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微专题12　发酵工程与细胞工程
一、选择题
1.大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如图所示，下列叙述错误的是（　　）
A.保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少
B.米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源
C.米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物
D.后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味
2.（2025·广东广州二模）研究人员以YMA培养基（10 g甘露醇、0.4 g酵母粉、0.5 g KH2PO4、0.1 g NaCl、0.2 g MgSO4·7H2O，定容至1 L）为基础，探究某种大豆根瘤菌的碳源利用情况，实验结果如图。下列叙述错误的是（　　）
A.添加酵母粉作为氮源，原因可能是根瘤菌在体外培养时固氮能力有所下降
B.实验组需将甘露醇替换为等量的其他碳源，其他条件保持一致
C.测定根瘤菌的数量可以使用显微镜直接计数法
D.实验结果直接证明大豆通过蔗糖的形式向根瘤菌提供有机营养
3.（2025·辽宁大连一模）黑曲霉多不耐高温，发酵获得柠檬酸的过程需大量冷却水控制温度，生产成本高。现利用原生质体融合技术获得耐高温高产黑曲霉，过程如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A.处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株
B.处理②、③用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
C.处理④升高温度即可筛选出耐高温高产黑曲霉
D.发酵结束后通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸
4.中药山茱萸的主要活性成分是马钱子苷，其具有活血通络、祛风除湿的功效。为探究不同浓度的马钱子苷对神经干细胞分化的影响，科研人员进行了相关实验，结果如图。下列有关分析正确的是（　　）
A.培养神经干细胞时需提供无菌、无毒以及纯氧的培养环境
B.可取山茱萸的外植体进行组织培养以获得大量的马钱子苷
C.神经干细胞分化为其他类型的细胞体现其具有全能性
D.马钱子苷溶液具有低浓度促进分化，高浓度抑制分化的作用
5.（2025·山东高考14题）利用动物体细胞核移植技术培育转基因牛的过程如图所示，下列说法错误的是（　　）
A.对牛乙注射促性腺激素是为了收集更多的卵母细胞
B.卵母细胞去核应在其减数分裂Ⅰ中期进行
C.培养牛甲的体细胞时应定期更换培养液
D.可用PCR技术鉴定犊牛丁是否为转基因牛
6.（2025·河北高考18题改编）隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一。从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述不正确的是（　　）
A.隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B.采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C.选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D.适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量
7.在制备单克隆抗体过程中，诱导免疫脾细胞（B淋巴细胞）和骨髓瘤细胞融合后，在培养体系中会存在多种细胞，常使用HAT培养基筛选所需的杂交瘤细胞，其原理如图（已知哺乳动物细胞中有两条途径可以合成DNA，一条途径会被HAT培养基中的氨基蝶呤阻断，另一条途径需要关键酶HGPRT的参与）。下列分析正确的是（　　）
注：＋/－分别代表存在和缺失。
A.诱导融合后只存在未融合的亲本细胞、融合同种核的细胞和产生同种抗体的杂交瘤细胞
B.免疫脾细胞的DNA合成过程被HAT培养基中的氨基蝶呤阻断，从而不能在体外无限繁殖
C.实验过程中使用的骨髓瘤细胞是经过人工筛选的缺陷型细胞，不具备无限增殖的能力
D.融合成功的杂交瘤细胞在HAT培养基中DNA的合成会被干扰，但能够存活并无限增殖
二、非选择题
8.（2025·江西九江二模）大肠杆菌常寄生于人和动物肠道内，一般情况下不会致病，但在具有某些特定毒力因子作用时具有致病性，能引起人和动物共同感染，影响畜牧业发展及人体的健康。回答下列问题。
（1）大肠杆菌在生物技术领域有着重要的应用价值。大肠杆菌细胞中的质粒可作为“分子运输车”将基因导入受体细胞，质粒适合作为载体，具有的特点有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（回答2点）；大肠杆菌因还具有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
等优点（回答2点），故在发酵工程中常作为工程菌生产药物和疫苗。
（2）科研人员制备了浸泡有4种抗生素溶液的6 mm圆形滤纸片，分别放置在接种有大肠杆菌培养基的不同区域，经培养后发现滤纸片附近都出现了抑菌圈，且抑菌圈直径　　　　（填“越大”或“越小”）的抗生素，抑菌效果越明显。而在直径最大的抑菌圈边缘附近还出现了部分菌落，分析可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（回答2点即可）。
（3）为检测某品牌的饮用矿泉水中大肠杆菌（活菌）数量是否超标，可抽取1 mL矿泉水经10倍稀释后，利用　　　　　　　在显微镜下直接观察计数；显微镜下观察结果如图，则矿泉水中大肠杆菌的数量约为　　　个/L（注：仪器规格为1 mm×1 mm×0.1 mm，25×16，用图中加粗的中方格代表整个计数室内中方格大肠杆菌数的平均值）。
微专题12　发酵工程与细胞工程
1.B　在保温发酵过程中，米曲霉等微生物会分泌多种酶来分解有机物。在分解过程中，复杂的有机物会被逐步分解成小分子有机物，所以有机物的种类会增加。同时，微生物的呼吸作用会消耗有机物来获取能量，导致有机物含量减少，A正确；在米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供碳源，B错误；米曲霉发酵时需不断翻酱的目的是让米曲霉接触到充足的氧气，由此推断米曲霉是需氧型微生物，C正确；后期发酵中乳酸菌会进行发酵产生乳酸，乳酸可以降低环境的pH，很多杂菌在酸性环境中生长会受到抑制，同时乳酸也能赋予豆瓣酱独特的酸味，D正确。
2.D　根瘤菌在自然界中与豆科植物共生时，才能发挥固氮作用，因为根瘤菌都依赖豆科植物为其提供有机物，所以在体外培养时，其固氮能力可能受到抑制或下降，因此需要额外添加酵母粉作为氮源，A正确；本实验为探究大豆根瘤菌对不同碳源的利用情况，实验自变量为碳源的种类，为控制无关变量，保证实验为单一变量，故实验组需将甘露醇替换为等量的其他碳源，其他条件保持一致，B正确；显微镜直接计数法计数是测定培养液中微生物数量的方法之一，故该实验中测定根瘤菌的数量可以使用显微镜直接计数法，C正确；据题干信息和实验结果分析可知，当甘露醇被蔗糖替换后，根瘤菌其相对数量与甘露醇的对照组相当，故实验结果只能说明大豆根瘤菌能利用蔗糖作为碳源进行生长繁殖，不能直接证明大豆在自然条件下通过蔗糖的形式向根瘤菌提供有机营养，D错误。
3.A　诱变的原理是基因突变，而基因突变具有不定向性，故处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株，A正确；黑曲霉的细胞壁成分不是纤维素和果胶，故处理②、③不可以用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，B错误；处理④升高温度后还需要进一步验证才能筛选出耐高温高产黑曲霉，C错误；发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢物，另一类是菌体本身。如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；如果产品是代谢物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取，可见题图发酵结束后不能通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸，D错误。
4.D　培养神经干细胞时需提供无菌、无毒以及含有95％空气、5％ CO2气体的培养环境，A错误；可取山茱萸的外植体进行脱分化形成愈伤组织后再进行植物细胞培养以获得大量的马钱子苷，B错误；神经干细胞分化为其他类型的细胞未体现其具有全能性，C错误；由题图可知，马钱子苷溶液对干细胞具有低浓度促进分化，高浓度抑制分化的作用，D正确。
