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第38讲 微生物培养技术和应用
目录 01 课标达标练 【题型一】培养基的成分及功能 【题型二】无菌技术 【题型三】微生物的接种 【题型四】微生物的分离和计数 02 能力突破练（新角度+新情境+新考法） 03 高考溯源练（含2025年高考真题）
题型一 培养基的成分及功能
1．下列叙述正确的是（ ）
A．微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质
B．无菌技术包括对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌
C．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌，以免污染环境
D．固体培养基中的琼脂可为微生物的生长提供能量
2．如表为某培养基的配方，下列叙述错误的是（ ）
成分 尿素 葡萄糖 K2HPO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 琼脂 H2O
含量 1.0g 10.0g 1.4g 2.1g 0.2g 15.0g 定容至1000mL
A．从物理性质看，该培养基属于固体培养基
B．该培养基含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质
C．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物生长越有利
D．配制好培养基后，应使用湿热灭菌法进行灭菌
3．某研究团队在实验室培养从雨林土壤中分离的微生物。请根据微生物培养的基本原理，判断以下叙述正确的是（　　）
A．牛肉膏和蛋白胨来源于微生物
B．固体培养基中加入少量水也不能制成液体培养基
C．培养细菌时，一般需要将培养基调至酸性
D．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利
4．科研工作者从药用植物石斛中分离得到一株好氧型枯草芽孢杆菌菌株，通过培养、发酵可用于水产养殖，提高水产动物的生长速度。下列叙述不正确的是（　　）
A．从药用植物石斛中分离的枯草芽孢杆菌具有独特的生物学特性，可能与石斛提供的特殊环境有关
B．对该枯草芽孢杆菌进行培养时，培养基中需添加水、碳源、氮源、无机盐等营养物质
C．枯草芽孢杆菌的染色体主要由DNA和蛋白质组成的，核糖体的形成与核仁有关
D．此枯草芽孢杆菌可能分泌多种酶帮助动物消化饲料，提高饲料转化率，从而促进水产动物生长
5．发酵工程中微生物的培养是一项基础技术。下列叙述错误的是（　　）
A．通常情况下琼脂可作为凝固剂也可作为微生物的碳源
B．蛋白胨主要为细菌的生长提供碳源、氮源和维生素
C．可设置一组未接种的平板倒置培养以检测培养基的灭菌状况
D．平板上长出的一个菌落一般可代表原稀释液中的一个活菌
题型二 无菌技术
6．根腐病是一种真菌引起的疾病，该病会造成根部腐烂，吸收水分和养分的功能逐渐减弱，最后全株死亡，主要表现为整株叶片发黄、枯萎。如需从土壤中分离致病真菌，流程大致如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（　　）
A．为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置
B．倒平板前需要将pH调整到中性或弱碱性
C．高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是100kPa、121℃，15～30min
D．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
7．金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　）
A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D．接种培养Ma时使用的器具需消毒
8．获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。在选择消毒和灭菌方法时，应根据实验的具体情况和需要，综合考虑各种因素，选择最适合的方法。同时，还应注意操作过程中的具体步骤问题。下列相关叙述错误的是（ ）
A．微生物纯培养时，对培养基及培养用具需进行严格灭菌处理
B．在酒精灯火焰附近，不能将培养皿盖完全打开然后倒入培养基
C．玻璃器皿、金属用具可以干热灭菌，培养基一般进行湿热灭菌
D．经巴氏消毒法处理的食物因微生物被彻底消灭，可在常温下长期保存
9．大肠杆菌在伊红-亚甲蓝琼脂培养基（EMB）上会形成有金属光泽的深紫色菌落。利用EMB鉴定冰淇淋中的大肠杆菌是否超标，相关操作正确的是（ ）
A．培养基经干热灭菌后再倒平板 B．冰淇淋原液可不经稀释直接涂布在培养基上
C．EMB上形成的菌落均呈有金属光泽的深紫色 D．使用过的培养基可以直接丢弃
10．消毒和灭菌是两个不同的概念。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物（含芽孢和孢子）；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。下列适用于消毒处理的是（　　）
①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀
A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩
C．①②③④⑤⑥⑧ D．以上全部
题型三 微生物的接种
11．培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（ ）
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤巴氏消毒法
A．⑤②③④① B．①②③④⑤ C．③②①④⑤ D．③②④①⑤
12．防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，下列关于微生物的基本培养技术的叙述，正确的是（　　）
A．培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染
B．倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质
D．接种时，为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
13．分离和纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法。下列叙述错误的是（　　）
A．分离和纯化微生物所用的培养基常用湿热灭菌法进行灭菌
B．用蘸有菌液的接种环划一条线后，再次蘸取菌液继续划线
C．稀释涂布平板法操作时，利用无菌水进行梯度稀释以分散菌种
D．用两种方法分别将同种霉菌接种于同一培养基上，得到的菌落特征基本一致
14．微生物的实验室培养有较高的技术要求，下列操作不符合规范的是（ ）
A．倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置
B．配制培养基时，应先调节pH，再进行灭菌处理
C．浸泡在酒精中的玻璃涂布器无需再灼烧灭菌
D．用平板划线法分离大肠杆菌时，需要多次灼烧接种环
15．空气细菌总数测定主要有自然沉降法和撞击法。自然沉降法是让空气中的细菌自然降至琼脂平板表面，撞击法是将一定量空气以较高的流速喷射撞击到琼脂平板上，空气中的细菌即滞留在琼脂表面，关于自然沉降法和撞击法，下列说法错误的是（　　）
A．用于检测空气细菌总数时，都需对不同方位和高度的空气进行采样
B．撞击法采样不受环境气流影响，对洁净空气中细菌总数的测定比自然沉降法更准确
C．两种方法均可使用牛肉膏蛋白胨培养基培养
D．两种方法取样后在琼脂平板上形成的菌落均为单菌落
题型四 微生物的分离和计数
16．下列关于微生物的选择培养和计数方法，叙述错误的是（ ）
A．菌液的稀释倍数会影响活菌计数法计数结果的准确度
B．不含氮源或碳源的培养基也能用于某些微生物的培养
C．能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长、繁殖的一定是尿素分解菌
D．用营养齐全的培养基在80℃条件下培养栖热菌属于选择培养
17．科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程如图，经步骤③最后一次稀释之后若在 3 个平板上分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，得到的结果是 39、38、37。下列叙述正确的是（　　）

