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第3、4章阶段检测
一、 单选题：每题3分，共45分。
1．20世纪70年代，多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些工具酶的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。下列有关上述工具酶的叙述，正确的是(　　)
A．不同限制酶切割DNA所形成的黏性末端一定不同
B．DNA连接酶只能连接DNA片段互补的黏性末端
C．可通过逆转录酶催化DNA的合成，获取目的基因
D．三种工具酶都是从原核生物中分离纯化得到的
2．科学家利用AI技术从头设计了具有高效催化活性和新型折叠结构的丝氨酸水解酶。下列不属于AI技术设计该酶考虑的是(　　)
A．氨基酸R基种类 B．氨基酸的数目
C．氨基酸排列顺序 D．肽键形成方式
3．下列关于基因工程的说法，正确的是(　　)
A．基因表达载体中启动子是DNA聚合酶的结合部位，启动复制过程
B．基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、启动子和终止密码子等结构
C．利用PCR技术获取目的基因依据的是DNA半保留复制的原理
D．将目的基因导入植物细胞和动物细胞分别采用花粉管通道法和农杆菌转化法
4．某线性DNA分子含有5 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关叙述不正确的是(　　)
a酶切割产物(bp) b酶再次切割产物(bp)
2 100；1 400；1 000；500 1 900；200；800；600；1 000；500
A．a酶与b酶切断的化学键相同
B．a酶与b酶切出的黏性末端能相互连接
C．a酶与b酶切割该DNA分子位点分别有3个和5个
D．限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子
5．某兴趣小组以香蕉为原材料进行“DNA粗提取、扩增及电泳鉴定”系列实验。下列叙述正确的是(　　)
A．提取DNA时，研磨后需用滤纸进行过滤
B．可利用DNA在酒精中溶解度大的特点来提取DNA
C．琼脂糖熔化前需将适量的核酸染料加入并进行混匀
D．若DNA带负电，则凝胶加样孔应位于电泳槽负极侧
6．在基因工程中涉及DNA的提取、目的基因的扩增及电泳鉴定，下列叙述正确的是(　　)
A．利用DNA不溶于酒精、不能溶于2 mol·L-1的NaCl溶液的性质，可进行DNA的粗提取
B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率
C．在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下会逐渐产生砖红色沉淀
D．PCR过程中，耐高温的DNA聚合酶需先与启动子结合，继而从引物的3′端延伸子链
7．质粒是基因工程中常用的分子载体。下列有关质粒的说法，正确的是(　　)
A．质粒是独立于细菌拟核DNA之外的链状DNA分子，可在体外进行自我复制
B．质粒上的基因表达不遵循中心法则，所以可用作外源DNA分子的载体
C．质粒上的抗生素合成基因可作为标记基因用于重组质粒的筛选和鉴定
D．作为外源DNA分子的载体，质粒需具有限制酶能够切割的位点
8．下列关于基因工程及其应用的叙述，正确的是(　　)
A．若要生产转基因抗病水稻，可先将目的基因导入大肠杆菌中，再转入水稻细胞
B．用氨基酸序列推测合成的目的基因与原基因的编码区中的外显子一致
C．用DNA探针能检测饮用水中重金属物质的含量
D．作为载体要有多种限制酶的切点，但对一种限制酶而言，最好只有一个切点
9．科学家从其他植物中克隆出花色基因W，现欲将花色基因W与质粒相连，通过农杆菌转化法导入牡丹，从而增加牡丹花的花色类型。下列相关叙述正确的是(　　)
图1
　　
图2
A．PCR扩增基因W时，须已知W基因全部核苷酸序列来设计引物
B．需使用含有氨苄青霉素的培养基筛选出被成功转化的牡丹细胞
C．W基因被成功导入牡丹细胞后，其不一定能稳定遗传和表达
D．DNA连接酶可将经EcoRⅠ处理后的W基因和质粒碱基间的氢键连接起来
10．生物武器的杀伤特点有(　　)
