资源简介

(共112张PPT)
生物技术
与工程
专题复习
<专题八>
高考生物
焦聚高考
1.发酵工程
2.细胞工程
(2024天津卷）(2024浙江卷)
(2024海南卷）(2024江苏卷)
(2024福建卷）(2024重庆卷)
(2024浙江卷）(2024海南卷)
(2024江苏卷）(2024安徽卷)
(2024吉林卷）(2024江西卷)
(2024广东卷）
考点
高考考情具体分析
3.基因工程
(2024湖南卷）(2024安徽卷)
(2024福建卷）(2024贵州卷)
(2024浙江卷)
内容索引
考点一
发酵工程
考点二
细胞工程
考点三
基因工程
知识导图
基本环节
发酵工程及其应用
选育菌种→扩大培养
配制培养基→灭菌→接种→发酵罐内发酵→分离、提纯产物
应用
食品工业、医药工业、农牧业等
传统发酵技术的应用
泡菜制作→乳酸菌→厌氧
果酒制作→酵母菌→兼性厌氧
果醋制作→醋酸菌→好氧
知识导图
湿热灭菌法
尿素
稀释涂布平板法
平板划线法
碳源、氮源、水和无机盐
微生物的培养及应用
煮沸消毒法
化学药物消毒法
巴氏消毒法（如牛奶）
紫外线消毒法（照射30 min能杀死物体
表面或空气中的微生物）
无菌技术
消毒方法
灭菌方法
关键是防止杂菌污染
灼烧灭菌法(涂布器、接种环(针)或其他
金属用具)
干热灭菌法
湿热灭菌法
知识导图
微生物的培养及应用
尿素分解菌的分离与计数
培养基特点
计数方法
以尿素作为唯一氮源的选择培养基
稀释涂布平板法和显微镜直接计数法
培养
实验流程
培养基成分
接种
碳源、氮源、水和无机盐
平板划线法
稀释涂布平板法
配制培养基→灭菌(灭菌前调节pH) →倒平板→接种→培养
一、发酵工程
1、微生物在传统发酵技术中的应用
酵母菌（出芽生殖）
主要是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌
异养兼性厌氧型
真核细胞
醋酸菌（二分裂）
异养需氧型
原核细胞
空气中的
野生型醋酸菌
乳酸菌（二分裂）
植物体表面
天然的乳酸菌
异养厌氧型
原核细胞
项目 泡菜制作 果酒制作 果醋制作
发酵菌种
菌种来源
菌种代谢类型
菌种细胞类型
一、发酵工程
1、微生物在传统发酵技术中的应用
C6H12O6+6H2O+6O2 6CO2+12H2O+能量
C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+少量能量
酶
C6H12O6+2O2 2CH3COOH+2H2O+
2CO2+能量
C2H5OH+O2 CH3COOH+H2O+能量
酶
C6H12O6 2C3H6O3（乳酸）+能量
酶
酶
酶
在无氧的情况下：
氧气充足、缺少糖源时：
在无氧条件下：
氧气、糖源都充足时：
项目 泡菜制作 果酒制作 果醋制作
发酵原理 在有氧条件下：
一、发酵工程
1、微生物在传统发酵技术中的应用
28℃（18-30℃）
10-12d
初期需氧，后期不需氧
30-35℃
7-8d
需要氧气
18-20℃
不需要氧气
8-10d
项目 泡菜制作 果酒制作 果醋制作
发酵 条件 温度
时间
氧气
一、发酵工程
（1）泡菜制作流程
配制盐水
用清水和食盐配制质量百分比为5%-20%的盐水→盐水煮沸→冷却待用
调味；抑制其他微生物生长
a.杀灭盐水中的微生物
b.去除水中的溶解氧
防止高温杀死菜料表面的乳酸菌
过高：乳酸菌渗透失水，抑制乳酸菌生长繁殖，发酵延迟
过低：杂菌易繁殖；亚硝酸盐含量增加
盐的作用:
盐水浓度适宜:
盐水煮沸的目的:
盐水冷却的目的:
一、发酵工程
（1）泡菜制作流程
原料处理蔬菜装坛
新鲜蔬菜洗净→切条块、混匀→晾干；
装至半坛→加调味料→
继续加菜至八成满
新鲜蔬菜亚硝酸盐含量少，营养物质丰富
选用新鲜蔬菜的原因:
调味、抑菌
调味料、香辛料作用：
a.防止其他微生物发酵产生CO2而导致发酵液溢出坛外(发酵初期，酵母菌、大肠杆菌等较为活跃，发酵产物中有较多CO2)
b.防止因装太满使盐水未完全淹没菜料而导致菜料腐烂变质
装八成满原因：
一、发酵工程
（1）泡菜制作流程
加盐水
将冷却好的盐水缓缓倒入坛中，
盐水没过全部菜料→盖好坛盖
抑菌、无氧环境
盐水没过全部菜料的原因
增加乳酸菌的含量， 使其在短时间内形成菌种优势
可加少许的陈泡菜水的目的:
一、发酵工程
（1）泡菜制作流程
封坛发酵
向坛盖边缘的水槽中注满水→发酵过程中经常向水槽中补充水
根据室内温度控制发酵时间
保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境
向坛盖边缘的水槽中注满水目的:
外界溶液浓度高，使蔬菜渗透失水
腌制过程会出现溶液量增多现象，原因？
一、发酵工程
（2）果酒果醋制作流程
器具消毒
①将发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精清洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用 →目的？ →防止发酵液被污染
冲洗葡萄
选取的葡萄怎样处理：先清水冲洗1-2次，再去除枝梗和腐烂的籽粒，沥干
先冲洗、后去除枝梗的目的：避免除去枝梗引起葡萄破损而被杂菌污染
为何不能反复冲洗
避免洗去果皮表面附着的野生酵母菌
一、发酵工程
（2）果酒果醋制作流程
榨汁装瓶
要留有大约1/3的空间，
盖好瓶盖
酒精发酵
将温度控制在18~30℃进行发酵
每隔12h左右，拧松(不是打开)、再拧紧
发酵时间为10~12d。
留有大约1/3的空间目的：①酵母菌可通过有氧呼吸大量繁殖；②防止发酵液溢出
盖好瓶盖目的：
①创造无氧环境，酒精发酵
②防止好氧微生物污染
拧松目的：
排出CO2 ，防止发酵瓶爆裂
一、发酵工程
（2）果酒果醋制作流程
果酒检测
从发酵瓶口取样来对发酵的情况进行检测
打开瓶盖盖上纱布
醋酸发酵
发酵温度为30～35℃，时间为7～8d。→此时酵母菌是否会继续发酵？
a.嗅味、品尝
b.重铬酸钾
c.镜检酵母菌数量
不会。随醋酸发酵进行，发酵液PH、发酵温度均不利于酵母菌生长繁殖，酵母菌活性很低
果醋检测
发酵完成后，在发酵液的液面上会出现一层菌膜，这是醋酸菌膜
a.观察液面白色菌膜;嗅味、品尝
b.检测醋酸发酵前后PH
c.镜检醋酸菌数量
一、发酵工程
（3）制作果酒、果醋的装置图解
关闭
CO2
防止空气
中微生物的污染
一、发酵工程
2.发酵工程的基本环节
选育菌种
从自然界中筛选
通过诱变育种或基因工程育种获得
扩大培养
在发酵前需要对菌种进行扩大培养
配制培养基
根据菌种,选择原料制备培养基
灭菌
对培养基和发酵设备进行严格灭菌
一、发酵工程
2.发酵工程的基本环节
获得产品
接种
将菌种接种到培养基上培养
发酵
随时检测培养液中微生物数量和产物浓度
及时添加必需的营养组分