5.B　胚胎工程中，往往需要对雌性供体进行超数排卵处理，即注射促性腺激素促使其产生更多的卵母细胞，A正确；卵母细胞培养至MⅡ期（减数分裂Ⅱ中期）进行去核，B错误；动物细胞培养时，培养液需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，C正确；PCR技术可以检测受体细胞中是否导入目的基因，D正确。
6.B　由题干信息知，隐甲藻属于异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片（富含有机碳）上生长繁殖，说明隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确；采集的腐烂叶片上含有隐甲藻，其经湿热灭菌后会杀死叶片上的隐甲藻，B错误；选择培养基中加入能抑制细菌生长而对隐甲藻无毒害作用的抗生素，有利于获得隐甲藻，C正确；隐甲藻属于好氧型藻类，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率可增加溶氧量，有利于隐甲藻的生长繁殖，以提高DHA产量，D正确。
7.D　诱导融合后会产生三种类型的细胞：未融合的亲本细胞、融合同种核的细胞和杂交瘤细胞，但杂交瘤细胞有多种类型，能够产生多种类型的抗体，A错误；免疫脾细胞是高度分化的细胞，本身就不具备无限繁殖能力，B错误；实验过程中使用的骨髓瘤细胞是经过人工筛选的缺陷型细胞，缺乏关键酶HGPRT，但仍具备通过另一条途径进行DNA合成从而实现无限增殖的能力，C错误；融合成功的杂交瘤细胞在HAT培养基（含有氨基蝶呤）中会失去一条DNA合成的途径，即DNA的合成会被干扰，但具有关键酶HGPRT，依然能够存活并无限增殖，D正确。
8.（1）具自我复制能力、有一到多个限制酶的酶切位点、常具有特殊的标记基因　代谢快、繁殖快、易培养、培养成本低　（2）越大　6 mm圆形滤纸片上的抗生素溶液扩散范围有限；抑菌圈边缘的菌落为耐药性的大肠杆菌（答案合理即可）　（3）细菌计数板　3.5×1010
解析：（1）质粒具有自我复制能力、有一到多个限制酶酶切位点、常具有特殊的标记基因等特点，常作为载体，由于大肠杆菌含有质粒，且大肠杆菌具有代谢快、繁殖快、易培养、培养成本低等优点，故在发酵工程中常作为工程菌生产药物和疫苗。（2）抑菌圈越大，说明其抑菌效果越明显，由于部分菌体出现了基因突变，导致其耐药性的出现，同时可能抗生素扩散范围有限，导致抑菌圈边缘附近出现了部分菌落。（3）利用显微镜直接计数时，可用细菌计数板在显微镜下直接计数。图示计数板为25×16规格，中格中有14个菌，所以1 L培养液含有14×25×10×103÷0.1×103＝3.5×1010个菌体。
3 / 3微专题12　发酵工程与细胞工程
一、微生物的培养与发酵工程
1.判断下列关于微生物培养和发酵工程表述的正误
（1）（2025·河南卷）食醋和黄酒发酵过程中，微生物繁殖越快发酵产物产率越高。（　　）
（2）（2023·山东卷）检测泡菜中亚硝酸盐的含量，可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低。（　　）
（3）（2024·河北卷）将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养，获得单菌落。（　　）
（4）（2025·湖南卷）用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质。（　　）
（5）（2024·贵州卷）稀释涂布平板法既可分离菌株又可用于计数。（　　）
（6）（2023·江苏卷）通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌。（　　）
（7）（2023·江苏卷）血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。（　　）
（8）（2025·陕晋宁青卷）培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同。（　　）
2.（选择性必修3 P7“探究·实践”）制作葡萄酒时，要将温度控制在18～30 ℃的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
利用葡萄酒制作葡萄醋时，需打开容器的盖子并罩上一层透气纱布，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
3.（2024·全国甲卷37题节选）（1）采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为　　　　个/mL。
4.（2024·安徽高考20题节选）大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　。发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经　　　　　　　　　，最终获得发酵产品。
5.（选择性必修3 P24“思考·讨论”）与传统的手工发酵相比，啤酒的工业化生产使啤酒的产量和质量明显提高，其所采用的工程手段有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
二、细胞工程
1.判断下列关于细胞工程表述的正误
（1）（2024·北京卷）大豆叶片细胞的细胞壁被酶解后，获得的原生质体失去全能性。（　　）
（2）（2024·浙江卷）提高生长素和细胞分裂素的比值可促进愈伤组织形成丛生芽。（　　）
（3）（2024·山东卷）体细胞杂交获得的杂种植株细胞具有来自亲本的2个细胞核。（　　）
（4）（2023·海南卷）营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制。（　　）
（5）（2023·辽宁卷）大量悬浮培养流感病毒的单克隆细胞，培养基pH不会影响单克隆细胞的病毒产量。（　）
（6）（2025·新课标卷）作物单倍体育种时，利用了由植物茎尖组织培养获得的单倍体。（　　）
（7）（2025·安徽卷）将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合的细胞即为能分泌所需抗体的细胞。（　）
2.（2023·湖北高考22题节选，选择性必修3 P48“相关信息”）添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
灭活病毒诱导细胞融合的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
三、胚胎工程
1.判断下列关于胚胎工程表述的正误
（1）（2024·湖北卷）生产中常采用胚胎工程技术快速繁殖波尔山羊，胚胎移植前可采集滋养层细胞进行遗传学检测。（　　）
（2）（2023·天津卷）生产试管动物的过程需要MⅡ期去核卵母细胞。（　　）
（3）（2025·黑吉辽蒙卷）为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替体细胞核移植。（　　）
（4）（2025·安徽卷）采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚或囊胚，因这两个时期的细胞未发生分化。（　　）
2.（2022·全国甲卷38题改编）在体外受精前要对精子进行获能处理，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　。以保存的囊胚和相应数量的非繁殖期受体母羊为材料进行操作，以获得具某公羊优良性状的后代，其主要操作步骤是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
命题点1　传统发酵和发酵工程
【高考例证】
（2025·甘肃高考15题）我国葡萄酒酿造历史悠久、传统发酵技术延续至今。发酵工程通过选育菌种和控制发酵条件等措施可优化传统发酵工艺，改善葡萄酒品质。下列叙述错误的是（　　）
A.传统发酵时，葡萄果皮上的多种微生物参与了葡萄酒的发酵过程
B.工业化生产时，酵母菌需在无氧条件下进行扩大培养和酒精发酵
C.通过诱变育种或基因工程育种能够改良葡萄酒发酵菌种的性状
D.大规模发酵时，需要监测发酵温度、pH值、罐压及溶解氧等参数
【挖掘拓展】
传统发酵技术与发酵工程的比较
比较项目 传统发酵技术 发酵工程
菌种来源 一般来自自然界，混合菌种发酵 一般是经过育种或筛选的优质菌种，单一菌种发酵
发酵方式 通常是固体、半固体发酵 通常是液体发酵
发酵设备 简单，一般容器 复杂，发酵罐
条件控制 通常不是很严格，与环境条件密切相关 通常比较严格，有专门的调控装置
【对点即练】
1.（2025·重庆高考6题）豆瓣酱是我国地方特色调味品，生产豆瓣酱时要将蚕豆瓣制作成豆瓣曲，再添加调料进一步发酵，下列说法错误的是（　　）
蚕豆瓣蚕豆与面粉混合物豆瓣曲
A.沸水浸泡能杀死蚕豆细胞，减少有机物消耗
B.面粉可为菌种的快速繁殖和生长提供营养
C.菌种中含有产蛋白酶和淀粉酶的微生物
D.豆瓣酱的制备主要是利用厌氧微生物发酵
2.（2025·广东二模）酿酒主要借助酵母菌的发酵作用，可以在家庭进行，也可以实现工业化生产。科研人员进行了关于杂种酵母菌在不同基质中的发酵测试，结果见图，下列叙述错误的是（　　）
A.实验结果表明，酵母菌对蔗糖和淀粉的利用效率相近
B.为提高酒精产量，实验过程应该保持严格的无氧条件
C.家庭酿酒可在糯米中加入适量白砂糖以提高发酵效率