①多数传染性强　②污染面积广　③发病快　④无色无味　⑤难以防治　⑥有一定的潜伏期　⑦像核武器一样破坏建筑物　⑧自然条件下的大雪、低温、干燥、日晒等不影响生物武器的杀伤力
A．①②③⑦ B．①③⑤⑧
C．③④⑥⑦ D．①②⑤⑥
11．科研人员通过PCR技术获得肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建基因表达载体，培育出在肝细胞中特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述错误的是(　　)
A．将基因表达载体导入肝细胞经培育获得转基因小鼠
B．构建基因表达载体需要限制酶和DNA连接酶
C．特异性白蛋白启动子应位于Cre重组酶基因的首端
D．通过抗原—抗体杂交技术可检测Cre重组酶基因是否完成表达
12．科研人员通过切割pET SEA质粒上SEA基因和终止子之间的部分序列，将猪流行性腹泻病毒的S基因插入，以构建pET SEA S重组质粒，并在大肠杆菌中高效表达SEA S融合蛋白。目的基因导入受体细胞后，可用PCR技术筛选出成功导入pET SEA S融合表达质粒的细菌。下列各项所列引物用来进行筛选最合适的是(　　)
A．引物1和引物4 B．引物3和引物4
C．引物1和引物5 D．引物2和引物5
13．农杆菌Ti质粒上的T DNA可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将图示中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板进行PCR，扩增出T DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T DNA插入的具体位置。下列说法不正确的是(　　)
注：子链从引物的3′端开始延伸。
A．PCR扩增利用的是DNA热变性的原理
B．进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚合酶
C．利用图中的引物②③组合可扩增出两侧的未知序列
D．通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T DNA的插入位置
14．为了提高水稻产量，科研人员将四种基因(EcCAT、OsGLO1、EcGCL、TSR)与叶绿体转运肽基因连接，构建多基因表达载体，引导合成的蛋白质定向运输至叶绿体，从而在水稻叶绿体内构建了一条新的代谢途径。下列说法正确的是(　　)
A． T DNA插入水稻的染色体DNA中可能会影响水稻自身基因的表达
B．含卡那霉素的培养基上不能存活的水稻细胞未成功导入四种目的基因
C．限制酶识别特定的序列具有专一性，DNA连接酶不具有专一性
D．目的基因产物转运至叶绿体，避免了目的基因通过花粉转移到近缘植物
15．世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿，是由经CRISPR/Cas9基因编辑技术对CCR5基因进行修改的胚胎细胞孕育的。研究者的初衷是让志愿者生出能抗艾滋病病毒的婴儿。但婴儿诞生后，深圳市医学伦理专家委员会启动对该事件涉及伦理问题的调查。下列叙述错误的是(　　)
A．在普通培养液中加入适量的动物血清可以培养艾滋病病毒
B．修改的胚胎细胞孕育出婴儿，说明胚胎细胞具有发育的全能性
C．胚胎是人生命的一个自然阶段，不能对其生命属性进行非道德篡改
D．并不能确保CCR5基因被选择修饰、发生变异的个体不患艾滋病
二、 非选择题：共55分。
16．(18分)几丁质酶可以催化真菌细胞壁的重要成分——几丁质的水解，从而抑制真菌的生长繁殖，提高植物的抗真菌能力。通过基因工程将几丁质酶基因转入杨树体内，可增强其抵抗真菌的能力。回答下列问题：
(1)为了便于目的基因与Ti质粒的连接，在利用PCR技术扩增目的基因时，需要在引物的________(填“5′”或“3′”)端增加特定的限制酶切割位点。在两种引物上增加不同限制酶识别序列的主要目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出两点即可)。