严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件
分离、提纯产物
微生物细胞：采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥
代谢物：根据产物性质进行提取、分离和纯化
一、发酵工程
3、培养基的营养成分
营养物质 定义 作用 主要来源
碳源 凡能提供碳元素的物质 构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些碳源也是异养生物的能源物质 无机碳源： 、 等；有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油、牛肉膏等
氮源 凡能提供氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢物等 无机氮源： 、、 铵盐、硝酸盐等。
有机氮源：尿素、蛋白胨等
一、发酵工程
3、培养基的营养成分
营养物质 定义 作用 主要来源
水 — 良好的溶剂， 参与化学反应等 培养基、空气、
代谢产物
无机盐 为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素 是细胞的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂等 无机化合物：如
、 、 等
一、发酵工程
4、微生物培养中的无菌操作技术
项目 条件 结果 常用方法 应用范围
消毒 较为温和的物理、化学或生物等方法 仅杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子） 煮沸消毒法 日常用品
巴氏消毒法 不耐高温的液体（如牛奶）
化学药品消毒法 操作者双手、水源
紫外线消毒法 接种室、接种箱或超净工作台等
一、发酵工程
4、微生物培养中的无菌操作技术
项目 条件 结果 常用方法 应用范围
灭菌 强烈的理化方法 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 湿热灭菌（其中高压蒸汽灭菌法效果最好） 培养基及容器的灭菌
干热灭菌法 耐高温的和需要保持干燥的物品（如玻璃器皿、金属用具等）
灼烧灭菌法 接种工具（如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具）
一、发酵工程
5、培养基制备与微生物纯化技术
制备固体培养
过程：基配制培养基→灭菌→倒平板
纯化培养
平板划线法：只能纯化，不能计数
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
稀释涂布平板法：既能纯化，也能计数
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。
接种方法
一、发酵工程
6、微生物分离与计数的两个实例
筛选：用尿素作为唯一氮源的选择培养基培养
分解尿素的细菌
鉴定：
上述培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红则初步鉴定该细菌能分解尿素
计数方法
显微镜直接计数法：在显微镜下利用特定细菌计数板或血细胞计数板，计数一定体积的样品中微生物的数目
间接计数法：(活菌计数法，即稀释涂布平板法)
一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
一、发酵工程
6、微生物分离与计数的两个实例
筛选：用纤维素作为唯一碳源的选择培养基培养
纤维素
分解菌
鉴定原理
刚果红
纤维素
红色复合物→红色消失，出现透明圈
纤维素酶 纤维素分解菌
真题练习
1．（2025·浙江·高考真题）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（ ）
A．泡菜的风味由乳酸菌的种类决定
B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌
C．家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸
D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵
A
真题练习
解析：
A、泡菜的风味由原料、发酵菌种类、发酵环境等因素共同决定的，A错误；
B、用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧型微生物，B正确；
C、家庭酿制米酒主要用的是酵母菌，在酿制米酒的过程中，首先让酵母菌在有氧的环境进行增殖，然后在无氧的环境中进行发酵，C正确；
D、传统发酵食品所用的是自然菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，D正确。
真题练习
2．（2024·天津·高考真题）实验中常根据菌落外表特征鉴别微生物，进而对实验结果做出判断，下列实验不是根据菌落外表特征做出判断的是（ ）
A．艾弗里证明肺炎链球菌的转化因子是DNA
B．判断分离酵母菌的固体培养基是否被毛霉污染
C．利用浸有抗生素的滤纸片筛选大肠杆菌中耐药性强的菌株
D．判断在尿素为唯一氮源的培养基上生长的尿素降解菌是否有不同种类
C
真题练习
解析：
A、艾弗里将S型细菌的DNA、蛋白质、糖类等物质分离开，单独的、直接的观察它们各自的作用进行对比，R型肺炎双球菌没有荚膜（菌落表面粗糙），S型肺炎双球菌有荚膜（菌落表面光滑），该实验是通过观察培养基上形成的不同菌落特征，来判断转化是否成功的，A不符合题意;
B、毛霉属于多细胞的真菌，由细胞形成菌丝，可根据毛霉的形态判定固体培养基是否是被毛霉污染了，B不符合题意;
真题练习
解析：
C、抗生素可消灭细菌，利用浸有抗生素的滤纸片筛选大肠杆菌中耐药性强的菌株是从抑菌圈边缘菌落挑取大肠杆菌来获得目的菌株，没有依靠菌落外表形态特征做出判断，C符合题意;
D、不同尿素降解菌降解尿素的能力不同，因此在分离出的以尿素为唯一氮源的尿素降解菌后，若要验证其中是否有不同种类降解菌，可在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若根据菌落周围出现红色环带的大小判定其种类，D不符合题意。
真题练习
3．（2024·福建·高考真题）虾酱是以虾为原料的传统发酵食品。在乳酸菌、芽孢杆菌等多种微生物共同作用下，原料中的蛋白质和脂肪发生水解，形成虾酱的特有风味。下列叙述错误的是（ ）
A．虾酱特有风味的形成受发酵时间的影响
B．传统虾酱的制作过程需要严格执行无菌操作
C．原料中的蛋白质会被水解成小分子的肽和氨基酸
D．虾酱发酵过程微生物种类和数量的分析有助于改良风味
B
真题练习
解析：