A．步骤②振荡 20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中
B．步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径与菌落直径比值较小的菌落培养
C．步骤⑤中的接种方法为平板划线法，3 次划线时需要对接种环灼烧 3 次
D．每克土样中的活菌数为 3.8×104个，该法统计的结果往往比实际值偏低
18．研究发现，某些昆虫的肠道内存在 PE（一种合成塑料）降解菌。实验小组利用如图的流程从昆虫的肠道中筛选能够降解 PE 的菌株，下列有关说法中错误的是（ ）
A．选择扩大培养的培养基中应加入 PE 作为唯一碳源
B．选择扩大培养的目的是增大 PE 降解菌的相对浓度
C．划线纯化不仅可以分离菌株还可以统计菌株的数量
D．划线纯化时每次划线开始前和结束后都要灼烧灭菌
19．某种含氮有机物的除草剂，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。其在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤破坏生态环境。为修复被破坏的生态环境，按下图选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是（　　）
A．未使用该除草剂的农田中一定不存在能降解该除草剂的细菌
B．图中Ⅱ划线5个区域，接种环需要灼烧灭菌5次
C．图中接种方法为平板划线法，可对细菌进行计数
D．有透明圈的菌落能够利用除草剂中的氮源，应扩大培养
20．在抗生素大规模发酵生产前，需对接种的菌种进行分离、纯化和鉴定，其操作流程如下图所示，为鉴定青霉素生产菌产抗生素的能力，培养皿丙中需预先涂布（ ）
A．生理盐水 B．大肠杆菌 C．青霉素 D．青霉素生产菌
1．（以根瘤菌为情境）根瘤菌是最早用于生物肥料研发的微生物，其菌肥生产需经菌种选育、种子液制备、发酵罐发酵、质量检测等流程。下列说法正确的是（　　）
A．菌种选育时，需用含碳源、氮源等营养的培养基进行筛选
B．在质量检测中的活菌计数时，可采用涂布平板法进行接种
C．发酵罐发酵条件不同，仅影响代谢产物含量不影响其种类
D．田间应用时，根瘤菌主要通过产生有机酸来增加土壤肥力
2．（2025·陕西西安·一模）关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法错误的是（　　）
A．取样时要选择表层土，取土样的铁铲和取样纸袋要进行灭菌处理
B．本实验中使用的平板较多，需要在各培养皿底上做好标记避免混淆
C．利用显微镜直接计数结果通常较稀释涂布平板法进行计数的结果偏高
D．若涂布0.2mL稀释103倍的培养液，获得菌落平均值为58，则每克土样中尿素分解菌数为2.9×105个
3．（2025·湖南永州·一模）某同学欲用市场售卖的泡菜汁进行耐酸的乳酸杆菌分离或计数，下列操作正确的是（ ）
A．将泡菜汁直接涂布于固体培养基，培养一段时间便可得到单菌落
B．可用平板划线法对乳酸杆菌进行分离和计数
C．在固体培养基中加入碳酸钙，挑取透明溶钙圈最大的菌落即为目标菌
D．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素并提供无氧的环境
4．（2025·福建漳州·一模）科研小组用双层平板法测定某污水样本中噬菌体的数量，操作流程是：①先铺2%琼脂于培养皿底层，形成底层琼脂培养基；②将敏感指示菌和待测污水样本混合液，加入已熔化并降温至45～48℃的1%琼脂培养基中，迅速倾注于底层培养基上，形成上层培养基；③倒置培养一段时间后，计数噬菌斑。双层平板如下图所示。下列叙述正确的是（　　）

A．倒平板前需对培养基和培养皿进行干热灭菌
B．可用酵母菌作为敏感指示菌对T2噬菌体进行计数
C．上层培养基冷却至45～48℃，主要目的是防止底层培养基液化
D．上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于计数
5．（2025·河北秦皇岛·模拟预测）为探究某种细菌A抑制真菌B生长的原理，实验组将细菌A接种在A1平板上，B1平板中央接种直径为0.5cm的真菌B菌落，把两个培养皿对扣，两平板上菌株无接触，放在适宜环境中培养5d，菌体生长情况如图中甲组所示。下列叙述正确的是（　　）
A．接种前需对培养基和培养皿通过干热法进行灭菌
B．需将含有细菌A的菌液进行稀释后涂布在A1平板上
C．乙组为对照组，且A2平板上接种的是无菌水
D．细菌A通过与真菌B竞争营养物质抑制其生长
6．（2025·湖南长沙·一模）科研人员先在12个固体培养基上各涂以数目相等（约5×104个）的对T1噬菌体敏感的大肠杆菌，经5h培养后，平板上长出大量的微菌落（约5100个细胞/菌落）。取其中6个（A组）直接喷上T1噬菌体，另6个（B组）则先用灭菌后的涂布器把平板上的微菌落重新均匀涂布一遍，然后喷上等量T1噬菌体。培养后计算这两组平板上形成的抗T1噬菌体的菌落数。结果发现，A组长出28个菌落，B组长出353个菌落。下列说法正确的是（ ）
A．该实验通过等比稀释的操作对微菌落进行计数
B．B组中所使用的培养基为选择培养基
C．B组的涂布使单个抗T1噬菌体自发突变大肠杆菌形成一个菌落的概率增加
D．该实验证明重新涂布后再喷T1噬菌体导致了抗性突变的大量发生
7．（以小龙虾为情境）小龙虾因肉味鲜美而广受欢迎。为提高小龙虾虾壳废弃物中甲壳素[分子式为 的利用率，某小组欲从土壤中筛选出能高效降解甲壳素的菌株。鉴别培养基可用于区分不同类型的微生物。下列相关叙述正确的是（　　）
A．土壤取样时需在小龙虾虾壳堆积较多的土壤中挖取表层土
B．所用鉴别培养基需以小龙虾虾壳粉作为唯一的碳源和氮源
C．每隔24小时计数一次，以菌落数目稳定时的记录作为结果
D．实验时需注意无菌操作，纯化后的菌种可在室温下长期保存
8．（2025·山东青岛·三模）随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。下列说法正确的是（　　）

A．诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，选择透明圈大的即为目的菌株
B．可使用紫外线进行诱变，无需筛选即可得到产纤维素酶高的菌种
C．能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株一定是纤维素分解菌
D．富集培养应使用液体培养基，目的是能得到更多能产纤维素酶的菌株
9．（2025·云南丽江·一模）下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（　　）
A．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂
B．⑨计数得到的细菌数与用显微镜直接计数法得到的细菌数相比较多
C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求
D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌
10．（2025·山东聊城·三模）研究人员欲筛选对抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物以降解餐余垃圾，进行的操作如图所示。下列叙述错误的是（　　）
A．餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行高压蒸汽灭菌处理
B．可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种在X培养基上
C．X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是不含琼脂的液体培养基
D．图中降解淀粉最高效的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型
1．（2025·广西·高考真题）利用微生物分解厨余垃圾可实现资源的再利用。下列说法错误的是（　　）
A．厨余垃圾分解过程产生的热量，会影响分解效率
B．对组成复杂的厨余垃圾再分类，可提高利用效率
C．厨余垃圾中的淀粉，可作为微生物的碳源和氮源
D．含盐量高的厨余垃圾，可选用耐高盐的微生物分解
2．（2025·贵州·高考真题）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　）
A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D．接种培养Ma时使用的器具需消毒
