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第一章　发酵工程
第一节　微生物的培养需要适宜条件
知识点一　培养基的成分和类型及配制酵母菌的培养基
1.下列关于培养基的说法，正确的是（　　）
A.培养基中含量最高的是碳源
B.所有培养基中都必须含有生长因子
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落
2.下列关于培养基的叙述，错误的是（　　）
A.液体培养基常用于大规模快速繁殖某种微生物
B.固体培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中快
C.平板固体培养基常用于观察由单个细胞生长繁殖成的菌落
D.斜面固体培养基常用于菌种保存
3.配制培养基是培养微生物的第一步，下列叙述正确的是（　　）
A.配制斜面培养基时试管中的液体量为试管长度的1/3
B.获得纯净培养物的关键是阻止一切微生物生长
C.制作棉塞不能使用医用脱脂棉
D.在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上可以继续使用
4.下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源的来源和新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是（　　）
项目 硝化细菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻
能源 NH3 乳酸 N2 光能
碳源 CO2 糖类 糖类 CO2
氮源 NH3 N2 N2 N
代谢类型 自养需氧型 异养厌氧型 自养需氧型 自养需氧型
A.硝化细菌与乳酸菌 B.乳酸菌与根瘤菌
C.根瘤菌与衣藻 D.硝化细菌与衣藻
知识点二　灭菌和无菌操作
5.下列实验用品通常需要进行高压蒸汽灭菌的是（　　）
6.下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是（　　）
A.高压蒸汽灭菌 B.紫外灯照射
C.70％酒精浸泡灭菌 D.过滤灭菌
7.（2024·丽水高二月考）下列有关微生物培养实验中灭菌方法的叙述，错误的是（　　）
A.常用高压蒸汽灭菌法对培养基、玻璃器皿进行灭菌
B.含尿素的培养基需在121 ℃下进行高压蒸汽灭菌
C.含葡萄糖的培养基可在112 ℃下加热30分钟高压灭菌
D.接种环和涂布器在使用的过程中常通过灼烧灭菌
8.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，实验中下列做法错误的是（　　）
A.对接种环进行灼烧处理
B.带菌培养基必须经高压灭菌锅灭菌后才能倒掉
C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉
D.操作者对双手进行酒精处理属于消毒
9.高压灭菌锅是微生物培养的常用设备。下列关于利用高压灭菌锅进行灭菌操作的叙述，错误的是（　　）
A.灭菌前，向锅内加入适量的水，便于产生水蒸气
B.装锅时，不宜太满太实，利于蒸气透过，提高灭菌效果
C.灭菌时，需待压力上升到所需压力，再开始计时
D.灭菌后，需等灭菌锅内温度下降到室温，再打开锅盖
10.将甲、乙、丙和丁四种细菌分别接种到①②③④四种培养液中，经培养后分别测得它们繁殖一代所需的时间，结果如表所示：
培养液 组别 培养液成分 繁殖一代所 需时间（分钟）
甲 乙 丙 丁
① 葡萄糖、NaCl、P、MgSO4 43 100 － －
② 葡萄糖、NaCl、P、MgSO4、8种氨基酸 28 40 － －
③ 葡萄糖、NaCl、P、MgSO4、19种氨基酸 25 25 80 －
④ NaCl、MgSO4、N、P － － － 80
注：“－”表示细菌没有生长。
下列相关分析正确的是（　　）
A.甲、乙均能在①培养基上生长，且乙增长较快
B.甲、乙、丙和丁四种细菌，丁代谢类型与蓝细菌相似
C.四种培养基均需要通过121 ℃高压蒸汽灭菌15 min
D.氨基酸是甲、乙、丙、丁四种细菌生长的限制条件
11.请分析下列操作，错误的是（　　）
①煮沸消毒可以杀死微生物的细胞和部分芽孢
②接种操作要在酒精灯火焰附近进行
③培养基要进行高压蒸汽灭菌
④加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
⑤可以对接种室、接种箱、超净工作台和操作人员进行紫外线消毒，以杀死物体表面或者空气中的微生物
⑥在接种过程中，试管口、瓶口等易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌
A.①② B.⑤⑥
C.③⑤ D.④⑤
12.（2024·杭州高二期末）请回答下列关于配制马铃薯蔗糖培养基的问题：
（1）配制培养基时通常按“细菌喜荤，霉菌喜素”的原则进行。配制培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基时，通常需要加入一定量的蔗糖，其主要作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）不同微生物对生存环境的pH要求不同，通常细菌在　　　　　　　　的环境中生长良好，霉菌在　　　　　　　的环境中生长良好，调节酸碱度应在培养基灭菌之　　　　（填“前”或“后”）进行。
（3）配制固体培养基时，通常选择　　　　　作为凝固剂。
（4）培养基配制完成后，需转移分装到三角瓶和试管中，为了避免发生　　　　　，三角瓶口和试管口不能黏有培养基。分装完成后，三角瓶口和试管口需要加棉塞，制作棉塞所需的棉花不能用脱脂棉，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
13.如表所示为某培养基的配方，请回答下列问题：
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万 单位
（1）从培养基的物理特征上看，该培养基属于　　　培养基，判断的依据是　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）从培养基的化学成分上看，该培养基属于　　　培养基，判断的依据是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。
（3）该培养基中葡萄糖的主要作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（4）该培养基的氮源为　　　　。
（5）该培养基中加入0.1万单位的青霉素，其作用可能是　　　　　　　　　　　。
（6）从无菌操作的角度分析，向该培养基中加入葡萄糖时，应采用的方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
第一节　微生物的培养需要适宜条件
1.D　培养基中含量最高的应该是水，A错误；由于自身的缺陷，有些微生物对培养基成分有特殊的需求，需要在培养基中有针对性地添加某些特定的维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶等有机化合物才能生长，这些化合物统称为生长因子，并非所有培养基中都含有生长因子，B错误；固体培养基中含有凝固剂，即使加入少量水也无法制成液体培养基，C错误；微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落，根据菌落特征可鉴定、筛选不同微生物，D正确。