A、虾酱是由微生物发酵形成的，虾酱特有风味的形成受发酵条件、发酵温度、发酵时间的影响，A正确；
B、传统虾酱的制作过程利用原料中带有的微生物进行发酵，不需要经过严格无菌操作，B错误；
C、原料中的蛋白质会被蛋白酶水解成小分子的肽和氨基酸，C正确；
D、虾酱发酵由乳酸菌、芽孢杆菌等多种微生物共同参与，虾酱发酵过程微生物种类和数量的分析有助于改良风味，D正确。
真题练习
4．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中
有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
D
真题练习
解析：
A、由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确；
B、由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；
C、由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；
D、与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。
真题练习
5．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（ ）
A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌
B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养
C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数
D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰
C
真题练习
解析：
A、酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌和真菌，A错误；
B、将含有酵母菌的培养基放置在28℃恒温培养箱中进行培养，B错误；
C、稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，由此可知，可用稀释涂布平板法对酵母菌计数，C正确；
D、酵母菌是真核细胞，具有高尔基体和内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰，D错误。
真题练习
6．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ）
A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落
B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验
C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙
D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
D
真题练习
解析：
A、群落的物种组成在一定程度上，可以反映群落的生态位，据图可知：未去除组，丙的生态位先升高，后趋于稳定，去除组，丙的生态位先下降，后升高，A错误；
B、即使优势种去除，当地环境没有改变，所以三地能够容纳的种群数量和物种数目是有限的，所以K值不会增加，B错误；
C、据图可知，未去除组，甲也消失了，说明优势种去除不是甲消失的主要原因，C错误；
D、在群落中，各个生物种群分别占据了不同的空间，使群落形成一定的空间结构，据图可知，随着时间的推移，群落的物种组成在不断地发生变化，盐沼植物群落的空间结构也会发生改变，D正确。
知识导图
细胞工程
植物细胞工程
原理
基本技术
应用
细胞的全能性、细胞膜的流动性
植物组织培养
植物体细胞杂交
快速繁殖、作物脱毒
植物繁殖的新途径
作物新品种的培育
单倍体育种、突变体的利用
细胞产物的工厂化生产
知识导图
细胞工程
动物细胞工程
动物细胞
培养
细胞增殖
原理
产生大量细胞，不形成新个体
结果
动物体细
胞核移植
动物细胞核的全能性
原理
获得克隆动物个体
结果
动物细胞
融合
细胞膜的流动性
原理
PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
结果
单克隆抗体的制备
给小鼠注射抗原
首要步骤
第一次：杂交瘤细胞
第二次：能产生特异性抗体的杂交瘤细胞
筛选
能产生特定抗体的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞
所需细胞
知识导图
细胞工程
二、细胞工程
1、植物组织培养的过程
原理：植物细胞的全能性
胚状体或
丛芽
愈伤组织
外植体
脱分化
不需光
再分化
需光
离体培养的植物器官、组织或细胞。如：胡萝卜的形成层、菊花幼茎段
失去特有结构和功能转变成未分化的细胞。
排列不规则，高度液泡化，呈不定形的薄壁细胞。
培养条件：
①离体 ②无菌操作 ③种类齐全、比例适合的营养物质
④植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）
⑤适宜的外界条件（温度、pH、光照等）
生长素/细胞分裂素
“高”根，“低”芽，“中”愈伤
二、细胞工程
1、植物组织培养的过程
原理：植物细胞的全能性
芽发育成叶，叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照。
应用：生产细胞产物利用愈伤。制作人工种子利组织，用胚状体。
培养条件：
①离体 ②无菌操作 ③种类齐全、比例适合的营养物质
④植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）
⑤适宜的外界条件（温度、pH、光照等）
生长素/细胞分裂素
“高”根，“低”芽，“中”愈伤
植物体
胚状体或
丛芽
愈伤组织
生长、发育
再分化
需光
愈伤组织重新分化为芽、根等器官
二、细胞工程
2、植物体细胞杂交技术
细胞A
原生质体A
原生质体B
去除细胞壁
去除细胞壁
细胞B
诱导融合
融合原生质体
细胞壁再生
脱分化
再分化
杂合细胞AB
愈伤组织
杂合植株
植物细胞融合
植物组织培养
原理：植物细胞的全能性
二、细胞工程
2、植物体细胞杂交技术
纤维素酶
果胶酶
酶解法
原理：细胞膜具有流动性
方法：物理方法：电融合法、离心法
化学方法：聚乙二醇（PEG）法、高Ca2+-高pH融合法
染色体变异，异源多倍体；打破生殖隔离，实现远缘杂交育种
植物体融合成功的标志
相关的主要细胞器：高尔基体、线粒体
二、细胞工程