D.家庭酿酒难以做到严格灭菌，需要通过消毒抑制杂菌生长
命题点2　微生物筛选与鉴定中的“圈”
【高考例证】
（2024·黑吉辽高考19题改编）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作错误的是（　　）
A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B.将采集的样品充分消毒后，用无菌水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C.将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D.判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
思维路径
从题干和图中提取关键信息，分析本题可考查的具体考点，并结合所学内容即可做出精准解答，相关信息即可考查的具体内容如图所示。
【挖掘拓展】
筛选与鉴定微生物的“圈”法
抑菌圈 透明圈 变色圈 生长圈
原 理 用抗生素等对菌体具有杀抑作用的物质抑制菌体的生长，形成清晰的抑菌圈 菌体能降解或利用浑浊或带有颜色的培养基中的某特定物质，在菌落周围形成清晰的透明圈 微生物代谢产物显色或代谢产物与特定指示剂反应而变色，在菌落周围会形成变色圈 代谢缺陷型微生物在能大量合成某特定营养物质的菌体周围生长，形成明显的生长圈
应 用 筛选与鉴定抗生素产生菌；评估待测药物的抑菌杀菌效应 筛选与鉴定能降解（或合成某种酶）和利用特定物质的微生物，如：用含刚果红的纤维素培养基筛选能分解纤维素的细菌 筛选与鉴定能合成某种酶或产物的微生物，如：用含酚红指示剂培养基筛选能利用尿素或产生脲酶的微生物 筛选特定营养物质产生菌；鉴定微生物的代谢缺陷
抑菌圈 透明圈 变色圈 生长圈
特 点 抑菌圈直径（抑菌圈/菌落）越大，抑菌作用越强，反之则越弱 透明圈与菌落大小的比值大，说明菌体降解某物质的能力强 变色圈的颜色及大小与微生物代谢产物及代谢能力相关 可根据生长圈的直径大小初步判断菌体合成和释放某物质的能力
【对点即练】
1.实验小组为了检测某化学药物是否会诱发基因突变，在特定选择培养基上培养组氨酸缺陷型细菌，并在培养基中间放置一张浸润一定浓度该药物的圆纸片，一段时间后实验结果如图所示，下列有关说法错误的是（　　）
A.该特定的选择培养基上应不含有组氨酸
B.内侧无细菌生长说明内侧细菌没有发生突变
C.该实验应设置不含该药物的培养基作为对照组
D.若适当提高该药物的浓度，则菌落范围可能会变大
2.（2025·山东菏泽二模）庆大霉素（GM）能抑制沙门氏菌的生长。研究人员为了探究LPC（用MRS培养基培养植物乳杆菌后获得的上清液）对沙门氏菌生长的影响及作用机制，在接种沙门氏菌的平板上做了五组不同处理，实验结果如图所示。下列说法错误的是（　　）
A.需将含沙门氏菌的菌液稀释到适宜浓度后用平板划线法接种
B.设置MRS是为了排除MRS培养基成分对实验结果的影响
C.Heat-LPC与LPC对比结果说明LPC的热稳定性比较强
D.LPC抑制沙门氏菌的机制可能是因为LPC含有酸性物质
命题点3　动、植物细胞培养
【高考例证】
1.（2025·黑吉辽蒙高考8题）利用植物组织培养技术获得红豆杉试管苗，有助于解决紫杉醇药源短缺问题。下列叙述正确的是（　　）
A.细胞分裂素和生长素的比例会影响愈伤组织的形成
B.培养基先分装到锥形瓶，封口后用干热灭菌法灭菌
C.芽原基细胞由于基因选择性表达，不能用作外植体
D.紫杉醇不能通过细胞产物的工厂化生产来获取， 植物组织培养优势明显
2.（2024·黑吉辽高考14题）从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是（　　）
A.传代培养时，培养皿需密封防止污染
B.选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C.直接用离心法收集细胞进行传代培养
D.细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
【挖掘拓展】
1.哺乳动物细胞培养过程中，细胞的变化及应用
对正常细胞进行体外培养时，要经历原代培养和1至多次的传代培养（N0为培养瓶中细胞的初始数量），图示为培养瓶中细胞的数量变化。原代培养与初次传代培养，细胞数量可呈“S”形增长，传代培养中会出现部分细胞停止分裂与衰老死亡，极少数细胞因发生核型改变而成为不死性细胞（具有癌细胞的特征）。通过细胞培养技术，可将核型未改变的细胞用于移植，可检测某药物对细胞代谢或增殖的影响，可研究导致细胞核型发生改变的因素及细胞增殖的调控等。
2.哺乳动物细胞的培养条件可与人体内环境稳态的维持及调节相联系。注意比较：
（1）培养液与人体细胞外液的化学组成（包括营养物质、激素等活性物质）、理化性质（pH、温度、渗透压等）；
（2）细胞的代谢（物质的吸收、转化等）及生命历程（增殖、衰老、癌变等）。
【对点即练】
1.与常规栽培技术相比，利用植物细胞培养进行药用次生代谢物的生产具有显著的优越性，根据不同的需求可以采用不同的技术流程（如图）。下列相关叙述错误的是（　　）
A.培养体系1、2、3中的细胞基因型不完全相同
B.上图的过程与植物组织培养都需要更换培养基
C.将目标产物合成途径中的关键酶基因导入悬浮细胞，可用花粉管通道法
D.愈伤组织没有叶绿体，是异养型细胞，因此需在培养基中加入有机碳源
2.细胞悬浮培养是将细胞接种于液体培养基中并保持良好分散状态的培养方式，细胞悬浮培养常在生物反应器（如发酵罐等）中进行。下列叙述错误的是（　　）
A.悬浮培养可以增加细胞与培养液的接触，促进营养物质的吸收
B.生物反应器能精确地控制温度、pH、溶解氧等培养条件
C.植物细胞培养用的是固体培养基，不能进行悬浮培养
D.在接种细胞之前，生物反应器必须经过严格的灭菌
命题点4　单抗、双抗与双抗体夹心法
【高考例证】
（2025·甘肃高考16题）肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种细胞因子，高浓度时可以引发疾病。研究者利用细胞工程技术制备了TNF-α的单克隆抗体，用于治疗由TNF-α引发的疾病，制备流程如图。下列叙述正确的是（　　）
A.①是从小鼠的血液中获得的骨髓瘤细胞
B.②含未融合细胞、同种核及异种核融合细胞
C.③需用特定培养基筛选得到大量的杂交瘤细胞
D.④需在体外或小鼠腹腔进行克隆化培养和抗体检测
【挖掘拓展】
单克隆体的制备与应用
1.杂交瘤细胞的两次筛选
在合成核苷酸的两个途径中，物质A可以阻断其中的全合成途径（如图）。B淋巴细胞中含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，但B淋巴细胞一般不分裂增殖，在培养基中仅能存活5～7天。制备单克隆抗体选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。
2.双抗体夹心法定量检测抗原
酶联免疫吸附双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原理如图所示：
【对点即练】
1.（2025·四川成都高三练习）将两种不同的单克隆抗体在体外解偶联后重新偶联，可制备双特异性抗体，简称双抗。最新研究发现长春碱有良好的抗肿瘤效果，但没有对肿瘤的靶向作用。因此研究人员进行了如图的制备过程，图2为其双抗发挥作用的图示。下列叙述正确的是（　　）
A.第一次筛选后的细胞进行克隆化培养，传代培养过程中会发生贴壁和接触抑制
B.第二次筛选是为了确定分泌抗体的特异性，可以通过PCR的方式检验
C.给小鼠同时注射2种抗原可刺激其B细胞分化为产双抗的浆细胞
D.将双抗上连接的长春碱换成荧光蛋白，可能会有助于肿瘤的临床诊断
2.（2025·江西萍乡二模）如图表示双抗体夹心法检测抗原的过程，该方法是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆抗体能增强该过程的有效性。下列叙述错误的是（　　）
A.图示两种抗体与样品中待测抗原的结合位点不同
B.温度、pH等会影响双抗体夹心法检测抗原的结果
C.用双抗体夹心法检测抗原需要制备两种能与抗原结合的单克隆抗体
D.双抗体夹心法与只使用单克隆抗体相比，能增加可识别抗原的种类
微专题12　发酵工程与细胞工程
【核心知识·真题化梳理】
一、微生物的培养与发酵工程
1.（1）×　（2）×　（3）×　（4）×　（5）√　（6）×　（7）×
（8）×
2.提示：温度影响酵母菌的生长与代谢，酿酒酵母的最适生长温度约为28 ℃　醋酸菌是好氧菌，打开盖子并罩上透气纱布，利于醋酸菌获得氧气
3.提示：（1）前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌　
（2）5 000
4.提示：大肠杆菌进行细胞呼吸时会释放大量热量　提取、分离、纯化
5.提示：接种单一高质量纯种、严格的消毒灭菌措施、培养基营养物质协调、严格的发酵条件控制
二、细胞工程
1.（1）×　（2）×　（3）×　（4）×　（5）×　（6）×　（7）×
2.提示：使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合　病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚并引起细胞膜上的蛋白质和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