2.B　由于细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速度相对较慢，培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中慢，B错误。
3.C　配制斜面培养基时试管中的液体量为试管长度的1/4，A错误；获得纯净培养物的关键是无菌操作，保证目标微生物的生长，B错误；在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上不能继续使用，D错误。
4.D　硝化细菌能将NH3氧化成亚硝酸和硝酸，并利用该过程释放的化学能，将二氧化碳和水合成有机物，属于自养需氧型生物，其氮源和能源都是NH3，碳源是二氧化碳；乳酸菌是异养厌氧型生物，不能直接利用N2，氮源是硝酸根离子等，碳源和能源为糖类；根瘤菌是能固氮的异养需氧型生物，进行生命活动所需要的能量来自糖类等有机物的氧化分解，氮源是N2，碳源和能源是糖类；衣藻是低等植物，能利用光能进行光合作用制造有机物，属于自养需氧型生物，其能源是光能，碳源是二氧化碳，氮源是硝酸根离子等。
5.D　接种环和涂布器通常需要进行灼烧灭菌，A、B错误；酒精灯不需要进行灭菌，C错误；试管需要进行高压蒸汽灭菌，D正确。
6.D　由于尿素受热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用过滤灭菌法，D正确。
7.B　尿素受热会分解，因此常用G6玻璃砂漏斗对尿素进行过滤除菌，然后在超净工作台内将尿素溶液加到已经灭菌的培养基中，B错误。
8.C　带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，简单的加热达不到灭菌效果，B正确，C错误。
9.D　灭菌前，先将内层灭菌桶取出，再向锅内加入适量的水，便于产生水蒸气，水面与三角搁架平齐，A正确；在灭菌桶内装入待灭菌物品时，不要装得太挤，以免妨碍水蒸气流通而影响灭菌效果，B正确；灭菌时，需待压力上升到所需压力，再开始计时，控制热源，按照灭菌所需时间，维持压力，C正确；灭菌后，需等灭菌锅内温度自然下降到室温，且当压力表的压力降至0时，打开排气阀，再打开锅盖，D错误。
10.B　由表格数据分析可知，甲、乙均能在①培养基上生长，且甲增长较快，A错误；甲、乙、丙和丁四种细菌，丁在没有葡萄糖和氨基酸的培养基中生长，属于自养型细菌，代谢类型与蓝细菌相似，B正确；葡萄糖在115 ℃以上会焦化，①②③培养基中含有葡萄糖，因此，对于含葡萄糖的培养基采用适当降低温度、压力（112 ℃，500 g/cm2）以及延长时间（30 min）的高压灭菌方法灭菌，C错误；由表格数据分析可知，氨基酸是丙细菌生长的限制条件，D错误。
11.D　指示剂和染料可能混有微生物，故加入培养基前需要灭菌，④错误；接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线消毒，但不能对操作人员进行紫外线消毒，⑤错误。
12.（1）提供营养和维持培养基的渗透压　（2）中性偏碱　中性偏酸　前　（3）琼脂　（4）污染　脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染
解析：（2）不同微生物对pH的要求不同，细菌常在中性偏碱的环境中生长良好；霉菌在中性偏酸的环境中生长良好，培养基要做到无菌，故调节酸碱度应在高压灭菌之前。
13.（1）液体　其成分中不含凝固剂　（2）合成　其化学成分完全清楚　（3）为微生物的生长提供碳源和能源　（4）NaNO3　（5）抑制细菌的生长　（6）可采用已在121 ℃下灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后，再在超净工作台内添加到培养基中；也可采用适当降低温度、压力（112 ℃，500 g/cm2）以及延长时间（30 min）的高压蒸汽灭菌方法灭菌
2 / 3第一章　发酵工程
第一节　微生物的培养需要适宜条件
导学 聚焦 1.概述培养基的成分和类型。 2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。 3.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术
知识点（一）　培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
1.微生物与无菌技术
（1）微生物
①定义：是人们对所有　　　　　　　　　　　　的生物的统称。
②微生物培养的基本要求：一方面需要提供其适宜的生长环境，另一方面需要除掉与　　　　　　　具有竞争和寄生关系的异种微生物。
（2）无菌技术：在培养某种微生物时，防止　　　　　　　混入，保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术。
2.培养基的概念、主要成分及理化特性
小提醒：（1）生长因子是指在培养基中有针对性地添加的某些特定的维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶等有机化合物。
（2）微生物能量来源不同，自养型微生物利用光能或化学反应释放的能量；异养型微生物利用培养基中的有机物。
3.培养基的类型
（1）
（2）
小提醒：固体培养基表面的微生物生长速度比液体培养基中慢的原因是细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速度相对较慢。
4.判断下列相关表述的正误
（1）配制培养基时要考虑不同微生物的代谢特性。（　　）
（2）培养基的主要成分为水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，此外还需要满足微生物生长对pH等的要求。（　　）
（3）培养异养型微生物时，培养基中需要加入无机碳。（　　）
（4）同样条件下，大肠杆菌在液体培养基和固体培养基中的繁殖速度相同。（　　）
（5）天然培养基成本较低，可用于大规模的生物发酵工业。（　　）
探讨　分析微生物培养基的营养成分和类型
　下表为微生物的培养基配方，完成下列问题：
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至 1 000 mL
（1）培养基中的碳源主要是　　　　，尿素主要为微生物的生长提供　　　　，琼脂的作用是　　　　。
（2）从化学成分来看，该培养基属于　　　　培养基；从物理性质来看，该培养基属于　　　　培养基。
（3）该培养基可用来培养　　　　（填“自养型”或“异养型”）微生物。若要培养圆褐固氮菌，可除去的的成分是　　　　。
（4）培养基的KH2PO4及Na2HPO4的作用是什么？
1.培养基营养成分的作用和主要来源
2.有关培养基营养物质的四点提醒
（1）培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。
①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
（2）对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。
（3）微生物需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。
（4）微生物需要量最大的是碳源。能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。
