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专题排查8　生物技术与工程
知识点24　微生物的培养和利用
核心 盘点 1．微生物培养基的“两种类型”和“五大成分” (1)根据物理性质可将培养基分为________培养基和________培养基。 (2)培养基一般含有________、________、水、无机盐和其他物质等。 2．无菌技术的两个方面 (1)用比较温和的方法——________。 (2)用强烈的理化方法——________。 (3)两者的最大区别是能否杀死芽孢和孢子。 3．微生物纯培养中“一灯附近、两法接种” (1)为避免周围环境中微生物的污染，微生物实验操作应在____________附近进行。 (2)用____________法和____________法接种的目的：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成____________，以便于纯化菌种。 4．平板划线的四个操作要点 (1)每次划线之前都需要________接种环灭菌。 (2)灼烧接种环之后，要________后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (3)从第二次划线开始，接种环都要从____________________开始划线。 (4)划线时最后一区域不要与____________相连。 5．微生物的分离和培养中四个注意点及分析 (1)分离特定微生物所用的________培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。 (2)____________法只适用于微生物的纯化，不适用于计数，并且通常在最后一次划线的________的菌种最纯。 (3)________的温度一般适宜在50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基会凝固。 (4)平板需________，这样既可避免培养基表面的水分过快地蒸发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。 6．微生物计数的两种方法 (1)显微镜直接计数。该方法的缺点是不能区分细菌的死活，导致结果________。 (2)________________(间接计数法)。该方法常用来统计活菌数目，但当两个或多个细胞连在一起，观察到的只是一个菌落，导致统计结果________。
精准 判断 1．各种培养基在配制时都应包含碳源、氮源、水和无机盐等。 (　　) 2．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃。 (　　) 3．青霉素具有杀菌作用，因此培养青霉菌的培养基不需严格灭菌。 (　　) 4．样品溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落。 (　　) 5．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染。 (　　) 6．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。 (　　) 7．对酵母菌细胞进行计数时，通常使用细菌计数板。 (　　) 8．平板划线时，只有在最后一个划线区域才可得到所需单菌落。 (　　) 9．在统计样品活菌数时，需对每个稀释度进行涂布培养并计数。 (　　) 10．将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上，可以有效防止杂菌的污染。 (　　) 11．可以利用加入刚果红染料的牛肉膏蛋白胨培养基筛选目标菌株。 (　　) 12．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶(分解尿素)的微生物。 (　　) 13．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，不能灭活真菌。 (　　) 14．用平板划线法进行酵母菌的分离时，必须一次连续划线完成接种操作。 (　　)
知识点25　传统发酵技术、发酵工程及其应用
核心 盘点 1．两类生物、三种温度 (1)果酒发酵的菌种______和腐乳制作的主要菌种______都是真核生物，果醋发酵的菌种______和泡菜制作的菌种______都是原核生物。 (2)酒精发酵时一般将温度控制在________℃，醋酸菌的最适生长温度为________℃。制作泡菜时需根据室内________控制发酵时间。 2．传统发酵的三个原理 (1)果酒的制作利用了酵母菌无氧条件下产生________的原理。 (2)果醋的制作利用了醋酸菌在________氧条件下产生乙酸的原理。 (3)泡菜制作的原理：在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成________。 3．传统发酵中的“一膜一物质” (1)果醋发酵过程中发酵液表面会形成________。 (2)泡菜制作过程中会有____________产生，腌制方法、时间长短和温度高低等条件都会对其含量有影响。 4．发酵工程八大基本环节 菌种的________，扩大培养，培养基的配制，灭菌，接种，___________ _____，产品的____________。 5．发酵工程的四个特点 (1)生产条件温和。 (2)原料来源丰富且价格低廉。 (3)产物专一。 (4)废弃物对环境的________和容易处理。