三、胚胎工程
1.（1）√　（2）×　（3）√　（4）×
2.提示：精子通过获能处理后才获得受精能力　对非繁殖期的受体母羊用激素做同期发情处理→胚胎移植（将保存的囊胚移植到发情的受体子宫的相应部位）→移植后的检测（对受体做是否妊娠的检查）→受体产下胚胎移植的新个体
【命题要点·深挖式拓展】
命题点1　传统发酵和发酵工程
高考例证
B　在传统发酵制作葡萄酒时，葡萄果皮上附着有多种微生物，如酵母菌等，这些微生物参与了葡萄酒的发酵过程，A正确；工业化生产时，酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，能大量繁殖，进行扩大培养，在无氧条件下进行酒精发酵产生酒精，B错误；通过诱变育种（利用物理、化学等因素诱导基因突变）或基因工程育种（定向改造生物的基因）能够改良葡萄酒发酵菌种（如酵母菌）的性状，比如提高发酵效率等，C正确；大规模发酵时，发酵温度、pH值、罐压及溶解氧等参数会影响微生物的生长和代谢，进而影响发酵过程和产品质量，所以需要监测这些参数，D正确。
对点即练
1. D　沸水浸泡能使蚕豆细胞死亡，从而减少细胞呼吸等对有机物的消耗，A正确；面粉中含有淀粉等营养物质，可为菌种的快速繁殖和生长提供营养，B正确；在发酵过程中需要将蛋白质和淀粉等分解，所以菌种中含有产蛋白酶和淀粉酶的微生物，C正确；从图中可以看出，在制作豆瓣曲过程中有翻拌操作，且整个过程不是完全密封的，说明主要利用的是好氧微生物发酵，D错误。
2.B　据图可知，乙组（蒸煮过的糯米）和丙组（5％蔗糖溶液）在相同时间内酵母菌相对数量变化趋势相近，说明酵母菌对蔗糖和淀粉的利用效率相近，A正确；在发酵前期适当通入氧气，酵母菌进行有氧呼吸利于其快速繁殖，后期保持无氧条件利于酵母菌通过无氧呼吸产生酒精，B错误；甲组（含蔗糖）的发酵效果比乙组好，说明在糯米中加入适量白砂糖（主要成分是蔗糖）利于提高发酵效率，C正确；家庭酿酒难以做到严格灭菌，可通过消毒处理来抑制杂菌生长，D正确。
命题点2　微生物筛选与鉴定中的“圈”
高考例证
A　根据题干信息“某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病”可知，若要筛选出该内生菌，应该从未感染香蕉枯萎病的植株上采样，A错误。要筛选内生菌，同时防止样品表面杂菌对实验结果的影响，需要对样品进行消毒，用无菌水冲洗样品表面，收集冲洗液，对冲洗液进行无菌检测，B正确。稀释涂布平板法可用于分离微生物，将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离能获得内生菌的单菌落，C正确。要想判断内生菌对病原菌的抗性效果，需要比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正确。
对点即练
1.B　实验使用的是组氨酸缺陷型细菌，若培养基中含有组氨酸，细菌均可生长，无法检测药物是否能诱发突变，A正确；内侧无细菌生长可能是因为药物抑制了细菌的生长，而不是细菌没有发生突变，B错误；设置对照组是为了排除其他因素对实验结果的影响，确保实验结果是由药物引起的，C正确；药物对周围细菌抑制范围扩大，也可能出现突变菌落范围变大的情况，故适当提高该药物的浓度时菌落范围可能会变大，D正确。
2.A　在本实验的培养基上形成了均匀分布的沙门氏菌的菌落，这是用稀释涂布平板法进行接种、培养获得的结果，A错误；MRS培养基中的成分可能会影响实验结果，设置MRS是为了排除无关变量的影响，B正确；Heat-LPC经过了高温处理，但该组的抑菌圈与LPC组的基本相同，说明加热不影响LPC，其热稳定性强，C正确；NaOH-LPC组没有抑菌圈，与MRS组相同，该组在LPC中加入了NaOH后调节到了中性，加入的NaOH与LPC中的酸性物质反应，使其失去抑菌作用，可推测LPC抑菌是因为其含有酸性物质，D正确。
命题点3　动、植物细胞培养
高考例证
1.A　细胞分裂素和生长素的比例会影响愈伤组织的形成，两者比例适中时，促进愈伤组织形成，A正确；培养基用湿热灭菌法灭菌，B错误；植物细胞一般具有全能性，芽原基可以用作外植体，C错误；紫杉醇是一种植物次生代谢物，能通过细胞产物的工厂化生产来获取，它不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制，优势明显，D错误。
2.D　动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的。传代培养时，培养皿不能密封，A错误；处于指数增长期的细胞形态和生理特性相对稳定，适合进行传代培养，离体培养的细胞生命力比较脆弱，需要适应培养基的环境，传代最好在细胞生长覆盖瓶底80％～90％时进行，故选取②的细胞进行传代培养比①更合理，B错误；题干显示从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，C错误；悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，因此，细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关，D正确。
对点即练
1.C　由图可知，体系1经转基因细胞系筛选培养获得，故其基因型与体系2和体系3不同，A正确；植物激素的浓度和比例等都会影响植物细胞的发育方向，植物组织（细胞）培养过程需更换培养基，B正确；花粉管通道法是指在受粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并整合到受体细胞的基因组中。将目标基因导入悬浮细胞，不可用花粉管通道法，C错误；愈伤组织没有叶绿体，此植物细胞不能进行光合作用，因此在植物组织培养的培养基中需要加入有机营养物质，D正确。
2.C　悬浮培养时细胞在液体培养基中呈良好分散状态，相比其他培养方式，极大地增加了细胞与培养液的接触面积，这样能让细胞更充分地接触和吸收培养液中的营养物质，A正确；生物反应器具备较为精密的控制装置，能够对培养过程中的温度、pH、溶解氧等关键培养条件进行精确调控，为细胞生长提供稳定适宜的环境，B正确；植物细胞培养一般采用的是液体培养基，C错误；生物反应器必须经过严格灭菌处理，这是为了防止杂菌污染，避免杂菌与培养细胞争夺营养物质、产生有害物质影响细胞生长等，D正确。
命题点4　单抗、双抗与双抗体夹心法
高考例证
B　骨髓瘤细胞应该从骨髓中获取，A错误；B细胞和骨髓瘤细胞的融合是随机的，可能有些细胞不发生融合，有些两两融合，有些多个融合，有同种核融合细胞，也有异种核融合细胞，B正确；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，但不能得到大量的杂交瘤细胞，C错误；④过程需在96孔培养板中进行克隆化培养和抗体检测，D错误。
对点即练
1.D　第一次筛选后的细胞是杂交瘤细胞，具有肿瘤细胞的特征，故克隆化培养不会有接触抑制的现象，A错误；第二次筛选是为了确定分泌抗体的特异性，可以通过抗原—抗体杂交的方法检验，B错误；给小鼠同时注射2种抗原可刺激其B细胞分化出两种产单抗的浆细胞，C错误；将长春碱换成荧光蛋白，临床使用双抗与荧光蛋白即可指示肿瘤细胞位置，起到辅助诊断的效果，D正确。
2.D　据图可知，用双抗体夹心法检测抗原时需要用到与抗原不同位点结合的两种抗体，因此用双抗体夹心法检测抗原需要制备两种能与抗原结合的单克隆抗体，A、C正确；据图可知，双抗体夹心法利用酶标抗体中的酶水解相应物质，通过检测水解产物的量来反映样品中抗原的含量，由于酶活性受温度、pH等因素的影响，因此温度、pH等会影响双抗体夹心法检测抗原的结果，B正确；抗原与抗体的结合具有特异性，双抗体夹心法与只使用单克隆抗体相比，未增加可识别抗原的种类，D错误。
7 / 8(共72张PPT)
微专题12　发酵工程与细胞工程
目录
核心知识·真题化梳理
命题要点·深挖式拓展
跟踪检测·巩固中提升
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核心知识·真题化梳理
一、微生物的培养与发酵工程
1. 判断下列关于微生物培养和发酵工程表述的正误
（1）（2025·河南卷）食醋和黄酒发酵过程中，微生物繁殖越快发酵产物
产率越高。 （　×　）
（2）（2023·山东卷）检测泡菜中亚硝酸盐的含量，可检测到完整发酵过
程中亚硝酸盐含量逐渐降低。 （　×　）
（3）（2024·河北卷）将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线
培养，获得单菌落。 （　×　）
×
×
×
（4）（2025·湖南卷）用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和
无机盐等营养物质。 （　×　）
（5）（2024·贵州卷）稀释涂布平板法既可分离菌株又可用于计数。
（　√　）
（6）（2023·江苏卷）通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培
养基用过滤除菌法除菌。 （　×　）
（7）（2023·江苏卷）血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用
于细菌的数量测定。 （　×　）