1.（2024·浙江温州期末）关于微生物的营养，下列说法正确的是（　　）
A.同一种物质不可能既作为碳源又作为氮源
B.凡是碳源都能提供能量
C.除水以外的无机物仅提供无机盐
D.无机氮源也可能提供能量
2.甲、乙、丙为三种微生物，下表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（　　）
项目 粉状 硫10 g K2HPO4 4 g FeSO4 0.5 g 蔗糖 10 g （NH4）2SO40.4 g H2O 100 mL MgSO4 9.25 g CaCl2 0.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
注：“＋”表示培养基中加入了这种物质，“－”表示培养基中没有加入这种物质。
A.甲、乙、丙都是异养型微生物
B.甲、乙都是自养型微生物，丙是异养型微生物
C.甲是异养型微生物，乙是固氮微生物，丙是自养型微生物
D.甲是固氮微生物，乙是自养型微生物，丙是异养型微生物
知识点（二）　灭菌和无菌操作技术可以排除非目标微生物的干扰
1.灭菌和无菌操作的原因
（1）在培养过程中，必须始终保证微生物培养物的种类单一，防止　　　　　　　　　混入。
（2）保证　　　　　　　　　无菌是获得微生物“纯”培养物的基础。
（3）避免操作者自身被微生物感染。
2.实验器具与培养基灭菌
3.较高温度下会分解的化合物的灭菌和使用过的器皿、废弃物的处理
（1）较高温度下会分解的化合物的灭菌
（2）使用过的器皿、废弃物的处理：所有使用过的器皿、废弃物等必须先经过　　　　　后再洗涤或倾倒。
4.接种过程中的灭菌和无菌操作
（1）接种工具的灭菌
（2）瓶口或试管口的灭菌：接种过程中，打开塞子后和塞上塞子前都要将　　　　　　　在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
（3）接种时要靠近酒精灯的火焰，以减少空气中微生物　　　　　　　的可能性。
5.判断下列相关表述的正误
（1）微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种。（　　）
（2）通过消毒不能杀死物体内所有的微生物。（　　）
（3）灼烧法灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具。（　　）
（4）波长在256～266 nm的紫外线可使菌体的蛋白质和核酸变性，有很强的杀菌作用。（　　）
（5）在使用涂布器接种时，应该将涂布器在酒精灯的火焰上进行灼烧，然后立即进行涂布，以防止其他微生物进入。（　　）
探讨一　分析无菌操作
1.在培养某种微生物时，防止其他微生物混入，保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术，称为无菌技术。
（1）培养基、双手和接种环分别采用什么方法进行灭菌或消毒处理？
（2）培养工作结束后，培养基等废弃物能否直接倾倒，为什么？
（3）接种时为什么要靠近酒精灯的火焰？
探讨二　巴氏消毒法的分析
2.市售的牛奶中有部分是采用巴氏消毒法杀菌的，通常称为“巴氏杀菌乳”（如图）。这种牛奶一般来说储存时间较短，其原因是什么？
灭菌、消毒与防腐的比较
1.（2024·浙江嘉兴高二联考期中）下列微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中正确的是（　　）
A.煮沸消毒可以杀死所有微生物细胞和一部分芽孢
B.接种操作要在酒精灯火焰附近进行
C.为了保证超净工作台中空气无菌，实验人员在操作时也要打开紫外灯和过滤风
D.加入培养基中的指示剂不需要灭菌
2.（2024·绍兴高二期末）微生物的培养和分离实验通常需要进行高压蒸汽灭菌。下列相关叙述正确的是（　　）
A.实验前，采用高压蒸汽灭菌法对接种环、玻璃刮刀等器具进行灭菌
B.培养基中有尿素时，降低高压蒸汽灭菌的压力与温度即可
C.经高压蒸汽灭菌后的器皿可直接用于微生物实验
D.实验后的培养基不需要进行高压蒸汽灭菌，直接丢弃
知识点（三）　配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基
　
1.目的要求：配制液体培养基和固体培养基。
2.配方（20％马铃薯蔗糖培养基）：去皮　　　丝（或小块）20 g，　　　　2 g，琼脂1.5～2 g，水100 mL（自然pH）。
3.方法步骤
1.下列关于制备用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖斜面培养基的叙述，正确的是（　　）
A.应将琼脂加热溶化后加入马铃薯浸汁中
B.应先将培养基高压蒸汽灭菌再分装到试管中
C.应在高压蒸汽灭菌后将斜面培养基摆成斜面
D.分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/2
2.将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量的蔗糖和琼脂，用蒸馏水定容后灭菌，得到M培养基。下列有关叙述不正确的是（　　）
A.向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，要注意不要让培养基黏附在内壁上
B.培养霉菌时，需要将培养基调至中性偏碱
C.M培养基中的马铃薯浸出液可为微生物提供无机盐
D.将M培养基分装到试管后可以做成斜面培养基，以用于菌种的保存
　
（1）培养基是人们为满足微生物　　　　　或　　　　　　的需求而配制的混合养料。
（2）培养基的营养构成是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　等。
（3）紫外线能杀菌的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
1.（2023·浙江嘉兴联考期中）下列不属于微生物生长所需营养物质的是（　　）
A.琼脂 B.碳源
C.氮源 D.无机盐
2.不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养型微生物营养的描述中，不正确的是（　　）
A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B.碳源物质也是该微生物的能源物质
C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D.水是该微生物的营养要素之一
3.如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是（　　）
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O （CH2O） 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至1 000 mL 0.1万单位
A.根据物理特征划分，该培养基属于液体培养基
B.微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落
C.根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型
D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基
4.（2024·衢州质检）无菌操作是微生物培养过程中的关键环节，下列叙述错误的是（　　）