3、植物体细胞杂交和有性杂交的辨析
两个不同品种的植物细胞A、B
(2x+2y)条
(x+y)条
植物体细胞杂交
植物有性杂交
植物细胞A含有2x条染色体，2个染色体组，基因型为Aabb
植物细胞B含有2y条染色体，2个染色体组，基因型为ccDd
杂交后细胞中染色体数
基因型
AabbccDd
AbcD或abcD或Abcd或abcd
二、细胞工程
4、动物细胞培养
原理：细胞增殖(有丝分裂)
条件：
动物细胞培养所需的基本条件
营养条件
其他条件
无菌无毒的环境
适宜的温度、
pH和渗透压
适宜的气体环境
糖类、氨基酸、无机盐、维生素
二、细胞工程
4、动物细胞培养
条件：
（1）营养：
①合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制的培养基。
动物细胞培养常用培养液。
②通常需要加入血清等一些天然成分。
（2）无菌、无毒的环境：
无菌：①培养液和所有培养用具进行灭菌处理。 ②在无菌环境下操作。
（补充：添加抗生素）
无毒：培养液定期更换。
（目的:清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。）
二、细胞工程
4、动物细胞培养
条件：
（3）温度、PH和渗透压：
36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。
（4）气体环境：
动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
①O2作用:是细胞代谢必需的。
②CO2的主要作用:是维持培养液的pH。
③进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,并置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中培养
二、细胞工程
4、动物细胞培养
过程：
①取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养
②细胞培养一段时间后，分裂会受阻的原因？
悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、
有害代谢物积累和培中营养物质缺乏
等因素而分裂受阻。贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素的影响外，还会发生接触抑制现象。
二、细胞工程
4、动物细胞培养
过程：
③胰蛋白酶两次处理的目的
第一次：将组织分散成单个细胞
第二次：贴满瓶壁的细胞分散成单个细胞
④区分原代培养和传代培养的关键：
是否分瓶培养。
二、细胞工程
5、动物细胞融合
原理：细胞膜的流动性
不同DNA的两个细胞
融合
有丝分裂
两个完整的杂交细胞
诱导方式
物理法：离心、振动、电激
生物法：灭活的病毒诱导法
化学法：聚乙二醇（PEG)
突破了有性杂交方
法的局限，使远缘
杂交成为可能。
二、细胞工程
6、单克隆抗体
原理：细胞膜的流动性、细胞的增殖。
2次筛选目的不同：
①第1次：获得杂交瘤细胞。
②第2次：获得能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞。
二、细胞工程
7、动物体细胞核移植技术和克隆动物
原理：动物细胞核的全能性
① 细胞体积比较大，易操作
② 卵黄多营养丰富，为发育提供充足的营养。
③此时具有受精能力，细胞质内存在激发细胞核全能性表达的物质。
去核方法：
显微操作（去核）法
二、细胞工程
7、动物体细胞核移植技术和克隆动物
原理：动物细胞核的全能性
用物理或化学方法（电刺激、Ca2+载体、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等）激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程
核移植获得的克隆动物与提供细胞核的亲本性状可能不同的三个原因：①克隆动物遗传物质来自两个亲本。②发育过程中可能发生基因突变或染色体变异。③外界环境可能引起表型改变。
二、细胞工程
7、动物体细胞核移植技术和克隆动物
原理：动物细胞核的全能性
动物细胞核移植
早期胚胎培养
胚胎移植
动物细胞融合
动物细胞培养
应用到的技术：
二、细胞工程
8、受精过程中的“三大反应”“两道屏障”
受精过程中的三大反应
酶解反应
获能后的精子与卵子相遇时，释放多种酶以溶解卵细胞膜外的一些结构
内容
作用
利于精子与卵细胞膜接触
透明带反应
卵细胞膜
反应
精子触及卵细胞膜的瞬间产生阻止后来的精子进人透明带的生理反应
内容
防止多精入卵的两道屏障
精子人卵后，卵细胞膜立即产生拒绝其他精子进入的生理反应
内容
二、细胞工程
9、哺乳动物的早期胚胎发育过程
受精卵
分裂方式:有丝分裂
分裂特点:细胞数量不断增加，但胚胎的总体积并不增加
桑葚胚
卵裂产生的子细胞逐渐形成致密的细胞团形似桑葚
囊胚
组成:内细胞团、滋养层、囊胚腔
特点:细胞已分化，内细胞团将发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞将发育成胎膜和胎盘
卵裂
二、细胞工程
9、哺乳动物的早期胚胎发育过程
囊胚
组成:内细胞团、滋养层、囊胚腔
特点:细胞已分化，内细胞团将发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞将发育成胎膜和胎盘
孵化
出现内、中、外三个胚层的分化
原肠胚
幼体
二、细胞工程
10、胚胎移植的操作流程
对供受体的选择和处理
选择：遗传性状优良和生产能力强的供体、有健康的体质和正常繁殖能力的受体
处理:同期发情处理和对供体母畜进行超数排卵处理→促性腺激素
收集：冲卵
检查：对胚胎进行质量检查，这时胚胎应发育到桑葚胚或囊胚阶段
处理：直接向受体移植或放入-196℃的液氮中保存
配种或进行人工授精
对胚胎的收集、检查处理
不在原肠胚阶段移植，因为此时分化程度高，移植成功率很低，另外不能直接移植受精卵
二、细胞工程
10、胚胎移植的操作流程
收集：冲卵
检查：对胚胎进行质量检查，这时胚胎应发育到桑葚胚或囊胚阶段
处理：直接向受体移植或放入-196℃的液氮中保存
对胚胎的收集、检查处理
不在原肠胚阶段移植，因为此时分化程度高，移植成功率很低，另外不能直接移植受精卵
移植胚胎
对受体进行妊娠检查
二、细胞工程
供受体：
(1)选择：
①供体:遗传性状优良、生产能力强
②受体:同一物种，健康体质，正常繁殖能力
(2)两次处理：
①同期发情处理（供、受体母牛）：激素
②超数排卵处理（供体母牛）：促性腺激素
(3)两次检查：
①收集胚胎后，检查胚胎质量
②胚胎移植后，对受体进行妊娠检查
二、细胞工程
生理学基础：
