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山东省聊城市2024-2025学年高二下学期期中生物试题
一、单选题
1．传统发酵技术大大丰富了食品种类。下列关于传统发酵技术及其应用的叙述，错误的是（ ）
A．传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主
B．制作豆豉、酱油、豆腐等食品均利用了传统发酵技术
C．泡菜腌制全过程需保持密封，以利于菌种的厌氧呼吸
D．果酒发酵控制的温度一般要比果醋发酵控制的温度低
2．用“麦汁酸化”法酿造的酸啤酒既有麦芽清香，又酸甜适口。它是通过微生物发酵将麦汁中的麦芽糖和其他糖类转化为乳酸，再结合酒精发酵制作而成。下列叙述错误的是（ ）
A．利用大麦作原料时，需浸泡大麦并加入赤霉素有助于淀粉酶的形成
B．发酵过程中需将乳酸菌和酵母菌同时接种以有利于同时进行乳酸发酵和酒精发酵
C．达到一定酸度后需将麦汁蒸煮以杀死乳酸菌，同时加入啤酒花产生风味组分
D．为延长啤酒的保存期，可采用过滤消毒法去除啤酒中的部分微生物
3．微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。下列叙述错误的是（ ）
A．根据微生物对碳源需求的差别，使用含有不同碳源的培养基
B．接种前后．接种环都要在酒精灯火焰上灼烧灭菌
C．微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
D．固体培养基表面生长的一个菌落一般是由单个微生物繁殖形成的
4．双层平板法是先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后形成底层平板；再倒入由宿主细菌、噬菌体以及琼脂含量较低的培养基组成的混合液，形成上层平板。培养一段时间后，在上层平板上可观察到由噬菌体侵染周围细菌而形成的噬菌斑（通常一个噬菌斑来自一个噬菌体），根据噬菌斑的数目可计算噬菌体的数量。下列叙述错误的是（ ）
A．需先调节培养基的pH再灭菌，然后进行倒平板
B．需使用灭菌后的涂布器将混合液均匀涂布在底层平板上
C．利用双层平板法获得的噬菌斑不容易出现上下重叠现象
D．由于上层培养基较软形成的噬菌斑较大，故有利于计数
5．科研人员采用平板法筛选出淀粉酶高产菌株S458-1，然后对该菌株进行扩大培养，并研究了装瓶量（培养瓶中培养液的装有量）、发酵时间等发酵条件对该菌株产生的淀粉酶活力的影响，实验结果如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．筛选时可在平板上喷洒碘液，菌落周围棕色区域较大的菌株即为S458-1
B．进行扩大培养时，培养基中不需要添加琼脂但要以淀粉作为唯一碳源
C．装瓶量增大会降低S458-1的产酶能力，可能是由于培养液中溶解氧的含量降低
D．由图示可知，装瓶量10%、发酵时间60h为S458-1的最佳发酵条件
6．海洋杜氏藻是一种单细胞绿藻，具有耐盐特性；紫球藻是一种单细胞红藻，是制备重要医药原料花生四烯酸的良好材料．且对青霉素有抗性。通过植物细胞工程技术，培育出了能在高盐海水中养殖且高产花生四烯酸的杂种藻类。下列叙述错误的是（ ）
A．用酶解法获取原生质体的过程需在等渗或高渗溶液中进行
B．用高Ca2+-高pH融合法可人工诱导原生质体的融合
C．在高盐培养基中添加青霉素可筛选出所需的杂种细胞
D．杂种细胞需脱分化形成愈伤组织后才能进一步发育
7．三维细胞培养技术（3D细胞培养技术）是通过人工模拟细胞间质微环境，允许动物细胞在三维空间中生长和相互作用的技术。与传统的细胞培养相比，3D细胞培养更接近体细胞的实际生长环境。下列叙述正确的是（ ）
A．传统细胞培养时，细胞往往需要贴附于某些基质表面才能生长增殖
B．用胰蛋白酶处理传统培养的贴壁细胞，使其胞间连丝断裂有利于传代培养
C．3D细胞培养前需要对动物组织进行灭菌处理，培养时需定期更换培养液
D．利用3D细胞培养技术研究干细胞分化过程时，一定不需要进行分瓶处理
8．干细胞的培养成功是动物细胞培养领域的重大成就，其应用前景吸引着众多科学家投入到相关研究中。下列叙述错误的是（ ）