3．（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（ ）
A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数
B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高
C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种
D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
4．（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　）
A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数
B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照
C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸
D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质
5．（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（ ）
A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌
B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布
C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存
6．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（ ）
组别 压强 纤维素 淀粉 菌落
① 常压 - + -
② 常压 + - -
③ 高压 - + -
④ 高压 + - +
注： “+”表示有；“一”表示无
A．可用平板划线法对该菌计数
B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌
C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长
D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长
7．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（ ）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
8．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长
④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
9．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（ ）
A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌
B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋
C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理
D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色
10．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ）
A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落
B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验
C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙
D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
11．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（ ）
A．镍是组成脲酶的重要元素
B．镍能提高尿素水解反应的活化能
C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖
D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
12．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　）
A．X→Y→Z B．Z→Y→X C．Y→X→Z D．Z→X→Y
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第38讲 微生物培养技术和应用
目录 01 课标达标练 【题型一】培养基的成分及功能 【题型二】无菌技术 【题型三】微生物的接种 【题型四】微生物的分离和计数 02 能力突破练（新角度+新情境+新考法） 03 高考溯源练（含2025年高考真题）
题型一 培养基的成分及功能
1．下列叙述正确的是（ ）
A．微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质
B．无菌技术包括对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌
C．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌，以免污染环境
D．固体培养基中的琼脂可为微生物的生长提供能量
【答案】C
【解析】A、微生物培养基不一定都需添加特殊营养物质，如自养微生物可利用CO 作为碳源，无需额外加入碳源，且并非所有微生物均需特殊营养，有些自身能产生，A错误；
B、无菌技术中，操作者的手和衣着仅需消毒（如酒精擦拭），B错误；
C、使用后的培养基可能携带大量微生物，丢弃前必须灭菌以防止污染环境，C正确；
D、琼脂在固体培养基中仅作为凝固剂，无法被微生物分解利用，故不提供能量，D错误。
故选C。
2．如表为某培养基的配方，下列叙述错误的是（ ）
成分 尿素 葡萄糖 K2HPO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 琼脂 H2O
含量 1.0g 10.0g 1.4g 2.1g 0.2g 15.0g 定容至1000mL
A．从物理性质看，该培养基属于固体培养基
B．该培养基含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质
C．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物生长越有利
D．配制好培养基后，应使用湿热灭菌法进行灭菌
【答案】C
【解析】A、培养基中含有琼脂，琼脂作为凝固剂使培养基呈固态，因此该培养基属于固体培养基，A正确；
B、尿素提供氮源，葡萄糖提供碳源，K2HPO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O等为无机盐，水为溶剂，故培养基包含水、碳源、氮源和无机盐，B正确；
C、营养物质浓度过高会导致微生物细胞渗透失水，抑制其生长，并非浓度越高越有利，C错误；
D、培养基灭菌需用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌），以彻底杀灭微生物，D正确。
故选C。
3．某研究团队在实验室培养从雨林土壤中分离的微生物。请根据微生物培养的基本原理，判断以下叙述正确的是（　　）
A．牛肉膏和蛋白胨来源于微生物
B．固体培养基中加入少量水也不能制成液体培养基
C．培养细菌时，一般需要将培养基调至酸性
D．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利
【答案】B
【解析】A、牛肉膏由牛肉加工得到，蛋白胨是蛋白质经酶解产生，来源于动植物而非微生物，A错误；
B、固体培养基因含琼脂，加水无法溶解琼脂，无法转变为液体培养基，B正确；
C、细菌适宜中性或弱碱性环境，酸性条件常用于培养真菌（如霉菌），C错误；
D、营养浓度过高会导致微生物渗透失水，抑制生长，D错误。
故选B。