（8）（2025·陕晋宁青卷）培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同。
（　×　）
×
√
×
×
×
2. （选择性必修3 P7“探究·实践”）制作葡萄酒时，要将温度控制在18～
30 ℃的原因是
。利用葡萄酒制作葡萄醋时，需打开容器的盖子并罩上一层透
气纱布，原因是
。
温度影响酵母菌的生长与代谢，酿酒酵母的最适生长温度
约为28 ℃　
醋酸菌是好氧菌，打开盖子并罩上透气纱布，利于醋酸
菌获得氧气　
3. （2024·全国甲卷37题节选）（1）采用显微镜直接计数法和菌落计数法
分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原
因是
。
（2）从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从
稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液
中细菌浓度为 个/mL。
前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一
个菌落的情况且只计数活菌　
5 000　
4. （2024·安徽高考20题节选）大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，
温度会升高，其原因是 。发
酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经
，最终获得发酵产品。
5. （选择性必修3 P24“思考·讨论”）与传统的手工发酵相比，啤酒的工
业化生产使啤酒的产量和质量明显提高，其所采用的工程手段有

。
大肠杆菌进行细胞呼吸时会释放大量热量　
提取、分离、纯
化　
接种单
一高质量纯种、严格的消毒灭菌措施、培养基营养物质协调、严格的发酵
条件控制　
二、细胞工程
1. 判断下列关于细胞工程表述的正误
（1）（2024·北京卷）大豆叶片细胞的细胞壁被酶解后，获得的原生质体
失去全能性。 （　×　）
（2）（2024·浙江卷）提高生长素和细胞分裂素的比值可促进愈伤组织形
成丛生芽。 （　×　）
（3）（2024·山东卷）体细胞杂交获得的杂种植株细胞具有来自亲本的2个
细胞核。 （　×　）
（4）（2023·海南卷）营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生
接触抑制。 （　×　）
×
×
×
×
（5）（2023·辽宁卷）大量悬浮培养流感病毒的单克隆细胞，培养基pH不
会影响单克隆细胞的病毒产量。 （　×　）
（6）（2025·新课标卷）作物单倍体育种时，利用了由植物茎尖组织培养
获得的单倍体。 （　×　）
（7）（2025·安徽卷）将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合的细
胞即为能分泌所需抗体的细胞。 （　×　）
×
×
×
2. （2023·湖北高考22题节选，选择性必修3 P48“相关信息”）添加脂溶
性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是
。灭活病毒诱导
细胞融合的原理是

。
使细胞接
触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合　
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖
蛋白发生作用，使细胞互相凝聚并引起细胞膜上的蛋白质和脂质重新排
布，细胞膜打开，细胞发生融合　
三、胚胎工程
1. 判断下列关于胚胎工程表述的正误
（1）（2024·湖北卷）生产中常采用胚胎工程技术快速繁殖波尔山羊，胚
胎移植前可采集滋养层细胞进行遗传学检测。 （　√　）
（2）（2023·天津卷）生产试管动物的过程需要MⅡ期去核卵母细胞。
（　×　）
（3）（2025·黑吉辽蒙卷）为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替
体细胞核移植。 （　√　）
（4）（2025·安徽卷）采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚或囊胚，
因这两个时期的细胞未发生分化。 （　×　）
√
×
√
×
2. （2022·全国甲卷38题改编）在体外受精前要对精子进行获能处理，其
原因是 。以保存的囊胚和相应数
量的非繁殖期受体母羊为材料进行操作，以获得具某公羊优良性状的后
代，其主要操作步骤是

。
精子通过获能处理后才获得受精能力　
对非繁殖期的受体母羊用激素做同期发情处理→
胚胎移植（将保存的囊胚移植到发情的受体子宫的相应部位）→移植后的
检测（对受体做是否妊娠的检查）→受体产下胚胎移植的新个体　
命题要点·深挖式拓展
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命题点1　传统发酵和发酵工程
【高考例证】
（2025·甘肃高考15题）我国葡萄酒酿造历史悠久、传统发酵技术延续至
今。发酵工程通过选育菌种和控制发酵条件等措施可优化传统发酵工艺，
改善葡萄酒品质。下列叙述错误的是（　　）
A. 传统发酵时，葡萄果皮上的多种微生物参与了葡萄酒的发酵过程
B. 工业化生产时，酵母菌需在无氧条件下进行扩大培养和酒精发酵
C. 通过诱变育种或基因工程育种能够改良葡萄酒发酵菌种的性状
D. 大规模发酵时，需要监测发酵温度、pH值、罐压及溶解氧等参数
√
解析：　在传统发酵制作葡萄酒时，葡萄果皮上附着有多种微生物，如酵母菌等，这些微生物参与了葡萄酒的发酵过程，A正确；工业化生产时，酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，能大量繁殖，进行扩大培养，在无氧条件下进行酒精发酵产生酒精，B错误；通过诱变育种（利用物理、化学等因素诱导基因突变）或基因工程育种（定向改造生物的基因）能够改良葡萄酒发酵菌种（如酵母菌）的性状，比如提高发酵效率等，C正确；大规模发酵时，发酵温度、pH值、罐压及溶解氧等参数会影响微生物的生长和代谢，进而影响发酵过程和产品质量，所以需要监测这些参数，D正确。
【挖掘拓展】
传统发酵技术与发酵工程的比较
比较项目 传统发酵技术 发酵工程
菌种来源 一般来自自然界，混合菌种发酵 一般是经过育种或筛选的优质菌种，单一菌种发酵
发酵方式 通常是固体、半固体发酵 通常是液体发酵
发酵设备 简单，一般容器 复杂，发酵罐
条件控制 通常不是很严格，与环境条件密切相关 通常比较严格，有专门的调控装置
【对点即练】
1. （2025·重庆高考6题）豆瓣酱是我国地方特色调味品，生产豆瓣酱时要
将蚕豆瓣制作成豆瓣曲，再添加调料进一步发酵，下列说法错误的是
（　　）
蚕豆瓣 蚕豆与面粉混合物 豆瓣曲
A. 沸水浸泡能杀死蚕豆细胞，减少有机物消耗
B. 面粉可为菌种的快速繁殖和生长提供营养
C. 菌种中含有产蛋白酶和淀粉酶的微生物
D. 豆瓣酱的制备主要是利用厌氧微生物发酵
√
解析：　沸水浸泡能使蚕豆细胞死亡，从而减少细胞呼吸等对有机物的
消耗，A正确；面粉中含有淀粉等营养物质，可为菌种的快速繁殖和生长
提供营养，B正确；在发酵过程中需要将蛋白质和淀粉等分解，所以菌种
中含有产蛋白酶和淀粉酶的微生物，C正确；从图中可以看出，在制作豆
瓣曲过程中有翻拌操作，且整个过程不是完全密封的，说明主要利用的是好氧微生物发酵，D错误。
2. （2025·广东二模）酿酒主要借助酵母菌
的发酵作用，可以在家庭进行，也可以实现
工业化生产。科研人员进行了关于杂种酵母
菌在不同基质中的发酵测试，结果见图，下
列叙述错误的是（　　）
A. 实验结果表明，酵母菌对蔗糖和淀粉的利用效率相近
B. 为提高酒精产量，实验过程应该保持严格的无氧条件
C. 家庭酿酒可在糯米中加入适量白砂糖以提高发酵效率
D. 家庭酿酒难以做到严格灭菌，需要通过消毒抑制杂菌生长
√
解析：　据图可知，乙组（蒸煮过的糯米）和丙组（5％蔗糖溶液）在相
同时间内酵母菌相对数量变化趋势相近，说明酵母菌对蔗糖和淀粉的利用
效率相近，A正确；在发酵前期适当通入氧气，酵母菌进行有氧呼吸利于
其快速繁殖，后期保持无氧条件利于酵母菌通过无氧呼吸产生酒精，B错
误；甲组（含蔗糖）的发酵效果比乙组好，说明在糯米中加入适量白砂糖
（主要成分是蔗糖）利于提高发酵效率，C正确；家庭酿酒难以做到严格
灭菌，可通过消毒处理来抑制杂菌生长，D正确。
命题点2　微生物筛选与鉴定中的“圈”
【高考例证】
（2024·黑吉辽高考19题改编）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香
蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作错误的是（　　）
A. 在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B. 将采集的样品充分消毒后，用无菌水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C. 将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单
菌落
