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第1课时 微生物的基本培养技术
任务一 培养基的配制
任务二 无菌技术
任务三 探究·实践——酵母菌的纯培养
一、微生物及培养条件
1.微生物的概念:微生物是__________________________的统称，包
括细菌、真菌和病毒等。本章中提及的微生物主要指_____________
_________。
难以用肉眼观察的微小生物
用于发酵的细菌和真菌
2.在实验室培养微生物:一方面要为人们需要的微生物提供合适的
________________；另一方面要确保___________________________
____________________。
营养和环境条件
其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来
二、培养基的配制
1.培养基的概念:人们按照微生物对__________的不同需求，配制出
的供其生长繁殖的__________。
2.培养基的功能:用以培养、______、鉴定、保存微生物或_________
______。
营养物质
营养基质
分离
积累其代谢物
液体培养基
↓(加入______等凝固剂)
固体培养基：微生物在其表面或内部可形成______
琼脂
菌落
3.培养基的种类
4.培养基的营养要素
(1)各种培养基的配方不同，但一般都含有____、______、______、
________等营养物质。
(2)需要满足微生物生长对____、特殊营养物质以及____的需求。部
分实例见下表。
水
碳源
氮源
无机盐
细菌类型 对培养基的需求
乳酸杆菌 添加________
霉菌 一般将培养基调至____性
细菌 一般将培养基调至____________性
厌氧微生物 提供______的条件
维生素
酸
中性或弱碱
无氧
三、无菌技术
1.获得纯净的微生物培养物的关键：防止__________。
杂菌污染
2.具体操作
(1)对操作的______、操作者的衣着和手，进行清洁和______。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行______。
(3)做好消毒和灭菌工作后应避免已经灭菌处理的材料用具与_______
______接触。
(4)为避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作应在_______
______上并在____________附近进行。
空间
消毒
灭菌
周围的物品
超净工作台
酒精灯火焰
3.消毒和灭菌
方法 结果
消毒 较为______的物理、 化学或生物等方法 仅杀死物体表面或内部的________
_______
灭菌 ______的理化方法 杀死物体内外______________
(包括芽孢和孢子)
温和
一部分微生物
强烈
所有的微生物
四、微生物的纯培养
1.相关概念
(1)培养物:在微生物学中,将接种于培养基内,在合适条件下形成的含
特定种类微生物的群体称为培养物。
(2)纯培养物:由__________繁殖所获得的微生物群体。
(3)纯培养:获得__________的过程。
(4)菌落：分散的微生物在适宜的______培养基表面或内部可以繁殖
形成____________、有一定形态结构的____________。
单一个体
纯培养物
固体
肉眼可见的
子细胞群体
2.步骤：微生物的纯培养包括____________、_____、______、______
和______等步骤。
配制培养基
灭菌
接种
分离
培养
3.常用接种方法：____________和________________。
平板划线法
稀释涂布平板法
任务一 培养基的配制
【情境】 下表为培养细菌常用的培养基配方。
牛肉膏 蛋白胨 琼脂 蒸馏水
(1)该培养基是______(填“固体”或“液体”)培养基。
(2)利用该培养基的细菌的同化作用类型是________(填“自养型”或
“异养型”)。
固体
异养型
(3)配方中的牛肉膏主要为细菌的生长提供_______________________
______等营养，蛋白胨主要为细菌的生长提供___________________
等营养。
碳源、氮源、磷酸盐和维生素
碳源、氮源和维生素
1.培养基的成分
营养物 质 来源 功能
碳源 无机 碳源 ①提供碳元素，构成细胞物质和一
些代谢产物;
②有机碳既是碳源又是能源
有机 碳源 糖类、脂质、蛋白质、 有机酸、石油等 氮源 无机 氮源 主要是提供氮元素，用于蛋白质、
核酸等的合成
营养物 质 来源 功能
氮源 有机 氮源 牛肉膏、蛋白胨、尿 素、氨基酸等 主要是提供氮元素，用于蛋白质、
核酸等的合成
特殊营 养物质 维生素、氨基酸、碱基 ①酶或核酸的组成成分；
②参与代谢过程中的酶促反应
水 — ①良好的溶剂；
②维持生物大分子结构的稳定
续表
营养物 质 来源 功能
无机盐 无机化合物 ①细胞组成成分、生理调节物质、
某些化能自养菌的能源；
②酶的激活剂、抑制剂
续表
［注意］
①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源
是铵盐、硝酸盐。
②对异养微生物来说，含C、、、 的有机化合物既是碳源和能源，
又是氮源。
③并非所有培养基都含有碳源、氮源。若培养自养型微生物，如硝
化细菌，培养基可不含碳源，其可利用空气中的 合成有机物；若
培养固氮微生物，培养基可不含氮源。
④琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
⑤病毒为非细胞结构生物，不能利用人工培养基来培养。
2.两种培养基的比较
培养基种类 特点 用途
液体培养基 不加凝固剂 一般用于工业生产
固体培养基 加凝固剂，如琼 脂 微生物分离、鉴定、活菌计
数、保藏菌种
例1 下列关于微生物营养物质的描述正确的是( )
A.同一物质不可能既作碳源又作氮源
B.除水以外的无机物仅提供无机盐
C.凡是碳源都能提供能量
D.无机氮源也能提供能量
√
[解析] 对异养微生物来说，含C、、、 的化合物既是碳源，又
是氮源，如牛肉膏，A错误；和 是无机物，也是某些微生物的
碳源和氮源，B错误；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量，
C错误；硝化细菌所利用的氮源是无机氮源——氨，同时氨也为硝化
细菌提供用于化能合成作用的能源，D正确。
任务二 无菌技术
【资料】阅读教材第11页“资料卡——常用的消毒和灭菌方法”，完
善下表。
无菌 技术 常用方法 应用范围 操作方法
消毒 ________ __法 日常用品
煮沸消毒
无菌 技术 常用方法 应用范围 操作方法
消毒 ________ __法 不耐高温的液体，如 牛奶
化学药物 消毒法 手、水源等 用______擦拭双手，用______
消毒水源
巴氏消毒
酒精
氯气
续表
无菌 技术 常用方法 应用范围 操作方法
消毒 ________ ____法 接种室、接种箱或超 净工作台等
紫外线消毒
续表
无菌 技术 常用方法 应用范围 操作方法
灭菌 ________ __法 涂布器、接种环、接 种针或其他金属用 具、试管口、瓶口等 将需灭菌的器具在酒精灯火焰
的充分燃烧层灼烧
干热灭菌 法 玻璃器皿(如吸管、培 养皿等)、金属用具等 耐高温的和需要保持 干燥的物品
续表
灼烧灭菌
无菌 技术 常用方法 应用范围 操作方法
灭菌 ________ ______法 (属于湿 热灭菌 法) 培养基及容器
高压蒸汽灭菌
续表
［注意］
用紫外线消毒前，适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强
消毒效果。
例2 [2024·江苏南通一中月考] 微生物培养时常利用无菌技术避免杂
菌的污染，下列相关叙述错误的是( )
A.配制好的培养基应放入干热灭菌箱中进行干热灭菌
B.实验中避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触
C.接种环要进行灼烧灭菌
D.实验结束后对实验室喷洒苯酚同时配合紫外线照射
√
[解析] 对培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法，A错误；为避免杂菌
污染，实验中应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触，B正确；
接种环、接种针需要进行灼烧灭菌处理，C正确；紫外线能破坏
结构，密闭空间内的空气常采用紫外线照射消毒，喷洒苯酚同时配
合紫外线照射可加强对密闭空间的消毒效果，D正确。
任务三 探究·实践——酵母菌的纯培养
1.原理
采用____________和稀释涂布平板法能将______微生物分散在固体
培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由______微生物繁殖形
成的纯培养物。
平板划线法
单个
单个
2.方法步骤
纱布
琼脂
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌
酒精灯火焰
平板划线
未接种的平板
恒温培养箱
［分析］ (1)倒平板时______(填“能”或“不能”)将培养皿完全打开，
原因是______________________。
(2)培养基冷却凝固后，将培养皿______(填“正置”或“倒置”)，原因是
__________________________________________________。
不能
防止空气中杂菌的污染
倒置
防止蒸发的水分落入培养基；防止培养基水分过快挥发
(3)进行平板划线时，接种环首先要进行______灭菌，待其冷却后再
进行接种，原因是__________________。第二次划线时应从第一次
划线的______开始，其原因是划线后，线条末端细菌的数目比线条
起始处要____。
灼烧
防止高温杀死菌种
末端
少
(4)将______________与接种的平板同时倒置培养，其目的是_______
________________________。
未接种的平板
检验配制的培养基灭菌是否彻底
1.平板划线的注意事项
(1)接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。
(2)每次划线前对接种环进行灼烧灭菌，灼烧接种环之后，要冷却后
才能进行划线，以免温度太高杀死菌种。
(3)最后一次划线与第一次划线不能相接。
(4)划线用力要适当，防止用力过大将培养基划破。
2.平板划线法中几次“灼烧”的分析
平板划线法中的无菌操作主要是通过“灼烧”实现的，在平板划线过
程中要进行多次灼烧，这几次灼烧的目的见表。