精准 判断 1．(2025·甘肃卷T15A)传统发酵时，葡萄果皮上的多种微生物参与了葡萄酒的发酵过程。 (　　) 2．在果酒发酵后期，拧松瓶盖的间隔时间可适当延长。 (　　) 3．变酸的酒表面的菌膜是酵母菌大量繁殖形成的。 (　　) 4．葡萄糖转化为乙醇所需的酶既存在于细胞质基质，也存在于线粒体。 (　　) 5．酸奶制作过程中，后期低温处理可产生大量乳酸菌。 (　　) 6．乙醇既是醋酸发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖。 (　　) 7．蓝莓果酒发酵液可能使酸性重铬酸钾溶液由蓝变绿再变黄。 (　　) 8．在一段时间内，果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中pH升高。 (　　) 9．(2025·甘肃卷T15C)通过诱变育种或基因工程育种能够改良葡萄酒发酵菌种的性状。 (　　) 10．在连续培养过程中补充的同种培养液和空气须先灭菌。 (　　) 11．乳酸菌可以代替酵母菌用于乙醇的生产。 (　　) 12．发酵罐中微生物的生长繁殖、代谢物的形成速度都与搅拌速度有关。 (　　) 13．分离、提纯酵母菌发酵生产的单细胞蛋白，可采用过滤、沉淀等方法。 (　　) 14．发酵工程中培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌。 (　　) 15．(2025·甘肃卷T15D)大规模发酵时，需要监测发酵温度、pH、罐压及溶解氧等参数。 (　　)
知识点26　细胞工程
核心 盘点 1．植物组织培养中的三个使用 (1)固体培养基的使用：脱分化和再分化都是固体培养基，其中________的培养基又分为生根培养基和生芽培养基。 (2)植物激素比例的使用：生长素和细胞分裂素比例适中时，促进__________的形成；生长素用量高于细胞分裂素时，有利于_______的分化、抑制芽的形成；生长素用量低于细胞分裂素时，有利于_______的分化、抑制根的形成。 (3)光照的使用：脱分化阶段不需要给予光照，再分化阶段需要给予光照，以利于________的形成。 2．植物体细胞杂交的五个关键点 (1)酶解法——用____________________去除细胞壁，除去成功的标志为细胞变为近似球形。 (2)促融剂——____________。 (3)杂种细胞形成的标志——____________的形成。 (4)培养杂种植株的技术——植物组织培养。 (5)培养成功的原理——植物细胞的全能性。 3．动物细胞培养中的三个注意点 (1)两次使用____________或胶原蛋白酶，但目的不同。 (2)无菌、无毒的三个措施：一是灭菌处理以及在无菌环境下进行操作，二是加入一定量的__________，三是定期________培养液。 (3)两个特殊的条件 ①培养液中需加入______________________等一些天然成分。 ②气体条件为含95%空气和____________的混合气体。 4．三种干细胞：胚胎干细胞、成体干细胞、诱导多能干细胞(iPS细胞)。 5．单克隆抗体制备过程中的三个“两” (1)两种细胞：________________和已免疫的B淋巴细胞。 (2)两次筛选：第一次用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次经克隆化培养和抗体检测筛选出足够数量的____________________________。 (3)两种培养杂交瘤细胞的方法：体内培养和体外培养。 6．受精的两个阶段、两个反应 (1)受精包括准备阶段(精子获能、卵子的准备)和受精阶段。 (2)防止多精子入卵的2个反应：________反应和____________反应。 7．早期胚胎的四阶段 受精卵→卵裂期→桑葚胚→________。 8．体外受精的三个主要步骤 卵母细胞的采集、____________、受精。 9．胚胎移植操作程序中“两种处理”“两种检查”和“一个意义” (1)两种处理：对供体母畜注射___________进行超数排卵处理；对受体母畜注射激素进行___________处理。 (2)两种检查：对收集的胚胎进行质量检查；移植后，对受体母牛是否________进行检查。 (3)胚胎移植技术可充分发挥优良雌性个体的繁殖潜力。
精准 判断 1．利用组织培养技术培育脱毒苗，获得具有抗病毒的新品种。 (　　) 2．(2025·河北卷T5A)将种子消毒后，取种胚接种到适当的固体培养基诱导愈伤组织。 (　　) 3．动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒。 (　　) 4．除温度、pH外，渗透压也是动物细胞培养需要考虑的一个重要环境参数。 (　　) 5．动物细胞培养中，含5%CO2的恒温培养箱用来调控pH和温度。 (　　) 6．植物体细胞杂交过程中，原生质体融合后获得的细胞需要进行筛选。 (　　) 7．某种植物是由甲、乙两品种的体细胞杂交形成的杂种，与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目不同。 (　　) 8．为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素。 (　　) 9．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞都需要酶处理。 (　　) 10．直接从活体动物卵巢中吸取采集的卵母细胞，需要经体外人工培养至减数分裂Ⅱ中期。 (　　) 11．体外受精等技术可培育出与母本遗传性状完全相同的试管牛。 (　　) 12．卵裂期胚胎中，细胞数目和有机物总量都在不断增加。 (　　) 13．囊胚的内细胞团发育成胎膜和胎盘。 (　　) 14．克隆高产奶牛时，获得的重构胚需要在胚胎移植后用Ca2+载体等试剂“激活”。 (　　) 15．将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞。 (　　)
知识点27　基因工程