D. 判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑
大小
√
解析：　根据题干信息“某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉
枯萎病”可知，若要筛选出该内生菌，应该从未感染香蕉枯萎病的植株上
采样，A错误。要筛选内生菌，同时防止样品表面杂菌对实验结果的影
响，需要对样品进行消毒，用无菌水冲洗样品表面，收集冲洗液，对冲洗
液进行无菌检测，B正确。稀释涂布平板法可用于分离微生物，将无菌检
测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离能获得内生菌的单菌落，C正
确。要想判断内生菌对病原菌的抗性效果，需要比较有无接种内生菌的平
板上的病原菌菌斑大小，D正确。
思维路径
从题干和图中提取关键信息，
分析本题可考查的具体考点，
并结合所学内容即可做出精
准解答，相关信息即可考查
的具体内容如图所示。
【挖掘拓展】
筛选与鉴定微生物的“圈”法
抑菌圈 透明圈 变色圈 生长圈
原 理 用抗生素等对菌体具有杀抑作用的物质抑制菌体的生长，形成清晰的抑菌圈 菌体能降解或利用浑浊或带有颜色的培养基中的某特定物质，在菌落周围形成清晰的透明圈 微生物代谢产物显色或代谢产物与特定指示剂反应而变色，在菌落周围会形成变色圈 代谢缺陷型微生物在能大量合成某特定营养物质的菌体周围生长，形成明显的生长圈
抑菌圈 透明圈 变色圈 生长圈
应 用 筛选与鉴定
抗生素产生
菌；评估待
测药物的抑
菌杀菌效应 筛选与鉴定能降解（或合成某种酶）和利用特定物质的微生物，如：用含刚果红的纤维素培养基筛选能分解纤维素的细菌 筛选与鉴定能合成某种酶或产物的微生物，如：用含酚红指示剂培养基筛选能利用尿素或产生脲酶的微生物 筛选特定营养物质产生菌；鉴定微生物的代谢缺陷
抑菌圈 透明圈 变色圈 生长圈
特 点 抑菌圈直径（抑
菌圈/菌落）越
大，抑菌作用越
强，反之则越弱 透明圈与菌落大
小的比值大，说
明菌体降解某物
质的能力强 变色圈的颜色
及大小与微生
物代谢产物及
代谢能力相关 可根据生长圈的
直径大小初步判
断菌体合成和释
放某物质的能力
【对点即练】
1. 实验小组为了检测某化学药物是否
会诱发基因突变，在特定选择培养基
上培养组氨酸缺陷型细菌，并在培养
基中间放置一张浸润一定浓度该药物
的圆纸片，一段时间后实验结果如图所示，下列有关说法错误的是（　）
A. 该特定的选择培养基上应不含有组氨酸
B. 内侧无细菌生长说明内侧细菌没有发生突变
C. 该实验应设置不含该药物的培养基作为对照组
D. 若适当提高该药物的浓度，则菌落范围可能会变大
√
解析：　实验使用的是组氨酸缺陷型细菌，若培养基中含有组氨酸，
细菌均可生长，无法检测药物是否能诱发突变，A正确；内侧无细菌生
长可能是因为药物抑制了细菌的生长，而不是细菌没有发生突变，B错
误；设置对照组是为了排除其他因素对实验结果的影响，确保实验结
果是由药物引起的，C正确；药物对周围细菌抑制范围扩大，也可能出
现突变菌落范围变大的情况，故适当提高该药物的浓度时菌落范围可
能会变大，D正确。
2. （2025·山东菏泽二模）庆大霉素（GM）
能抑制沙门氏菌的生长。研究人员为了探究
LPC（用MRS培养基培养植物乳杆菌后获得
的上清液）对沙门氏菌生长的影响及作用
机制，在接种沙门氏菌的平板上做了五组
不同处理，实验结果如图所示。下列说法错误的是（　　）
A. 需将含沙门氏菌的菌液稀释到适宜浓度后用平板划线法接种
B. 设置MRS是为了排除MRS培养基成分对实验结果的影响
C. Heat-LPC与LPC对比结果说明LPC的热稳定性比较强
D. LPC抑制沙门氏菌的机制可能是因为LPC含有酸性物质
√
解析：　在本实验的培养基上形成了均匀分布的沙门氏菌的菌落，这是用稀释涂布平板法进行接种、培养获得的结果，A错误；MRS培养基中的成分可能会影响实验结果，设置MRS是为了排除无关变量的影响，B正确；Heat-LPC经过了高温处理，但该组的抑菌圈与LPC组的基本相同，说明加热不影响LPC，其热稳定性强，C正确；NaOH-LPC组没有抑菌圈，与MRS组相同，该组在LPC中加入了NaOH后调节到了中性，加入的NaOH与LPC中的酸性物质反应，使其失去抑菌作用，可推测LPC抑菌是因为其含有酸性物质，D正确。
命题点3　动、植物细胞培养
【高考例证】
1. （2025·黑吉辽蒙高考8题）利用植物组织培养技术获得红豆杉试管苗，
有助于解决紫杉醇药源短缺问题。下列叙述正确的是（　　）
A. 细胞分裂素和生长素的比例会影响愈伤组织的形成
B. 培养基先分装到锥形瓶，封口后用干热灭菌法灭菌
C. 芽原基细胞由于基因选择性表达，不能用作外植体
D. 紫杉醇不能通过细胞产物的工厂化生产来获取， 植物组织培养优势明显
√
解析：　细胞分裂素和生长素的比例会影响愈伤组织的形成，两者比例
适中时，促进愈伤组织形成，A正确；培养基用湿热灭菌法灭菌，B错误；
植物细胞一般具有全能性，芽原基可以用作外植体，C错误；紫杉醇是一
种植物次生代谢物，能通过细胞产物的工厂化生产来获取，它不占用耕
地，几乎不受季节、天气等的限制，优势明显，D错误。
2. （2024·黑吉辽高考14题）从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行
贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正
确的是（　　）
A. 传代培养时，培养皿需密封防止污染
B. 选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C. 直接用离心法收集细胞进行传代培养
D. 细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
√
解析：　动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需
的。传代培养时，培养皿不能密封，A错误；处于指数增长期的细胞形态
和生理特性相对稳定，适合进行传代培养，离体培养的细胞生命力比较脆
弱，需要适应培养基的环境，传代最好在细胞生长覆盖瓶底80％～90％时
进行，故选取②的细胞进行传代培养比①更合理，B错误；题干显示从小
鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，贴壁细胞需要重新用胰
蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，C错误；悬
浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺
乏等因素而分裂受阻，因此，细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有
关，D正确。
【挖掘拓展】
1. 哺乳动物细胞培养过程中，细胞的变化及应用
对正常细胞进行体外培养时，要经历
原代培养和1至多次的传代培养（N0
为培养瓶中细胞的初始数量），图示
为培养瓶中细胞的数量变化。原代培
养与初次传代培养，细胞数量可呈“S”
形增长，传代培养中会出现部分细胞停止分裂与衰老死亡，极少数细胞因发生核型改变而成为不死性细胞（具有癌细胞的特征）。通过细胞培养技术，可将核型未改变的细胞用于移植，可检测某药物对细胞代谢或增殖的影响，可研究导致细胞核型发生改变的因素及细胞增殖的调控等。
2. 哺乳动物细胞的培养条件可与人体内环境稳态的维持及调节相联系。注
意比较：
（1）培养液与人体细胞外液的化学组成（包括营养物质、激素等活性物
质）、理化性质（pH、温度、渗透压等）；
（2）细胞的代谢（物质的吸收、转化等）及生命历程（增殖、衰老、癌
变等）。
【对点即练】
1. 与常规栽培技术相比，利用植物细
胞培养进行药用次生代谢物的生产具
有显著的优越性，根据不同的需求可
以采用不同的技术流程（如图）。下
列相关叙述错误的是（　　）
A. 培养体系1、2、3中的细胞基因型不完全相同
B. 如图的过程与植物组织培养都需要更换培养基
C. 将目标产物合成途径中的关键酶基因导入悬浮细胞，可用花粉管通道法
D. 愈伤组织没有叶绿体，是异养型细胞，因此需在培养基中加入有机碳源
√
解析：　由图可知，体系1经转基因细胞系筛选培养获得，故其基因型与
体系2和体系3不同，A正确；植物激素的浓度和比例等都会影响植物细胞
的发育方向，植物组织（细胞）培养过程需更换培养基，B正确；花粉管
通道法是指在受粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在受精
过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并整合到受体细
胞的基因组中。将目标基因导入悬浮细胞，不可用花粉管通道法，C错
误；愈伤组织没有叶绿体，此植物细胞不能进行光合作用，因此在植物组
织培养的培养基中需要加入有机营养物质，D正确。
2. 细胞悬浮培养是将细胞接种于液体培养基中并保持良好分散状态的培养
方式，细胞悬浮培养常在生物反应器（如发酵罐等）中进行。下列叙述错
误的是（　　）
A. 悬浮培养可以增加细胞与培养液的接触，促进营养物质的吸收
B. 生物反应器能精确地控制温度、pH、溶解氧等培养条件
C. 植物细胞培养用的是固体培养基，不能进行悬浮培养
D. 在接种细胞之前，生物反应器必须经过严格的灭菌