A．胚胎干细胞具有可分化为成年动物体内任何一种类型的细胞的潜能
B．成体干细胞具有组织特异性，不具有发育成完整个体的能力
C．iPS细胞可由成纤维细胞经相关因子诱导转化而来，类似于再分化
D．移植来源于患者自身体细胞的iPS细胞理论上可以避免免疫排斥反应
9．HER-2蛋白主要在胎儿期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。由曲妥珠单抗和药物DMI连接而成的抗体—药物偶联物T-DMI，对HER-2有很强的靶向性，可用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌。下列叙述正确的是（ ）
A．给小鼠反复注射HER-2蛋白，以便在血清中获取曲妥珠单抗
B．用选择培养基可筛选出产生HER-2抗体的杂交瘤细胞
C．DMI与HER-2特异性结合是T-DMI对癌细胞进行选择性杀伤的关键
D．用灭活的病毒诱导细胞融合时细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布
10．在胚胎工程技术中，有很多操作步骤都需要“检查”。下列叙述正确的是（ ）
A．取出的卵母细胞移入培养液中培养，需检查其是否分裂到MII中期
B．胚胎移植前，需对胚胎进行检查以确定是否发育至原肠胚阶段
C．检查胚胎性别时，需取样囊胚内细胞团细胞做DNA分析
D．胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应
11．下列关于重组DNA技术的基本工具的叙述，错误的是（ ）
A．E．coliDNA连接酶既能“缝合”黏性末端，也能“缝合”平末端
B．限制性内切核酸酶主要来自原核生物，一般不切割自身DNA
C．载体上要有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入
D．DNA连接酶能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键
12．苹果切开后颜色会加深的现象称为“褐变”，“褐变”是由于多酚氧化酶催化多酚类物质生成褐色素所致。培育抗褐变转基因苹果的操作流程如图。下列叙述正确的是（ ）
A．图中的目的基因为多酚氧化酶基因，标记基因为卡那霉素抗性基因
B．目的基因的表达依赖上游的启动子，标记基因的表达则不需要启动子
C．步骤①是获得转基因苹果的核心工作，一般需要限制酶和DNA聚合酶的参与
D．可通过PCR技术检测苹果的染色体DNA上是否成功插入了目的基因
13．目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因与卵子完成受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列叙述错误的是（ ）
A．导入外源基因的精子需放入ATP溶液中进行获能处理
B．②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合
C．④过程是胚胎移植，需移植到同种的、生理状态相同的代孕母鼠子宫中
D．精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小
14．水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。研究发现，用赖氨酸替换水蛭素第47位天冬酰胺可以提高它的抗凝血活性。下列叙述正确的是（ ）
A．水蛭素的改造属于蛋白质工程，自然界中的酶也都可通过该工程进行改造
B．水蛭素疗效提高的根本原因是水蛭素氨基酸的排列顺序发生了改变
C．用基因定点突变技术进行碱基的替换可实现水蛭素第47位氨基酸的替换
D．改造水蛭素过程中遗传信息的流向和天然水蛭素合成过程中的相同
15．现代生物技术有着巨大的应用前景，但会涉及到生物安全问题。下列叙述错误的是（ ）
A．消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面
B．我国禁止一切与生殖性克隆和治疗性克隆有关的研究
C．为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果
