长成多层。
5．动物细胞培养和植物组织培养的目的有什么不同？
提示：动物细胞培养是为了获得大量的动物细胞或细胞产物；植物组织培养是为了获得新个体或细胞产物。
深化归纳
动物细胞培养与植物组织培养的比较
比较项目 动物细胞培养 植物组织培养
生物学原理 细胞增殖 植物细胞的全能性
培养基性质 液体 固体
培养结果 子代细胞 新的植株
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产等 ①快速繁殖
②作物脱毒
③培育作物新品种
④细胞产物的工厂化生产
比较项目 动物细胞培养 植物组织培养
培养条件 无菌、适宜的温度和pH等 取材 新鲜的组织 植物器官、组织或细胞
培养对象 分散的单个细胞 离体的植物器官、组织或细胞
过程 原代培养、传代培养 脱分化、再分化
细胞分裂、生长、分化特点 ①贴壁生长 ②接触抑制 ①脱分化：形成愈伤组织
②再分化：形成根、芽等
对点练习
1．在进行动物细胞培养时，需要(　　)
A．用胃蛋白酶处理以获得单细胞悬液
B．充入5%CO2以刺激细胞正常呼吸
C．加入经高压蒸汽灭菌的血清以提供营养
D．定期更换培养液以清除代谢物
√
D　[用胰蛋白酶或胶原蛋白酶等处理动物组织，以获得单细胞悬液，A错误；充入5%CO2的目的是维持培养液的pH，B错误；加入血清为动物细胞提供营养，高压蒸汽灭菌会破坏血清中的活性成分，C错误。]
2．实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述不正确的是(　　)
实验小鼠皮肤组织皮肤细胞细胞培养1细胞培养2
A．甲过程需要在无菌条件下进行，需要对小鼠进行消毒
B．乙过程需要将获得的皮肤细胞制成细胞悬液
C．丙过程是原代培养，会出现接触抑制现象
D．丁过程是传代培养，细胞增殖时一般不会贴附在瓶壁上
√
D　[对离体动物细胞进行培养需要提供无菌、无毒的环境，需要对实验小鼠进行消毒处理，A正确；乙过程表示对皮肤组织进行处理，使其分散成单个皮肤细胞，制成细胞悬液，B正确；丙过程表示原代培养，离体的动物细胞经过原代培养，生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖，出现接触抑制现象，C正确；丁过程表示传代培养，该过程皮肤细胞增殖时一般会出现贴壁生长的现象，D错误。]
1．干细胞的功能和类型
(1)干细胞的功能：在一定条件下，可以分化成________________。
(2)干细胞的类型：存在于__________、______和________等多种组织和器官中，包括______干细胞和______干细胞等。
知识点2　干细胞培养及其应用
其他类型的细胞
早期胚胎
骨髓
脐带血
胚胎
成体
2．胚胎干细胞
(1)存在：__________中。
(2)功能：具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有______和器官甚至______的潜能。
(3)局限：胚胎干细胞必须从______中获取，这涉及伦理问题，因而限制了它在医学上的应用。
早期胚胎
组织
个体
胚胎
3．成体干细胞
(1)存在：成体组织或器官内。
(2)类型：骨髓中的______干细胞、神经系统中的______干细胞和睾丸中的______干细胞等。
(3)特点：具有____________，只能分化成特定的细胞或组织，________发育成完整个体的能力。
(4)作用：有着自我更新能力及__________，与组织、器官的发育、再生和______等密切相关。
造血
神经
精原
组织特异性
不具有
分化潜能
修复
(5)应用
①造血干细胞：治疗________及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、__________功能障碍等疾病。
②神经干细胞：治疗神经__________和神经系统____________(如帕金森病、阿尔茨海默病等)。
白血病
免疫系统
组织损伤
退行性疾病
4．诱导多能干细胞
(1)概念：通过体外诱导小鼠________细胞，获得了类似____________的一种细胞(简称iPS细胞)。
(2)应用：治疗小鼠的镰状细胞贫血；治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等。
(3)优点：诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免______________。
成纤维
胚胎干细胞
免疫排斥反应
(选择性必修3 P46“相关信息”)制备iPS细胞的方法：借助______将特定______导入细胞中，直接将特定______导入细胞中或者用______________等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由________细胞转化而来的，后来发现已分化的___细胞、___细胞等也能被诱导为iPS细胞。