操作 第一次灼烧 从第二次划线开始,每次划线 之前灼烧 划线结束后灼烧
目的 避免接种环上 可能存在微生 物污染培养物 杀死上次划线结束后接种环 上残留的菌种,使下一次划线 时接种环上的菌种直接来源 于上次划线的末端 杀死接种环上残留
的菌种,避免微生
物污染环境和感染
操作者
例3 下列关于酵母菌的纯培养实验的叙述中，正确的是( )
A.最后将平板倒置，放在培养箱中培养
B.使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过程中不再灭菌
C.将蘸有菌种的接种环通过酒精灯火焰后迅速伸入平板内划线即可
D.打开含菌种的试管，试管口需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马
上塞上棉塞
√
[解析] 为防止培养皿皿盖上的水珠滴入培养基，以及避免培养基的
水分过快地挥发，划线操作结束后，将平板倒置，放入恒温培养箱
中培养，A正确；平板划线过程中，接种环在每次划线之前和划线结
束后均需要灼烧灭菌，B错误；蘸有菌种的接种环不能通过酒精灯火
焰，否则菌种会死亡，将蘸有菌种的接种环伸入平板，在培养基表
面迅速划三至五条平行线，然后盖上培养皿皿盖，注意不要划破培
养基，C错误；打开含菌种的试管，试管口需通过火焰灭菌，取出菌
种后，试管口还需通过火焰灭菌，再塞上棉塞，D错误。
例4 平板划线法是微生物接种的常用方法。下图是平板划线示意图，
①②③④代表依次划线的区域。下列叙述错误的是( )
A.划线前操作者应对其衣着和手进行清洁和
消毒
B.划线时蘸有菌种的接种环不能插入培养基中
C.区域④的划线与区域①的划线不得相连
D.在图示操作过程中共需灼烧接种环4次
√
[解析] 为了防止杂菌污染，划线前操作者应
对其衣着和手进行清洁和消毒，A正确；划
线时蘸有菌种的接种环在培养基表面进行划
线，不能插入培养基中，B正确；区域④的
划线与区域①的划线不得相连，否则可能不
能得到单菌落，C正确；平板划线过程中，
接种环在每次划线之前和划线完成后均需要灼烧灭菌，故在图示操作过
程中共需灼烧接种环5次，D错误。
1.正误辨析
(1)在固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基。( )
×
[解析] 固体培养基中添加了凝固剂，加少量水不能使其成为液体培
养基。
(2)实验室培养硝化细菌时，培养基中无须加入有机碳源。 ( )
√
[解析] 硝化细菌为自养型生物，可以二氧化碳为碳源合成有机物。
(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的
伤害。( )
√
(4)为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应立即挑取菌落。( )
×
[解析] 接种环经灼烧灭菌后应冷却后再挑取菌落，防止高温杀死菌种。
(5)倒平板时，培养皿皿盖不能完全打开。( )
√
(6)进行平板划线操作时，第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可
能存在的微生物污染培养物。 ( )
√
(7)只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压
蒸汽灭菌法进行灭菌。( )
×
[解析] 在培养基中含有高温条件下会被破坏或分解的物质时或物品
需要保持干燥时，不能用高压蒸汽灭菌法灭菌。
(8)所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源。( )
×
[解析] 不是所有培养基都需要添加氮源，例如培养固氮菌的培养基
不需要添加氮源，因为固氮菌可以直接利用空气中的氮气。
(9)与紫外线照射相比，高压蒸汽灭菌防止杂菌污染的效果更好。
( )
√
(10)若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用。( )
√
2.[2024·河北保定期末]在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒
和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是( )
A.玻璃器皿和金属用具可利用干热灭菌箱进行干热灭菌
B.巴氏消毒法处理牛奶，能减少牛奶中营养物质的损失
C.无水酒精能加速蛋白质脱水，常用无水酒精对皮肤进行消毒
D.由于紫外线能破坏 结构，病房中常采用紫外线进行消毒
√
[解析] 玻璃器皿和金属用具常用干热灭菌法灭菌，A正确；巴氏消
毒法既能杀死牛奶中绝大多数的微生物，又不破坏牛奶中的营养物
质，B正确；通常使用 的酒精对皮肤进行消毒，C错误；紫外线
通过破坏蛋白质和 结构来杀死微生物，常用于一定空间内空气
的消毒，D正确。
3.人们在研究、利用微生物时，用无菌技术培养获取纯种微生物，并
对其进行计数或保存。下列有关叙述错误的是( )
A.微生物接种技术的方法各不相同，但核心都是要防止杂菌污染，
保证培养物的纯度
B.微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤
C.为得到纯培养物，需要为微生物提供合适的营养物质和培养条件
D.平板划线法分离菌种，划线五个区域，接种环需要灼烧灭菌5次
√
[解析] 微生物接种技术的方法各不相同，但核心都是要防止杂菌污
染，保证培养物的纯度，A正确；微生物的纯培养包括配制培养基、
灭菌、接种、分离和培养等步骤，B正确；为得到纯培养物，需要为
微生物提供合适的营养物质和培养条件，C正确；用平板划线法分离
菌种，划线五个区域，每次接种之前需要灼烧接种环灭菌，最后划
线完成也需要灼烧灭菌，共6次，D错误。
4.[2024·山东郓城一中月考]下表所示为某微生物培养基的配方，有
关叙述错误的是( )
成分 含量 成分 含量
葡萄糖
琼脂
青霉素 0.1万单位
A.依物理性质划分，该培养基属于固体培养基
B.由培养基的原料可知，所培养微生物的同化作用类型是异养型，
培养的微生物可以是酵母菌或毛霉
C.本培养基培养霉菌时，应将 调至中性或弱碱性
D.配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例
√
[解析] 从培养基成分看，配方中含有凝固剂琼脂，属于固体培养基，
A正确；葡萄糖属于有机碳源，因此所培养微生物的同化作用类型是
异养型，同时培养基中含有青霉素，所以培养的微生物可以是酵母
菌或毛霉等真菌，B正确；培养霉菌时一般需将培养基的 调至酸
性，C错误;配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例，从
而能为微生物的生长提供合适的营养，同时也可保证培养基的渗透
压，D正确。
5.硝化细菌是化能自养菌，通过 的氧化过程获取
菌体生长繁殖所需的能量，在水产养殖中具有重要作用。如表是分
离硝化细菌的培养基配方，下列说法错误的是( )
成分 含量 成分 含量
琼脂
蒸馏水
A. 可作为硝化细菌的氮源和能源
B.培养基中的 是硝化细菌的主要碳源
C.和能维持培养基的
D.硝化细菌能清除水体中的及
√
[解析] 据题分析，硝化细菌通过 的氧化过程获取
能量，故通过分析培养基成分可知 可作为硝化细菌的氮源
和能源，A正确；硝化细菌为自养型生物，能利用二氧化碳合成糖类，
故硝化细菌的主要碳源是二氧化碳，B错误；分析培养基成分，其中
和属于无机盐，可维持培养基的 ，C正确；据题
分析，硝化细菌能将氧化成，进而将氧化成 ，故可
用硝化细菌清除水体中的及 ，D正确。
1.菌落特征常作为鉴定微生物种类的依据。下列关于菌落的叙述，正
确的是( )
A.一个菌落就是单个微生物在液体培养基上迅速生长、繁殖，并以此
母细胞为中心形成的子细胞团
B.不同种类的微生物的菌落特征完全不一样
C.同一种类的微生物的菌落特征完全一样
D.不同种类的微生物所表现出来的菌落差异是个体细胞形态差异的反映
√
[解析] 菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形
成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，A错误；不同种
类微生物的菌落特征各有特点，但彼此之间存在一定的相似性，B
错误；同种微生物的菌落特征受培养时间、营养物质的含量与种类
等影响也会有所差异，C错误；不同种类的微生物所表现出来的菌
落差异是个体细胞形态差异的反映，D正确。
2.下列有关培养基的成分及功能的叙述中正确的是( )
A.牛肉膏蛋白胨培养基可用来直接培养细菌、病毒等微生物
B.从微生物中分离出硝化细菌时，培养基中可以不加氮源
C.培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素
D.培养基的无机成分中，只能为微生物提供水和无机盐
√
[解析] 病毒没有细胞结构，只有寄生在宿主活细胞中才能进行繁殖，
不能利用牛肉膏蛋白胨培养基进行培养，A错误；硝化细菌属于自养
型微生物，能够以CO2为碳源，故培养硝化细菌时可以不加有机碳源，
B错误；在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素，C正确；
CO2和N2也是无机物，但是它们能作为某些微生物的碳源和氮源，D
错误。
3.某同学在实验室进行了酵母菌的纯培养实验，酵母菌培养基的配方
如下表所示。下列有关该实验的叙述正确的是( )
A.牛肉膏蛋白胨培养基可用来直接培养细菌、病毒等微生物
B.从微生物中分离出硝化细菌时，培养基中可以不加氮源
C.培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素
D.培养基的无机成分中，只能为微生物提供水和无机盐
√
组分 马铃薯滤液 葡萄糖 琼脂 加水定容至
含量 200g 20g 15g 1000mL
[解析] 该培养基含琼脂，是固体培养基，葡萄糖不是酵母菌生长繁殖
的唯一碳源，马铃薯滤液也能为酵母菌提供碳源，A错误；含培养基
的锥形瓶用牛皮纸包扎后不能采用干热灭菌法灭菌，而要采用高压蒸
汽灭菌法灭菌，B错误；若以平板划线法纯化酵母菌菌种，每次划线
前后均要对接种环进行灼烧灭菌，因此接种环的灼烧次数比划线次数
多一次，C错误；倒平板冷却后的培养皿和接种酵母菌的平板都要倒
置在恒温培养箱中，既能防止培养皿盖上的水珠落在培养基表面造成
污染，又能防止培养基中的水分过快蒸发，D正确。
4.肺炎支原体是支原体肺炎的主要致病菌，在患者体内采集样本并制
成菌液后，进行分离培养是诊断支原体肺炎的主要方法。下列有关叙
述错误的是( )
A.肺炎支原体是一种无细胞壁的原核生物
B.培养肺炎支原体的培养基中，一般都含有水、碳源、氮源和无机
盐等营养物质