4．科研工作者从药用植物石斛中分离得到一株好氧型枯草芽孢杆菌菌株，通过培养、发酵可用于水产养殖，提高水产动物的生长速度。下列叙述不正确的是（　　）
A．从药用植物石斛中分离的枯草芽孢杆菌具有独特的生物学特性，可能与石斛提供的特殊环境有关
B．对该枯草芽孢杆菌进行培养时，培养基中需添加水、碳源、氮源、无机盐等营养物质
C．枯草芽孢杆菌的染色体主要由DNA和蛋白质组成的，核糖体的形成与核仁有关
D．此枯草芽孢杆菌可能分泌多种酶帮助动物消化饲料，提高饲料转化率，从而促进水产动物生长
【答案】C
【解析】A、石斛生长环境特殊，其周围微生物可能因适应特殊化学环境进化出独特生物学特性，所以从石斛中分离枯草芽孢杆菌可能有独特优势，A正确；
B、对微生物进行培养时，通常需提供水、碳源、氮源、无机盐等营养物质满足其生长代谢，B正确；
C、枯草芽孢杆菌为原核生物，无染色体结构，其遗传物质为环状DNA，且原核细胞无核仁，核糖体形成与核仁无关，C错误；
D、枯草芽孢杆菌可能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，帮助水产动物消化饲料，提高饲料利用率，从而促进水产动物生长，D正确。
故选C。
5．发酵工程中微生物的培养是一项基础技术。下列叙述错误的是（　　）
A．通常情况下琼脂可作为凝固剂也可作为微生物的碳源
B．蛋白胨主要为细菌的生长提供碳源、氮源和维生素
C．可设置一组未接种的平板倒置培养以检测培养基的灭菌状况
D．平板上长出的一个菌落一般可代表原稀释液中的一个活菌
【答案】A
【解析】A、琼脂主要成分为多糖，但绝大多数微生物无法分解利用琼脂，因此琼脂仅作为凝固剂，不能作为碳源，A错误；
B、蛋白胨是由动植物蛋白经酶解或酸解制成的混合物，含有多种氨基酸、维生素和含氮化合物，可为细菌生长提供碳源（氨基酸中的碳）、氮源（氨基酸中的氮）和维生素，B正确；
C、未接种的平板培养可检测培养基灭菌是否彻底，若无菌落则灭菌合格，若有菌落说明灭菌失败，C正确；
D、稀释涂布平板法中，在稀释度足够时，一个菌落通常由一个活菌繁殖形成，D正确。
故选A。
题型二 无菌技术
6．根腐病是一种真菌引起的疾病，该病会造成根部腐烂，吸收水分和养分的功能逐渐减弱，最后全株死亡，主要表现为整株叶片发黄、枯萎。如需从土壤中分离致病真菌，流程大致如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（　　）
A．为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置
B．倒平板前需要将pH调整到中性或弱碱性
C．高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是100kPa、121℃，15～30min
D．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
【答案】C
【解析】A、灭菌后的培养基需冷却至50℃左右再倒入培养皿，避免高温导致培养皿内壁产生冷凝水过多，A错误；
B、真菌适宜在酸性环境中生长，而中性或弱碱性培养基常用于培养细菌，要分离真菌，需将pH调至酸性，B错误；
C、高压蒸汽灭菌的标准条件为100kPa、121℃、灭菌15～30min，可有效杀灭包括芽孢在内的微生物，C正确；
D、连续划线时，应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌种，获得单菌落，D错误。
故选C。
7．金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　）
A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D．接种培养Ma时使用的器具需消毒
【答案】D
【解析】A、金龟子绿僵菌（Ma）作为昆虫病原真菌，可通过寄生导致害虫死亡，符合微生物杀虫剂的特点，可用于生物防治，A正确；
B、僵化死亡的昆虫体内含有大量Ma菌体，因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma的合理方法，B正确；
C、稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微生物，适用于分离样品中的Ma，C正确；
D、微生物培养中，接种环等直接接触菌种的器具需严格灭菌（如灼烧灭菌），而非仅消毒，消毒无法彻底杀灭微生物的芽孢或孢子，D错误。
故选D。
8．获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。在选择消毒和灭菌方法时，应根据实验的具体情况和需要，综合考虑各种因素，选择最适合的方法。同时，还应注意操作过程中的具体步骤问题。下列相关叙述错误的是（ ）
A．微生物纯培养时，对培养基及培养用具需进行严格灭菌处理
B．在酒精灯火焰附近，不能将培养皿盖完全打开然后倒入培养基
C．玻璃器皿、金属用具可以干热灭菌，培养基一般进行湿热灭菌
D．经巴氏消毒法处理的食物因微生物被彻底消灭，可在常温下长期保存
【答案】D
【解析】A、微生物纯培养时，培养基需灭菌以防止杂菌干扰，培养用具（如培养皿、接种环）也需灭菌处理，A正确；
B、倒平板时应在酒精灯火焰附近操作，仅打开培养皿盖一条缝隙倒入培养基，避免杂菌污染，B正确；
C、玻璃器皿和金属用具耐高温且需保持干燥，适用干热灭菌；培养基含水分且需彻底灭菌，适用湿热灭菌（高压蒸汽灭菌），C正确；
D、巴氏消毒法通过较低温度处理杀死部分微生物（尤其是致病菌），但未彻底消灭所有微生物（如芽孢），故处理后食物仍需低温保存，D错误。
故选D。
9．大肠杆菌在伊红-亚甲蓝琼脂培养基（EMB）上会形成有金属光泽的深紫色菌落。利用EMB鉴定冰淇淋中的大肠杆菌是否超标，相关操作正确的是（ ）
A．培养基经干热灭菌后再倒平板 B．冰淇淋原液可不经稀释直接涂布在培养基上
C．EMB上形成的菌落均呈有金属光泽的深紫色 D．使用过的培养基可以直接丢弃
【答案】B
【解析】A、培养基需进行湿热灭菌，A错误；
B、一般来说，食品中的大肠杆菌量不至于多到需要稀释再涂布，B正确；
C、EMB是鉴别培养基，只有大肠杆菌的菌落呈现深紫色金属光泽，不是只有大肠杆菌生长，C错误；
D、使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免环境污染，D错误。
故选B。
10．消毒和灭菌是两个不同的概念。灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物（含芽孢和孢子）；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。下列适用于消毒处理的是（　　）
①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀
A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩
C．①②③④⑤⑥⑧ D．以上全部
【答案】A
【解析】①皮肤应该进行消毒处理，①正确；
②饮用水应该进行消毒处理，②正确；
③牛奶应该进行消毒处理，一般采用巴氏消毒法，③正确；
④注射器需要进行灭菌处理，④错误；
⑤培养皿需要进行灭菌处理，一般采用干热灭菌，⑤错误；
⑥接种环需要进行灭菌处理，一般采用灼烧灭菌，⑥错误；
⑦培养基需要进行灭菌处理，一般采用高压蒸汽灭菌，⑦错误；
⑧果汁需要进行消毒处理，⑧正确；
⑨酱油需要进行消毒处理，⑨正确；
⑩手术刀应该进行灭菌处理，⑩错误。
题型三 微生物的接种
11．培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（ ）
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤巴氏消毒法
A．⑤②③④① B．①②③④⑤ C．③②①④⑤ D．③②④①⑤
【答案】C
【解析】培养皿能耐高温，需用③干热灭菌；接种环可用②灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手用酒精擦拭双手，属于①化学消毒；空气可用④紫外线消毒；⑤巴氏消毒法用于牛奶及其制品的消毒，不会破坏其营养成分；综合以上分析，正确的顺序为③②①④⑤，ABD错误，C正确。
故选C。
12．防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，下列关于微生物的基本培养技术的叙述，正确的是（　　）
A．培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染
B．倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质
