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(共31张PPT)
非选择题强化练（六）
（限时：20分钟）
1.[2025·江西南昌月考] 微生
物驯化是指在微生物培养过程
中，逐步加入某种物质，让微
生物逐渐适应，从而得到对此
物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员采用微生物驯化结合
传统接种的方法筛选能降解2，，4，四溴联苯醚 的
微生物，并设计了如下实验流程。回答下列问题：
（1） 因具备良好的
阻燃性及热稳定性，被广泛应
用于电子产品中。选择在电子
垃圾拆解区采集的土壤进行菌
电子垃圾拆解区的土壤中含有较多的
允许能降解的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长
稀释涂布平板法
种筛选，原因是___________________________________________。
在驯化培养基A中逐步加入的物质 为__________，培养基B、培养基
C中以 作为唯一碳源，其目的是 ________________________
__________________________________________。将驯化后的微生物
接种于培养基B的方法为________________。
[解析] 因具备良好的阻燃
性及热稳定性，被广泛应用于电子
产品中，则电子垃圾拆解区的土壤
中含有较多的 ，选择在电子垃圾拆解区采集的土壤进行菌
种筛选，能够增加获得目的菌的概率。为了通过微生物驯化获得能
够降解的微生物，则需在培养基中逐步加入 ，使
微生物逐步适应。培养基B、C中以 作为唯一碳源，则属于
选择培养基，该培养基允许能降解 的微生物生长，同时抑
制或阻止其他种类微生物生长，所以可以筛选能够分解 的
微生物。据题图可知，利用涂布器在培养基B上进行接种，所以接种
方法是稀释涂布平板法。
（2）为进一步提高微生物对 的降解效率，研究人员欲将好
氧菌中的重要降解酶基因 导入上述筛选得到的优势菌
中。为获得大量目的基因，常利用_____技术对 基因进行快速
扩增，该技术主要分为__________________三个步骤。
变性、复性、延伸
[解析] 利用的方法可以大量扩增基因，所以用 技术对
基因进行快速扩增， 的基本步骤为高温变性、低温复性、
中温延伸。
（3）为使目的基因在体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代，同时还能够表达和发挥作用，需要构建基因表达载体，基因表达载体上除需要目的基因、复制原点外，还需具备__________________________等结构。现已知目的基因在基因工程菌传代菌株中可稳定遗传，若要进一步了解基因工程菌对 的降解效率是否提高，还需要进行___________________________________________________________。
启动子、终止子、标记基因
个体生物学水平的鉴定（或基因工程菌对的降解实验）
[解析] 基因的表达载体应该具备启动子、终止子、标记基因、目的
基因、复制原点等结构。获取的转基因工程菌需要在个体生物学水
平进行检测，检测基因工程菌对 的降解能力。
2.[2024·江苏苏州模拟] 癌症是严重威胁人类健康的疾病之一，科学家
们一直在研究可以治疗癌症的药物和技术。图甲为普通抗癌药物和单
克隆抗体药物（“生物导弹”）的作用特点，图乙为我国科学家设计的
单克隆抗体偶联药物（ADC）作用机制。请回答下列问题：
（1）一般情况下，人体可自行发现并消灭体内的肿瘤细胞，这一过
程属于______免疫。
细胞
[解析] 机体自行发现和消灭体内产生的肿瘤细胞主要依靠细胞毒性
细胞，属于细胞免疫。
（2）治疗癌症的“生物导弹”由单克隆抗体和抗癌药物组成，分子标靶
治疗药物主要依靠细胞膜上的受体区分正常细胞和癌细胞，其中的单
克隆抗体的优点有____________________________________________
_______________________（答出两点）。
能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并可大量制备