C.在对肺炎支原体进行纯培养的过程中需要对接种环、培养皿和培
养基等进行灭菌
D.微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
√
[解析] 支原体是原核生物，且没有细胞壁，A正确；肺炎支原体代谢
方式是异养，培养基一般都含水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，
B正确；在微生物培养前需要对相关的器皿、接种用具和培养基等进
行灭菌，C正确；由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，
D错误。
练习册
知识点一 培养基的配制
1.培养微生物需要提供适宜的培养基。下列关于培养微生物的培养基
的叙述，错误的是( )
A.培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
B.培养基的成分需根据目标微生物的代谢特点而定
C.培养基需满足各种微生物生长繁殖的需求
D.在液体培养基中，添加适量琼脂等凝固剂可制成固体培养基
√
[解析] 培养基中含有目标微生物生长所需要的营养物质，还能满足
目标微生物生长对环境的要求，A正确；配制培养基时，需要满足目
标微生物生长对 、特殊营养物质等的需要，B正确；培养基是根
据所培养微生物的生长繁殖需求进行配制的，而不是满足各种微生
物生长繁殖的需求，C错误；在液体培养基中，添加适量琼脂等凝固
剂可制成固体培养基，D正确。
2.下列关于四种微生物的叙述，错误的是( )
A.和 分别是硝化细菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自
的氧化
B. 和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源，该生物所需的能源来自太
阳能
C.糖类和 是乳酸菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自乳酸的
氧化分解
D.葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源，但 一定不是酵母菌的碳源
√
[解析] 硝化细菌是化能自养需氧型微生物，和 分别是硝化细
菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自 的氧化，A正确；褐藻
是自养生物，能进行光合作用， 和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮
源，该生物所需的能源来自太阳能，B正确；乳酸菌是异养厌氧型微
生物，糖类和蛋白质类有机物是乳酸菌的碳源和氮源，该生物所需
的能源来自糖类的氧化分解，C错误；酵母菌是异养生物，葡萄糖既
是酵母菌的碳源也是其能源，酵母菌不能直接利用二氧化碳，D正确。
3.[2024·山西定襄中学月考]培养基是指供微生物、植物组织和动物
组织生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。下列
有关培养基的叙述，错误的是( )
A.如果培养基中不含氮源，则该培养基上不会有微生物生长
B.配制培养细菌的培养基时要将 调至中性或弱碱性
C.根据微生物对碳源需求的差别，使用含不同碳源的培养基
D.微生物在固体培养基上生长时，可形成肉眼可见的菌落
√
[解析] 自生固氮菌可利用空气中的氮气作为氮源，所以若培养基中
不含氮源，则该培养基上也可能会有微生物生长，A错误;培养不同
的微生物需要的是不同的，如培养细菌时需将培养基的 调至中
性或弱碱性，B正确;不同微生物对碳源需求有差别，要使用含不同
碳源的培养基，也可据此对微生物进行筛选，C正确;微生物在琼脂
固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落，D正确。
4.[2024·福建连城一中月考]下表为某培养基的配方，有关叙述正确
的是( )
成分 牛肉膏 葡萄糖 琼脂 蒸馏水
含量 适量
A.能在此培养基上生长的只有大肠杆菌
B.该培养基调节至合适的 后可以直接接种使用
C.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是牛
肉膏
D.从物理性质看该培养基属于液体培养基
√
[解析] 很多微生物都能利用葡萄糖，此培养基中能生长多种微生物，
并不是只有大肠杆菌，A错误；该培养基调节至合适的 后还要进
行高压蒸汽灭菌操作才可以接种使用，B错误；该培养基中属于碳源
的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是牛肉膏，C正确；该培养基
含有琼脂，从物理性质看属于固体培养基，D错误。
5.[2024·江苏连云港期中]下列关于微生物培养的叙述，正确的是
( )
A.配制培养基时，一般先调 再灭菌
B.培养微生物用到的接种环、培养皿、培养基等都用干热灭菌法灭菌
C.培养乳酸菌时，除了基本的碳源、氮源、水和无机盐，还需要添
加抗生素
D.琼脂中含有糖类，既可以为微生物提供碳源也是凝固剂
√
[解析] 配制培养基时，一般先调再灭菌，这样可以避免在调 时
有杂菌污染培养基，A正确；培养微生物用到的接种环、培养皿可以
用干热灭菌法灭菌，培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，B错误；培养乳
酸菌时，需添加维生素，不能添加抗生素，因为抗生素会杀死乳酸
菌，C错误；琼脂中虽然含有糖类，但只作为凝固剂，因为绝大多数
微生物无法产生分解琼脂的酶，D错误。
6.化合物 被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产化
合物， 的产量与培养菌株C所利用的碳源关系密切。为此，某科学
家通过实验比较不同碳源对菌体生长和 产量的影响，结果见表。下
列说法错误的是( )
碳源
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖废液 2.30 0.18
A.通常在实验室培养微生物时，对玻璃器皿采用干热灭菌法
B.由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是制糖废液
C.由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因可能是菌
株C不能合成淀粉酶
D.利用制糖废液生产 可以实现废物利用，其意义是减少污染、节省
原料、降低生产成本
√
[解析] 防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键，对玻璃器
皿通常采用干热灭菌法，A正确；由表格中的结果分析可知，以葡萄
糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C生长的最适碳源是葡萄糖，B
错误；由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，原因可能是
其不能合成分解淀粉的淀粉酶，导致其不能利用淀粉，C正确；利用
制糖废液生产 可以实现废物的再利用，该过程能减少污染、节省原
料、降低生产成本，有利于可持续发展，D正确。
知识点二 无菌技术
7.[2024·广西梧州期末]在生产、生活和科研实践中，经常通过无菌
操作技术避免杂菌的污染。下列有关无菌技术的叙述,正确的是
( )
A.无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物
B.煮沸消毒法中在煮沸 分钟可以杀死微生物细胞和所有
芽孢、孢子
C.配制好的培养基需要先倒平板以后再进行灭菌
D.紫外线照射前，适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强
消毒效果
√
[解析] 无菌技术的关键是防止杂菌的污染，A错误;煮沸消毒法中在
煮沸 分钟可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢，B错
误;配制好的培养基先灭菌后再进行倒平板操作，这样做可以最大程
度上避免杂菌对培养基和实验造成污染，C错误;用紫外线照射
,可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒
苯酚或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果，D正确。
8.[2024·福建德化一中月考]微生物在实验室培养时，获得纯净培养
物的关键是防止外来杂菌入侵。下列无菌操作中，错误的是( )
A.对试管口、锥形瓶口等部位，通过火焰灼烧进行灭菌
B.倒平板的操作过程在酒精灯火焰附近进行
C.对锥形瓶、试管、吸管等，都可用干热灭菌箱进行灭菌
D.对操作者的双手、衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒
√
[解析] 对试管口、锥形瓶口等部位，可以通过火焰灼烧进行灭菌，
A正确；由于要防止空气及周围环境中微生物的污染，所以倒平板过
程需要在酒精灯火焰旁进行，B正确；玻璃器皿和金属用具等可以使
用干热灭菌法灭菌，所以对锥形瓶、试管、吸管等，都可用干热灭
菌箱进行灭菌，C正确；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤 的结
构，因此对操作者的双手不能采用紫外线进行消毒，应该用酒精进
行消毒，D错误。
9.[2024·河南焦作月考]在器械灭菌时，通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物
指示剂来检验灭菌效果，自含式生物指示剂如图所示。为检验生物指示剂是
否出现阳性变化，需用工具(在塑料瓶外)刺破安瓿瓶，使菌片浸没在培养液
内。最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况，判断器械灭菌效
果。下列叙述错误的是( )
A.安瓿瓶中培养液的作用是使芽孢复苏
B.菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌
C.挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出现阳性变化
D.若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好
√
[解析] 安瓿瓶中的培养液可使芽孢复苏，
从而观察生物指示剂是否出现阳性变化，
A正确；芽孢是细菌的休眠体，可以帮助
细菌度过不良环境，因此菌片中芽孢的耐
热性大于器械上的可能污染菌，B正确；
芽孢复苏需要时间，所以扎破安瓿瓶后，