载体
基因
蛋白
小分子化合物
成纤维
T
B
基于对干细胞的培养及其应用的认识，判断相关表述是否正确。
1．干细胞都是来源于早期胚胎。 (　　)
提示：干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等。
2．iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，可以避免免疫排斥反应。 (　　)
×
√
3．不同类型的干细胞，它们的分化潜能完全相同。 (　　)
提示：不同类型的干细胞，它们的分化潜能是有差别的，如胚胎干细胞的分化潜能大于成体干细胞。
×
下图为iPS细胞的培养和利用过程，请据图回答问题。
1．1→2过程的实质是什么？
提示：基因的选择性表达。
2．诱导多能干细胞用于治疗人类的某些顽症的原理是什么？
提示：诱导多能干细胞可以被诱导分化形成新的组织细胞，经移植可使坏死或退化部位得以修复并恢复正常功能。
3．诱导多能干细胞为什么可以解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题？
提示：通过干细胞体外诱导分化，可以培育出人造器官，从而解决供体器官不足的问题。又由于人造器官是病人自身细胞经诱导分化形成的，所以可以避免免疫排斥反应。
深化归纳
三种干细胞的比较
比较项目 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
来源 早期胚胎 成体组织或器官 诱导高度分化的组织细胞形成
特点 具有分化成为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能 具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力 诱导过程无须破坏胚胎，不涉及伦理问题，且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应
对点练习
1．研究人员研究肥胖机理时发现了一种与脂肪细胞的分化形成有关的蛋白质M，其细胞分化过
程如图所示。下列有关叙述错
误的是(　　)
A．已分化的细胞不可能继续分化为其他类型的细胞
B．肌肉细胞与脂肪细胞中均含控制蛋白质M合成的基因
C．促进蛋白质M的合成是解决肥胖问题的一条途径
D．间充质细胞是一种成体干细胞，其分化过程具有组织特异性
√
A　[已分化的细胞也可能继续分化为其他类型的细胞，如人体的干细胞可分化为间充质细胞，间充质细胞又分化为肌肉细胞或脂肪细胞，A错误。]
2．下列关于ES细胞和iPS细胞及其应用的说法，正确的是(　　)
A．ES细胞存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内各种功能的细胞的潜能，但其不能形成生物个体
B．ES细胞存在于成体组织和器官内，能分化成特定的组织
C．iPS细胞存在于成体组织和器官内，能分化成特定的组织
D．iPS细胞是人工诱导产生的，也可诱导分化成为各种组织细胞
√
D　[ES细胞存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织、器官甚至生物个体的潜能，A、B错误；iPS细胞是分化的体细胞在体外经人工诱导培养形成的多能干细胞，在特定条件下可诱导分化成为各种组织细胞，C错误，D正确。]
1．核心概念
(1)动物细胞培养：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
(2)干细胞：在一定条件下，可以分化成其他类型细胞的细胞。
2．结论语句
(1)动物细胞培养的培养基一般为液体培养基，含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素等成分，还要加入血清等一些天然成分。
(2)培养动物细胞的CO2培养箱中含有95%的空气和5%的CO2。
(3)培养的动物细胞有贴壁生长和接触抑制现象。
(4)体细胞经体外诱导能够形成类似胚胎干细胞的诱导多能干细胞。
1．下列哪项条件不是动物细胞培养所需要的(　　)
A．无菌、无毒的环境
B．充足的营养物质
C．适宜的温度和pH
D．95%的空气和5%的O2
课堂检测　素养测评
2
4
3
题号
1
5
√
D　[CO2培养箱的气体条件是95%的空气和5%的CO2。]
2．动物细胞培养过程的顺序是(　　)
①原代培养　②传代培养　③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液
A．①②③ B．①③②
C．②①③ D．③①②
√
2
4
3
题号
1
5
D　[动物细胞培养是用动物胚胎或幼龄动物器官通过胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理制成细胞悬液，再通过原代培养和传代培养得到细胞株。]