[解析] 单克隆抗体的优点有能准确识别抗原的细微差异，与特定抗
原发生特异性结合，并可大量制备。
（3）请根据图乙所示说出 杀死肿瘤细胞的作用机制：肿瘤细胞会
将_____________，之后 药物会在________中分解并释放出毒性药
物，破坏________________________，从而杀死肿瘤细胞。
分子内吞
溶酶体
或阻止肿瘤细胞分裂
[解析] 根据图乙所示可知，肿瘤细胞会将分子内吞，之后
药物会在溶酶体中分解并释放出毒性药物，破坏 或阻止肿瘤细
胞分裂，从而杀死肿瘤细胞。
（4）2021年8月，120万一针的天价抗癌药（ 疗法）进入大众
的视野，国内首例 疗法治疗的淋巴瘤患者在上海瑞金医院出
院，为肿瘤患者的治愈带来希望。 疗法是一种免疫疗法，就
是将患者的 细胞取出来在体外培养、修饰，使其获得特异性识别肿
瘤细胞的能力，然后在体外大量扩增后重新输回患者体内，发挥抗肿
瘤的治疗作用，即把细胞改造成细胞（嵌合抗原受体 细
胞）。
从上述疗法的机理可知，由细胞改造成的 细胞特异
性识别肿瘤细胞后，其发挥作用的过程是 细胞先增殖、分化
产生________________________________，随后由________________
_____与肿瘤细胞密切接触，使肿瘤细胞裂解死亡。
活化的细胞毒性细胞和记忆细胞
活化的细胞毒性细胞
[解析] 细胞改造成的 细胞特异性识别肿瘤细胞后，先增殖、
分化产生活化的细胞毒性细胞和记忆 细胞，随后由活化的细胞毒
性 细胞与肿瘤细胞密切接触，使肿瘤细胞裂解死亡。
（5）除了运载药物外，单克隆抗体在多种疾病的诊断和病原体鉴定
中也发挥着重要作用，例如利用__________________的单克隆抗体在
特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。
同位素或荧光标记
[解析] 除了运载药物外，单克隆抗体在多种疾病的诊断和病原体鉴
定中也发挥着重要作用，可以利用同位素或荧光标记的单克隆抗体
在特定组织中与相应的抗原结合，并通过放射性或荧光区域成像的
特点，定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。
3.[2024·安徽合肥模拟] 中国科学家在国际上
首次成功构建了高比例胚胎干细胞贡献的活
嵌合体猴（将食蟹猴的胚胎干细胞注入原始
胚胎后发育而成），这对于理解灵长类胚胎
注：胚胎干细胞是指在 体系下培养的食蟹猴胚胎干细胞，具有
较高的多能性。
干细胞全能性具有重要意义，为遗传修饰模型猴的构建奠定了技术基
础。其技术路线如下图所示，请回答下列问题：
（1） 胚胎干细胞不仅具有自我更新能力，
且具有高度的______潜能。科学家将绿色荧
光基因导入 胚胎干细胞，用于检测
胚胎干细胞在胚胎和个体中的分布。请
分化
荧光标记细胞膜蛋白，检测细胞膜的流动性
注入的胚胎干细胞与桑葚胚细胞嵌合发育为内细胞团细胞，共同发育为幼猴的各种组织
再举出一个荧光标记技术在生物学中的应用实例：________________
_________________________。嵌合体猴体内绿色荧光散乱分布的原
因是________________________________________________________
__________________________。
[解析] 胚胎干细胞具有自我更新能
力及高度的分化潜能。高中生物教材
提及的荧光标记技术在生物学中的应
用还有：荧光标记细胞膜蛋白，检测
细胞膜的流动性；荧光标记染色体上
的基因，检测基因在染色体上的分布；荧光标记抗原或抗体，检测
抗原和抗体的特异性结合等。 胚胎干细胞与桑葚胚细胞嵌合发育
为内细胞团细胞，进而共同发育为幼猴的各种组织，故嵌合体猴体
内绿色荧光散乱分布。
（2）通过滚瓶培养可获取足够数量的
单个细胞。培养时，需将盛有细胞、
培养液的滚瓶放置于滚动架上，使其
缓慢旋转。滚瓶培养的优点为_______
_________________________________
使细胞充分接触培养液和气体，有利于细胞的生长
营养条件，无菌、无毒的环境，适宜的温度、、渗透压和气体环境