需培养一段时间再观察是否出现阳性变化，
C正确；若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌
前无有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。
知识点三 微生物的纯培养
10.下列关于菌落的叙述，错误的是( )
A.一个菌落往往是一个细胞在固体培养基上繁殖的结果
B.一个菌落属于一个种群
C.用平板划线法分离菌种时可在培养基上获得单菌落
D.用固体培养基培养微生物时，微生物只会在固体培养基表面生长
繁殖
[解析] 微生物可在固体培养基表面或内部生长繁殖，D错误。
√
11.下列与微生物培养有关的说法，不正确的是( )
A.高压蒸汽灭菌的原理是高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响
其生命活动
B.培养基在 时倒平板不需要无菌操作
C.在微生物培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、温度和
渗透压等条件
D.每个菌落都由大量微生物组成，菌落的特征可以作为菌种鉴定的
重要依据
√
[解析] 蛋白质是生命活动的主要承担者，核酸是细胞的遗传物质，
高压蒸汽灭菌破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动，A正
确；培养基在 时倒平板需要无菌操作，否则会导致杂菌污染，
影响实验结果，B错误；在微生物培养过程中，除考虑营养条件外，
还需要满足微生物生长对 、氧气、温度和渗透压等条件的要求，
C正确；菌落是一个肉眼可见的子细胞群体，由大量微生物组成，菌
落的特征可以作为菌种鉴定的重要依据，D正确。
12.[2024·四川成都月考]在微生物学中，通过纯培养能够获得由单一
个体繁殖所获得的微生物群体。小明做“微生物的分离与培养”实验
时得出如下结论，相关叙述正确的是( )
A.高压蒸汽灭菌锅加热结束时,立即开启锅盖，拿出培养基和工具待用
B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C.为了防止污染,接种环经酒精灯火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上
√
[解析] 灭菌结束后,让高压蒸汽灭菌锅内温度自然下降，当压力表的
指针降到零后才能开启盖子，拿出培养基和工具待用，A错误;倒平
板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶
中的培养基(约 )倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，
B错误;接种环经酒精灯火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后再挑取菌
落，C错误;培养基是倒置培养，标记菌落时应用记号笔标记在皿底
上，D正确。
13.[2024·广东深圳统考]在“酵母菌纯培养”的实验课中，某同学进行
平板划线的实践操作。下列叙述错误的是( )
A.开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧
B.棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰
C.在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液
D.将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面划线
√
[解析] 接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，避免接种环上
存在的微生物污染培养物，划线完毕后要将接种环进行灼烧，以防
止细菌污染环境和感染操作者，A正确；棉塞拔出后和塞上前装有培
养液的试管口都要通过火焰，防止杂菌污染，B正确；酒精灯火焰旁
存在无菌区域，故在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液，C正确；
划线操作时，为了防止杂菌污染，培养皿的皿盖不能完全打开，只
打开一条缝隙，D错误。
14.如下图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5，
下列操作方法正确的是( )
A.操作前要将接种环放在酒精灯火焰旁灭菌
B.划线操作需在酒精灯火焰上进行
C.只有在5区域中才可以得到所需菌落
D.在2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
√
[解析] 接种前要将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，A错误；划
线操作需在酒精灯火焰旁进行，B错误；在5个区域中，5区域是最后
一个区域，最有可能在5区域获得所需要的菌落，但其他区域也有可
能得到所需要的菌落，C错误；每次划线前后都要对接种环进行灼烧
灭菌，D正确。
15.[2024·河南洛阳联考]扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，
其次生代谢产物棒曲霉素 对人体有毒害作用。研究人员进行了
如图所示实验，“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，
取样分离的5个部位分别为①～⑤，且在其中均检测到 。下列叙
述不正确的是( )
A.扩展青霉培养液中需加入碳源
B.接种前需对苹果进行灭菌处理
C.若要分离扩展青霉，可选择平板划线法
D.去除腐烂部位后的苹果不宜食用
√
[解析] 青霉为异养型生物，因此扩展青霉培养液中需加入碳源，A
正确；为避免苹果上其他杂菌的污染，应对苹果进行消毒处理，B错
误；平板划线法可分离得到单菌落，因此若要分离扩展青霉，可选
择平板划线法，C正确；腐烂苹果去除腐烂部位后不能放心食用，这
是因为 对人体有毒害作用，将腐烂苹果的腐烂部位去除后，未腐
烂部位仍含一定量的 ，食用仍存在健康风险，D正确。
16.[2024·河南洛阳中学月考]炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患的传染
病,对炭疽病疑似患者,可根据噬菌体的宿主专一性, 通过实验确诊，具体过程
是先通过采集疑似患者的样本，分离培养,获得可疑菌落，再进行细菌鉴定,实
验流程如图所示。已知在该实验中噬菌体能够使炭疽杆菌死亡,增加实验组液
体培养基的浑浊度。下列分析错误的是( )
A.实验中所用的液体培养基的碳源为有机碳源
B.在条件下培养 ,液体培养基因杂菌污染而变浑浊
C.实验过程中，对照组试管中应加入等量生理盐水
D.若疑似患者已被炭疽杆菌感染,实验组培养基的浑浊度比对照组的高
√
[解析] 炭疽杆菌是异养型生物，需要以有机物作为碳源，液体培养基
的碳源为有机碳源，A正确;在条件下培养 ,主要因为炭疽杆菌
大量繁殖导致液体培养基变浑浊，B错误;实验组加入的是生理盐水配
制的澄清噬菌体溶液，为了排除生理盐水的影响，对照组试管中应加
入等量生理盐水，C正确;噬菌体的宿主具
有专一性，患者被炭疽杆菌感染，实验组
加入的噬菌体就会侵染炭疽杆菌,炭疽杆菌就会裂解，已
知在该实验中噬菌体能够使炭疽杆菌死亡，增加实验组液体培养基的
浑浊度，故实验组培养基浑浊度高于对照组的，D正确。
17.[2024·广西北海期末] 某研究小组发现类产碱假单胞菌对黄脊竹
蝗有较强的感染力，并可引起其发病死亡，该小组成员以此展开实
验探究。回答下列问题：
(1)用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，在此
培养基中，为微生物提供碳源的物质包括________________。对培
养基进行灭菌所用的方法是________________。
牛肉膏和蛋白胨
高压蒸汽灭菌法
[解析] 牛肉膏蛋白胨培养基中，为微生物提供碳源的是牛肉膏和蛋
白胨；对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法。
(2)在培养类产碱假单胞菌的过程中，培养皿应倒置，其原因是______
____________________________________________________________。
避免培养基的水分过快地挥发，防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上
[解析] 为了避免培养基的水分过快地挥发以及防止皿盖上凝结的水
珠滴落到培养基上，培养皿应倒置。
(3)研究发现：黄脊竹蝗幼虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后，
于24小时后开始死亡，72小时达到死亡高峰，染病后出现行动迟缓，
伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗虫致病、致死的原因，该研
究小组成员从病死虫尸体中提取并分离得到该菌，并用该菌_______
_________________________，
观察到的现象是____________________________________________。
感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫
感染后的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛现象
[解析] 为证明类产碱假单胞菌是蝗虫致病、致死的原因，需要从病
死虫尸体中提取并分离得到该菌，并用该菌感染生理状况良好的黄
脊竹蝗幼虫，如果感染后的幼虫出现行动迟缓并伴有轻微痉挛现象，
即可证明。
18.下图是平板划线操作的过程，探究下列问题。
(1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：_________________
_________________________________________________________。
[解析] 平板划线法操作步骤是 将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至
烧红 在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开菌种试管的棉塞
将试管口通过火焰 在火焰附近用接种环蘸取出一环菌液
将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞 在火焰附近将皿
盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，
盖上皿盖 灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始
作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要
将最后一次的划线与第一次的划线相连 将平板倒置，放入培养
箱中培养。
(2)在操作的第一步要灼烧接种环，其目的是_____________________
____________________。
避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
[解析] 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微
生物污染培养物。
(3)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，原因是_________
______________________。
以免接种环温度太高，杀死菌种
[解析] 在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环
温度太高，杀死菌种。
(4)在第二次以及其后的划线操作总是从上一次划线的末端开始划线，
目的是 ____________________________________________________
___________________________________________________________
__________________________________________ 。
[解析] 在第二次以及其后的划线操作，总是从上一次划线的末端开
始划线，因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从
上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐
步减少，这样就能将聚集的菌体逐渐稀释(分散)以便获得单菌落。
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从
上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐
步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固
体培养基应采用的检测方法是_________________________________
_________________________________________。
将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
[解析] 培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对
于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度
下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。第2节　微生物的培养技术及应用
第1课时　微生物的基本培养技术
【预习梳理】
一、1.难以用肉眼观察的微小生物　用于发酵的细菌和真菌
2.营养和环境条件　其他微生物无法混入,并将需要的微生物分离出来
二、1.营养物质　营养基质
2.分离　积累其代谢物
3.琼脂　菌落
4.(1)水　碳源　氮源　无机盐
(2)pH　O2　维生素　酸　中性或弱碱　无氧　
三、1.杂菌污染
2.(1)空间　消毒
(2)灭菌
(3)周围的物品
(4)超净工作台　酒精灯火焰
3.温和　一部分微生物　强烈　所有的微生物
四、1.(2)单一个体
(3)纯培养物
(4)固体　肉眼可见的　子细胞群体
2.配制培养基　灭菌　接种　分离　培养
3.平板划线法　稀释涂布平板法
【任务活动】
任务一
[情境]
(1)固体　(2)异养型
(3)碳源、氮源、磷酸盐和维生素　碳源、氮源和维生素
反馈评价
例1　D　[解析] 对异养微生物来说,含C、H、O、N的化合物既是碳源,又是氮源,如牛肉膏,A错误;CO2和N2是无机物,也是某些微生物的碳源和氮源,B错误;有机碳源能提供能量,无机碳源不能提供能量,C错误;硝化细菌所利用的氮源是无机氮源——氨,同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源,D正确。
任务二
[资料]
煮沸消毒　巴氏消毒　酒精　氯气　紫外线消毒　灼烧灭菌　高压蒸汽灭菌
反馈评价
例2　A　[解析] 对培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法,A错误;为避免杂菌污染,实验中应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触,B正确;接种环、接种针需要进行灼烧灭菌处理,C正确;紫外线能破坏DNA结构,密闭空间内的空气常采用紫外线照射消毒,喷洒苯酚同时配合紫外线照射可加强对密闭空间的消毒效果,D正确。
任务三
1.平板划线法　单个　单个
2.纱布　琼脂　高压蒸汽灭菌锅　100 kPa　121 ℃　15~30　干热灭菌　160~170　2　50　酒精灯火焰　平板划线　未接种的平板　恒温培养箱
[分析]
(1)不能　防止空气中杂菌的污染
(2)倒置　防止蒸发的水分落入培养基;防止培养基水分过快挥发
(3)灼烧　防止高温杀死菌种　末端　少
(4)未接种的平板　检验配制的培养基灭菌是否彻底
反馈评价
例3　A　[解析] 为防止培养皿皿盖上的水珠滴入培养基,以及避免培养基的水分过快地挥发,划线操作结束后,将平板倒置,放入恒温培养箱中培养,A正确;平板划线过程中,接种环在每次划线之前和划线结束后均需要灼烧灭菌,B错误;蘸有菌种的接种环不能通过酒精灯火焰,否则菌种会死亡,将蘸有菌种的接种环伸入平板,在培养基表面迅速划三至五条平行线,然后盖上培养皿皿盖,注意不要划破培养基,C错误;打开含菌种的试管,试管口需通过火焰灭菌,取出菌种后,试管口还需通过火焰灭菌,再塞上棉塞,D错误。
例4　D　[解析] 为了防止杂菌污染,划线前操作者应对其衣着和手进行清洁和消毒,A正确;划线时蘸有菌种的接种环在培养基表面进行划线,不能插入培养基中,B正确;区域④的划线与区域①的划线不得相连,否则可能不能得到单菌落,C正确;平板划线过程中,接种环在每次划线之前和划线完成后均需要灼烧灭菌,故在图示操作过程中共需灼烧接种环5次,D错误。
【当堂自测】
1.(1)×　(2)√　(3)√　(4)×　(5)√　(6)√　(7)× (8)×　(9)√　(10)√
[解析] (1)固体培养基中添加了凝固剂,加少量水不能使其成为液体培养基。
(2)硝化细菌为自养型生物,可以二氧化碳为碳源合成有机物。
(4)接种环经灼烧灭菌后应冷却后再挑取菌落,防止高温杀死菌种。
(7)在培养基中含有高温条件下会被破坏或分解的物质时或物品需要保持干燥时,不能用高压蒸汽灭菌法灭菌。
(8)不是所有培养基都需要添加氮源,例如培养固氮菌的培养基不需要添加氮源,因为固氮菌可以直接利用空气中的氮气。
2.C　[解析] 玻璃器皿和金属用具常用干热灭菌法灭菌,A正确;巴氏消毒法既能杀死牛奶中绝大多数的微生物,又不破坏牛奶中的营养物质,B正确;通常使用70%的酒精对皮肤进行消毒,C错误;紫外线通过破坏蛋白质和DNA结构来杀死微生物,常用于一定空间内空气的消毒,D正确。
3.D　[解析] 微生物接种技术的方法各不相同,但核心都是要防止杂菌污染,保证培养物的纯度,A正确;微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤,B正确;为得到纯培养物,需要为微生物提供合适的营养物质和培养条件,C正确;用平板划线法分离菌种,划线五个区域,每次接种之前需要灼烧接种环灭菌,最后划线完成也需要灼烧灭菌,共6次,D错误。
4.C　[解析] 从培养基成分看,配方中含有凝固剂琼脂,属于固体培养基,A正确;葡萄糖属于有机碳源,因此所培养微生物的同化作用类型是异养型,同时培养基中含有青霉素,所以培养的微生物可以是酵母菌或毛霉等真菌,B正确;培养霉菌时一般需将培养基的pH调至酸性,C错误;配制培养基时,要注意各种营养物质的浓度和比例,从而能为微生物的生长提供合适的营养,同时也可保证培养基的渗透压,D正确。
5.B　[解析] 据题分析,硝化细菌通过N→N→N的氧化过程获取能量,故通过分析培养基成分可知(NH4)2SO4可作为硝化细菌的氮源和能源,A正确;硝化细菌为自养型生物,能利用二氧化碳合成糖类,故硝化细菌的主要碳源是二氧化碳,B错误;分析培养基成分,其中K2HPO4和NaH2PO4属于无机盐,可维持培养基的pH,C正确;据题分析,硝化细菌能将N氧化成N,进而将N氧化成N,故可用硝化细菌清除水体中的N及N,D正确。第2节　微生物的培养技术及应用
第1课时　微生物的基本培养技术
一、微生物及培养条件
1.微生物的概念:微生物是 的统称,包括细菌、真菌和病毒等。本章中提及的微生物主要指 。
2.在实验室培养微生物:一方面要为人们需要的微生物提供合适的 ;另一方面要确保 。
二、培养基的配制
1.培养基的概念:人们按照微生物对 的不同需求,配制出的供其生长繁殖的 。
2.培养基的功能:用以培养、 、鉴定、保存微生物或 。
3.培养基的种类
4.培养基的营养要素
(1)各种培养基的配方不同,但一般都含有 、 、 、 等营养物质。
(2)需要满足微生物生长对 、特殊营养物质以及 的需求。部分实例见下表。
细菌类型 对培养基的需求
乳酸杆菌 添加
霉菌 一般将培养基调至 性
细菌 一般将培养基调至 性
厌氧微生物 提供 的条件
三、无菌技术
1.获得纯净的微生物培养物的关键:防止 。
2.具体操作
(1)对操作的 、操作者的衣着和手,进行清洁和 。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。
(3)做好消毒和灭菌工作后应避免已经灭菌处理的材料用具与 接触。
(4)为避免周围环境中微生物的污染,接下来的许多操作应在 上并在 附近进行。
3.消毒和灭菌
方法 结果
消毒 较为 的物理、化学或生物等方法 仅杀死物体表面或内部的
灭菌 的理化方法 杀死物体内外 (包括芽孢和孢子)
四、微生物的纯培养
1.相关概念
(1)培养物:在微生物学中,将接种于培养基内,在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。
(2)纯培养物:由 繁殖所获得的微生物群体。
(3)纯培养:获得 的过程。
(4)菌落:分散的微生物在适宜的 培养基表面或内部可以繁殖形成 、有一定形态结构的 。