A.煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，达到消毒目的
B.培养真菌时，在培养基中加入青霉素可抑制某些细菌的生长
C.在酒精灯火焰旁操作可以减少空气中微生物落入培养基的可能性
D.含葡萄糖的培养基需在121 ℃（1 kg/cm2压力）条件下高压蒸汽灭菌20分钟
5.（2024·绍兴高二期末）下列有关生物技术实践实验中的灭菌方法，错误的是（　　）
A.用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌
B.尿素培养基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可
C.含葡萄糖的培养基须在500 g/cm2压力下灭菌30 min
D.接种环在使用的过程中常通过灼烧灭菌
第一节　微生物的培养需要适宜条件
【核心要点·巧突破】
知识点（一）
自主学习
1.（1）①形体微小、肉眼不可见　②目标微生物
（2）其他微生物
2. 生长繁殖　 积累代谢产物　 无机盐　 碳源
氮源　 可溶性　 中性偏碱　 中性偏酸
3.（1） 凝固剂　 快速繁殖　 分离、鉴定、活菌计数
菌种保存　（2） 化学成分　 可重复　 不恒定
生物发酵工业
4.（1）√
（2）√
（3）×　提示：培养异养型微生物时，需要在培养基中加入有机碳。
（4）×　提示：同样条件下，大肠杆菌在液体培养基中的繁殖速度快于在固体培养基中。
（5）√
互动探究
　（1）葡萄糖　氮源　凝固剂　（2）合成　固体　（3）异养型
尿素　（4）提示：作为无机盐为细菌生长提供营养物质，调节pH。
学以致用
1.D　对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源，A错误；CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量，B错误；CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源，C错误；自然界中一些微生物如硝化细菌，可以利用无机氮源合成细胞物质，同时通过氧化无机氮源获得生长所需能量，D正确。
2.D　由题表数据可知，Ⅰ是无氮培养基，只有能固氮的微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅱ是不含碳源的培养基，只有自养型微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅲ培养基含有氮源和碳源，营养成分全面，适合多种微生物生长繁殖。再结合题干分析可知，甲是固氮微生物、乙是自养型微生物、丙是异养型微生物，D正确。
知识点（二）
自主学习
1.（1）其他微生物　（2）器具与培养基
2. 实验器具　 培养基　 高压灭菌锅　 耐热性
15～20　 超净工作台　 烘干　 过滤风
3.（1）G6玻璃砂漏斗　温度　压力　（2）高压灭菌
4.（1） 灼烧　 冷却　 酒精　 灼烧　 冷却
（2）瓶口或试管口　（3）落入培养基
5.（1）√
（2）√
（3）×　提示：涂布器也可以灼烧法灭菌。
（4）√
（5）×　提示：在使用涂布器接种时，应将涂布器浸泡在75％的酒精中，接种前将表面残留着少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧，冷却后用于涂布。
互动探究
1.（1）提示：高压蒸汽灭菌、酒精擦拭、火焰灼烧。
（2）提示：不能，因为实验使用过的废弃物对环境有不确定性的影响，必须先经过高压灭菌后再倾倒。
（3）提示：利用燃烧产生的上升气流减少空气中微生物落入培养基的可能性。
2.提示：巴氏消毒法是采用相对温和的加热方式进行的消毒方法，该方法仅仅杀死物体表面或内部的一部分微生物（不包括芽孢和孢子），因此长时间储存时，微生物有可能会慢慢繁殖起来，改变牛奶的品质，甚至产生有毒有害物质，危害健康。
学以致用
1.B　煮沸消毒指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物，A错误；酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了无菌操作，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，B正确；紫外线对人有伤害，在超净工作台操作时可以打开过滤风，但不能打开紫外灯，C错误；指示剂中可能混有微生物，故加入培养基前需灭菌，D错误。
2.A　无菌操作的首要条件是各种器皿必须是无菌的，如各种大小的培养皿、试管、三角瓶、取样器的头、移液管、三角刮刀、接种环、镊子等。这些用具通常用高压蒸汽灭菌法灭菌，A正确；尿素受热会分解，只能用G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌，但玻璃砂漏斗使用前也要在121 ℃下高压蒸汽灭菌，B错误；通常要将高压蒸汽灭菌后的实验器皿放入60～80 ℃的烘箱中烘干后再使用，C错误；为防止污染环境，实验后的培养基需要高压灭菌后再丢弃，D错误。
知识点（三）
自主学习
2.马铃薯　蔗糖
3. 用量　 称量　 煮沸　 过滤　 琼脂　 加热溶化
三角瓶　 高压蒸汽　 缝隙　⑩普通棉花　 污染
学以致用
1.C　应将琼脂加入马铃薯浸汁后再加热溶化，A错误；应先将培养基分装到试管中再进行高压蒸汽灭菌，B错误；分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/4，D错误。
2.B　向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，要注意不要让培养基黏附在器皿内壁上，以防止引起杂菌污染，A正确；霉菌通常要求在中性偏酸的环境中生长，B错误；斜面培养基常用来进行短期的菌种保存，D正确。
【过程评价·勤检测】
网络构建
　（1）生长繁殖　积累代谢产物
（2）水、无机盐、碳源、氮源、生长因子
（3）紫外线可以使菌体的蛋白质和核酸变性
课堂演练
1.A　微生物生长所需要的营养物质主要有碳源、氮源、水、无机盐、特殊营养物质等。琼脂是凝固剂，不是微生物生长所需的营养物质。
2.B　CO2为无机物，只能做碳源而不能作为能源物质。
3.D　液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）可形成固体培养基，题表所示的培养基配方中没有加凝固剂，因此属于液体培养基，A正确，D错误；微生物在固体培养基表面生长，形成肉眼可见的菌落，B正确；该培养基中的（CH2O）可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C正确。
4.D　葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此对含葡萄糖的培养基，应采用适当降低温度、压力（112 ℃，500 g/cm2）以及延长时间（30 min）的高压灭菌方法灭菌，D错误。
5.B　尿素需用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌后加入经高压蒸汽灭菌过的培养基中，B错误。
8 / 8(共77张PPT)
第一节　微生物的培养需要适宜条件
导
学 聚
焦 1.概述培养基的成分和类型。
2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。
3.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不
被微生物污染的技术