(2)受体农杆菌细胞在导入重组Ti质粒前，需要先用Ca2+处理，其目的是________________________________________________________________________________。形成的重组Ti质粒需要先导入农杆菌细胞，再侵染杨树的愈伤组织，理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(3)外植体(幼嫩的茎段)经过________形成愈伤组织。在愈伤组织形成的过程中，导致外植体被污染的原因可能是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________(答出一点即可)。
(4)目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性，首先需要通过分子水平的检测，其次，还需要进行________________________________________________________________________水平的鉴定。
17．(18分)病毒感染初期，机体会分泌干扰素并作用于细胞受体IFNAR来应对感染。麻疹是由麻疹病毒感染引起的急性传染病。已知人白细胞分化抗原46(hCD46)是麻疹病毒入侵细胞的主要受体，小鼠没有该受体，科研人员构建hCD46转基因小鼠用于相关研究，部分流程如图所示。回答下列问题：
(1)利用PCR技术获取目的基因hCD46，复性温度下发生的扩增过程是_________________________________________________________________。
(2)将hCD46接入质粒应选用的限制酶组合是________________________________________________________________________。
为提高转基因效率，同时避免标记基因进入胚胎体内，应选用____________________限制酶组合将重组质粒变为线性DNA。
(3)为获取大量胚胎用于移植，可用激素处理小鼠a，使其____________。将胚胎移植到小鼠c的子宫中，应选用桑葚胚的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(4)利用PCR技术对子代小鼠进行hCD46基因检测，应设置不加DNA模板的对照组，目的是________________________________________________________________________________________________________。
(5)若能进一步构建既表达hCD46受体又敲除IFNAR基因的小鼠，则该小鼠对麻疹病毒具有高易感性，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
18．(19分)大丽轮枝菌(一种丝状真菌)是引起棉花黄萎病的主要病原菌，因此对其研究至关重要。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员通过基因工程培育出了表达绿色荧光蛋白的转基因菌株。图1是其主要过程，分析回答：
图1
(1)据图1分析，过程①表示利用________技术获取和扩增两端含有酶切位点的绿色荧光蛋白基因(sGFP)，为保证sGFP正确插入质粒中，还需要在目的基因两端添加________________限制酶的识别序列。
(2)过程②表示基因工程的第二个步骤：________________________________________________________________________。
首先需要利用上述两种限制酶对sGFP片段和质粒进行剪切，然后利用______________进行重组质粒的连接。
(3)此研究中利用________________法将sGFP导入大丽轮枝菌。为了获得所需的农杆菌，可用________处理农杆菌，然后将重组质粒导入其中，接着在含有________的选择培养基上进行筛选，利用________________________法进行接种，培养后获得单菌落。