（1）同期发情处理：使供、受体生殖器官生理变化相同，生理环境相同
（2）胚胎收集的基础：早期胚胎处于游离状态
（3）胚胎在受体内存活的基础：不发生免疫排斥反应
（4）受体不影响胚胎的遗传特性
胚胎移植实质：
早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
二、细胞工程
11、胚胎分割
无性繁殖或克隆
材料
发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚
实质
胚胎分割可增加动物后代的数量，其实质是动物的无性繁殖或克隆
成功关键点
对囊胚分割时，注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。对未知性别的胚胎可以取滋养层细胞，做DNA分析进行性别鉴定
真题练习
1．（2025·浙江·高考真题）某研究小组进行微型月季的快速繁殖研究，结果如表所示。
注：从生苗为丛状生长的幼苗，IBA（吲哚丁酸）为生长素类物质
流程 最佳措施或最适培养基
①外植体腋芽消毒 75%乙醇浸泡30s+5%NaClO浸泡6min
②诱导出丛生苗 MS+3.0mg·L-16-BA+0.05mg·L-1NAA
③丛生苗的扩增 MS+2.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA
④丛生苗的生根 1/2MS+0.25mg·L-1IBA+0.25mg·L-1NAA
真题练习
下列叙述正确的是（ ）
A．流程①的效果取决于消毒剂浓度
B．流程②不需要经过脱分化形成愈伤组织的阶段
C．与流程②相比，流程③培养基中细胞分裂素类与生长素类物质的比值更大
D．与流程③相比，提高流程④培养基的盐浓度有利于从生苗的生根
B
真题练习
解析：
A、流程①中，消毒效果不仅取决于消毒剂浓度，还取决于消毒时间和消毒剂种类，A错误；
B、流程②不需要经过脱分化形成愈伤组织的阶段，直接经腋芽直接分化为丛生苗，B正确；
C、流程②与流程③都是分化长出芽，故两者培养基中细胞分裂素类与生长素类物质的比值相同，C错误；
D、与流程③相比，提高流程④培养基的IBA浓度有利于从生苗的生根，D错误。
真题练习
2．（2024·海南·高考真题）海南龙血树具有药用和观赏价值，可利用植物组织培养技术产生愈伤组织，进而获得该种植株。动物细胞融合技术可将骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，进而制备单克隆抗体。下列有关这两种技术的叙述，正确的是（ ）
A．利用的原理均是细胞的全能性
B．使用的培养基均需添加葡萄糖和血清
C．培养时的温度和pH均相同
D．产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力
D
真题练习
解析：
A、利用植物组织培养技术获得海南龙血树，利用的原理是细胞的全能性；制备单克隆抗体使用了动物细胞培养技术和细胞融合技术，这两种技术利用的原理分别是细胞的增殖和细胞膜的流动性，A错误；
B、利用植物组织培养技术获得海南龙血树，使用的培养基中添加的是蔗糖，不需添加葡萄糖和血清，B错误；
C、由于植物细胞和动物细胞生长所需的适宜温度和pH存在差异，所以培养时的温度和pH均不相同， C错误；
D、愈伤组织是外植体（离体的植物器官、组织或细胞）经脱分化形成的，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合后形成的，因此产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力，D正确。
真题练习
3．（2024·江苏·高考真题）图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是（ ）
A．步骤①添加盐酸以去除细胞壁
B．步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗
C．原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间
D．台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养
C
真题练习
解析：
A、步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞，其原理是酶的专一性，A错误；
B、步骤②吸取原生质体放入等渗液中清洗，否则会导致原生质体吸水涨破，B错误；
C、结合图示可知原生质体处于甘露醇和蔗糖溶液之间，因而可推测原生质体的密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间，C正确；
D、台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养，染成蓝色的原生质体活性差或死亡，D错误。
真题练习
4．（2024·吉林·高考真题）迷迭香酸具有多种药理活性。进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错误的是（ ）
A．迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体
B．诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸
C．悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团
D．茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率
B
真题练习
解析：
A、迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体，生长旺盛，分裂能力较强，A正确；
B、诱导愈伤组织时需加入NAA和细胞分裂素，B错误；
C、悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团，获得更多的营养物质和氧气，使得其可以进一步分裂，C正确；
D、加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量，推测茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物（不是植物生长所必须的）的合成速率，D正确。
真题练习
5．（2024·江苏·高考真题）从牛卵巢采集卵母细胞进行体外成熟培养，探究高温对卵母细胞成熟的影响，结果如图所示。下列相关叙述错误的有（ ）

A．选取发育状态一致的卵母细胞进行培养