核心要点·巧突破
01
过程评价·勤检测
02
课时训练·提素能
03
目录
CONTENTS
核心要点·巧突破
01
精准出击 高效学习
知识点（一）　培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
1. 微生物与无菌技术
（1）微生物
①定义：是人们对所有 的生物的
统称。
形体微小、肉眼不可见　
②微生物培养的基本要求：一方面需要提供其适宜的生长环
境，另一方面需要除掉与 具有竞争和寄生关
系的异种微生物。
目标微生物　
（2）无菌技术：在培养某种微生物时，防止 混
入，保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术。
其他微生物　
2. 培养基的概念、主要成分及理化特性
小提醒：（1）生长因子是指在培养基中有针对性地添加的某些特
定的维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶等有机化合物。
（2）微生物能量来源不同，自养型微生物利用光能或化学反应释
放的能量；异养型微生物利用培养基中的有机物。
3. 培养基的类型
（1）
（2）
小提醒：固体培养基表面的微生物生长速度比液体培养基中慢的原
因是细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速
度相对较慢。
4. 判断下列相关表述的正误
（1）配制培养基时要考虑不同微生物的代谢特性。 （　√　）
（2）培养基的主要成分为水、碳源、氮源、无机盐和生长因子
等，此外还需要满足微生物生长对pH等的要求。
（　√　）
（3）培养异养型微生物时，培养基中需要加入无机碳。
（　×　）
提示：培养异养型微生物时，需要在培养基中加入有机碳。
√
√
×
（4）同样条件下，大肠杆菌在液体培养基和固体培养基中的繁殖
速度相同。 （　×　）
提示：同样条件下，大肠杆菌在液体培养基中的繁殖速度快
于在固体培养基中。
（5）天然培养基成本较低，可用于大规模的生物发酵工业。
（　√　）
×
√
探讨　分析微生物培养基的营养成分和类型
　下表为微生物的培养基配方，完成下列问题：
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7
H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000
mL
（1）培养基中的碳源主要是 ，尿素主要为微生物的生长
提供 ，琼脂的作用是 。
（2）从化学成分来看，该培养基属于 培养基；从物理性质
来看，该培养基属于 培养基。
（3）该培养基可用来培养 （填“自养型”或“异养
型”）微生物。若要培养圆褐固氮菌，可除去的的成分是
。
（4）培养基的KH2PO4及Na2HPO4的作用是什么？
提示：作为无机盐为细菌生长提供营养物质，调节pH。
葡萄糖　
氮源　
凝固剂　
合成　
固体　
异养型　
尿
素　
1. 培养基营养成分
的作用和主要来源
2. 有关培养基营养物质的四点提醒
（1）培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。
①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
（2）对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又
是氮源。
（3）微生物需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要
的酶或合成能力有限。
（4）微生物需要量最大的是碳源。能合成含碳有机物的是自养
型，反之则为异养型。
1. （2024·浙江温州期末）关于微生物的营养，下列说法正确的是
（　　）
A. 同一种物质不可能既作为碳源又作为氮源
B. 凡是碳源都能提供能量
C. 除水以外的无机物仅提供无机盐
D. 无机氮源也可能提供能量
解析：　对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源
又是氮源，A错误；CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能
量，B错误；CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源，C错
误；自然界中一些微生物如硝化细菌，可以利用无机氮源合成细胞
物质，同时通过氧化无机氮源获得生长所需能量，D正确。
2. 甲、乙、丙为三种微生物，下表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三
种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常
生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都
不能。下列说法正确的是（　　）
项目 粉状 硫10 g K2HP
O44 g FeSO4 0.5 g 蔗糖 10 g （NH4）2SO40.4 g H2O 100 L MgSO
49.25 g CaCl2
0.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
注：“＋”表示培养基中加入了这种物质，“－”表示培养基中没
有加入这种物质。
A. 甲、乙、丙都是异养型微生物
B. 甲、乙都是自养型微生物，丙是异养型微生物
C. 甲是异养型微生物，乙是固氮微生物，丙是自养型微生物
D. 甲是固氮微生物，乙是自养型微生物，丙是异养型微生物
解析：　由题表数据可知，Ⅰ是无氮培养基，只有能固氮的微生
物才能在其上正常生长繁殖；Ⅱ是不含碳源的培养基，只有自养型
微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅲ培养基含有氮源和碳源，营养
成分全面，适合多种微生物生长繁殖。再结合题干分析可知，甲是
固氮微生物、乙是自养型微生物、丙是异养型微生物，D正确。
知识点（二）　灭菌和无菌操作技术可以排除非目标微生物的干扰
1. 灭菌和无菌操作的原因
（1）在培养过程中，必须始终保证微生物培养物的种类单一，防
止 混入。
（2）保证 无菌是获得微生物“纯”培养物的
基础。
（3）避免操作者自身被微生物感染。
其他微生物　
器具与培养基　
2. 实验器具与培养基灭菌
3. 较高温度下会分解的化合物的灭菌和使用过的器皿、废弃物的处理
（1）较高温度下会分解的化合物的灭菌
（2）使用过的器皿、废弃物的处理：所有使用过的器皿、废弃物
等必须先经过 后再洗涤或倾倒。
高压灭菌　
4. 接种过程中的灭菌和无菌操作
（1）接种工具的灭菌
（2）瓶口或试管口的灭菌：接种过程中，打开塞子后和塞上塞子
前都要将 在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
（3）接种时要靠近酒精灯的火焰，以减少空气中微生物
的可能性。
瓶口或试管口　
落入培
养基　
5. 判断下列相关表述的正误
（1）微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种。
（　√　）
（2）通过消毒不能杀死物体内所有的微生物。 （　√　）
（3）灼烧法灭菌的对象是金属器具，不可以是玻璃器具。
（　×　）
提示：涂布器也可以灼烧法灭菌。
（4）波长在256～266 nm的紫外线可使菌体的蛋白质和核酸变性，
有很强的杀菌作用。 （　√　）
√
√
×
√