_______，动物细胞培养的条件为_______________________________
__________________________________（答2点即可）。
[解析] 据题意分析可知，滚瓶培养
可使细胞充分接触培养液和气体，有
利于细胞的生长。动物细胞培养的条
件为营养条件，无菌、无毒的环境，
适宜的温度、 和渗透压，气体环
境的空气和的 。
（3）可用囊胚的________部分的细胞做 分析，进行性别鉴定。
滋养层
[解析] 可用囊胚的滋养层细胞做 分析，进行性别鉴定，这样不
会影响内细胞团的发育和功能。
4.[2024·河南新乡一模] 修复系统是生物细胞修复 损伤的一套
网络系统，和是系统中最重要的两种修复蛋白，在
损伤后表达大大增强，实验小组将绿色荧光蛋白基因置于
或 启动子调控下，构建重组质粒并转入大肠杆菌中，获得了能用
于检测环境中致癌物质的菌株，图 Ⅰ 表示质粒的结构示意图，图 Ⅱ
表示基因和或启动子构成的 片段，回答下列问题：
（1）启动子的作用是_________________________________________
_______，GFP基因和或启动子构成的 片段两侧无限制酶识别位点，为了构建重组质粒，应在 扩增目的基因时，在引物的____（填“”或“ ”）端添加_______________两种限制酶的识别序列。
聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出
Ⅰ 和 Ⅰ
[解析] 启动子的作用是 聚合酶识别和结合的部
位,驱动基因转录出；进行扩增目的基因
时， 聚合酶将脱氧核苷酸加到引物的端，并
以此为起始点，沿方向延伸，故需在引物
的 端添加限制酶识别序列。用限制酶Ⅲ 会
破坏，限制酶 Ⅰ 在载体上存在两个酶切
位点， Ⅰ 切割质粒后，质粒会自身环化，不
利于目的基因拼接到质粒上，故只能选择 Ⅰ 、
Ⅰ两种限制酶。
（2）用于筛选重组质粒的培养基上应添加适量的________（填抗生素名称）。检测发现，某细菌能在含该抗生素的培养基上增殖形成菌落，但在外界刺激下仍不能合成绿色荧光蛋白，其可能的原因是
_______________________________，为了进一步确定是否是由该原因导致的，可用相应的限制酶切割质粒，并利用________________的方法分离不同 片段。
四环素
导入的是不含目的基因的空质粒
琼脂糖凝胶电泳
[解析] 表达载体上存在四环素抗性基因作为标记基因，故用于筛选
重组质粒的培养基上应添加适量的四环素。某细菌能在含四环素的
培养基上增殖形成菌落，说明含有四环素的质粒 已进入受体细
胞；但在外界刺激下仍不能合成绿色荧光蛋白，其可能的原因是荧
光蛋白基因未进入受体细胞，所以导入的是不含目的基因的空质粒。
琼脂糖凝胶电泳可分离不同 片段。
（3）含重组质粒的大肠杆菌能用于检测环境中的致癌物质，试阐述
其检测原理：________________________________________________
____________________________________________________________
______。实验小组分别检测了导入或 启动子的不同菌株对致
癌物质的荧光反应强度，实验结果如下表所示：
0 50 100 150 200
0 6 7 36 38
0 1.20 1.4 11.5 12.5
环境中的致癌物质能够损伤，从而激活细胞的修复系统，促使或启动子启动下游基因表达，合成绿色荧光蛋白
根据实验数据可知，欲更好利用细菌检测环境中的致癌物质，应将
基因置于启动子_____的下游，试结合表格数据说明原因：______
____________________________________________________________
_______。
启动子对环境中的致癌物质更敏感，能产生更多的绿色荧光蛋白，便于检测
0 50 100 150 200
0 6 7 36 38
0 1.20 1.4 11.5 12.5
[解析] 修复系统是生物细胞修复 损伤的一套网络系统，
和是系统中最重要的两种修复蛋白，在 损伤后表达
大大增强，实验小组将绿色荧光蛋白基因置于或 启动
子调控下，环境中的致癌物质能够损伤，从而激活细胞的 修
复系统，促使或 启动子启动下游基因表达，合成绿色荧光