(4)选择不同的农杆菌菌落，分别提取细菌质粒DNA，并用上述限制酶完全酶切后电泳，结果如下图2，第________泳道为重组质粒的酶切结果，判断依据是___________________________________________________________________________________________________________________________________。
图2
(5)在获得高表达的转基因大丽轮枝菌后，将其接种到棉花根部，通过持续观察__________________________________，以确定其对棉花根部的侵染路径，为棉花黄萎病的治疗提供依据。
第3、4章阶段检测
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
答案 C D C C D B D D C D A A C A A
1．C　解析：限制酶具有特异性，不同限制酶切割形成的黏性末端有可能相同，如同尾酶，A错误；DNA连接酶能连接黏性末端和平末端，B错误；以目的基因转录的mRNA为模板，通过逆转录酶催化合成cDNA，可获取目的基因，C正确；三种工具酶不都是从原核生物中分离纯化得到的，如逆转录酶来自病毒，T4 DNA连接酶来自T4 噬菌体(病毒)，D错误。
2．D　解析：无论是何种蛋白质，其肽键的形成方式都是通过氨基酸之间的脱水缩合反应，这种形成方式不会因为蛋白质的种类、功能或结构不同而改变，所以在利用AI技术设计丝氨酸水解酶时，不需要考虑肽键的形成方式，D符合题意。
3．C　解析：基因表达载体中启动子是RNA聚合酶的识别并结合部位，启动转录过程，A错误；基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、启动子和终止子等结构，密码子存在于mRNA上，B错误；PCR是一项体外扩增DNA的技术，利用PCR技术获取目的基因依据的是DNA半保留复制的原理，C正确；将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法，也可用花粉管通道法，导入动物细胞的方法是显微注射法，D错误。
4．C　解析：限制酶都是使DNA分子的磷酸二酯键断裂，A正确；图中a酶和b酶切割后产生的黏性末端均为 GATC ，相同的黏性末端能相互连接，B正确；先用a酶切割该线性DNA，得到4种产物(2 100 bp、1 400 bp、1 000 bp、500 bp)，说明a酶切割位点有3个，a酶切割得到的4种产物再经b酶切割，其中2 100 bp被切成1 900 bp和200 bp，1 400 bp被切成800 bp和600 bp，1 000 bp、500 bp未被切割，因此b酶切割位点有2个，C错误；限制酶将一个DNA分子片段切成两个片段需要断裂2个磷酸二酯键，消耗2个水分子，D正确。
5．D　解析：DNA会吸附在滤纸上，提取DNA时，研磨后不能用滤纸过滤，应该用纱布过滤，A错误；DNA不溶于酒精，B错误；将琼脂糖熔化并稍微冷却后，再将适量的核酸染料加入并进行混匀，这样可以使核酸染料均匀分布在凝胶中，便于后续对DNA进行染色观察，C错误；若DNA带负电，在电泳过程中，DNA会向正极移动，所以凝胶加样孔应位于电泳槽负极侧，让DNA从负极向正极移动进行分离，D正确。
6．B　解析：利用DNA不溶于酒精，细胞中的某些蛋白质溶于酒精以及能溶于的NaCl溶液的性质，可进行DNA的粗提取，A错误；在凝胶中电泳时，待测样品中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关，B正确；在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后再沸水浴，冷却后可观察到蓝色，C错误；启动子是RNA聚合酶的结合位点，不是DNA聚合酶的结合位点，D错误。
7．D　解析：质粒是独立于细菌拟核DNA之外的小型环状DNA分子，可在体外进行自我复制，A错误；质粒上的基因表达遵循中心法则，B错误；质粒上的抗生素抗性基因可作为标记基因，用于重组质粒的筛选和鉴定，C错误；作为外源DNA分子的载体，质粒需具有多个限制酶切割位点，以便能插入目的基因，D正确。
8．D　解析：水稻属于单子叶植物，一般利用基因枪法将目的基因导入受体细胞，如果用农杆菌转化法，则需要先将目的基因导入农杆菌中，再用农杆菌去感染植物受体细胞，A错误；由于密码子的简并性，用氨基酸序列推测合成的目的基因与原基因的编码区中的外显子不一定相同，B错误；探针是用放射性同位素(或荧光分子)标记的含有目的基因的单链DNA片段，可以检查饮用水中是否含有病毒，但不能检查重金属，C错误。