√
解析：　悬浮培养时细胞在液体培养基中呈良好分散状态，相比其他培
养方式，极大地增加了细胞与培养液的接触面积，这样能让细胞更充分地
接触和吸收培养液中的营养物质，A正确；生物反应器具备较为精密的控
制装置，能够对培养过程中的温度、pH、溶解氧等关键培养条件进行精确
调控，为细胞生长提供稳定适宜的环境，B正确；植物细胞培养一般采用
的是液体培养基，C错误；生物反应器必须经过严格灭菌处理，这是为了
防止杂菌污染，避免杂菌与培养细胞争夺营养物质、产生有害物质影响细
胞生长等，D正确。
命题点4　单抗、双抗与双抗体夹心法
【高考例证】
（2025·甘肃高考16题）肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种细胞因子，高浓
度时可以引发疾病。研究者利用细胞工程技术制备了TNF-α的单克隆抗
体，用于治疗由TNF-α引发的疾病，制备流程如图。下列叙述正确的是
（　　）
A. ①是从小鼠的血液中获得的骨髓瘤细胞
B. ②含未融合细胞、同种核及异种核融合细胞
C. ③需用特定培养基筛选得到大量的杂交瘤细胞
D. ④需在体外或小鼠腹腔进行克隆化培养和抗体检测
解析：　骨髓瘤细胞应该从骨髓中获取，A错误；B细胞和骨髓瘤细胞的融合是随机的，可能有些细胞不发生融合，有些两两融合，有些多个融合，有同种核融合细胞，也有异种核融合细胞，B正确；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，但不能得到大量的杂交瘤细胞，C错误；④过程需在96孔培养板中进行克隆化培养和抗体检测，D错误。
√
【挖掘拓展】
单克隆体的制备与应用
1. 杂交瘤细胞的两次筛选
在合成核苷酸的两个途径中，物质A可以阻断其中的全合成途径（如
图）。B淋巴细胞中含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，但B淋巴细
胞一般不分裂增殖，在培养基中仅能存活5～7天。制备单克隆抗体选用的
骨髓瘤细胞缺乏转化酶。
2. 双抗体夹心法定量检测抗原
酶联免疫吸附双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原
理如图所示：
【对点即练】
1. （2025·四川成都高三练习）将两种不同的单克隆抗体在体外解偶联后
重新偶联，可制备双特异性抗体，简称双抗。最新研究发现长春碱有良好
的抗肿瘤效果，但没有对肿瘤的靶向作用。因此研究人员进行了如图的制
备过程，图2为其双抗发挥作用的图示。下列叙述正确的是（　　）
A. 第一次筛选后的细胞进行克隆化培养，传代培养过程中会发生贴壁和
接触抑制
B. 第二次筛选是为了确定分泌抗体的特异性，可以通过PCR的方式检验
C. 给小鼠同时注射2种抗原可刺激其B细胞分化为产双抗的浆细胞
D. 将双抗上连接的长春碱换成荧光蛋白，可能会有助于肿瘤的临床诊断
√
解析：　第一次筛选后的细胞是杂交瘤细胞，具有肿瘤细胞的特征，故
克隆化培养不会有接触抑制的现象，A错误；第二次筛选是为了确定分泌
抗体的特异性，可以通过抗原—抗体杂交的方法检验，B错误；给小鼠同
时注射2种抗原可刺激其B细胞分化出两种产单抗的浆细胞，C错误；将长
春碱换成荧光蛋白，临床使用双抗与荧光蛋白即可指示肿瘤细胞位置，起
到辅助诊断的效果，D正确。
2. （2025·江西萍乡二模）如图表示双抗体夹心法检测抗原的过程，该方
法是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆
抗体能增强该过程的有效性。下列叙述错误的是（　　）
A. 图示两种抗体与样品中待测抗原的结合位点不同
B. 温度、pH等会影响双抗体夹心法检测抗原的结果
C. 用双抗体夹心法检测抗原需要制备两种能与抗原结合的单克隆抗体
D. 双抗体夹心法与只使用单克隆抗体相比，能增加可识别抗原的种类
√
解析：　据图可知，用双抗体夹心法检测抗原时需要用到与抗原不同位
点结合的两种抗体，因此用双抗体夹心法检测抗原需要制备两种能与抗原
结合的单克隆抗体，A、C正确；据图可知，双抗体夹心法利用酶标抗体中
的酶水解相应物质，通过检测水解产物的量来反映样品中抗原的含量，由
于酶活性受温度、pH等因素的影响，因此温度、pH等会影响双抗体夹心法
检测抗原的结果，B正确；抗原与抗体的结合具有特异性，双抗体夹心法
与只使用单克隆抗体相比，未增加可识别抗原的种类，D错误。
跟踪检测·巩固中提升
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<
一、选择题
1. 大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，
也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传
的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如图所示，下列叙述错误的是（　　）
A. 保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少
B. 米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源
C. 米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物
D. 后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味
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√
解析：　在保温发酵过程中，米曲霉等微生物会分泌多种酶来分解有
机物。在分解过程中，复杂的有机物会被逐步分解成小分子有机物，
所以有机物的种类会增加。同时，微生物的呼吸作用会消耗有机物来
获取能量，导致有机物含量减少，A正确；在米曲霉发酵过程中，添加
面粉主要是为米曲霉的生长提供碳源，B错误；米曲霉发酵时需不断翻
酱的目的是让米曲霉接触到充足的氧气，由此推断米曲霉是需氧型微
生物，C正确；后期发酵中乳酸菌会进行发酵产生乳酸，乳酸可以降低
环境的pH，很多杂菌在酸性环境中生长会受到抑制，同时乳酸也能赋
予豆瓣酱独特的酸味，D正确。
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2. （2025·广东广州二模）研究人员以YMA培养基（10 g甘露醇、0.4 g酵
母粉、0.5 g KH2PO4、0.1 g NaCl、0.2 g MgSO4·7H2O，定容至1 L）为基
础，探究某种大豆根瘤菌的碳源利用情况，实验结果如图。下列叙述错误
的是（　　）
A. 添加酵母粉作为氮源，原因可能是根
瘤菌在体外培养时固氮能力有所下降
B. 实验组需将甘露醇替换为等量的其他
碳源，其他条件保持一致
C. 测定根瘤菌的数量可以使用显微镜直接计数法
D. 实验结果直接证明大豆通过蔗糖的形式向根瘤菌提供有机营养
√
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解析：　根瘤菌在自然界中与豆科植物共生时，才能发挥固氮作用，因
为根瘤菌都依赖豆科植物为其提供有机物，所以在体外培养时，其固氮能
力可能受到抑制或下降，因此需要额外添加酵母粉作为氮源，A正确；本
实验为探究大豆根瘤菌对不同碳源的利用情况，实验自变量为碳源的种
类，为控制无关变量，保证实验为单一变量，故实验组需将甘露醇替换为
等量的其他碳源，其他条件保持一致，B正确；显微镜直接计数法计数是
测定培养液中微生物数量的方法之一，故该实验中测定根瘤菌的数量可以
使用显微镜直接计数法，C正确；据题干信息和实验结果分析可知，当甘
露醇被蔗糖替换后，根瘤菌其相对数量与甘露醇的对照组相当，故实验结
果只能说明大豆根瘤菌能利用蔗糖作为碳源进行生长繁殖，不能直接证明
大豆在自然条件下通过蔗糖的形式向根瘤菌提供有机营养，D错误。
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3. （2025·辽宁大连一模）黑曲霉
多不耐高温，发酵获得柠檬酸的过
程需大量冷却水控制温度，生产成
本高。现利用原生质体融合技术获
得耐高温高产黑曲霉，过程如图所
示。下列叙述正确的是（　　）
A. 处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株
B. 处理②、③用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
C. 处理④升高温度即可筛选出耐高温高产黑曲霉
D. 发酵结束后通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸
√
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解析：　诱变的原理是基因突变，而基因突变具有不定向性，故处理①
培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株，A正确；黑曲霉的细胞壁成
分不是纤维素和果胶，故处理②、③不可以用纤维素酶和果胶酶去除细胞
壁，B错误；处理④升高温度后还需要进一步验证才能筛选出耐高温高产