D．接种时，为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
【答案】A
【解析】A、培养微生物时获得纯微生物培养物的关键是防止杂菌污染，A正确；
B、倒平板时，不能将培养皿盖完全打开，而应只打开一条稍大于瓶口的缝隙，防止空气中的杂菌污染培养基，B错误；
C、培养不同细胞的培养基所必须含的物质不同，培养自养菌一般不需要添加碳源，分离固氮菌的培养基中，不需加入氮源，C错误；
D、接种时，接种环经火焰灭菌之后还需要冷却才能挑取菌落，以免高温杀死菌种，D错误。
故选A。
13．分离和纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法。下列叙述错误的是（　　）
A．分离和纯化微生物所用的培养基常用湿热灭菌法进行灭菌
B．用蘸有菌液的接种环划一条线后，再次蘸取菌液继续划线
C．稀释涂布平板法操作时，利用无菌水进行梯度稀释以分散菌种
D．用两种方法分别将同种霉菌接种于同一培养基上，得到的菌落特征基本一致
【答案】B
【解析】A、分离和纯化微生物的培养基需严格灭菌，湿热灭菌法（如高压蒸汽灭菌）是常用方法，A正确；
B、平板划线法中，每次划线前需灼烧接种环以冷却后从上次划线末端继续，而非重复蘸取菌液，否则无法稀释菌种，B错误；
C、稀释涂布平板法需用无菌水进行梯度稀释，确保菌种分散且避免杂菌污染，C正确；
D、同种微生物在同一培养基上的菌落特征由其遗传特性决定，与接种方法无关，D正确。
故选B。
14．微生物的实验室培养有较高的技术要求，下列操作不符合规范的是（ ）
A．倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置
B．配制培养基时，应先调节pH，再进行灭菌处理
C．浸泡在酒精中的玻璃涂布器无需再灼烧灭菌
D．用平板划线法分离大肠杆菌时，需要多次灼烧接种环
【答案】C
【解析】A、倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，A正确；
B、配制培养基的过程中，为了防止调pH时造成对培养基的污染，应先调节 pH，再进行灭菌处理，B正确；
C、为防止杂菌污染，浸泡在酒精中的玻璃涂布器后需再灼烧灭菌，C错误；
D、用平板划线法分离大肠杆菌时，第一次划线前和每次划线后，都要对接种环进行灼烧灭菌，D正确。
故选C。
15．空气细菌总数测定主要有自然沉降法和撞击法。自然沉降法是让空气中的细菌自然降至琼脂平板表面，撞击法是将一定量空气以较高的流速喷射撞击到琼脂平板上，空气中的细菌即滞留在琼脂表面，关于自然沉降法和撞击法，下列说法错误的是（　　）
A．用于检测空气细菌总数时，都需对不同方位和高度的空气进行采样
B．撞击法采样不受环境气流影响，对洁净空气中细菌总数的测定比自然沉降法更准确
C．两种方法均可使用牛肉膏蛋白胨培养基培养
D．两种方法取样后在琼脂平板上形成的菌落均为单菌落
【答案】D
【解析】A、自然沉降法和撞击法均需在不同方位和高度采样，因为空气中细菌分布可能不均匀，需多点采样保证结果准确性，A正确；
B、撞击法通过主动抽气采集空气，能更高效捕获细菌，尤其在洁净空气中，自然沉降法因细菌少可能漏检，而撞击法结果更准确；且其采样过程由仪器控制流速，受环境气流影响较小，B正确；
C、两种方法均需培养细菌，牛肉膏蛋白胨培养基为通用培养基，适合大多数细菌生长，C正确；
D、由于上述两种方法都是空气细菌总数测定方法，在琼脂平板上形成的菌落有多种，不一定都是单菌落，D错误。
故选D。
题型四 微生物的分离和计数
16．下列关于微生物的选择培养和计数方法，叙述错误的是（ ）
A．菌液的稀释倍数会影响活菌计数法计数结果的准确度
B．不含氮源或碳源的培养基也能用于某些微生物的培养
C．能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长、繁殖的一定是尿素分解菌
D．用营养齐全的培养基在80℃条件下培养栖热菌属于选择培养
【答案】C
【解析】A、稀释涂布平板法中，稀释倍数过高会导致菌落数过少，过低则可能重叠，影响计数准确性，A正确；
B、不含氮源的培养基可用于固氮微生物的培养，不含碳源的培养基可以用于自养型微生物的培养，B正确；
C、以尿素为唯一氮源的培养基上生长出的可能是固氮菌，它可以利用空气中游离的N2作为氮源，C错误；
D、用营养齐全的培养基在80℃下培养栖热菌属于选择培养，因为只有耐热的细菌才能在80℃下存活，D正确。
17．科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程如图，经步骤③最后一次稀释之后若在 3 个平板上分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，得到的结果是 39、38、37。下列叙述正确的是（　　）

A．步骤②振荡 20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中
B．步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径与菌落直径比值较小的菌落培养
C．步骤⑤中的接种方法为平板划线法，3 次划线时需要对接种环灼烧 3 次
D．每克土样中的活菌数为 3.8×104个，该法统计的结果往往比实际值偏低
【答案】A
【解析】A、步骤②振荡 20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，减小实验误差，A正确；
B、溶磷圈直径与菌落直径的比值较大，说明细菌分解磷酸盐的能力较强，所以应选择溶磷圈直径与菌落直径比值较大的菌落，B错误；
C、采用步骤⑤中的平板划线法接种时，由于每次划线前后都要灼烧接种环，而图中共有 3 个划线区域，故接种环需要灼烧 4 次，C错误；
D、步骤③进行了 3 次稀释，每次稀释了 10 倍，则共将土壤悬浮液稀释了 104 倍，（39 + 38 + 37）÷3÷0.1×104 = 3.8×106个/克；由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低，D错误。
18．研究发现，某些昆虫的肠道内存在 PE（一种合成塑料）降解菌。实验小组利用如图的流程从昆虫的肠道中筛选能够降解 PE 的菌株，下列有关说法中错误的是（ ）
A．选择扩大培养的培养基中应加入 PE 作为唯一碳源
B．选择扩大培养的目的是增大 PE 降解菌的相对浓度
C．划线纯化不仅可以分离菌株还可以统计菌株的数量
D．划线纯化时每次划线开始前和结束后都要灼烧灭菌
【答案】C
【解析】A、实验的目的是要筛选能够降解PE的菌株，因此选择扩大培养的培养基中应加入PE作为唯一碳源，A正确；
B、选择扩大培养可以让PE降解菌大量繁殖，从而增大其相对浓度，B正确；
C、划线纯化可以分离菌株，但不能统计菌株的数量，统计菌株数量常用稀释涂布平板法，C错误；
D、划线纯化时每次划线开始前和结束后都要灼烧灭菌，目的是杀死接种环上的残留菌种，防止污染和保证划线的纯度，D正确。
19．某种含氮有机物的除草剂，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。其在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤破坏生态环境。为修复被破坏的生态环境，按下图选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是（　　）
A．未使用该除草剂的农田中一定不存在能降解该除草剂的细菌
B．图中Ⅱ划线5个区域，接种环需要灼烧灭菌5次
C．图中接种方法为平板划线法，可对细菌进行计数
D．有透明圈的菌落能够利用除草剂中的氮源，应扩大培养
【答案】D
【解析】A、自然界中可能存在随机突变产生的降解能力，即使未接触过除草剂的环境也可能存在此类细菌，A错误；
B、用平板划线法分离菌种，划线5个区域，每次接种之前均需要灼烧接种环灭菌，最后划线完成也需要灼烧灭菌，共6次，B错误；
C、平板划线法的主要目的是分离单个菌落，而不能用于计数，C错误；
D、分析题意可知，除草剂溶解度低，含除草剂的培养基原本不透明，能降解除草剂的细菌会利用其作为氮源，分解后形成透明圈（降解区域），此类菌落为目标菌，需扩大培养用于生态修复，D正确。
故选D。
20．在抗生素大规模发酵生产前，需对接种的菌种进行分离、纯化和鉴定，其操作流程如下图所示，为鉴定青霉素生产菌产抗生素的能力，培养皿丙中需预先涂布（ ）
A．生理盐水 B．大肠杆菌 C．青霉素 D．青霉素生产菌
【答案】B
【解析】抗生素主要用于抑制细菌的正常生命活动，为鉴定青霉素生产菌产抗生素的能力，培养皿丙中需预先涂布大肠杆菌（细菌），根据滴有青霉素的滤纸片产生的抑菌圈进行选择，ACD错误，B正确。