D．设计试管婴儿需要经过国家有关部门的严格审批，不宜推广
二、多选题
16．乳酸链球菌素（Nisin）是一种蛋白质类抗生素，对许多革兰氏阳性菌，包括对食品造成严重危害的主要腐败菌和某些致病菌有强烈的抑制作用。目前获得Nisin的唯一途径是通过乳酸链球菌发酵生产。下列叙述正确的是（ ）
A．随发酵时间的延长，菌液的pH下降会抑制菌种的生长
B．发酵生产过程中，可用抽样检测法对乳酸链球菌的数量进行监测
C．Nisin的分泌离不开细胞膜、细胞器膜等组成的生物膜系统
D．Nisin可被人体消化道中的蛋白酶水解，故对人体无害，可作为食品防腐剂
17．嗜盐单胞菌是一类嗜盐微生物，能够在高pH、高温和高盐等极端条件下生长。中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，其以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室通过发酵生产出PHA等新型高附加值可降解材料，从而提高了甘蔗的整体利用价值。具体的工艺流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．使用嗜盐单胞菌能够节约淡水资源，还能建立抗杂菌污染的开放式发酵系统
B．实验室用嗜盐单胞菌H发酵生产PHA时，需要提供无氧等发酵条件
C．为统计嗜盐单胞菌H的数目，在培养过程中应定期取样并采用平板划线法进行计数
D．为提高嗜盐单胞菌H对蔗糖的耐受力，应以蔗糖为唯一碳源，并不断提高蔗糖浓度
三、单选题
18．野生型草莓一般是二倍体，而平常食用的草莓是八倍体。某生物兴趣小组选用八倍体草莓进行了“DNA粗提取与鉴定”实验。下列有关说法错误的是（　　）
A．八倍体草莓细胞中的DNA含量高于野生型草莓细胞
B．研磨液用滤纸过滤后，于4℃冰箱中静置后再取上清液
C．向上清液中加入体积分数为95%的冷酒精，利于DNA析出
D．用二苯胺试剂鉴定DNA时，需进行沸水浴加热并冷却处理
四、多选题
19．研究表明，精子进入卵母细胞时带入的少量miRNA可促进早期胚胎发育。重构胚不能正常发育是限制核移植技术的重要因素，为探究其原因科学家进行相关实验，结果如图所示。下列说法错误的是（ ）
A．重构胚需用电刺激等方法激活后才能完成细胞分裂和发育进程
B．精子miRNA可通过改变重构胚中DNA的遗传信息促进其正常发育
C．精子miRNA可通过降低重构胚中组蛋白甲基化水平促进其正常发育
D．与正常胚胎相比，重构胚中甲基化水平异常主要发生在胚胎孵化时期
20．研究发现，大豆GmNF-YA19基因在干旱胁迫中有响应。科研人员利用PCR扩增GmNF-YA19基因，构建GmNF-YA19基因表达载体并转化烟草。含GmNF-YA19基因的DNA片段和载体的结构分别如图1、2所示。下列叙述正确的是（ ）
A．PCR扩增GmNF-YA19基因所需的两种引物的碱基序列一般不同
B．为获得能正确表达目的基因的重组质粒，应选用限制酶KpnI、EcoRI进行切割
C．终止子为一段DNA序列，其作用是使翻译在所需要的地方停下来
D．重组质粒转化烟草后，可使用含氨苄青霉素的培养基来筛选受体细胞
五、解答题
21．产黄青霉菌是一种自然界中广泛存在的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种。当产黄青霉菌处于葡萄糖浓度不足的环境中时，会分泌青霉素。工业上生产青霉素的流程如图所示。

(1)由图中分离纯化的结果推测，该过程中采用的方法是_____。刚分离获得的菌种不会直接加入主发酵罐，而是先进行母种培养，其目的是_____。
(2)图中主发酵过程中要随时取样检测培养液中的微生物数量、产物浓度等．同时，要严格控制_____（答出三点）等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成。
(3)随着主发酵过程的进行，需要适时向发酵罐内“补料”。为使产黄青霉菌处于“半饥饿”状态，延长青霉素的合成期，“补料”添加葡萄糖时应采取的方式是_____（从添加的量与频次角度回答）。青霉素是青霉菌的_____（填“初生”或“次生”）代谢物，一般采取适当的_____措施来获得产品。
六、实验题