B．体外培养卵母细胞时通常加入湿热灭菌后的血清
C．对采集的卵母细胞传代培养以产生大量卵细胞
D．体外培养时高温提高了卵母细胞发育的成熟率
BCD
真题练习
解析：
A、选取发育状态一致的卵母细胞进行培养，这样可以排除其他因素的干扰，保证实验结果是由温度这一变量引起的，A正确；
B、体外培养卵母细胞时通常加入血清，但是动物血清并不能进行湿热灭菌，否则会使其中部分有效成分失活，B错误；
C、卵母细胞不能进行传代培养，因为卵母细胞是生殖细胞，不具有连续分裂的能力，C错误；
D、由图可知，高温降低了卵母细胞发育的成熟率，而不是提高，D错误。
真题练习
6．（2024·江西·高考真题）某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S（含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体）。为了建立一种灵敏、高效检测S蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S单克隆抗体（如图）。
真题练习
6．（2024·江西·高考真题）某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S（含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体）。为了建立一种灵敏、高效检测S蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S单克隆抗体（如图）。
下列说法正确的是（ ）
A．利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞
B．制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B是相同的单克隆抗体
C．用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存
D．单克隆抗体A和单克隆抗体B都能够特异性识别S蛋白
AD
知识导图
基因工程
知识导图
基因工程
知识导图
基因工程
DNA的粗提取与鉴定
提取DNA的原理
DNA不于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
鉴定DNA的原理
在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色。
应用
农牧业方面的应用
医药卫生领域的应用
食品工业方面的应用
蛋白质工程
三、基因工程
1、基因工程的理论基础
①DNA的基本组成单位相同（四种脱氧核苷酸）
②都遵循碱基互补配对原则
③DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
拼接的基础
①基因是控制生物性状的结构与功能单位
②遗传信息的传递都遵循中心法则
③生物界几乎共用一套遗传密码
表达的基础
三、基因工程
2、基因工程的三种基本工具
作用：识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并切开特定部位两个核苷酸之间的磷酸二酯键
结果：产生黏性末端或平末端
限制性内切核酸酶
载体
作用：能将双链DNA片段“缝合”起来恢复被限制酶切开的磷酸二酯键
种类：E.coliDNA连接酶：连接黏性末端
T4DNA连接酶：既能连接黏性末端也能连接平末端
DNA连接酶
三、基因工程
2、基因工程的三种基本工具
种类：质粒、噬菌体、动植物病毒等
须具备的条件：能自我复制；有一个至多个限制酶切割位点；有特殊的标记基因；对受体细胞无毒害
载体
三、基因工程
3、与DNA有关的几种酶的比较
名称 作用过程 作用部位 作用结果
限制酶 基因工程 磷酸二酯键 将DNA切开
DNA连接酶 基因工程 磷酸二酯键 将两个DNA片段连接为一个DNA分子
解旋酶 DNA复制 碱基对之间的氢键 将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链
DNA聚合酶 DNA复制 磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端
三、基因工程
3、与DNA有关的几种酶的比较
名称 作用过程 作用部位 作用结果
RNA聚合酶 转录 磷酸二酯键 将单个核苷酸依次连接到单链末端
DNA（水解）酶 — 磷酸二酯键 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
聚合酶 PCR 磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸依次连接到引物末端
三、基因工程
4、图解限制酶的选择依据
(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类
①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstI
②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaI。
③为避免目的基因与质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstI和EcoRI两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。
三、基因工程
5、基因工程的基本操作程序
筛选方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选
获取方法：常用PCR特异性快速扩增目的基因
目的基因的筛选与获取
组成
基因表达载体的构建（核心步骤）
三、基因工程
5、基因工程的基本操作程序
植物：农杆菌转化法、花粉管通道法
动物：显微注射技术(导入受精卵)
微生物：Ca2+处理法
将目的基因导入受体细胞
分子水平：PCR等技术、抗原-抗体杂交
个体生物学水平：抗性、耐性实验
目的基因的检测与鉴定
三、基因工程
6、PCR技术及应用
含义：聚合酶链式反应的缩写，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术
PCR技术原理与条件
原理：DNA半保留复制模板
条件：DNA、引物、四种脱氧核苷酸、缓冲液(含Mg2+)、耐高温的DNA、聚合酶(Taq DNA聚合酶)
前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列根据这一序列合成引物
三、基因工程
6、PCR技术及应用
扩增方向：DNA的合成方向总是从子链的5'端向3'端延伸