1．（以根瘤菌为情境）根瘤菌是最早用于生物肥料研发的微生物，其菌肥生产需经菌种选育、种子液制备、发酵罐发酵、质量检测等流程。下列说法正确的是（　　）
A．菌种选育时，需用含碳源、氮源等营养的培养基进行筛选
B．在质量检测中的活菌计数时，可采用涂布平板法进行接种
C．发酵罐发酵条件不同，仅影响代谢产物含量不影响其种类
D．田间应用时，根瘤菌主要通过产生有机酸来增加土壤肥力
【答案】B
【解析】A、根瘤菌可以利用空气中的氮，在进行菌种选育时，培养基不含氮源，A错误；
B、常采用涂布平板法进行接种对菌体进行计数，B正确；
C、发酵罐发酵条件不同，既影响代谢产物含量也影响其种类，如氧气条件，可影响厌氧型菌和好氧型菌的选择，C错误；
D、根瘤菌可以将空气中的氮气转变为含氮养料（NH3等），有利于增加土壤肥力，D错误。
故选B。
2．（2025·陕西西安·一模）关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列说法错误的是（　　）
A．取样时要选择表层土，取土样的铁铲和取样纸袋要进行灭菌处理
B．本实验中使用的平板较多，需要在各培养皿底上做好标记避免混淆
C．利用显微镜直接计数结果通常较稀释涂布平板法进行计数的结果偏高
D．若涂布0.2mL稀释103倍的培养液，获得菌落平均值为58，则每克土样中尿素分解菌数为2.9×105个
【答案】A
【解析】A、取样时一般要铲去表层土，取距地表3~8cm的土壤层，A错误；
B、本实验中使用的平板较多，由于菌落是涂布在培养皿底部倒置培养，需要在各培养皿底上做好标记避免混淆，B正确；
C、利用显微镜直接计数时活菌和死菌都会被统计，而稀释涂布平板法仅能统计活菌的数目，且多个菌可能共同形成一个菌落，因此前者的统计结果会比后者偏高，C正确；
D、若取稀释103倍的0.2mL培养液进行涂布，获得菌落的平均值为58，根据公式C平均菌落数÷V涂布的体积数×M稀释倍数，可以计算出，58÷0.2×103=2.9×105个，即每克土样中尿素分解菌的数量为2.9×105个，D正确。
3．（2025·湖南永州·一模）某同学欲用市场售卖的泡菜汁进行耐酸的乳酸杆菌分离或计数，下列操作正确的是（ ）
A．将泡菜汁直接涂布于固体培养基，培养一段时间便可得到单菌落
B．可用平板划线法对乳酸杆菌进行分离和计数
C．在固体培养基中加入碳酸钙，挑取透明溶钙圈最大的菌落即为目标菌
D．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素并提供无氧的环境
【答案】D
【解析】A、将泡菜汁直接涂布于固体培养基，培养一段时间不能得到单菌落，因为泡菜汁中含有大量的乳酸菌，需要梯度稀释后才能获得单菌落，A错误；
B、可用平板划线法对乳酸杆菌进行分离获得单菌落，但不能用于计数，B错误；
C、周围透明圈最大的菌株，产酸能力不一定最强，应选择透明圈与菌落直径比例最大的类型，C错误；
D、培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素并提供无氧的环境，因为乳酸菌是厌氧菌，且需要维生素作为生长因子，D正确。
4．（2025·福建漳州·一模）科研小组用双层平板法测定某污水样本中噬菌体的数量，操作流程是：①先铺2%琼脂于培养皿底层，形成底层琼脂培养基；②将敏感指示菌和待测污水样本混合液，加入已熔化并降温至45～48℃的1%琼脂培养基中，迅速倾注于底层培养基上，形成上层培养基；③倒置培养一段时间后，计数噬菌斑。双层平板如下图所示。下列叙述正确的是（　　）

A．倒平板前需对培养基和培养皿进行干热灭菌
B．可用酵母菌作为敏感指示菌对T2噬菌体进行计数
C．上层培养基冷却至45～48℃，主要目的是防止底层培养基液化
D．上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于计数
【答案】D
【解析】A、对培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，而培养皿常用干热灭菌法，A错误；
B、T2 噬菌体专门寄生在大肠杆菌体内，酵母菌不是T2噬菌体的宿主，不能用酵母菌作为敏感指示菌对T2噬菌体进行计数，B错误；
C、上层培养基冷却至45 - 48℃，主要目的是防止高温杀死敏感指示菌和噬菌体，C错误；
D、由题注可知琼脂浓度越低越有利于噬菌体扩散，上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于计数 ，D正确。
5．（2025·河北秦皇岛·模拟预测）为探究某种细菌A抑制真菌B生长的原理，实验组将细菌A接种在A1平板上，B1平板中央接种直径为0.5cm的真菌B菌落，把两个培养皿对扣，两平板上菌株无接触，放在适宜环境中培养5d，菌体生长情况如图中甲组所示。下列叙述正确的是（　　）
A．接种前需对培养基和培养皿通过干热法进行灭菌
B．需将含有细菌A的菌液进行稀释后涂布在A1平板上
C．乙组为对照组，且A2平板上接种的是无菌水
D．细菌A通过与真菌B竞争营养物质抑制其生长
【答案】C
【解析】A、培养基常用高压蒸汽灭菌法，培养皿常用干热灭菌发，A错误；
B、根据图片可知A1平板上应该是采用平板划线法得到的平板，B错误；
C、乙组A2平板上接种的是无菌水，起对照作用，可排除其他因素的干扰，C正确；
D、由题干 “两平板上菌株无接触” 可知，细菌A不是通过竞争营养物质抑制真菌B生长，可能是分泌了抑制真菌B生长的物质，D错误。
6．（2025·湖南长沙·一模）科研人员先在12个固体培养基上各涂以数目相等（约5×104个）的对T1噬菌体敏感的大肠杆菌，经5h培养后，平板上长出大量的微菌落（约5100个细胞/菌落）。取其中6个（A组）直接喷上T1噬菌体，另6个（B组）则先用灭菌后的涂布器把平板上的微菌落重新均匀涂布一遍，然后喷上等量T1噬菌体。培养后计算这两组平板上形成的抗T1噬菌体的菌落数。结果发现，A组长出28个菌落，B组长出353个菌落。下列说法正确的是（ ）
A．该实验通过等比稀释的操作对微菌落进行计数
B．B组中所使用的培养基为选择培养基
C．B组的涂布使单个抗T1噬菌体自发突变大肠杆菌形成一个菌落的概率增加
D．该实验证明重新涂布后再喷T1噬菌体导致了抗性突变的大量发生
【答案】C
【解析】A、题目中未提及等比稀释操作，仅描述涂布菌液后培养，直接喷噬菌体或重新涂布后喷噬菌体，A错误；
B、B组培养基未添加特殊成分，仅通过喷T1噬菌体筛选抗性菌落，培养基不是选择培养基，B错误；
C、A组中微菌落是聚集的，若一个微菌落内存在多个抗性突变体，它们会因位置重叠仅形成1个菌落，B组重新涂布后，抗性突变体被分散，每个均可独立形成1个菌落，因此，B组的涂布操作提高了单个抗性突变体形成菌落的概率，导致菌落数更多，C正确；
D、抗性突变是自发产生且发生概率极低，噬菌体仅起选择作用，不会诱导突变，B组菌落数增加是因分散后抗性菌独立成菌落，而非突变率提高，D错误。
7．（以小龙虾为情境）小龙虾因肉味鲜美而广受欢迎。为提高小龙虾虾壳废弃物中甲壳素[分子式为 的利用率，某小组欲从土壤中筛选出能高效降解甲壳素的菌株。鉴别培养基可用于区分不同类型的微生物。下列相关叙述正确的是（　　）
A．土壤取样时需在小龙虾虾壳堆积较多的土壤中挖取表层土
B．所用鉴别培养基需以小龙虾虾壳粉作为唯一的碳源和氮源
C．每隔24小时计数一次，以菌落数目稳定时的记录作为结果
D．实验时需注意无菌操作，纯化后的菌种可在室温下长期保存
【答案】C
【解析】A、土壤中的细菌，绝大多数分布在距离地表约3~8cm的土壤中，因此在取样时一般要铲去表层土，A错误；
B、选择培养基只允许能分解甲壳素的菌生长，因此培养基需以甲壳素为唯一碳源和氮源，B错误；
C、菌落数目稳定时计数可确保所有微生物已生长完毕，结果更准确，C正确；
D、纯化后的菌种需在4℃短期保存或-20℃甘油管藏长期保存，室温下无法长期保存，D错误。
故选C。
8．（2025·山东青岛·三模）随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。下列说法正确的是（　　）

A．诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，选择透明圈大的即为目的菌株
B．可使用紫外线进行诱变，无需筛选即可得到产纤维素酶高的菌种
C．能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株一定是纤维素分解菌
D．富集培养应使用液体培养基，目的是能得到更多能产纤维素酶的菌株
【答案】D
【解析】A、变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，应选择透明圈直径/菌落直径值最大的为目的菌株，A错误；