核心 盘点 1．基因工程的三种工具：限制性内切核酸酶(简称限制酶)、____________、载体。但工具酶只有________________________两种。 2．有关限制性内切核酸酶的四个要点 (1)主要从________生物中提取。 (2)具有________性。 (3)使特定部位的两个核苷酸之间的____________断裂。 (4)形成两种末端：____________和平末端。 3．基因工程的“四步曲” 目的基因的筛选与获取(筛选合适的目的基因，利用PCR获取和扩增目的基因)→__________________________(核心步骤)→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。 4．基因表达载体的四个重要部件 ________、目的基因、________和标记基因。 5．目的基因导入三类受体细胞 (1)导入植物细胞的两种方法：________________和花粉管通道法。 (2)导入动物细胞的方法：________________。 (3)导入微生物细胞的方法：__________________法(用Ca2+处理，使其成为感受态细胞)。 6．检测目的基因的两个水平 分子水平和个体水平，其中分子水平包括PCR或核酸杂交技术(DNA与DNA、DNA与RNA)和________________技术。 7．蛋白质工程的基本思路 预期的蛋白质功能→设计预期的____________→推测应有的________序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成____________→获得所需要的蛋白质。 8．基因工程在三大领域的应用 (1)在农牧业方面：主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物。 (2)在医药卫生领域：如将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的________等调控元件重组，转入转基因动物，获得乳腺生物反应器；再如培育出不会引起____________反应的转基因克隆猪器官。 (3)在食品工业方面：如通过基因工程的方法获得外源基因，得到高效表达的基因工程菌。
精准 判断 1．用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。 (　　) 2．限制酶主要是从真核生物中分离纯化出来的。 (　　) 3．载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因。 (　　) 4．外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制。 (　　) 5．PCR反应中两种引物的碱基间应互补以保证与模板链的正常结合。 (　　) 6．表达载体的复制和目的基因的表达均启动于复制原点。 (　　) 7．DNA连接酶能将单个脱氧核苷酸结合到引物链上。 (　　) 8．PCR过程中DNA边解旋边复制。 (　　) 9．抗虫基因即使成功插入植物细胞染色体上，也未必能正常表达。 (　　) 10．为了让目的基因在乳腺细胞中特异性表达，需用绵羊的乳腺细胞作为受体细胞。 (　　) 11．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构。 (　　) 12．以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同。 (　　) 13．表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA逆转录获得。 (　　) 14．酶切时使用两种限制酶同时处理是为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。 (　　) 15．通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定。 (　　) 16．(2025·河北卷T5B)在提取的DNA溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后观察颜色以鉴定DNA。 (　　)
21世纪教育网(www.21cnjy.com)专题排查8　生物技术与工程
知识点24　微生物的培养和利用
核心盘点
1．(1)固体　液体　(2)碳源　氮源
2．(1)消毒　(2)灭菌　
3．(1)酒精灯火焰　(2)平板划线　稀释涂布平板　单个菌落
4．(1)灼烧　(2)冷却　(3)上一次划线的末端　(4)第一区域
5．(1)选择　(2)平板划线　末端　(3)倒平板　(4)倒置
6．(1)偏大　(2)稀释涂布平板法　偏小
精准判断
1．×
2．×　解析：即使未长出菌落的培养基也需灭菌后再丢弃。
3．×　4．×　5．×　6．×
7．×　解析：酵母菌计数常用血细胞计数板。
8．×　9．×　10．×　11．×　12．√　13．×　14．×
知识点25　传统发酵技术、发酵工程及其应用
核心盘点
1．(1)酵母菌　毛霉　醋酸菌　乳酸菌　(2)18～30　30～35　温度
2．(1)酒精　(2)有　(3)乳酸
3．(1)菌膜　(2)亚硝酸盐
4．选育　发酵罐内发酵　分离、提纯
5．(4)污染小
精准判断
1．√　2．√
3．×　解析：变酸的酒表面的菌膜是醋酸菌繁殖形成的。
4．×　5．×　6．√　7．×　8．×　9．√　10．√　11．×
12．√　13．√　14．√　15．√
知识点26　细胞工程
核心盘点
1．(1)再分化　(2)愈伤组织　根　芽　(3)叶绿素
2．(1)纤维素酶和果胶酶　(2)聚乙二醇　(3)新细胞壁
3．(1)胰蛋白酶　(2)抗生素　更换　(3)①动物血清或血浆
②5% CO2
5．(1)小鼠骨髓瘤细胞　(2)能够分泌所需抗体的杂交瘤细胞
6．(2)透明带　卵细胞膜
7．囊胚
8．精子的获取
9．(1)促性腺激素　同期发情　(2)妊娠　
精准判断
1．×　2．√　3．√　4．√　5．√　6．√　7．√
8．×　解析：为防细菌污染，应加入抗生素。
9．√　10．√　11．×
12．×　解析：卵裂过程中，有机物总量减少，但种类增加。
13．×　14．×　15．×
知识点27　基因工程
核心盘点
1．DNA连接酶　限制酶和DNA连接酶
2．(1)原核　(2)专一　(3)磷酸二酯键　(4)黏性末端
3．基因表达载体的构建
4．启动子　终止子
5．(1)农杆菌转化法　(2)显微注射法　(3)感受态细胞
6．抗原—抗体杂交
7．蛋白质结构　氨基酸　新的基因
8．(2)启动子　免疫排斥　
精准判断
1．√　2．×　3．×　4．×　5．×
6．×　解析：目的基因的表达启动于启动子。
7．×　解析：DNA聚合酶能将单个脱氧核苷酸结合到引物上。
8．×　9．√
10．×　解析：应该用受精卵作为受体细胞。
11．×　12．×　13．×　14．√　15．√　16．√
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