3．下列关于植物组织培养和动物细胞培养的叙述，正确的是
(　　)
A．都需要无菌的条件
B．都从单个细胞开始
C．都使用液体培养基
D．都能实现细胞的全能性
√
2
4
3
题号
1
5
A　[植物组织培养和动物细胞培养都需要防止杂菌污染，即都需要无菌的条件，A正确；植物组织培养从外植体，即离体的植物器官、组织或细胞等开始，动物细胞培养从单个细胞开始，B错误；植物组织培养使用固体培养基，动物细胞培养使用液体培养基，C错误；植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理是细胞增殖，D错误。]
2
4
3
题号
1
5
4．关于iPS细胞及其应用的说法，正确的是(　　)
A．iPS细胞是从早期胚胎中获取的
B．造血干细胞是一种iPS细胞
C．采用不同的方法可将成纤维细胞诱导产生iPS细胞
D．iPS细胞诱导基因突变可分化成各种组织细胞
2
4
3
题号
1
5
√
C　[iPS细胞是诱导多能干细胞，由体细胞诱导而来，不是从早期胚胎中获取的，A错误；造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，B错误；成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，可以诱导成iPS细胞，C正确；iPS细胞是由体细胞诱导而来的，iPS细胞可分化形成多种组织细胞是基因选择性表达的结果，D错误。]
2
4
3
题号
1
5
5．某研究小组进行药物实验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题。
(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。
2
4
3
题号
1
5
多
2
4
3
题号
1
5
(2)在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是______________________________________。细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的主要作用是_________________。
血清可以补充合成培养基中缺乏的物质
维持培养液的pH
(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长________。药物实验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_______。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需要用____________________________处理。
(4)为了防止细胞在培养过程中受到细菌的污染，可向培养液中加入适量的____________。
停止
多
胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)　
抗生素
[解析]　癌细胞具有无限增殖的特点，故相同培养条件下，肝肿瘤细胞数量多于正常肝细胞数量。动物细胞培养需提供无菌环境，如向培养液中加入适量的抗生素可防止细菌的污染；需提供一定的营养，如向培养基中加入适量血清，以便补充合成培养基中缺乏的物质；需提供一定的气体环境，如向恒温培养箱中加入5%的CO2，主要目的是维持培养液的pH。
2
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1
5
课时分层作业(7)
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动物细胞培养
（WORD版）
巩固课堂所学 · 激发学习思维
夯实基础知识 · 熟悉命题方式
自我检测提能 · 及时矫正不足
本节课掌握了哪些考点？
本节课还有什么疑问点？
课后训练
学习反思
课时小结
THANKS课时分层作业(7)　动物细胞培养
题组一　动物细胞培养的条件
1．在动物细胞培养的过程中，下列处理中不恰当的是(　　)
A．培养液和培养用具要进行无菌处理
B．提供种类齐全的营养物质
C．提供纯氧以保证细胞的呼吸作用
D．提供适宜的温度和pH
2．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件(　　)
①无毒、无菌的环境　②适宜的渗透压　③合成培养基需加血清等　④温度与动物体温相近　⑤需要O2，不需要CO2
A．①②③④⑤ B．①②③④
C．①③④⑤ D．①②④⑤
3．下列有关动物细胞培养所需条件的叙述，错误的是(　　)
A．为保证培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，培养液和培养用具等需要进行消毒处理