蛋白。在不同处理时间下，菌株甲荧光反应强度都高于菌株乙，即
启动子 对环境中的致癌物质更敏感，能产生更多的绿色荧光蛋
白，便于检测。非选择题强化练(六)
1.(1)电子垃圾拆解区的土壤中含有较多的BDE-47　BDE-47　允许能降解BDE-47的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长　稀释涂布平板法
(2)PCR　变性、复性、延伸
(3)启动子、终止子、标记基因　个体生物学水平的鉴定(或基因工程菌对BDE-47的降解实验)
[解析] (1)BDE-47因具备良好的阻燃性及热稳定性,被广泛应用于电子产品中,则电子垃圾拆解区的土壤中含有较多的BDE-47,选择在电子垃圾拆解区采集的土壤进行菌种筛选,能够增加获得目的菌的概率。为了通过微生物驯化获得能够降解BDE-47的微生物,则需在培养基中逐步加入BDE-47,使微生物逐步适应。培养基B、C中以BDE-47作为唯一碳源,则属于选择培养基,该培养基允许能降解BDE-47的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长,所以可以筛选能够分解BDE-47的微生物。据题图可知,利用涂布器在培养基B上进行接种,所以接种方法是稀释涂布平板法。(2)利用PCR的方法可以大量扩增基因,所以用PCR技术对AntABC基因进行快速扩增,PCR的基本步骤为高温变性、低温复性、中温延伸。(3)基因的表达载体应该具备启动子、终止子、标记基因、目的基因、复制原点等结构。获取的转基因工程菌需要在个体生物学水平进行检测,检测基因工程菌对BDE-47的降解能力。
2.(1)细胞
(2)能准确识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并可大量制备
(3)ADC分子内吞　溶酶体　DNA或阻止肿瘤细胞分裂
(4)活化的细胞毒性T细胞和记忆T细胞　活化的细胞毒性T细胞
(5)同位素或荧光标记
[解析] (1)机体自行发现和消灭体内产生的肿瘤细胞主要依靠细胞毒性T细胞,属于细胞免疫。(2)单克隆抗体的优点有能准确识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并可大量制备。(3)根据图乙所示可知,肿瘤细胞会将ADC分子内吞,之后ADC药物会在溶酶体中分解并释放出毒性药物,破坏DNA或阻止肿瘤细胞分裂,从而杀死肿瘤细胞。(4)T细胞改造成的CAR-T细胞特异性识别肿瘤细胞后,先增殖、分化产生活化的细胞毒性T细胞和记忆T细胞,随后由活化的细胞毒性T细胞与肿瘤细胞密切接触,使肿瘤细胞裂解死亡。(5)除了运载药物外,单克隆抗体在多种疾病的诊断和病原体鉴定中也发挥着重要作用,可以利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中与相应的抗原结合,并通过放射性或荧光区域成像的特点,定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。
3.(1)分化　荧光标记细胞膜蛋白,检测细胞膜的流动性　注入的4CL胚胎干细胞与桑葚胚细胞嵌合发育为内细胞团细胞,共同发育为幼猴的各种组织
(2)使细胞充分接触培养液和气体,有利于细胞的生长　营养条件,无菌、无毒的环境,适宜的温度、pH、渗透压和气体环境
(3)滋养层
[解析] (1)胚胎干细胞具有自我更新能力及高度的分化潜能。高中生物教材提及的荧光标记技术在生物学中的应用还有:荧光标记细胞膜蛋白,检测细胞膜的流动性;荧光标记染色体上的基因,检测基因在染色体上的分布;荧光标记抗原或抗体,检测抗原和抗体的特异性结合等。4CL胚胎干细胞与桑葚胚细胞嵌合发育为内细胞团细胞,进而共同发育为幼猴的各种组织,故嵌合体猴体内绿色荧光散乱分布。(2)据题意分析可知,滚瓶培养可使细胞充分接触培养液和气体,有利于细胞的生长。动物细胞培养的条件为营养条件,无菌、无毒的环境,适宜的温度、pH和渗透压,气体环境(95%的空气和5%的CO2)。(3)可用囊胚的滋养层细胞做DNA分析,进行性别鉴定,这样不会影响内细胞团的发育和功能。
4.(1)RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出mRNA　5'　Sac Ⅰ 和Bcl Ⅰ