2.步骤:微生物的纯培养包括 、 、 、 和 等步骤。
3.常用接种方法: 和 。
任务一培养基的配制
【情境】下表为培养细菌常用的培养基配方。
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 蒸馏水
5.0g 10.0g 5.0g 20.0g 定容至1000mL
(1)该培养基是 (填“固体”或“液体”)培养基。
(2)利用该培养基的细菌的同化作用类型是 (填“自养型”或“异养型”)。
(3)配方中的牛肉膏主要为细菌的生长提供 等营养,蛋白胨主要为细菌的生长提供 等营养。
1.培养基的成分
营养物质 来源 功能
碳源 无机 碳源 CO2、NaHCO3等含碳无机物 ①提供碳元素,构成细胞物质和一些代谢产物; ②有机碳既是碳源又是能源
有机 碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等
氮源 无机 氮源 N2、NH3、铵盐、硝酸盐等 主要是提供氮元素,用于蛋白质、核酸等的合成
有机 氮源 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
特殊营 养物质 维生素、氨基酸、碱基 ①酶或核酸的组成成分; ②参与代谢过程中的酶促反应
水 — ①良好的溶剂; ②维持生物大分子结构的稳定
无机盐 无机化合物 ①细胞组成成分、生理调节物质、某些化能自养菌的能源; ②酶的激活剂、抑制剂
[注意]
①微生物最常利用的碳源是糖类,尤其是葡萄糖;最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。
②对异养微生物来说,含C、H、O、N的有机化合物既是碳源和能源,又是氮源。
③并非所有培养基都含有碳源、氮源。若培养自养型微生物,如硝化细菌,培养基可不含碳源,其可利用空气中的CO2合成有机物;若培养固氮微生物,培养基可不含氮源。
④琼脂仅作为凝固剂,不能为微生物生长提供能量和碳源。
⑤病毒为非细胞结构生物,不能利用人工培养基来培养。
2.两种培养基的比较
培养基种类 特点 用途
液体培养基 不加凝固剂 一般用于工业生产
固体培养基 加凝固剂, 如琼脂 微生物分离、鉴定、 活菌计数、保藏菌种
例1下列关于微生物营养物质的描述正确的是()
A.同一物质不可能既作碳源又作氮源
B.除水以外的无机物仅提供无机盐
C.凡是碳源都能提供能量
D.无机氮源也能提供能量
任务二无菌技术
【资料】阅读教材第11页“资料卡——常用的消毒和灭菌方法”,完善下表。
无菌 技术 常用方法 应用范围 操作方法
消毒 法 日常用品 在100℃煮沸5~6min
法 不耐高温的液体,如牛奶 在63~65℃消毒30min或72~ 76℃处理15s或80~85℃处理 10~15s,可杀死绝大多数微生物,并且基本不破坏营养成分
化学药物消毒法 手、水源等 用 擦拭双手,用 消毒水源
法 接种室、接种箱或超净工作台等 用紫外线照射30min
灭菌 法 涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口、瓶口等 将需灭菌的器具在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌法 玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等耐高温的和需要保持干燥的物品 使用干热灭菌箱在160~170℃的热空气中维持1~2h
法(属于湿热灭菌法) 培养基及容器 常使用高压蒸汽灭菌锅以水蒸气为介质,在压力100kPa、温度为121℃的条件下,维持15~30min
[注意]
用紫外线消毒前,适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果。
例2[2024·江苏南通一中月考]微生物培养时常利用无菌技术避免杂菌的污染,下列相关叙述错误的是()
A.配制好的培养基应放入干热灭菌箱中进行干热灭菌
B.实验中避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触
C.接种环要进行灼烧灭菌
D.实验结束后对实验室喷洒苯酚同时配合紫外线照射
任务三探究·实践——酵母菌的纯培养
1.原理
采用 和稀释涂布平板法能将 微生物分散在固体培养基上,之后经培养得到的单菌落一般是由 微生物繁殖形成的纯培养物。
2.方法步骤
[分析]
(1)倒平板时 (填“能”或“不能”)将培养皿完全打开,原因是 。
(2)培养基冷却凝固后,将培养皿 (填“正置”或“倒置”),原因是 。
(3)进行平板划线时,接种环首先要进行 灭菌,待其冷却后再进行接种,原因是 。第二次划线时应从第一次划线的 开始,其原因是划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要 。
(4)将 与接种的平板同时倒置培养,其目的是 。
1.平板划线的注意事项
(1)接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次。
(2)每次划线前对接种环进行灼烧灭菌,灼烧接种环之后,要冷却后才能进行划线,以免温度太高杀死菌种。
(3)最后一次划线与第一次划线不能相接。
(4)划线用力要适当,防止用力过大将培养基划破。
2.平板划线法中几次“灼烧”的分析
平板划线法中的无菌操作主要是通过“灼烧”实现的,在平板划线过程中要进行多次灼烧,这几次灼烧的目的见表。
操作 第一次灼烧 从第二次划线开始,每次划线之前灼烧 划线结 束后灼烧
目的 避免接种环上可能存在微生物污染培养物 杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种,避免微生物污染环境和感染操作者
例3下列关于酵母菌的纯培养实验的叙述中,正确的是()
A.最后将平板倒置,放在培养箱中培养
B.使用已灭菌的接种环、培养皿,在操作过程中不再灭菌
C.将蘸有菌种的接种环通过酒精灯火焰后迅速伸入平板内划线即可
D.打开含菌种的试管,试管口需通过火焰灭菌,取出菌种后,需马上塞上棉塞
例4平板划线法是微生物接种的常用方法。下图是平板划线示意图,①②③④代表依次划线的区域。下列叙述错误的是()
A.划线前操作者应对其衣着和手进行清洁和消毒
B.划线时蘸有菌种的接种环不能插入培养基中
C.区域④的划线与区域①的划线不得相连
D.在图示操作过程中共需灼烧接种环4次
1.正误辨析
(1)在固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基。()
(2)实验室培养硝化细菌时,培养基中无须加入有机碳源。()
(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害。()
(4)为了防止污染,接种环经灼烧灭菌后应立即挑取菌落。()
(5)倒平板时,培养皿皿盖不能完全打开。()
(6)进行平板划线操作时,第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。()
(7)只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。()
(8)所有微生物在培养时,培养基中都需加入氮源。()
(9)与紫外线照射相比,高压蒸汽灭菌防止杂菌污染的效果更好。()
(10)若皿盖和皿底之间溅上培养基,这个培养基不可再用。()
2.[2024·河北保定期末]在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述错误的是()
A.玻璃器皿和金属用具可利用干热灭菌箱进行干热灭菌
B.巴氏消毒法处理牛奶,能减少牛奶中营养物质的损失
C.无水酒精能加速蛋白质脱水,常用无水酒精对皮肤进行消毒
D.由于紫外线能破坏DNA结构,病房中常采用紫外线进行消毒
3.人们在研究、利用微生物时,用无菌技术培养获取纯种微生物,并对其进行计数或保存。下列有关叙述错误的是()
A.微生物接种技术的方法各不相同,但核心都是要防止杂菌污染,保证培养物的纯度
B.微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤
C.为得到纯培养物,需要为微生物提供合适的营养物质和培养条件
D.平板划线法分离菌种,划线五个区域,接种环需要灼烧灭菌5次
4.[2024·山东郓城一中月考]下表所示为某微生物培养基的配方,有关叙述错误的是()
成分 含量 成分 含量
NaNO3 3g FeSO4 0.01g
K2HPO4 1g 葡萄糖 30g
琼脂 15g H2O 1000mL
MgSO4·7H2O 0.5g 青霉素 0.1万单位
A.依物理性质划分,该培养基属于固体培养基
B.由培养基的原料可知,所培养微生物的同化作用类型是异养型,培养的微生物可以是酵母菌或毛霉
C.本培养基培养霉菌时,应将pH调至中性或弱碱性
D.配制培养基时,要注意各种营养物质的浓度和比例
5.硝化细菌是化能自养菌,通过N→N→N的氧化过程获取菌体生长繁殖所需的能量,在水产养殖中具有重要作用。如表是分离硝化细菌的培养基配方,下列说法错误的是()
成分 含量 成分 含量
(NH4)2SO4 0.5g NaH2PO4 0.25g
FeSO4 0.03g Na2CO3 1g
MgSO4 0.03g 琼脂 5%
K2HPO4 0.75g 蒸馏水 定容至 1000mL
A.(NH4)2SO4可作为硝化细菌的氮源和能源
B.培养基中的Na2CO3是硝化细菌的主要碳源
C.K2HPO4和NaH2PO4能维持培养基的pH
D.硝化细菌能清除水体中的N及N第2节　微生物的培养技术及应用
第1课时　微生物的基本培养技术
1.C　[解析] 培养基中含有目标微生物生长所需要的营养物质,还能满足目标微生物生长对环境的要求,A正确;配制培养基时,需要满足目标微生物生长对pH、特殊营养物质等的需要,B正确;培养基是根据所培养微生物的生长繁殖需求进行配制的,而不是满足各种微生物生长繁殖的需求,C错误;在液体培养基中,添加适量琼脂等凝固剂可制成固体培养基,D正确。
2.C　[解析] 硝化细菌是化能自养需氧型微生物,CO2和NH3分别是硝化细菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自NH3的氧化,A正确;褐藻是自养生物,能进行光合作用,CO2和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源,该生物所需的能源来自太阳能,B正确;乳酸菌是异养厌氧型微生物,糖类和蛋白质类有机物是乳酸菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自糖类的氧化分解,C错误;酵母菌是异养生物,葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源,酵母菌不能直接利用二氧化碳,D正确。