B．动物细胞培养应在含有95%空气和5%CO2的恒温箱中培养，CO2的主要作用是维持培养液的pH
C．培养液中有糖类、氨基酸、无机盐、维生素等
D．使用合成培养基时，应加入动物的血清等一些天然成分
题组二　动物细胞培养的过程
4．下列动物细胞培养过程中，属于原代培养的是(　　)
A．把组织分散成单个细胞的过程
B．从机体取得细胞后初次进行培养的过程
C．出现接触抑制现象后取下的细胞的培养过程
D．哺乳动物细胞在培养基中的悬浮生长过程
5．在将动物组织块分散成单个细胞时，可以使用胰蛋白酶。由此判断以下推测不合理的是(　　)
A．动物细胞之间可能依靠蛋白质相互联系
B．处理时一定要注意处理时间、加酶量
C．胰蛋白酶一定不会对动物细胞造成损伤
D．动物细胞培养液的pH应与胰蛋白酶作用的适宜pH基本一致
6．如图是动物细胞培养过程中可能出现的接触抑制现象，下列有关叙述错误的是(　　)
A．正常动物细胞培养过程中均会出现接触抑制现象
B．癌细胞无接触抑制因而培养时可形成多层细胞
C．出现接触抑制时细胞将停止分裂活动
D．出现接触抑制后需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理后才可进行传代培养
7．下图为动物细胞培养的基本过程示意图，请回答下列问题。
A　 　B　 　C　 　 　D
(1)容器A中放入的一般是健康幼龄动物的器官或组织，原因是其细胞____________、易于培养。培养时要用胰蛋白酶分散细胞，胰蛋白酶的处理时间不能过长，原因是______________________________________________________
_____________________________________________________________________。
(2)将B瓶中的细胞悬液转入C瓶进行的初次培养称为________。动物细胞培养需要提供O2和CO2等气体环境，CO2的主要作用是________________________ _____________________________________________________________________。
(3)下图表示血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。
①据图可知，有无添加血清对培养__________细胞的影响较大。
②在探究物质X对正常细胞增殖的影响时，必须采用有血清培养，据图分析原因是_________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________。
题组三　干细胞的培养及应用
8．下列有关干细胞的叙述，错误的是(　　)
A．干细胞是具有分裂和分化能力的细胞
B．造血干细胞可定向诱导分化成机体所有类型的细胞
C．胚胎干细胞在滋养层细胞上培养能够维持不分化的状态
D．移植胚胎干细胞可使退化的组织得以修复并恢复正常功能
9．有研究表明渐冻症是由于突变的基因导致神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动。研究发现，利用诱导多能干细胞(iPS细胞)制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列有关叙述错误的是(　　)
A．诱导iPS细胞分化成的多种细胞中核酸相同，蛋白质却不完全相同
B．诱导iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞的形态功能发生变化
C．将控制合成破坏运动神经元的毒蛋白基因替换，可能会起到一定的治疗作用
D．植入神经干细胞，使受损的运动功能得到恢复，可以一定程度改善渐冻症
10．(2022·江苏选择性考试改编)航天员在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下列相关叙述正确的是(　　)
A．培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌
B．培养心肌细胞的时候既需要O2也需要CO2
C．心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖
D．心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动
11．(2023·辽宁选择性考试)大量悬浮培养产流感病毒的单克隆细胞，可用于流感疫苗的生产。下列叙述错误的是(　　)
A．悬浮培养单克隆细胞可有效避免接触抑制
B．用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清
C．当病毒达到一定数量时会影响细胞的增殖
D．培养基pH不会影响单克隆细胞的病毒产量
12．某兴趣小组开展小鼠原代神经元培养的研究，结果发现其培养的原代神经元生长缓慢，其原因不可能是(　　)