B、基因突变具有不定向性和多害少利性，因此使用紫外线进行诱变需要对菌株进行筛选，B错误；
C、能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株可能是纤维素分解菌，也可能是一些自养型细菌，C错误；
D、富集培养应使用液体培养基，有利于微生物与培养液的接触，有利于微生物的增殖，能得到更多能产纤维素酶的菌株，D正确。
9．（2025·云南丽江·一模）下图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作（A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（　　）
A．④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂
B．⑨计数得到的细菌数与用显微镜直接计数法得到的细菌数相比较多
C．④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求
D．可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌
【答案】B
【解析】A、④和⑤所用培养基从物理性质分析，④是液体培养基，⑤是固体培养基，两者的区别是⑤中加有琼脂，A正确；
B、⑨计数方法为稀释涂布平板法，只能统计活菌数，而显微镜直接计数法无论活菌还是死菌都统计在内，因此稀释涂布平板法统计得到的细菌数与用显微镜直接计数法得到的细菌数相比较少，B错误；
C、该实验是为了分离得到纤维素分解菌，培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微生物才能生长繁殖，从而筛选出纤维素分解菌，此外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需求，C正确；
D、当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌，D正确。
10．（2025·山东聊城·三模）研究人员欲筛选对抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物以降解餐余垃圾，进行的操作如图所示。下列叙述错误的是（　　）
A．餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行高压蒸汽灭菌处理
B．可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种在X培养基上
C．X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是不含琼脂的液体培养基
D．图中降解淀粉最高效的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型
【答案】A
【解析】A、餐余垃圾浸出液中含有目的菌，因此不能对其进行高压蒸汽灭菌处理，A错误；
B、根据培养后培养基上形成的菌落分布可知，将含目的菌的餐余垃圾浸出液接种在X培养基上采用的是稀释涂布平板法，B正确；
C、实验目的是筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，根据图示中在X培养基上滴加碘液后形成了透明圈，说明X培养基上含有淀粉，菌体分解淀粉的能力强，在其周围形成的透明圈就大，同时为了筛选到对抗生素有抗性的菌体，因此X培养基还应该含有抗生素，Y培养基是将筛选到的目的菌扩大培养，为不含琼脂的液体培养基，C正确；
D、碘液遇碘变蓝，淀粉被分解，蓝色消失，图中⑤的透明圈最大，说明菌体降解淀粉的能力最强，不同菌体形成的菌落特征不同，因此可根据菌落特征初步判断微生物类型，D正确。
1．（2025·广西·高考真题）利用微生物分解厨余垃圾可实现资源的再利用。下列说法错误的是（　　）
A．厨余垃圾分解过程产生的热量，会影响分解效率
B．对组成复杂的厨余垃圾再分类，可提高利用效率
C．厨余垃圾中的淀粉，可作为微生物的碳源和氮源
D．含盐量高的厨余垃圾，可选用耐高盐的微生物分解
【答案】C
【解析】A、微生物分解有机物时通过呼吸作用释放热量，若温度过高可能导致酶活性下降，从而影响分解效率，A正确；
B、厨余垃圾成分复杂，分类后可根据不同成分选择适宜微生物或处理条件，提高分解效率，B正确；
C、淀粉由C、H、O组成，仅含碳元素，可为微生物提供碳源，但无法提供氮源（氮源需含N元素），C错误；
D、高盐环境会抑制普通微生物生长，但耐高盐微生物（如嗜盐菌）可适应此环境并分解有机物，D正确。
2．（2025·贵州·高考真题）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　）
A．可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B．为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D．接种培养Ma时使用的器具需消毒
【答案】D
【解析】A、金龟子绿僵菌（Ma）作为昆虫病原真菌，可通过寄生导致害虫死亡，符合微生物杀虫剂的特点，可用于生物防治，A正确；
B、僵化死亡的昆虫体内含有大量Ma菌体，因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma的合理方法，B正确；
C、稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微生物，适用于分离样品中的Ma，C正确；
D、微生物培养中，接种环等直接接触菌种的器具需严格灭菌（如灼烧灭菌），而非仅消毒，消毒无法彻底杀灭微生物的芽孢或孢子，D错误。
3．（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如下图。下列叙述正确的是（ ）
A．用平板划线法能测定X菌组中的活菌数
B．Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高
C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种
D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
【答案】C
【解析】A、平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌数，测定活菌数常用稀释涂布平板法，A错误；
B、Y菌组微塑料残留率较高，说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱，而不是菌浓度高，微塑料残留率与菌对微塑料的降解能力有关，而非直接与菌浓度相关，B错误；
C、由图可知，X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组，说明混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种，C正确；
D、该培养基中含有蛋白胨，能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不一定都能降解微塑料，D错误。
4．（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（　　）
A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数
B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照
C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸
D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质
【答案】B
【解析】A、稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误；
B、平板划线法操作后需设置未接种的平板作为空白对照，以验证培养基灭菌是否彻底，B正确；
C、醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误；
D、筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法筛选目标菌，D错误。
5．（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（ ）
A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌
B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布
C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存
【答案】B
【解析】A、制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误；
B、将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确；
C、连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误；
D、斜面培养基保存菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（-20℃），室温下无法长期保存，D错误。
6．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（ ）
组别 压强 纤维素 淀粉 菌落
① 常压 - + -
② 常压 + - -
③ 高压 - + -
④ 高压 + - +
注： “+”表示有；“一”表示无
A．可用平板划线法对该菌计数
B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌
C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长
D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长
【答案】D
【解析】A、平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A错误；
B、制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH值后，分装到三角瓶中，然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养皿中（即“倒平板”），B错误；
C、组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C错误；
D、③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D正确。
7．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（ ）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
【答案】D
【解析】A、以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A正确；
B、逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B正确；
C、培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基的基本要求，C正确；
D、稀释涂布平板法需用 涂布器 将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。
故选D。
8．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长
④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
【答案】D
【解析】A、由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确；
B、由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；
C、由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；
D、与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。
故选D。
9．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（ ）
A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌
B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋
C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理
D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色
【答案】A
【解析】 A 、从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰，这样可以避免菌种被污染，A正确；
B、在高倍镜下观察时，只能调节细准焦螺旋，B错误；
C、探究温度对酶活性的影响时，应先将酶和底物分别在不同温度下处理，然后再混合，若先将酶与底物混合，再在不同温度下水浴处理，会在达到设定温度前就发生反应，影响实验结果，C错误；
D、鉴定脂肪时，子叶临时切片先用苏丹Ⅲ染液染色，然后用体积分数为50%的乙醇洗去浮色，D错误。
10．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ）
A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落
B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验
C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙
D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
【答案】C
【解析】A、平板划线法无需稀释，A错误；
B、由图可知，②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误；
C、所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确；
D、由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。
11．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（ ）
A．镍是组成脲酶的重要元素
B．镍能提高尿素水解反应的活化能
C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖
D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
【答案】B
【解析】A、根据题意，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确；
B、脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关，B错误；
C、产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动，因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖，C正确；
D、产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。
12．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（　　）
A．X→Y→Z B．Z→Y→X C．Y→X→Z D．Z→X→Y
【答案】A
【解析】ABCD、添加少量色氨酸，突变体菌株可以生长，色氨酸合成途径的中间产物积累后可排出胞外，进入培养基后，通过扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显的菌落。trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体，据图可知，trpX不能为trpY和trpZ提供原料，trpY不能为trpZ提供原料，trpZ可以为trpX、trpY的生长提供原料，推测3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z。
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