22．多肉植物因其观赏性和耐旱易培的特点受到人的喜爱。研究人员以叶插繁殖能力强的多肉植物长寿花为实验材料，通过使用改良的“切-浸-芽”（CDB）方法实现了多肉植物的遗传转化和基因编辑，为多肉植物的遗传改良开辟了新途径。图1和图2分别表示利用常规转化法和CDB法在长寿花中递送基因的示意图。回答下列问题。
(1)无菌操作是图1操作成功的关键，诱导愈伤组织的固体培养基应采用______法灭菌。若①过程在诱导生芽的培养基上未形成芽但分化出了根，原因可能是生长素与细胞分裂素用量的比值______（填“偏高”或“偏低”），该过程还需要提供光照，目的是_______。
(2)为测试CDB法能否对长寿花实现遗传转化，研究人员用携带增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP基因）和除草剂抗性基因（bar基因）的农杆菌K599侵染外植体B，再将被侵染的外植体B放入充满湿润土壤的培养箱中培养。紫外灯下，实现遗传转化的转基因芽表现为______；农杆菌侵染植物细胞时可将外源基因递送到外植体B细胞中的原因是_____。
(3)为确定CDB法能否用于传递基因编辑工具，研究人员构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体，已知PDS蛋白缺失会导致植株白化。鉴定导入转基因长寿花B中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是______，依据是_____。
(4)与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送的优点是：______。
七、解答题
23．猪细小病毒（PPV）会导致猪患细小病毒传染病。NS1 蛋白参与 PPV 的复制等生命活动，猪感染PPV后会产生抗NS1 蛋白抗体，研究人员开发了一种通过检测该抗体以快速检测 PPV 的试纸。
(1)研究发现，金黄色葡萄球菌A 蛋白（SPA）和NS1 蛋白均能与抗 NS1 蛋白抗体特异性结合。为探究它们与抗体的结合位点是否相同，研究人员首先制备了抗 NS1 蛋白的单克隆抗体，基本思路是：将从注射过_________的小鼠中提取的B淋巴细胞与________细胞融合，再经过两次筛选最终获得具有________特点的阳性杂交瘤细胞。然后将得到的抗 NS1蛋白抗体分为Fab和Fc两部分，电泳后分别用SPA 和NS1蛋白作探针进行杂交，结果如图1所示，由此得出的实验结论为________。
(2)利用NS1蛋白和SPA制备的PPV 检测试纸，原理如图2所示。其中PPV 多抗IgG可特异性结合包含NS1蛋白在内的多种 PPV抗原，当胶体金在检测线、质控线处聚集时，会出现可见条带。

若检测结果为检测线和质控线处均出现可见条带，则说明样品中含有________，理由是____ 。
(3)研究发现，只有当PPV 在细胞内大量繁殖后，才会在猪血清中检测到抗 NS1 蛋白抗体。据此推测，若将灭活的PPV疫苗接种到健康猪体内后，取其血清利用上述试纸进行检测的结果应为________。
24．为筛选出能与SARS病毒的S蛋白特异性结合的受体蛋白，研究人员在S蛋白末端添加TAP标签（能特异性地与人和哺乳动物体内IgG类抗体结合），再利用该标签在病毒敏感细胞中快速纯化出S蛋白及其相互作用的蛋白质，部分过程如图。回答下列问题。
注：XhoI、SmaI、EcoRI、BamHI表示限制酶；PCMV、T7表示启动子：Kozak序列是调控基因表达的重要序列且不含限制酶识别序列；Ampr表示氨苄青霉素抗性基因；ori表示复制原点。
(1)为成功构建pcDNA3．1-S-TAP重组质粒，在利用PCR扩增S基因时，应该在S基因的5'端引入Kozak序列和_______限制酶识别序列，并删除S基因3'端的________编码序列；缓冲液中Mg2+的作用是______。
(2)S基因和TAP基因的扩增产物通常用________进行初步鉴定，结果显示两个片段均得到扩增再经测序证实正确后，将这两个片段经限制酶切割并通过_______酶连接导入质粒pcDNA3．1。在重组质粒中，T7的作用是_______。