A．实验材料取自小鼠胚胎的脑组织
B．为了防止污染将培养瓶瓶口密封
C．血清经过高温处理后加入培养基
D．所使用的培养基呈弱酸性
13．为了初步检测药物X和Y的抗癌活性，在细胞培养板的每个孔中加入相同数量的肝癌细胞，使其贴壁生长，实验组加入等体积相同浓度的溶于二甲基亚砜(溶剂)的药物X或Y，对照组中也加入了一定的溶液，培养过程及结果如图所示。下列有关叙述错误的是(　　)
实验结果
组别 细胞个数(个/孔)
对照 7.8×106
药物X 6.7×104
药物Y 5.3×105
A．对照组和实验组均设置了三个孔，可以减小实验误差
B．可用胰蛋白酶处理使肝癌细胞脱落下来并进行计数
C．对照组中加入的溶液是和实验组等体积的无菌蒸馏水
D．根据实验结果，可以初步判断药物X的抗癌效果较好
14．甲、乙两种化学物质可能有一定致畸、致癌作用，利用动物细胞培养的方法鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱。请依据实验结果完成下列实验报告。
(1)实验步骤：
①制备细胞悬液：用________处理小白鼠胚胎组织使其分散成单个细胞，制成细胞悬液。
②进行细胞培养：
a．取A、B、C三个洁净的锥形瓶，分别加入________________。
b．向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，并将其摇匀；C瓶加入等量的生理盐水，作为对照。
c．把3个培养瓶放在37 ℃的CO2培养箱中培养。
③制作临时装片。
④镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于有丝分裂中期的细胞，与小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片进行对比，以确认发生变异的细胞。统计_________________________________________________________________
__________________________________________________________________。
(2)实验结果：
培养瓶 A B C
变异细胞数占细胞总数的百分比 1.3% 12.5% 0.1%
(3)请写出实验结论：___________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________。
课时分层作业(7)
1 2 3 4 5 6 8 9 10 11 12 13
C B A B C A B A B D A C
7．(1)分裂能力强　胰蛋白酶会分解细胞的其他蛋白质　(2)原代培养　维持培养液的pH　(3)①正常　②人们对细胞所需营养物质尚未全部研究清楚，培养正常细胞的合成培养基通常都需要加入血清等一些天然成分
14．(1)①胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)　②等量的细胞悬液　④该时期变异的细胞数占细胞总数的百分比　(3)甲、乙两种化学物质均具有一定的毒性，且乙的毒性比甲的毒性强
1．C　[动物细胞培养过程中要保证无菌、无毒，需要对培养液和培养用具进行无菌处理，A正确；培养液中营养成分应齐全、充足，以满足细胞增殖的需要，B正确；动物细胞培养过程需要的气体环境应为95%的空气和5%的CO2的混合气体，空气中的O2保证细胞代谢，CO2的主要作用为维持培养液的pH，C错误；细胞体外培养需要适宜的温度和pH，其中温度一般与动物体温接近，D正确。]
2．B　[动物细胞培养需要的气体环境是95%的空气和5%的CO2，其中5%的CO2能调节培养液的pH，⑤错误。]
3．A　[为保证培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，培养液和培养用具等需要进行灭菌处理，A错误。]
4．B　[原代培养是指从动物机体组织取得细胞后立即培养，直到细胞出现接触抑制为止。因为细胞之间存在接触抑制现象，所以细胞最终会停止分裂增殖，并逐渐走向衰亡。要想继续培养，必须将细胞取下分瓶后才能进行，而分瓶后的细胞培养是传代培养。]
5．C　[胰蛋白酶可使蛋白质分解，胰蛋白酶可破坏动物细胞之间的联系，可推测动物细胞之间可能依靠蛋白质相互联系，A正确；细胞膜中含有蛋白质成分，所以一定要注意处理的时间和酶的用量，以防止对动物细胞造成损伤，B正确，C错误；酶促反应需要适宜的pH，所以培养液的pH应与胰蛋白酶作用的适宜pH基本一致，D正确。]
6．A　[接触抑制是体外细胞培养时贴附型细胞生长的特性，悬浮型细胞不会出现接触抑制现象，A错误。]