(2)四环素　导入的是不含目的基因的空质粒　琼脂糖凝胶电泳
(3)环境中的致癌物质能够损伤DNA,从而激活细胞的SOS修复系统,促使recA或uvrA启动子启动下游基因表达,合成绿色荧光蛋白　recA　启动子recA对环境中的致癌物质更敏感,能产生更多的绿色荧光蛋白,便于检测
[解析] (1)启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出mRNA;进行PCR扩增目的基因时,DNA聚合酶将脱氧核苷酸加到引物的3'端,并以此为起始点,沿5'→3'方向延伸,故需在引物的5'端添加限制酶识别序列。用限制酶Hind Ⅲ 会破坏tetr,限制酶Xba Ⅰ 在载体上存在两个酶切位点,Xba Ⅰ 切割质粒后,质粒会自身环化,不利于目的基因拼接到质粒上,故只能选择Sac Ⅰ 、Bcl Ⅰ两种限制酶。(2)表达载体上存在四环素抗性基因作为标记基因,故用于筛选重组质粒的培养基上应添加适量的四环素。某细菌能在含四环素的培养基上增殖形成菌落,说明含有四环素的质粒DNA已进入受体细胞;但在外界刺激下仍不能合成绿色荧光蛋白,其可能的原因是荧光蛋白基因未进入受体细胞,所以导入的是不含目的基因的空质粒。琼脂糖凝胶电泳可分离不同DNA 片段。(3)SOS修复系统是生物细胞修复 DNA 损伤的一套网络系统,recA 和 uvrA 是SOS系统中最重要的两种修复蛋白,在DNA 损伤后表达大大增强,实验小组将绿色荧光蛋白(GFP)基因置于recA或uvrA 启动子调控下,环境中的致癌物质能够损伤DNA,从而激活细胞的SOS修复系统,促使recA 或uvrA 启动子启动下游基因表达,合成绿色荧光蛋白。在不同处理时间下,菌株甲荧光反应强度都高于菌株乙,即启动子 recA 对环境中的致癌物质更敏感,能产生更多的绿色荧光蛋白,便于检测。非选择题强化练(六)
1.[2025·江西南昌月考] 微生物驯化是指在微生物培养过程中,逐步加入某种物质,让微生物逐渐适应,从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能降解2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)的微生物,并设计了如下实验流程。回答下列问题:
(1)BDE-47因具备良好的阻燃性及热稳定性,被广泛应用于电子产品中。选择在电子垃圾拆解区采集的土壤进行菌种筛选,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。在驯化培养基A中逐步加入的物质X为　　　　　　,培养基B、培养基C中以BDE-47作为唯一碳源,其目的是 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为　　　　　　　　　　。
(2)为进一步提高微生物对BDE-47的降解效率,研究人员欲将好氧菌GB-2中的重要降解酶基因AntABC导入上述筛选得到的优势菌中。为获得大量目的基因,常利用　　　　技术对AntABC基因进行快速扩增,该技术主要分为　　　　　　　　　三个步骤。
(3)为使目的基因在体细胞中稳定存在,并且遗传给下一代,同时还能够表达和发挥作用,需要构建基因表达载体,基因表达载体上除需要目的基因、复制原点外,还需具备　　　　　　　　　　等结构。现已知目的基因在基因工程菌传代菌株中可稳定遗传,若要进一步了解基因工程菌对BDE-47的降解效率是否提高,还需要进行　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
2.[2024·江苏苏州模拟] 癌症是严重威胁人类健康的疾病之一,科学家们一直在研究可以治疗癌症的药物和技术。图甲为普通抗癌药物和单克隆抗体药物(“生物导弹”)的作用特点,图乙为我国科学家设计的单克隆抗体偶联药物(ADC)作用机制。请回答下列问题:
(1)一般情况下,人体可自行发现并消灭体内的肿瘤细胞,这一过程属于　　　　免疫。
(2)治疗癌症的“生物导弹”由单克隆抗体和抗癌药物组成,分子标靶治疗药物主要依靠细胞膜上的受体区分正常细胞和癌细胞,其中的单克隆抗体的优点有　(答出两点)。