9．C　解析：利用PCR扩增目的基因W时，只需要知道W基因两端的部分核苷酸序列就可以设计引物，A错误；需使用含有潮霉素的培养基筛选出被成功转化的牡丹细胞，B错误；W基因被成功送入受体细胞后，不一定能稳定遗传和表达，需要进行进一步检测与鉴定，C正确；DNA连接酶作用的是磷酸二酯键，D错误。
10．D　解析：生物武器有一定的潜伏期，发病不一定快；生物武器包括致病菌类、病毒类、生化毒剂类等，而生化毒剂类可能不是无色无味；生物武器不易被发现和鉴定，难以防治；生物武器不会像核武器那样破坏建筑物；生物武器受自然条件影响大，大雪、低温、干燥、日晒等可能加速病菌的消亡。
11．A　解析：动物细胞的受体通常是受精卵，故需要将该表达载体导入受精卵以获得转基因小鼠。
12．A　解析：将pET SEA S重组质粒导入大肠杆菌中，可利用PCR技术筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，即确定大肠杆菌细胞内含SEA基因和S基因，故应选择引物1和引物4，若扩增出片段，则说明导入成功。
13．C　解析：PCR技术利用DNA热变性原理，即高温使DNA双链解开，低温复性让引物结合，中温延伸合成子链，A正确；PCR过程中，DNA变性需高温(超过90 ℃)，延伸也需适宜温度(72 ℃左右)，所以要用耐高温的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)，B正确；将图中DNA片段连接成环，由于子链从引物的3′端开始延伸，若选用引物②③组合，则扩增出T DNA片段，若选择引物①④组合，则可扩增出两侧的未知序列，C错误；扩增出T DNA插入位置两侧未知序列后，和受体细胞基因组序列比对，就能确定T DNA的插入位置，D正确。
14．A　解析：T DNA插入水稻染色体DNA中的位置是随机的，可能会破坏原有基因结构，影响水稻自身基因的表达，A正确；含卡那霉素的培养基上不能存活的植物受体细胞可能未成功导入载体，但不能确定未成功导入四种目的基因，据图可知，卡那霉素抗性基因在载体的非T DNA区域，即使T DNA携带目的基因导入成功，卡那霉素抗性基因也不会导入，B错误；酶具有专一性，DNA连接酶只能连接两个DNA片段，催化形成磷酸二酯键，因此具有专一性，C错误；目的基因(而不是目的基因产物)定向转运至叶绿体中，才能避免目的基因通过花粉(有细胞核，不含叶绿体)转移到近缘植物，D错误。
15．A　解析：病毒只能寄生在活的细胞中，因此不能用普通培养基培养艾滋病病毒，A错误；根据全能性的概念可知，修改的胚胎细胞孕育出婴儿是胚胎细胞具有发育的全能性的体现，B正确；胚胎是人生命的一个自然阶段，对其生命属性进行篡改，即修改其基因是不道德的，C正确；由于基因编辑技术具有脱靶效应，因此，并不能确保CCR5基因被选择修饰、发生变异的个体不患艾滋病，D正确。
16．(1)5′　避免目的基因自身的环化、避免目的基因与质粒的反向连接、避免目的基因片段的任意连接　(2)使农杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态　农杆菌在自然条件下通过转化作用可将其所含Ti质粒上的T DNA转移、整合到宿主细胞染色体DNA上　(3)脱分化　培养基、接种工具灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；操作过程不符合无菌操作要求　(4)个体生物学
解析：(1)利用PCR技术扩增目的基因时，子链的延伸方向是从DNA的5′端向3′端，在耐高温的DNA聚合酶作用下，会将游离的脱氧核苷酸加到引物的3′端，所以限制酶酶切位点应该加在引物的5′端。在两种引物上增加不同限制酶识别序列，主要目的是避免同一种酶识别序列相同，造成目的基因自身的环化或者目的基因与质粒的反向连接或者目的基因片段的任意连接。(2)农杆菌转化法将重组Ti质粒导入农杆菌前，往往用Ca2+处理受体细胞，目的是使农杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态。农杆菌转化法的原理是农杆菌在自然条件下，通过转化作用可将其所含Ti质粒上的T DNA转移、整合到宿主细胞染色体DNA上，所以形成的重组Ti质粒需要先导入农杆菌细胞，再侵染杨树的愈伤组织。(3)植物组织培养先将外植体经过脱分化形成愈伤组织，再经过再分化形成完整植株。植物组织培养过程要求进行严格的无菌操作，若外植体消毒不彻底，培养基、接种工具灭菌不彻底或操作过程不符合无菌操作要求，都可能导致外植体被污染，使实验失败。(4)目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性，需要进行检测，包括分子水平和个体生物学水平的检测与鉴定。