(3)为检测转染细胞中是否表达出了S-TAP融合蛋白，科研人员将转染24h的细胞置于载玻片，洗涤、固定后，滴加带有荧光标记的_____稀释液，荧光显微镜下观察。若出现荧光标记，则说明转染细胞中表达出了S-TAP融合蛋白。
八、实验题
25．小麦的D1b基因是调控光周期的重要基因，当小麦细胞接受足够时长的短日照刺激后，细胞中的A 蛋白就会与D1b基因启动子区中的光周期响应序列结合，进而启动该基因的表达，小麦表现为延迟开花。
(1)与D1b基因相比，D1a 基因的启动子区缺失了含光周期响应序列的片段（长度约2089bp），但其他序列相同，因此D1a基因会使小麦表现为提前开花。欲利用PCR 扩增出D1b和D1a基因的启动子区，科研人员设计了图1中的引物DF 和DR，引物的作用是________。若D1a基因启动子区扩增产物为 709bp，D1b基因启动子区扩增产物为2518bp，则光周期响应序列片段的长度为________ bp。
(2)为找到光周期响应序列的位置，将通过引物F1~F9扩增得到的9种片段、D1b启动子区和D1a启动子区分别与报告基因连接成基因表达载体，如图2 所示。为正确构建基因表达载体，引物DR 的序列应为5‘-___________3’（,写出10个碱基）。将构建成功的11组基因表达载体分别转入拟南芥后，用短日照处理，检测不同组的报告基因开始表达的时间。当实验结果为________时，说明光周期响应序列位于引物F7~F8结合的DNA片段之间。
(3)为找到小麦细胞中的A蛋白，科研人员利用组氨酸和亮氨酸双营养缺陷型酵母菌为受体菌，进行了两次转化实验得到双转化的酵母菌，如图3所示。
①将含光周期响应序列的诱导型启动子与组氨酸合成酶基因连接，构建成诱饵载体，用该载体转化酵母菌后，其会自主整合到酵母菌基因组中。
②提取小麦总mRNA，通过_________得到不同的cDNA，以这些 cDNA 片段为目的基因，以亮氨酸合成酶基因为________基因，构建成猎物载体转化上述酵母菌。
③将双转化后的酵母菌接种到________的选择培养基上培养，若________，则说明该组酵母菌中 cDNA 指导合成的是 A 蛋白。
1．B
2．B
3．C
4．B
5．C
6．D
7．A
8．C
9．D
10．A
11．D
12．D
13．A
14．C
15．B
16．ABD
17．BC
18．B
19．BD
20．AD
21．(1) 稀释涂布平板法 增加菌种数量
(2)pH、温度、溶解氧
(3) 少量、多次添加 次生 提取、分离和纯化
22．(1) 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 偏高 诱导形成叶绿素，有利于进行光合作用
(2) 发出绿色荧光 外源基因插入到农杆菌Ti质粒上的T-DNA后可转移到被侵染的外植体B细胞中，并与外植体B细胞的染色体DNA整合到一起
(3) 观察植株是否表现出白化性状 PDS基因缺失会导致植株白化，出现白化苗则说明通过基因编辑技术实现了PDS基因的敲除
(4)不需要植物组织培养技术、操作简单、培养周期短
23．(1) NS1 蛋白 骨髓瘤 既能大量增殖又能产生专一抗体 SPA 和 NS1 蛋白与抗体的结合位点不同
(2) 抗NS1 蛋白抗体 SPA 和 NS1 蛋白与抗NS1 蛋白抗体的结合位点不同，样品中的抗NS1 蛋白抗体与与胶体金标记的 NS1 蛋白结合后，与检测线上的SPA结合形成可见条带，过量胶体金标记的 NS1 蛋白也会与质控线上的抗体结合形成可见条带
(3) 质控线处出现可见条带，检测线处不出现可见条带；灭活的 PPV 不能大量繁殖，血清中检测不到抗 NS1 蛋白抗体
24．(1) SmaI 终止密码子 激活TaqDNA聚合酶
(2) 琼脂糖凝胶电泳 DNA连接 是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA
(3)IgG类抗体
25．(1) 使DNA聚合酶能够从引物端开始连接脱氧核苷酸 1809
(2) GGATCCCATG 引物F1-F7组，报告基因表达，引物F8，F9组，报告基因不表达
(3) 逆转录/反转录 标记 不含亮氨酸和组氨酸 有菌落出现

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