3.A　[解析] 自生固氮菌可利用空气中的氮气作为氮源,所以若培养基中不含氮源,则该培养基上也可能会有微生物生长,A错误;培养不同的微生物需要的pH是不同的,如培养细菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性,B正确;不同微生物对碳源需求有差别,要使用含不同碳源的培养基,也可据此对微生物进行筛选,C正确;微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长,可以形成肉眼可见的菌落,D正确。
4.C　[解析] 很多微生物都能利用葡萄糖,此培养基中能生长多种微生物,并不是只有大肠杆菌,A错误;该培养基调节至合适的pH后还要进行高压蒸汽灭菌操作才可以接种使用,B错误;该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖,属于氮源的物质是牛肉膏,C正确;该培养基含有琼脂,从物理性质看属于固体培养基,D错误。
5.A　[解析] 配制培养基时,一般先调pH再灭菌,这样可以避免在调pH时有杂菌污染培养基,A正确;培养微生物用到的接种环、培养皿可以用干热灭菌法灭菌,培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌,B错误;培养乳酸菌时,需添加维生素,不能添加抗生素,因为抗生素会杀死乳酸菌,C错误;琼脂中虽然含有糖类,但只作为凝固剂,因为绝大多数微生物无法产生分解琼脂的酶,D错误。
6.B　[解析] 防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键,对玻璃器皿通常采用干热灭菌法,A正确;由表格中的结果分析可知,以葡萄糖为碳源时,细胞干重最大,故菌株C生长的最适碳源是葡萄糖,B错误;由实验结果可知,碳源为淀粉时菌株C不能生长,原因可能是其不能合成分解淀粉的淀粉酶,导致其不能利用淀粉,C正确;利用制糖废液生产S可以实现废物的再利用,该过程能减少污染、节省原料、降低生产成本,有利于可持续发展,D正确。
7.D　[解析] 无菌技术的关键是防止杂菌的污染,A错误;煮沸消毒法中在100 ℃煮沸5~6分钟可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢,B错误;配制好的培养基先灭菌后再进行倒平板操作,这样做可以最大程度上避免杂菌对培养基和实验造成污染,C错误;用紫外线照射30 min,可以杀死物体表面或空气中的微生物,在照射前,适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果,D正确。
8.D　[解析] 对试管口、锥形瓶口等部位,可以通过火焰灼烧进行灭菌,A正确;由于要防止空气及周围环境中微生物的污染,所以倒平板过程需要在酒精灯火焰旁进行,B正确;玻璃器皿和金属用具等可以使用干热灭菌法灭菌,所以对锥形瓶、试管、吸管等,都可用干热灭菌箱进行灭菌,C正确;紫外线能使蛋白质变性,还能损伤DNA的结构,因此对操作者的双手不能采用紫外线进行消毒,应该用酒精进行消毒,D错误。
9.D　[解析] 安瓿瓶中的培养液可使芽孢复苏,从而观察生物指示剂是否出现阳性变化,A正确;芽孢是细菌的休眠体,可以帮助细菌度过不良环境,因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌,B正确;芽孢复苏需要时间,所以挤破安瓿瓶后,需培养一段时间再观察是否出现阳性变化,C正确;若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化,则说明灭菌前无有活性芽孢,也就无法说明灭菌效果,D错误。
10.D　[解析] 微生物可在固体培养基表面或内部生长繁殖,D错误。
11.B　[解析] 蛋白质是生命活动的主要承担者,核酸是细胞的遗传物质,高压蒸汽灭菌破坏了细胞内的蛋白质、核酸,影响其生命活动,A正确;培养基在50 ℃时倒平板需要无菌操作,否则会导致杂菌污染,影响实验结果,B错误;在微生物培养过程中,除考虑营养条件外,还需要满足微生物生长对pH、氧气、温度和渗透压等条件的要求,C正确;菌落是一个肉眼可见的子细胞群体,由大量微生物组成,菌落的特征可以作为菌种鉴定的重要依据,D正确。
12.D　[解析] 灭菌结束后,让高压蒸汽灭菌锅内温度自然下降,当压力表的指针降到零后才能开启盖子,拿出培养基和工具待用,A错误;倒平板时,用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约10~20 mL)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖,B错误;接种环经酒精灯火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后再挑取菌落,C错误;培养基是倒置培养,标记菌落时应用记号笔标记在皿底上,D正确。
13.D　[解析] 接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌,避免接种环上存在的微生物污染培养物,划线完毕后要将接种环进行灼烧,以防止细菌污染环境和感染操作者,A正确;棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰,防止杂菌污染,B正确;酒精灯火焰旁存在无菌区域,故在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液,C正确;划线操作时,为了防止杂菌污染,培养皿的皿盖不能完全打开,只打开一条缝隙,D错误。
14.D　[解析] 接种前要将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌,A错误;划线操作需在酒精灯火焰旁进行,B错误;在5个区域中,5区域是最后一个区域,最有可能在5区域获得所需要的菌落,但其他区域也有可能得到所需要的菌落,C错误;每次划线前后都要对接种环进行灼烧灭菌,D正确。
15.B　[解析] 青霉为异养型生物,因此扩展青霉培养液中需加入碳源,A正确;为避免苹果上其他杂菌的污染,应对苹果进行消毒处理,B错误;平板划线法可分离得到单菌落,因此若要分离扩展青霉,可选择平板划线法,C正确;腐烂苹果去除腐烂部位后不能放心食用,这是因为Pat对人体有毒害作用,将腐烂苹果的腐烂部位去除后,未腐烂部位仍含一定量的Pat,食用仍存在健康风险,D正确。
16.B　[解析] 炭疽杆菌是异养型生物,需要以有机物作为碳源,液体培养基的碳源为有机碳源,A正确;在35 ℃条件下培养24 h,主要因为炭疽杆菌大量繁殖导致液体培养基变浑浊,B错误;实验组加入的是生理盐水配制的澄清噬菌体溶液,为了排除生理盐水的影响,对照组试管中应加入等量生理盐水,C正确;噬菌体的宿主具有专一性,患者被炭疽杆菌感染,实验组加入的噬菌体就会侵染炭疽杆菌,炭疽杆菌就会裂解,已知在该实验中噬菌体能够使炭疽杆菌死亡,增加实验组液体培养基的浑浊度,故实验组培养基浑浊度高于对照组的,D正确。
17.(1)牛肉膏和蛋白胨　高压蒸汽灭菌法
(2)避免培养基的水分过快地挥发,防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上
(3)感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫　感染后的幼虫出现行动迟缓,伴有轻微痉挛现象
[解析] (1)牛肉膏蛋白胨培养基中,为微生物提供碳源的是牛肉膏和蛋白胨;对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法。(2)为了避免培养基的水分过快地挥发以及防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上,培养皿应倒置。(3)为证明类产碱假单胞菌是蝗虫致病、致死的原因,需要从病死虫尸体中提取并分离得到该菌,并用该菌感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫,如果感染后的幼虫出现行动迟缓并伴有轻微痉挛现象,即可证明。
18.(1)d→b→f→a→e→c→h→g
(2)避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
(3)以免接种环温度太高,杀死菌种
(4)划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落
(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生
[解析] (1)平板划线法操作步骤是d:将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红→b:在酒精灯火焰旁冷却接种环,并打开菌种试管的棉塞→f:将试管口通过火焰→a:在火焰附近用接种环蘸取出一环菌液→e:将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞→c:在火焰附近将皿盖打开一条缝隙,用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线,盖上皿盖→h:灼烧接种环,待其冷却后,从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作,作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连→g:将平板倒置,放入培养箱中培养。(2)操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。(3)在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线,以免接种环温度太高,杀死菌种。(4)在第二次以及其后的划线操作,总是从上一次划线的末端开始划线,因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,这样就能将聚集的菌体逐渐稀释(分散)以便获得单菌落。(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生。第2节　微生物的培养技术及应用
第1课时　微生物的基本培养技术
　　　　　　　　　　　　　　　
知识点一　培养基的配制
1.培养微生物需要提供适宜的培养基。下列关于培养微生物的培养基的叙述,错误的是 (　)
A.培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