PCR技术原理与条件
引物：是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸→体内DNA复制引物是RNA
目的：短时间内大量扩增目的基因
产物鉴定：常采用琼脂糖凝胶电泳法→DNA带负电荷,向正极方向移动
三、基因工程
7.PCR扩增目的基因的过程
结果：
① n次复制后含有引物A的_______个。
含有引物B的_______个。同时含有引物A和B的_______个。
②从第____次扩增开始能够获得单纯的目的基因。
3
2n-1
2n-1
2n-2
三、基因工程
7、蛋白质工程
操作手段：基因改造或合成基因
实质：通过改造或合成基因，来定向改造现有蛋白质或制造新的蛋白质。
实验思路：
应用：医药方面、工业方面、农业方面
三、基因工程
8、DNA片段的电泳鉴定
原理：在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的
大小和构象等有关
鉴定：凝胶中DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下
被检测出来
注意：要避免外源DNA等因素的污染
真题练习
1．（2024·湖南·高考真题）某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，分析可能的原因并提出解决方法。下列叙述错误的是（　　）
A．限制酶失活，更换新的限制酶
B．酶切条件不合适，调整反应条件如温度和酶的用量等
C．质粒DNA突变导致酶识别位点缺失，更换正常质粒DNA
D．酶切位点被甲基化修饰，换用对DNA甲基化不敏感的限制酶
B
真题练习
解析：
A、限制酶失活会使DNA完全不被酶切，此时应更换新的限制酶，A正确；
B、酶切条件不合适通常会使切割效果下降，调整反应条件如温度和PH等，调整酶的用量没有作用，B错误；
C、质粒DNA突变会导致限制酶识别位点缺失，进而造成限制酶无法进行切割，此时应更换为正常质粒，C正确；
D、质粒DNA上酶切位点被甲基化修饰，会导致对DNA甲基化敏感的限制酶无法进行酶切，此时应换用对DNA甲基化不敏感的限制酶，D正确。
真题练习
2.（2024·浙江·高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。
疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病，可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白，在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，从而获得了对氯喹的抗性。对患者进行抗性筛查，区分氯喹敏感患者和氯喹抗性患者，以利于分类治疗。
研究人员根据pfcrt基因的序列，设计了F1、F2、R1和R2等4种备选引物，用于扩增目的片段，如图甲所示。为选出正确和有效的引物，以疟原虫基因组DNA为模板进行PCR，产物的电泳结果如图乙所示。
真题练习
下列关于引物F1、F2、R1和R2的叙述，错误的是（ ）
A．F1-R1引物可用于特异性地扩增目的片段
B．F1-R2引物不能用于特异性地扩增目的片段
C．F2为无效引物，没有扩增功能，无法使用
D．R2引物可用于特异性地扩增目的片段
D
真题练习
解析：
A、根据图乙结果显示可知，F1-R1引物只扩增出一条片段,说明能够用于特异性扩增目的片段，A正确；
B、根据图乙信息可知，F1-R2引物扩增条带为三条，说明其不能用于特异性扩增目的片段，B正确；
C、根据图乙信息可知，F1-R1能扩增目的1条带，F2-R1无法扩增目的条带，所以F2为无效引物，没有扩增功能，无法使用，C正确；
D、根据图乙显示可知，F1-R1引物只扩增出一条片段，F1-R2引物扩增条带为三条，说明R2引物无法特异性的扩增目的条带，D错误。
故选D。
真题练习
3．为了筛查疟原虫感染者，以及区分对氯喹的敏感性。现有6份血样，处理后进行PCR。产物用限制酶ApoⅠ消化，酶解产物的电泳结果如图所示。
1~6号血样中，来自于氯喹抗性患者的是（ ）
A．1号和6号 B．2号和4号
C．3号和5号 D．1号、2号、4号和6号
B
真题练习
解析：
根据题干信息可知
疟原虫pfcrt基因编码的蛋白，在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，从而获得了对氯喹的抗性。根据酶切位点可知，在具有氯喹抗性的基因组没有ApoⅠ酶切位点，而敏感性基因组中具有该酶切位点，因此对6份血样处理后进行PCR，产物用限制酶ApoⅠ消化，酶解产物的电泳出现两条带则为敏感型，只有一条带的为抗性，所以1~6号血样中，来自于氯喹抗性患者的是2号和4号，B正确，ACD错误。
真题练习
4．（2024·安徽·高考真题）下列关于“DNA 粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A．实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低
B．利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNA
C．DNA在不同浓度NaC1溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物
D．将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白质杂质
D
真题练习
解析：
A、研磨液有利于DNA的溶解，换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低，A正确；
B、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可分离DNA，B正确；
C、DNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl浓度的变化而改变，因此可用不同浓度的NaCl溶液对DNA进行粗提取，C正确；
D、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，二苯胺试剂用于鉴定DNA，D错误。
真题练习
5．（2024·山东·高考真题）制备荧光标记的DNA探针时，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大肠杆菌DNA聚合酶、扩增缓冲液、H2O和4种脱氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和碱基被荧光标记的dATP）的反应管①~④中，分别加入如表所示的适量单链DNA。已知形成的双链DNA区遵循碱基互补配对原则，且在本实验的温度条件下不能产生小于9个连续碱基对的双链DNA区。能得到带有荧光标记的DNA探针的反应管有（　　）