（5）在使用涂布器接种时，应该将涂布器在酒精灯的火焰上进行
灼烧，然后立即进行涂布，以防止其他微生物进入。
（　×　）
提示：在使用涂布器接种时，应将涂布器浸泡在75％的酒精
中，接种前将表面残留着少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上
灼烧，冷却后用于涂布。
×
探讨一　分析无菌操作
1. 在培养某种微生物时，防止其他微生物混入，保持无菌物品及无菌
区域不被污染的操作技术，称为无菌技术。
（1）培养基、双手和接种环分别采用什么方法进行灭菌或消毒
处理？
提示：高压蒸汽灭菌、酒精擦拭、火焰灼烧。
（2）培养工作结束后，培养基等废弃物能否直接倾倒，为什么？
提示：不能，因为实验使用过的废弃物对环境有不确定性的
影响，必须先经过高压灭菌后再倾倒。
（3）接种时为什么要靠近酒精灯的火焰？
提示：利用燃烧产生的上升气流减少空气中微生物落入培养
基的可能性。
探讨二　巴氏消毒法的分析
2. 市售的牛奶中有部分是采用巴氏消毒法杀菌的，通常称为“巴
氏杀菌乳”（如图）。这种牛奶一般来说储存时间较短，其原
因是什么？
提示：巴氏消毒法是采用相对温和的加热方式进行的消毒方法，该
方法仅仅杀死物体表面或内部的一部分微生物（不包括芽孢和孢
子），因此长时间储存时，微生物有可能会慢慢繁殖起来，改变牛
奶的品质，甚至产生有毒有害物质，危害健康。
灭菌、消毒与防腐的比较
1. （2024·浙江嘉兴高二联考期中）下列微生物培养过程中，要十分
重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，
防止杂菌污染。请分析下列操作中正确的是（　　）
A. 煮沸消毒可以杀死所有微生物细胞和一部分芽孢
B. 接种操作要在酒精灯火焰附近进行
C. 为了保证超净工作台中空气无菌，实验人员在操作时也要打开紫
外灯和过滤风
D. 加入培养基中的指示剂不需要灭菌
解析：　煮沸消毒指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀
死物体表面或内部一部分微生物，A错误；酒精灯火焰附近存在一
个无菌区，为了无菌操作，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，B
正确；紫外线对人有伤害，在超净工作台操作时可以打开过滤风，
但不能打开紫外灯，C错误；指示剂中可能混有微生物，故加入培
养基前需灭菌，D错误。
2. （2024·绍兴高二期末）微生物的培养和分离实验通常需要进行高
压蒸汽灭菌。下列相关叙述正确的是（　　）
A. 实验前，采用高压蒸汽灭菌法对接种环、玻璃刮刀等器具进行灭
菌
B. 培养基中有尿素时，降低高压蒸汽灭菌的压力与温度即可
C. 经高压蒸汽灭菌后的器皿可直接用于微生物实验
D. 实验后的培养基不需要进行高压蒸汽灭菌，直接丢弃
解析：　无菌操作的首要条件是各种器皿必须是无菌的，如各种
大小的培养皿、试管、三角瓶、取样器的头、移液管、三角刮刀、
接种环、镊子等。这些用具通常用高压蒸汽灭菌法灭菌，A正确；
尿素受热会分解，只能用G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌，但玻璃砂
漏斗使用前也要在121 ℃下高压蒸汽灭菌，B错误；通常要将高压
蒸汽灭菌后的实验器皿放入60～80 ℃的烘箱中烘干后再使用，C错
误；为防止污染环境，实验后的培养基需要高压灭菌后再丢弃，D
错误。
知识点（三）　配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基
1. 目的要求：配制液体培养基和固体培养基。
2. 配方（20％马铃薯蔗糖培养基）：去皮 丝（或小块）20
g， 2 g，琼脂1.5～2 g，水100 mL（自然pH）。
马铃薯　
蔗糖　
3. 方法步骤
1. 下列关于制备用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖斜面培养基的叙述，正
确的是（　　）
A. 应将琼脂加热溶化后加入马铃薯浸汁中
B. 应先将培养基高压蒸汽灭菌再分装到试管中
C. 应在高压蒸汽灭菌后将斜面培养基摆成斜面
D. 分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/2
解析：　应将琼脂加入马铃薯浸汁后再加热溶化，A错误；应先
将培养基分装到试管中再进行高压蒸汽灭菌，B错误；分装时，试
管中培养液的量应约为试管长度的1/4，D错误。
2. 将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。
在马铃薯浸出液中加入一定量的蔗糖和琼脂，用蒸馏水定容后灭
菌，得到M培养基。下列有关叙述不正确的是（　　）
A. 向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，要注意不要让培养基黏附
在内壁上
B. 培养霉菌时，需要将培养基调至中性偏碱
C. M培养基中的马铃薯浸出液可为微生物提供无机盐
D. 将M培养基分装到试管后可以做成斜面培养基，以用于菌种的保
存
解析：　向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，要注意不要让培
养基黏附在器皿内壁上，以防止引起杂菌污染，A正确；霉菌通常
要求在中性偏酸的环境中生长，B错误；斜面培养基常用来进行短
期的菌种保存，D正确。
过程评价·勤检测
02
反馈效果 筑牢基础
（1）培养基是人们为满足微生物 或
的需求而配制的混合养料。
（2）培养基的营养构成是 等。
（3）紫外线能杀菌的原理是
。
生长繁殖　
积累代谢产物　
水、无机盐、碳源、氮源、生长因子　
紫外线可以使菌体的蛋白质和核酸变
性　
1. （2023·浙江嘉兴联考期中）下列不属于微生物生长所需营养物质
的是（　　）
A. 琼脂 B. 碳源
C. 氮源 D. 无机盐
解析：　微生物生长所需要的营养物质主要有碳源、氮源、水、
无机盐、特殊营养物质等。琼脂是凝固剂，不是微生物生长所需的
营养物质。
2. 不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为
唯一碳源的自养型微生物营养的描述中，不正确的是（　　）
A. 氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B. 碳源物质也是该微生物的能源物质
C. 无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D. 水是该微生物的营养要素之一
解析：　CO2为无机物，只能做碳源而不能作为能源物质。
3. 如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是（　　）
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O （CH2O） 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至1
000 mL 0.1万单
位
A. 根据物理特征划分，该培养基属于液体培养基
B. 微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落
C. 根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型
是异养型
D. 固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基