17．(1)两种引物分别与含hCD46基因的两条模板链结合　(2) EcoRⅠ和NotⅠ
AgeⅠ和HindⅢ　(3) 超数排卵　桑葚胚易于在小鼠子宫着床　(4)排除PCR体系中外源DNA的污染　(5)该小鼠能被麻疹病毒感染，且干扰素无法作用于IFNAR以应对感染
解析：(1)利用PCR技术获取目的基因hCD46，PCR技术中，变性后进入复性阶段，此时两种引物分别与hCD46基因的两条模板链结合，随后在延伸阶段合成子链。(2)分析题图，为保证目的基因的完整性，不能选择限制酶SacⅠ和BamHⅠ，且目的基因应插在质粒中启动子和终止子之间，因此，应选择限制酶EcoRⅠ和NotⅠ切割质粒和hCD46基因。为提高转基因效率，同时避免标记基因进入胚胎体内，应选用AgeⅠ和HindⅢ将重组质粒变为线性DNA，因为这两种限制酶可以将重组质粒分为含目的基因的片段和含有标记基因的片段。(3)为获取大量胚胎用于移植，可用促性腺激素处理小鼠a，使其超数排卵，获得更多的卵母细胞，再经过受精作用获得较多的供体胚胎；将胚胎移植到小鼠c的子宫中，通常选用桑葚胚是因为桑葚胚易于在小鼠子宫着床，进而可以提高胚胎的存活率。(4)利用PCR技术对子代小鼠进行hCD46基因检测，应设置不加DNA模板的对照组作为空白对照，以排除PCR体系中外源DNA的污染，提高实验结果的可信度。(5)构建既表达hCD46受体又敲除IFNAR基因的小鼠，hCD46是麻疹病毒入侵细胞的主要受体，所以该转基因小鼠能接受抗原刺激，进而机体会分泌干扰素，但干扰素无法与相应的受体结合，使干扰素无法起作用，不能应对感染，因此，该小鼠对麻疹病毒具有高易感性。
18．(1)PCR　HindⅢ和BamHⅠ　(2)目的基因表达载体的构建　DNA连接酶　(3)农杆菌转化　CaCl2　潮霉素　平板划线(或稀释涂布平板)　(4)2　泳道2中除了质粒大片段外，另外的DNA片段的长度与目的基因的相同　(5)绿色荧光蛋白出现的位置
解析：(1)结合图示可知，过程①表示利用PCR技术获取和扩增两端含有酶切位点的绿色荧光蛋白基因的过程，为保证sGFP正确插入质粒中并且准确连接，由于目的基因需要连接在启动子和终止子之间，还需要在目的基因两端添加限制酶HindⅢ和BamHⅠ的识别序列，因为使用不同种限制酶切割目的基因和质粒，可以产生不同的黏性末端，防止目的基因和载体反向连接及自身环化。(2)过程②为目的基因表达载体的构建，是基因工程的核心步骤。该构成中首先需要利用上述两种限制酶对sGFP片段和质粒进行剪切，然后利用DNA连接酶进行重组质粒的连接。(3)图中显示，此研究中利用农杆菌转化法将sGFP导入大丽轮枝菌。根据目的基因表达载体上的标记基因——潮霉素抗性基因对成功导入重组质粒的受体菌进行筛选。因此，为了获得所需的农杆菌，可用CaCl2处理农杆菌，使其成为感受态，然后将重组质粒导入其中，接着在含有潮霉素的选择培养基上进行筛选，利用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种以便获得单菌落。(4)sGFP的基因长度为720 bp，质粒大片段为3 500 bp，二者连接后的长度为3 500＋720＝4 220 bp。用BamHⅠ和HindⅢ完全酶切后电泳会形成3 500 bp和720 bp两种片段，所以酶切后的电泳图示为第2泳道。(5)在获得高表达的转基因大丽轮枝菌后，将其接种到棉花根部，通过持续观察绿色荧光蛋白出现的位置可确定其对棉花根部的侵染路径，从而为棉花黄萎病的治疗提供依据。
21世纪教育网 www.21cnjy.com 精品试卷·第 2 页 （共 2 页）
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