D
反应管 加入的单链DNA
① 5'-GCCGATCTTTATA-3'
3'-GACCGGCTAGAAA-5'
② 5'-AGAGCCAATTGGC-3'
③ 5'-ATTTCCCGATCCG-3'
3'-AGGGCTAGGCATA-5'
④ 5'-TTCACTGGCCAGT-3'
A．①② B．②③ C．①④ D．③④
真题练习
解析：
分析反应管①～④中分别加入的适量单链DNA可知，①中两条单链DNA分子之间具有互补的序列，但双链DNA区之外的3'端无模板，因此无法进行DNA合成，不能得到带有荧光标记的DNA探针；②中单链DNA分子内具有自身互补的序列，由于在本实验的温度条件下不能产生小于9个连续碱基对的双链DNA区，故一条单链DNA分子不发生自身环化，但两条链可以形成双链DNA区，由于DNA合成的链中不含碱基A，不能得到带有荧光标记的DNA探针；③中两条单链DNA分子之间具有互补的序列，且双链DNA区之外的3'端有模板和碱基T，因此进行DNA合成能得到带有荧光标记的DNA探针；④中单链DNA分子内具有自身互补的序列，一条单链DNA分子不发生自身环化，两条链可以形成双链DNA区，且双链DNA区之外的3'端有模板和碱基T，因此进行DNA合成能得到带有荧光标记的DNA探针。
综上，能得到带有荧光标记的DNA探针的反应管有③④。
真题练习
6．（2024·福建·高考真题）病毒感染初期，机体会分泌干扰素并作用于细胞受体IFNAR来应对感染。麻疹是由麻疹病毒感染引起的急性传染病。已知人白细胞分化抗原46（hCD46）是麻疹病毒入侵细胞的主要受体，小鼠没有该受体，科研人员构建hCD46转基因小鼠用于相关研究，部分流程如图所示。
真题练习
回答下列问题：
(1)利用PCR技术获取目的基因hCD46，复性温度下发生的扩增过程是 。
(2)将hCD46接入质粒应选用的限制酶组合是 。为提高转基因效率，同时避免标记基因进入胚胎体内，应选用 限制酶组合将重组质粒变为线性DNA。
(3)为获取大量胚胎用于移植，可用激素处理小鼠a，使其 。将胚胎移植到小鼠c的子宫中，应选用桑葚胚的原因是 。
(4)利用PCR技术对子代小鼠进行hCD46基因检测，应设置不加DNA模板的对照组，目的是 。
(5)若能进一步构建既表达hCD46受体又敲除IFNAR基因的小鼠，则该小鼠对麻疹病毒具有高易感性，原因是 。
真题练习
答案
(1)两种引物分别与含hCD46基因的两条模板链结合
(2) EcoRⅠ和NotI AgeⅠ和HindⅢ
(3) 超数排卵 桑葚胚易于在小鼠子宫着床
(4)排除PCR体系中外源DNA的污染
(5)该小鼠能被麻疹病毒感染，且干扰素无法作用于IFNAR以应对感染
真题练习
7．（2024·江苏·高考真题）为了高效纯化超氧化物歧化酶（SOD），科研人员将ELP50片段插入pET-SOD构建重组质粒pET-SOD-ELP50，以融合表达SOD-ELP50蛋白，过程如图1。其中，ELP50是由人工合成的DNA片段，序列为：限制酶a识别序列-（GTTCCTGGTGTTGGC）50-限制酶b识别序列，50为重复次数。
请回答下列问题：
真题练习
(1)步骤①双酶切时，需使用的限制酶a和限制酶b分别是 。
(2)步骤②转化时，科研人员常用 处理大肠杆菌，使细胞处于感受态；转化后的大肠杆菌采用含有 的培养基进行筛选。用PCR技术筛选成功导入pET-SOD-ELP50的大肠杆菌，应选用的一对引物是 。
(3)步骤③大肠杆菌中RNA聚合酶与 结合，驱动转录，翻译SOD-ELP50蛋白。已知蛋白质中氨基酸残基的平均相对分子质量约为0.11kDa，将表达的蛋白先进行凝胶电泳，然后用SOD抗体进行杂交，显示的条带应是 （从图2的“A~D”中选填）。
真题练习
(4)步骤④为探寻高效纯化SOD-ELP50蛋白的方法，科研人员研究了温度、NaCl对SOD-ELP50蛋白纯化效果的影响，部分结果如图3。
（ⅰ）20℃时，加入NaCl后实验结果是 。
（ⅱ）100℃时，导致各组中所有蛋白都沉淀的原因是 。
（ⅲ）据图分析，融合表达SOD-ELP50蛋白的优点有 。
真题练习
答案
(1)EcoR I、Hind Ⅲ
(2) CaCl2 卡那霉素 S-F和P-R
(3) 启动子 C
(4) SOD-ELP50组纯化蛋白数量更多 高温使蛋白变性 低温下添加NaCl有利于SOD蛋白纯化，杂蛋白较少，有利于酶活性的保持【注意】字体安装之后
必须要重启PPT，字体
（适用于字体种类较少的情况） 才能显示出来。
找到压缩包中 鼠标左键双击 双击后，选择左上角的“安装”
的字体文件夹 字体文件
【注意】字体安装之后
也必须重启PPT。
（适用于字体种类较多的情况）
找到压缩包中 打开后有较多字体安装包，Ctrl+A全选 将字体文件包粘贴到：C盘 >
的字体文件夹 windows文件夹 > fonts文件夹
（Mac系统的安装与windows系统类似，仅提供路径）
找到压缩包中的字体文件夹 应用窗口中打开“字体册”
鼠标左键双击字体文件 界面左上方点击“+”
双击后，选择左上角的“安装” 选中要安装的字体，点击“打开”
【注意】Mac系统与Windows系统一样，都需要重启PPT，字体才能显示出来。
“明明自己电脑上安装成功了，播放也正常的，但拿去教室
电脑上播放，字体又变得乱七八糟！”
老师们自己电脑上安装成功了，代表安装在自己电脑上的C盘
（一般情况下），但如果教室电脑上没有安装过PPT内所用的
特殊字体，在打开PPT时，会出现字体不一或缺失的情况。
把字体文件复制粘贴到教室电脑上的 C盘> windows > fonts文件夹里即可。
在教室电脑上找到压 打开后框选中字体 将字体文件包粘贴到：C盘 >
缩包中的字体文件夹 包，Ctrl+C复制 windows文件夹 > fonts文件夹
【注意】转图片后，图
片会自动对齐页面正中
在自己的电脑上将有特殊字体的可编辑文字转化成图片即可。 心，需自己移动到原位
选中含有特殊字体的可编 Ctrl+V粘贴，点击右下角 点击“粘贴选项” 下右边
辑文字框，Ctrl+X剪切 图标 的图标，选择粘贴为图片
“下载了字体，安装也成功了，电脑也重启了，但PPT内却
找不到这款字体了？！”
一般这种情况出现在有多种字重的情况（例：阿里巴巴普惠
体），部分字体隐藏了。字重：可以理解为改款字体的不同粗细呈现
最直接的方法是 完毕后，
打开PPT，直接搜索字体+字重。
前提是确保完成一下操作：①字体安装后重启PPT； ②把这款字体整个系列（全部字重）都已下载

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