解析：　液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）可形成固体培养
基，题表所示的培养基配方中没有加凝固剂，因此属于液体培养
基，A正确，D错误；微生物在固体培养基表面生长，形成肉眼可
见的菌落，B正确；该培养基中的（CH2O）可作为有机碳源，因
此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C正确。
4. （2024·衢州质检）无菌操作是微生物培养过程中的关键环节，下
列叙述错误的是（　　）
A. 煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，达到消毒目的
B. 培养真菌时，在培养基中加入青霉素可抑制某些细菌的生长
C. 在酒精灯火焰旁操作可以减少空气中微生物落入培养基的可能性
D. 含葡萄糖的培养基需在121 ℃（1 kg/cm2压力）条件下高压蒸汽灭
菌20分钟
解析：　葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此对含葡萄糖的培养
基，应采用适当降低温度、压力（112 ℃，500 g/cm2）以及延长时
间（30 min）的高压灭菌方法灭菌，D错误。
5. （2024·绍兴高二期末）下列有关生物技术实践实验中的灭菌方
法，错误的是（　　）
A. 用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌
B. 尿素培养基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可
C. 含葡萄糖的培养基须在500 g/cm2压力下灭菌30 min
D. 接种环在使用的过程中常通过灼烧灭菌
解析：　尿素需用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌后加入经高压蒸汽灭菌
过的培养基中，B错误。
课时训练·提素能
03
分级练习 巩固提升
知识点一　培养基的成分和类型及配制酵母菌的培养基
1. 下列关于培养基的说法，正确的是（　　）
A. 培养基中含量最高的是碳源
B. 所有培养基中都必须含有生长因子
C. 固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D. 微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落
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解析：　培养基中含量最高的应该是水，A错误；由于自身的缺
陷，有些微生物对培养基成分有特殊的需求，需要在培养基中有针
对性地添加某些特定的维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶等有机化合物
才能生长，这些化合物统称为生长因子，并非所有培养基中都含有
生长因子，B错误；固体培养基中含有凝固剂，即使加入少量水也
无法制成液体培养基，C错误；微生物在固体培养基上生长时，可
以形成肉眼可见的菌落，根据菌落特征可鉴定、筛选不同微生物，
D正确。
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2. 下列关于培养基的叙述，错误的是（　　）
A. 液体培养基常用于大规模快速繁殖某种微生物
B. 固体培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中快
C. 平板固体培养基常用于观察由单个细胞生长繁殖成的菌落
D. 斜面固体培养基常用于菌种保存
解析：　由于细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间
物质交换速度相对较慢，培养基表面的微生物生长速度比在液体培
养基中慢，B错误。
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3. 配制培养基是培养微生物的第一步，下列叙述正确的是（　　）
A. 配制斜面培养基时试管中的液体量为试管长度的1/3
B. 获得纯净培养物的关键是阻止一切微生物生长
C. 制作棉塞不能使用医用脱脂棉
D. 在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上可以继续使用
解析：　配制斜面培养基时试管中的液体量为试管长度的1/4，A
错误；获得纯净培养物的关键是无菌操作，保证目标微生物的生
长，B错误；在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上不能继续使
用，D错误。
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4. 下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源的来源和新陈代谢类型的
描述，其中正确的一组是（　　）
项目 硝化细菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻
能源 NH3 乳酸 N2 光能
碳源 CO2 糖类 糖类 CO2
氮源 NH3 N2 N2
代谢类型 自养需氧型 异养厌氧型 自养需氧型 自养需氧型
A. 硝化细菌与乳酸菌 B. 乳酸菌与根瘤菌
C. 根瘤菌与衣藻 D. 硝化细菌与衣藻
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解析：　硝化细菌能将NH3氧化成亚硝酸和硝酸，并利用该过程
释放的化学能，将二氧化碳和水合成有机物，属于自养需氧型生
物，其氮源和能源都是NH3，碳源是二氧化碳；乳酸菌是异养厌氧
型生物，不能直接利用N2，氮源是硝酸根离子等，碳源和能源为
糖类；根瘤菌是能固氮的异养需氧型生物，进行生命活动所需要的
能量来自糖类等有机物的氧化分解，氮源是N2，碳源和能源是糖
类；衣藻是低等植物，能利用光能进行光合作用制造有机物，属于
自养需氧型生物，其能源是光能，碳源是二氧化碳，氮源是硝酸根
离子等。
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知识点二　灭菌和无菌操作
5. 下列实验用品通常需要进行高压蒸汽灭菌的是（　　）
解析：　接种环和涂布器通常需要进行灼烧灭菌，A、B错误；
酒精灯不需要进行灭菌，C错误；试管需要进行高压蒸汽灭菌，D
正确。
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6. 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是（　　）
A. 高压蒸汽灭菌 B. 紫外灯照射
C. 70％酒精浸泡灭菌 D. 过滤灭菌
解析：　由于尿素受热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用过滤
灭菌法，D正确。
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7. （2024·丽水高二月考）下列有关微生物培养实验中灭菌方法的叙
述，错误的是（　　）
A. 常用高压蒸汽灭菌法对培养基、玻璃器皿进行灭菌
B. 含尿素的培养基需在121 ℃下进行高压蒸汽灭菌
C. 含葡萄糖的培养基可在112 ℃下加热30分钟高压灭菌