(3)请根据图乙所示说出ADC杀死肿瘤细胞的作用机制:肿瘤细胞会将　　　　　　　　　　,之后ADC药物会在　　　　　中分解并释放出毒性药物,破坏　　　　　　　　　　　　　　,从而杀死肿瘤细胞。
(4)2021年8月,120万一针的天价抗癌药(CAR-T疗法)进入大众的视野,国内首例CAR-T疗法治疗的淋巴瘤患者在上海瑞金医院出院,为肿瘤患者的治愈带来希望。CAR-T疗法是一种免疫疗法,就是将患者的T细胞取出来在体外培养、修饰,使其获得特异性识别肿瘤细胞的能力,然后在体外大量扩增后重新输回患者体内,发挥抗肿瘤的治疗作用,即把T细胞改造成CAR-T细胞(嵌合抗原受体T细胞)。
从上述CAR-T疗法的机理可知,由T细胞改造成的CAR-T细胞特异性识别肿瘤细胞后,其发挥作用的过程是CAR-T细胞先增殖、分化产生　　　　　　　　　　　　　　,随后由　　　　　　　　　　　　与肿瘤细胞密切接触,使肿瘤细胞裂解死亡。
(5)除了运载药物外,单克隆抗体在多种疾病的诊断和病原体鉴定中也发挥着重要作用,例如利用　　　　　　　　　　　　的单克隆抗体在特定组织中成像的技术,可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。
3.[2024·安徽合肥模拟] 中国科学家在国际上首次成功构建了高比例胚胎干细胞贡献的活嵌合体猴(将食蟹猴的胚胎干细胞注入原始胚胎后发育而成),这对于理解灵长类胚胎干细胞全能性具有重要意义,为遗传修饰模型猴的构建奠定了技术基础。其技术路线如下图所示,请回答下列问题:
注:4CL胚胎干细胞是指在4CL体系下培养的食蟹猴胚胎干细胞,具有较高的多能性。
(1)4CL胚胎干细胞不仅具有自我更新能力,且具有高度的　　　　潜能。科学家将绿色荧光基因(GFP)导入4CL胚胎干细胞,用于检测4CL胚胎干细胞在胚胎和个体中的分布。请再举出一个荧光标记技术在生物学中的应用实例:　　　　　　　　　　　　　　　　　。嵌合体猴体内绿色荧光散乱分布的原因是　
　。
(2)通过滚瓶培养可获取足够数量的单个细胞。培养时,需将盛有细胞、培养液的滚瓶放置于滚动架上,使其缓慢旋转。滚瓶培养的优点为　　　　　　　　　　　　　　　　,动物细胞培养的条件为　　　　　　　　　　　　　　　(答2点即可)。
(3)可用囊胚的　　　　　部分的细胞做DNA分析,进行性别鉴定。
4.[2024·河南新乡一模] SOS修复系统是生物细胞修复DNA损伤的一套网络系统,recA和uvrA是SOS系统中最重要的两种修复蛋白,在DNA损伤后表达大大增强,实验小组将绿色荧光蛋白(GFP)基因置于recA或uvrA启动子调控下,构建重组质粒并转入大肠杆菌中,获得了能用于检测环境中致癌物质的菌株,图 Ⅰ 表示质粒的结构示意图,图 Ⅱ 表示GFP基因和recA或uvrA启动子构成的DNA片段,回答下列问题:
(1)启动子的作用是
　,
GFP基因和recA或uvrA启动子构成的DNA片段两侧无限制酶识别位点,为了构建重组质粒,应在PCR扩增目的基因时,在引物的　　　(填“3'”或“5'”)端添加　　　　　　　　　　两种限制酶的识别序列。
(2)用于筛选重组质粒的培养基上应添加适量的　　　　(填抗生素名称)。检测发现,某细菌能在含该抗生素的培养基上增殖形成菌落,但在外界刺激下仍不能合成绿色荧光蛋白,其可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　,为了进一步确定是否是由该原因导致的,可用相应的限制酶切割质粒,并利用　　　　　　　　　　的方法分离不同DNA片段。
(3)含重组质粒的大肠杆菌能用于检测环境中的致癌物质,试阐述其检测原理:　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。实验小组分别检测了导入recA或uvrA启动子的不同菌株对致癌物质的荧光反应强度,实验结果如下表所示:
时间/min
0 50 100 150 200
菌株甲(启动子为recA) 0 6 7 36 38
菌株乙(启动子为uvrA) 0 1.20 1.4 11.5 12.5
根据实验数据可知,欲更好利用细菌检测环境中的致癌物质,应将GFP基因置于启动子　　　　的下游,试结合表格数据说明原因:　
　。

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