黑曲霉，C错误；发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢物，另一类是
菌体本身。如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中
分离出来；如果产品是代谢物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提
取，可见题图发酵结束后不能通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸，
D错误。
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4. 中药山茱萸的主要活性成分是马钱
子苷，其具有活血通络、祛风除湿的
功效。为探究不同浓度的马钱子苷对
神经干细胞分化的影响，科研人员进
行了相关实验，结果如图。下列有关分析正确的是（　　）
A. 培养神经干细胞时需提供无菌、无毒以及纯氧的培养环境
B. 可取山茱萸的外植体进行组织培养以获得大量的马钱子苷
C. 神经干细胞分化为其他类型的细胞体现其具有全能性
D. 马钱子苷溶液具有低浓度促进分化，高浓度抑制分化的作用
√
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解析：　培养神经干细胞时需提供无菌、无毒以及含有95％空气、5％
CO2气体的培养环境，A错误；可取山茱萸的外植体进行脱分化形成愈伤组
织后再进行植物细胞培养以获得大量的马钱子苷，B错误；神经干细胞分
化为其他类型的细胞未体现其具有全能性，C错误；由题图可知，马钱子
苷溶液对干细胞具有低浓度促进分化，高浓度抑制分化的作用，D正确。
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5. （2025·山东高考14题）利用动物体细胞核移植技术培育转基因牛的过
程如图所示，下列说法错误的是（　　）
A. 对牛乙注射促性腺激素是为了收集更多的卵母细胞
B. 卵母细胞去核应在其减数分裂Ⅰ中期进行
C. 培养牛甲的体细胞时应定期更换培养液
D. 可用PCR技术鉴定犊牛丁是否为转基因牛
√
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解析：　胚胎工程中，往往需要对雌性供体进行超数排卵处理，即注射
促性腺激素促使其产生更多的卵母细胞，A正确；卵母细胞培养至MⅡ期
（减数分裂Ⅱ中期）进行去核，B错误；动物细胞培养时，培养液需要定期
更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，C正
确；PCR技术可以检测受体细胞中是否导入目的基因，D正确。
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6. （2025·河北高考18题改编）隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在
海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪
酸）的藻类之一。从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发
酵生产。下列叙述不正确的是（　　）
A. 隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B. 采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C. 选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D. 适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量
√
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解析：　由题干信息知，隐甲藻属于异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片（富含有机碳）上生长繁殖，说明隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确；采集的腐烂叶片上含有隐甲藻，其经湿热灭菌后会杀死叶片上的隐甲藻，B错误；选择培养基中加入能抑制细菌生长而对隐甲藻无毒害作用的抗生素，有利于获得隐甲藻，C正确；隐甲藻属于好氧型藻类，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率可增加溶氧量，有利于隐甲藻的生长繁殖，以提高DHA产量，D正确。
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7. 在制备单克隆抗体过程中，诱导免疫脾细胞（B淋巴细胞）和骨髓瘤细
胞融合后，在培养体系中会存在多种细胞，常使用HAT培养基筛选所需的
杂交瘤细胞，其原理如图（已知哺乳动物细胞中有两条途径可以合成
DNA，一条途径会被HAT培养基中的氨基蝶呤阻断，另一条途径需要关键
酶HGPRT的参与）。下列分析正确的是（　　）
注：＋/－分别代表存在和缺失。
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A. 诱导融合后只存在未融合的亲本细胞、融合同种核的细胞和产生同种
抗体的杂交瘤细胞
B. 免疫脾细胞的DNA合成过程被HAT培养基中的氨基蝶呤阻断，从而不
能在体外无限繁殖
C. 实验过程中使用的骨髓瘤细胞是经过人工筛选的缺陷型细胞，不具备无
限增殖的能力
D. 融合成功的杂交瘤细胞在HAT培养基中DNA的合成会被干扰，但能够
存活并无限增殖
√
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解析：　诱导融合后会产生三种类型的细胞：未融合的亲本细胞、融合
同种核的细胞和杂交瘤细胞，但杂交瘤细胞有多种类型，能够产生多种类
型的抗体，A错误；免疫脾细胞是高度分化的细胞，本身就不具备无限繁
殖能力，B错误；实验过程中使用的骨髓瘤细胞是经过人工筛选的缺陷型
细胞，缺乏关键酶HGPRT，但仍具备通过另一条途径进行DNA合成从而实
现无限增殖的能力，C错误；融合成功的杂交瘤细胞在HAT培养基（含有
氨基蝶呤）中会失去一条DNA合成的途径，即DNA的合成会被干扰，但具
有关键酶HGPRT，依然能够存活并无限增殖，D正确。
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二、非选择题
8. （2025·江西九江二模）大肠杆菌常寄生于人和动物肠道内，一般情况下不会致病，但在具有某些特定毒力因子作用时具有致病性，能引起人和动物共同感染，影响畜牧业发展及人体的健康。回答下列问题。
（1）大肠杆菌在生物技术领域有着重要的应用价值。大肠杆菌细胞中的
质粒可作为“分子运输车”将基因导入受体细胞，质粒适合作为载体，具
有的特点有
（回答2点）；大肠杆菌因还具有
等优点（回答2点），故在发酵工程中常作为工程菌
生产药物和疫苗。
具自我复制能力、有一到多个限制酶的酶切位点、常具有特
殊的标记基因
代谢快、繁殖快、易
培养、培养成本低
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解析：质粒具有自我复制能力、有一到多个限制酶酶切位点、常具有特殊的标记基因等特点，常作为载体，由于大肠杆菌含有质粒，且大肠杆菌具有代谢快、繁殖快、易培养、培养成本低等优点，故在发酵工程中常作为工程菌生产药物和疫苗。
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（2）科研人员制备了浸泡有4种抗生素溶液的6 mm圆形滤纸片，分别放置
在接种有大肠杆菌培养基的不同区域，经培养后发现滤纸片附近都出现了
抑菌圈，且抑菌圈直径 （填“越大”或“越小”）的抗生素，抑
菌效果越明显。而在直径最大的抑菌圈边缘附近还出现了部分菌落，分析
可能的原因是
（回答2点即可）。
解析：抑菌圈越大，说明其抑菌效果越明显，由于部分菌体出现了基因突变，导致其耐药性的出现，同时可能抗生素扩散范围有限，导致抑菌圈边缘附近出现了部分菌落。
越大
6 mm圆形滤纸片上的抗生素溶液扩散范围有限；抑菌圈边
缘的菌落为耐药性的大肠杆菌（答案合理即可）
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（3）为检测某品牌的饮用矿泉水中大肠杆菌（活菌）数量是否超标，可
抽取1 mL矿泉水经10倍稀释后，利用 在显微镜下直接观察
计数；显微镜下观察结果如图，则矿泉水中大肠杆菌的数量约
为 个/L（注：仪器规格为1 mm×1 mm×0.1 mm，25×16，
用图中加粗的中方格代表整个计数室内中方格大肠杆菌数的平均值）。
解析：利用显微镜直接计数时，可用细菌计数板在显微镜下直接计数。图示计数板为25×16规格，中格中有14个菌，所以1 L培养液含有14×25×10×103÷0.1×103＝3.5×1010个菌体。
细菌计数板
3.5×1010
1
2
3
4
5
6
7
8
THANKS
感谢您的观看

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