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(共20张PPT)
第2节 微生物的培养技术及应用
第1章 传统发酵技术的应用
第2课时 酵母菌的纯培养
三、微生物的纯培养
由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
1.概念：
2.内容：
（1）配制培养基
（2）灭菌（培养基和器具）
（3）微生物接种
（4）分离
（5）恒温箱中培养
酵母菌的纯培养
探究-实践
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
1、菌落：
2、纯培养：
采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。
3、原理：
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
方法步骤
1、制备培养基
1）配制培养基
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml.
2）灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h.
包器材
倒平板的具体操作：
3）倒平板
——待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
1.拔出锥形瓶的棉塞
2.将瓶口迅速通过火焰
3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基到人，立即盖上皿盖。
4.等待培养皿冷却后，将培养皿倒过来放置。
灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。
倒平板注意事项：
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用这个平板培养微生物。
防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
问题讨论
2、接种和分离酵母菌
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
(1)原理：
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
分散或稀释
生长繁殖
连续划线法
分区划线法
(2)“平板划线”实验操作
(2)“平板划线”实验操作
1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞
3、将试管口通过火焰
.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液
5、将试管通过火焰，并塞上棉塞
6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连
8、将平板倒置放入培养箱中培养。
划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）
1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
分区划线法
1
2
3
4
5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.
②划线首尾不能相接
③每次划线前接种环进行灭菌
④划线后,培养皿倒置培养
平板划线法注意事项:
灼烧时期 目的
取菌种前
每次划线前
接种结束后
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
杀死接种环上原有微生物
问题讨论
问题讨论
3.培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h。
(1)为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。( )(2)获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。( )(3)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。( )(4)倒平板后,待平板冷凝之后需将其倒置。( )(5)若皿盖和皿底之间溅上培养基,这个培养基不可再用。( )
×
√
√
√
√
1.(2021·山东青岛市高二期中)在分离、纯化细菌的实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如下图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是（ ）
A.每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌
B.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
C.甲图中的a区域为划线的起始区域
D.蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行
C
8．下列有关平板划线操作的叙述，错误的是(　　)A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B．接种环在平板上随机划线时不要划破培养基C．在蘸取菌液前后均要将盛有菌液的试管口通过火焰D．平板冷却后倒置，放入恒温培养箱中培养
12．下图为实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是(　　)
A．①步骤使用的培养基是已经调节过pH并灭菌的培养基
B．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
C．③到④的过程中，接种环共灼烧了5次
D．④步骤操作时，不能将第1区和第5区的划线相连
B
C
17．某同学配制好含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后，对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌，当培养基温度下降到50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，待培养基冷却至室温，按照下表进行处理：
将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2～3 d，观察每个培养皿中的菌落特征和数目。请回答下列问题：
(1)实验中E组的作用是____________，若该组的培养基表面没有菌落生长，这说明__________________。
(2)“在酒精灯火焰附近”进行相关操作是为了避免周围环境中微生物的污染；“待培养基冷却至室温”的目的是使培养基凝固和防止培养基温度过高杀死接种在其上的微生物。
实验结束后，对使用过的培养基应进行灭菌处理。
组别 处理
A组 打开培养皿盖，距地面0.3 m处暴露15 min
B组 打开培养皿盖，距地面0.6 m处暴露15 min
C组 打开培养皿盖，距地面0.9 m处暴露15 min
D组 打开培养皿盖，距地面1.2 m处暴露15 min
E组 不打开培养皿盖
(空白)对照
培养基灭菌合格
17．某同学配制好含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后，对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌，当培养基温度下降到50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，待培养基冷却至室温，按照下表进行处理：
将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2～3 d，观察每个培养皿中的菌落特征和数目。请回答下列问题：
(3)若挑取培养皿中的某一菌落，利用平板划线法进行纯化，则在进行第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______________________________________________________。
组别 处理
A组 打开培养皿盖，距地面0.3 m处暴露15 min
B组 打开培养皿盖，距地面0.6 m处暴露15 min
C组 打开培养皿盖，距地面0.9 m处暴露15 min
D组 打开培养皿盖，距地面1.2 m处暴露15 min
E组 不打开培养皿盖
将聚集的菌体逐渐分散以便获得单个菌落
11．下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是(　　)
A．甲、乙、丙都是异养微生物
B．甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
D．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
序号 粉状硫10 g K2HPO44 g FeSO40.5 g 蔗糖10 g (NH4)2SO40.4 g H2O100 mL MgSO49.25 g CaCl20.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
C
5. 如表是某微生物培养基的成分及含量,请据此回答下列问题:
(1)上表培养基可培养的微生物类型是____________ 。
(2)若除去成分②,加入(CH2O),该培养基可用于培养____________。
(3)表中营养成分共有________类。
(4)使用后的培养基在丢弃前,要进行的是__________。
(5)题表中各成分含量确定的原则是__________________________。
(6)若要利用题表培养基观察菌落,应该增加的成分是____________。
自养型微生物
固氮微生物
3
灭菌
依微生物的生长需要确定
琼脂(或凝固剂)
高压蒸汽灭菌
液体培养基
原有前程可奔赴，亦有岁月可回首
感谢观看

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