B.培养基的成分需根据目标微生物的代谢特点而定
C.培养基需满足各种微生物生长繁殖的需求
D.在液体培养基中,添加适量琼脂等凝固剂可制成固体培养基
2.下列关于四种微生物的叙述,错误的是 (　)
A.CO2和NH3分别是硝化细菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自NH3的氧化
B.CO2和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源,该生物所需的能源来自太阳能
C.糖类和N2是乳酸菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自乳酸的氧化分解
D.葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源,但CO2一定不是酵母菌的碳源
3.[2024·山西定襄中学月考] 培养基是指供微生物、植物组织和动物组织生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。下列有关培养基的叙述,错误的是 (　)
A.如果培养基中不含氮源,则该培养基上不会有微生物生长
B.配制培养细菌的培养基时要将 pH调至中性或弱碱性
C.根据微生物对碳源需求的差别,使用含不同碳源的培养基
D.微生物在固体培养基上生长时,可形成肉眼可见的菌落
4.[2024·福建连城一中月考] 下表为某培养基的配方,有关叙述正确的是 (　)
成分 牛肉膏 葡萄糖 K2HPO4 琼脂 蒸馏水
含量 10 g 10 g 2 g 适量 定容至1000 mL
A.能在此培养基上生长的只有大肠杆菌
B.该培养基调节至合适的pH后可以直接接种使用
C.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖,属于氮源的物质是牛肉膏
D.从物理性质看该培养基属于液体培养基
5.[2024·江苏连云港期中] 下列关于微生物培养的叙述,正确的是 (　)
A.配制培养基时,一般先调pH再灭菌
B.培养微生物用到的接种环、培养皿、培养基等都用干热灭菌法灭菌
C.培养乳酸菌时,除了基本的碳源、氮源、水和无机盐,还需要添加抗生素
D.琼脂中含有糖类,既可以为微生物提供碳源也是凝固剂
6.化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产化合物S,S的产量与培养菌株C所利用的碳源关系密切。为此,某科学家通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响,结果见表。下列说法错误的是 (　)
碳源 细胞干重/(g/L) S产量/(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖废液 2.30 0.18
A.通常在实验室培养微生物时,对玻璃器皿采用干热灭菌法灭菌
B.由实验结果可知,菌株C生长的最适碳源是制糖废液
C.由实验结果可知,碳源为淀粉时菌株C不能生长,其原因可能是菌株C不能合成淀粉酶
D.利用制糖废液生产S可以实现废物利用,其意义是减少污染、节省原料、降低生产成本
知识点二　无菌技术
7.[2024·广西梧州期末] 在生产、生活和科研实践中,经常通过无菌操作技术避免杂菌的污染。下列有关无菌技术的叙述,正确的是 (　)
A.无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物
B.煮沸消毒法中在100 ℃煮沸5~6分钟可以杀死微生物细胞和所有芽孢、孢子
C.配制好的培养基需要先倒平板以后再进行灭菌
D.紫外线照射前,适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果
8.[2024·福建德化一中月考] 微生物在实验室培养时,获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。下列无菌操作中,错误的是 (　)
A.对试管口、锥形瓶口等部位,通过火焰灼烧进行灭菌
B.倒平板的操作过程在酒精灯火焰附近进行
C.对锥形瓶、试管、吸管等,都可用干热灭菌箱进行灭菌
D.对操作者的双手、衣着以及操作空间等,采用紫外线进行消毒
9.[2024·河南焦作月考] 在器械灭菌时,通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物指示剂来检验灭菌效果,自含式生物指示剂如图所示。为检验生物指示剂是否出现阳性变化,需用工具(在塑料瓶外)挤破安瓿瓶,使菌片浸没在培养液内。最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况,判断器械灭菌效果。下列叙述错误的是 (　)
A.安瓿瓶中培养液的作用是使芽孢复苏
B.菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌
C.挤破安瓿瓶后,需培养一段时间再观察是否出现阳性变化
D.若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化,则说明灭菌效果良好
知识点三　微生物的纯培养
10.下列关于菌落的叙述,错误的是 (　)
A.一个菌落往往是一个细胞在固体培养基上繁殖的结果
B.一个菌落属于一个种群
C.用平板划线法分离菌种时可在培养基上获得单菌落
D.用固体培养基培养微生物时,微生物只会在固体培养基表面生长繁殖
11.下列与微生物培养有关的说法,不正确的是 (　)
A.高压蒸汽灭菌的原理是高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸,影响其生命活动
B.培养基在50 ℃时倒平板不需要无菌操作
C.在微生物培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑pH、温度和渗透压等条件
D.每个菌落都由大量微生物组成,菌落的特征可以作为菌种鉴定的重要依据
12.[2024·四川成都月考] 在微生物学中,通过纯培养能够获得由单一个体繁殖所获得的微生物群体。小明做“微生物的分离与培养”实验时得出如下结论,相关叙述正确的是 (　)
A.高压蒸汽灭菌锅加热结束时,立即开启锅盖,拿出培养基和工具待用
B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上
C.为了防止污染,接种环经酒精灯火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上
13.[2024·广东深圳统考] 在“酵母菌纯培养”的实验课中,某同学进行平板划线的实践操作。下列叙述错误的是 (　)
A.开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧
B.棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰
C.在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液
D.将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面划线
14.如下图是微生物平板划线示意图,划线的顺序为1、2、3、4、5,下列操作方法正确的是 (　)
A.操作前要将接种环放在酒精灯火焰旁灭菌
B.划线操作需在酒精灯火焰上进行
C.只有在5区域中才可以得到所需菌落
D.在2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
15.[2024·河南洛阳联考] 扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一,其次生代谢产物棒曲霉素(Pat)对人体有毒害作用。研究人员进行了如图所示实验,“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处,取样分离的5个部位分别为①~⑤,且在其中均检测到Pat。下列叙述不正确的是 (　)
A.扩展青霉培养液中需加入碳源
B.接种前需对苹果进行灭菌处理
C.若要分离扩展青霉,可选择平板划线法
D.去除腐烂部位后的苹果不宜食用
16.[2024·河南洛阳中学月考] 炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患的传染病,对炭疽病疑似患者,可根据噬菌体的宿主专一性, 通过实验确诊,具体过程是先通过采集疑似患者的样本,分离培养,获得可疑菌落,再进行细菌鉴定,实验流程如图所示。已知在该实验中噬菌体能够使炭疽杆菌死亡,增加实验组液体培养基的浑浊度。下列分析错误的是 (　)
A.实验中所用的液体培养基的碳源为有机碳源
B.在35 ℃条件下培养24 h,液体培养基因杂菌污染而变浑浊
C.实验过程中,对照组试管中应加入等量生理盐水
D.若疑似患者已被炭疽杆菌感染,实验组培养基的浑浊度比对照组的高
17.[2024·广西北海期末] 某研究小组发现类产碱假单胞菌对黄脊竹蝗有较强的感染力,并可引起其发病死亡,该小组成员以此展开实验探究。回答下列问题:
(1)用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基,在此培养基中,为微生物提供碳源的物质包括　　　　　　　　　　　。对培养基进行灭菌所用的方法是　　　　　　　　　　　　。
(2)在培养类产碱假单胞菌的过程中,培养皿应倒置,其原因是 　。
(3)研究发现:黄脊竹蝗幼虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后,于24小时后开始死亡,72小时达到死亡高峰,染病后出现行动迟缓,伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗虫致病、致死的原因,该研究小组成员从病死虫尸体中提取并分离得到该菌,并用该菌　, 观察到的现象是 　。
18.下图是平板划线操作的过程,探究下列问题。
(1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤:
。
(2)在操作的第一步要灼烧接种环,其目的是 。
(3)在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线,原因是 。
(4)在第二次以及其后的划线操作总是从上一次划线的末端开始划线,目的是 。
(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。

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