D. 接种环和涂布器在使用的过程中常通过灼烧灭菌
解析：　尿素受热会分解，因此常用G6玻璃砂漏斗对尿素进行过
滤除菌，然后在超净工作台内将尿素溶液加到已经灭菌的培养基
中，B错误。
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8. 金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食
物中毒，实验中下列做法错误的是（　　）
A. 对接种环进行灼烧处理
B. 带菌培养基必须经高压灭菌锅灭菌后才能倒掉
C. 带菌培养基必须经加热后才能倒掉
D. 操作者对双手进行酒精处理属于消毒
解析：　带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，简单的加
热达不到灭菌效果，B正确，C错误。
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9. 高压灭菌锅是微生物培养的常用设备。下列关于利用高压灭菌锅进
行灭菌操作的叙述，错误的是（　　）
A. 灭菌前，向锅内加入适量的水，便于产生水蒸气
B. 装锅时，不宜太满太实，利于蒸气透过，提高灭菌效果
C. 灭菌时，需待压力上升到所需压力，再开始计时
D. 灭菌后，需等灭菌锅内温度下降到室温，再打开锅盖
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解析：　灭菌前，先将内层灭菌桶取出，再向锅内加入适量的
水，便于产生水蒸气，水面与三角搁架平齐，A正确；在灭菌桶内
装入待灭菌物品时，不要装得太挤，以免妨碍水蒸气流通而影响灭
菌效果，B正确；灭菌时，需待压力上升到所需压力，再开始计
时，控制热源，按照灭菌所需时间，维持压力，C正确；灭菌后，
需等灭菌锅内温度自然下降到室温，且当压力表的压力降至0时，
打开排气阀，再打开锅盖，D错误。
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10. 将甲、乙、丙和丁四种细菌分别接种到①②③④四种培养液中，
经培养后分别测得它们繁殖一代所需的时间，结果如表所示：
培养液组别 培养液成分 繁殖一代所需时间（分钟） 甲 乙 丙 丁
① 43 100 － －
② 28 40 － －
③ 25 25 80 －
④ － － － 80
注：“－”表示细菌没有生长。
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下列相关分析正确的是（　　）
A. 甲、乙均能在①培养基上生长，且乙增长较快
B. 甲、乙、丙和丁四种细菌，丁代谢类型与蓝细菌相似
C. 四种培养基均需要通过121 ℃高压蒸汽灭菌15 min
D. 氨基酸是甲、乙、丙、丁四种细菌生长的限制条件
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解析：　由表格数据分析可知，甲、乙均能在①培养基上生
长，且甲增长较快，A错误；甲、乙、丙和丁四种细菌，丁在没
有葡萄糖和氨基酸的培养基中生长，属于自养型细菌，代谢类型
与蓝细菌相似，B正确；葡萄糖在115 ℃以上会焦化，①②③培养
基中含有葡萄糖，因此，对于含葡萄糖的培养基采用适当降低温
度、压力（112 ℃，500 g/cm2）以及延长时间（30 min）的高压
灭菌方法灭菌，C错误；由表格数据分析可知，氨基酸是丙细菌
生长的限制条件，D错误。
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11. 请分析下列操作，错误的是（　　）
①煮沸消毒可以杀死微生物的细胞和部分芽孢　②接种操作要在
酒精灯火焰附近进行　③培养基要进行高压蒸汽灭菌　④加入培
养基中的指示剂和染料不需要灭菌　⑤可以对接种室、接种箱、
超净工作台和操作人员进行紫外线消毒，以杀死物体表面或者空
气中的微生物　⑥在接种过程中，试管口、瓶口等易被污染的部
位，也可以通过火焰灼烧来灭菌
A. ①② B. ⑤⑥
C. ③⑤ D. ④⑤
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解析：　指示剂和染料可能混有微生物，故加入培养基前需要
灭菌，④错误；接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用
紫外线消毒，但不能对操作人员进行紫外线消毒，⑤错误。
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12. （2024·杭州高二期末）请回答下列关于配制马铃薯蔗糖培养基的
问题：
（1）配制培养基时通常按“细菌喜荤，霉菌喜素”的原则进行。
配制培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基时，通常需要加入一定
量的蔗糖，其主要作用是 。
提供营养和维持培养基的渗透压
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（2）不同微生物对生存环境的pH要求不同，通常细菌在
的环境中生长良好，霉菌在 的环境中生长良
好，调节酸碱度应在培养基灭菌之 （填“前”或“后”）进行。
中性偏
碱　
中性偏酸　
前　
解析：不同微生物对pH的要求不同，细菌常在中性偏
碱的环境中生长良好；霉菌在中性偏酸的环境中生长良好，
培养基要做到无菌，故调节酸碱度应在高压灭菌之前。
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（4）培养基配制完成后，需转移分装到三角瓶和试管中，为了避
免发生 ，三角瓶口和试管口不能黏有培养基。分装完
成后，三角瓶口和试管口需要加棉塞，制作棉塞所需的棉花
不能用脱脂棉，原因是
（3）配制固体培养基时，通常选择 作为凝固剂。
琼脂　
污染　
脱脂棉易吸水，吸z　
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13. 如表所示为某培养基的配方，请回答下列问题：
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7
H2O 葡萄糖 蒸馏水 青霉
素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至1
000 mL 0.1万
单位
（1）从培养基的物理特征上看，该培养基属于 培养基，判
断的依据是 。
（2）从培养基的化学成分上看，该培养基属于 培养基，判
断的依据是 。
液体　
其成分中不含凝固剂　
合成　
其化学成分完全清楚　
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（3）该培养基中葡萄糖的主要作用是
。
（4）该培养基的氮源为 。
为微生物的生长提供碳源
和能源　
NaNO3　
（5）该培养基中加入0.1万单位的青霉素，其作用可能是
。
抑制细
菌的生长　
（6）从无菌操作的角度分析，向该培养基中加入葡萄糖时，应采
用的方法是


。
可采用已在121 ℃下灭菌的、孔径最小的G6玻
璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后，再在超净工作台内添加
到培养基中；也可采用适当降低温度、压力（112 ℃，500
g/cm2）以及延长时间（30 min）的高压蒸汽灭菌方法灭菌
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