7．(1)动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。由于健康幼龄动物的器官或组织的细胞分裂能力强、易于培养，所以容器A中放入的一般是健康幼龄动物的器官或组织。胰蛋白酶能催化蛋白质水解，培养时若用胰蛋白酶分散细胞的处理时间过长，则胰蛋白酶会分解细胞的其他蛋白质，因此胰蛋白酶的处理时间不能过长。(2)将B瓶中的细胞悬液转入C瓶进行的初次培养称为原代培养。适宜的气体环境是动物细胞培养的条件之一，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH。(3)①分析曲线图可知，随着培养时间的延长，相同培养时间内，有血清组的癌细胞数目略高于无血清组，但有血清组的正常细胞数目却明显高于无血清组，说明有无添加血清对培养正常细胞的影响较大。②在探究物质X对正常细胞增殖的影响时，需采用动物细胞培养技术来培养正常细胞。曲线图显示，添加血清更有利于正常细胞的增殖，而对癌细胞增殖的影响不大。由于人们对细胞所需营养物质尚未全部研究清楚，所以培养正常细胞的合成培养基通常都需要加入血清等一些天然成分。
8．B　[干细胞具有分裂和分化的能力，A正确；造血干细胞可分化成血细胞，胚胎干细胞在一定条件下可定向诱导分化成机体所有类型的细胞，B错误；胚胎干细胞在滋养层细胞上或在添加抑制因子的培养液中培养，能够维持不分化的状态，C正确；当身体某一类细胞功能退化时，可以通过诱导胚胎干细胞定向分化来及时修补，并恢复正常功能，D正确。]
9．A　[诱导iPS细胞分化成多种细胞是基因选择性表达的结果，细胞核中遗传物质DNA不变，但mRNA有所差异，使翻译形成的蛋白质也不完全相同，A错误；诱导iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞的形态功能发生变化，B正确；将控制合成破坏运动神经元的毒蛋白基因替换，细胞内表达的毒蛋白减少，对渐冻症可能会起到一定的治疗作用，C正确；由题干信息“研究发现，利用诱导多能干细胞(iPS细胞)制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命”可知，植入神经干细胞，能使受损的运动功能得到恢复，可以一定程度改善渐冻症，D正确。]
10．B　[培养心肌细胞的器具要先进行高压蒸汽灭菌，但是试剂并不都需要灭菌，如动物血清不能进行高压蒸汽灭菌，否则会使其中的成分失活，A错误；培养心肌细胞的时候既需要O2(有助于进行有氧呼吸)也需要CO2(有助于维持培养液的pH)，B正确；心肌细胞高度分化，不能进行有丝分裂，C错误；心肌细胞节律性收缩，受自主神经的支配，在神经细胞释放的神经递质的支配下跳动，D错误。]
11．D　[悬浮培养单克隆细胞，可以保证足够的气体交换，通过振荡或转动装置使细胞始终分散悬浮于培养液内，可有效避免接触抑制，A正确；由于细胞的生长是比较复杂的过程，血清中含有一些必需的因子，用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清，B正确；病毒借助于细胞进行繁殖，利用了活细胞的物质、能量和酶等，当病毒达到一定数量时细胞的生命活动受到影响，会影响细胞的增殖，C正确；细胞的正常生命活动需要适宜的pH，培养基pH会影响细胞代谢，进而影响单克隆细胞的病毒产量，D错误。]
12．A　[小鼠胚胎脑组织中含有丰富的神经元，且细胞增殖能力强，不会造成生长缓慢，A符合题意；将培养瓶瓶口密封会使培养液中缺氧，影响细胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使细胞生长缓慢，B不符合题意；血清经过高温处理后，其中活性成分变性，失去原有的功能，无法满足细胞生长所需，可能使细胞生长缓慢，C不符合题意；小鼠细胞生活的内环境为弱碱性，所使用的培养基呈弱酸性，不利于细胞生存，可能造成细胞生长缓慢，D不符合题意。]
13．C　[对照组和实验组均设置了三个孔，符合平行重复原则，最终求每个组的平均值，可以减小实验误差，降低偶然因素对实验结果的影响，A正确；用胰蛋白酶处理可以使肝癌细胞间的蛋白质被分解，破坏细胞间的连接，可以获得游离的肝癌细胞并进行计数，B正确；根据单一变量原则可知，对照组中加入的溶液是和实验组等体积、相同浓度的无菌二甲基亚砜，以排除溶剂对实验结果的干扰，C错误；根据实验结果可知，最终细胞的数量：对照组>药物Y实验组>药物X实验组，说明加入药物X的实验组存活的癌细胞数量是最少的，即可以初步判断药物X的抗癌效果较好，D正确。]
14．(1)①离散组织细胞常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。②根据b的实验步骤可以得出：a中A、B、C三个洁净的锥形瓶，分别加入等量的细胞悬液。④根据实验目的可知，应统计该时期变异细胞数占细胞总数的百分比。(3)C组为对照组，A组与B组变异细胞数占细胞总数的百分比均比C组的高，说明甲、乙两种化学物质均具有一定的毒性，B组数据比A组数据大，说明乙的毒性比甲的毒性强。
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