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2025-2026 学年第二学期第一次月考高二生物
一、单选题
1．广东佛山、浙江嘉兴依托果酒深加工发展功能性果醋产业，实现农产品增值超 300%，
下列关于制作果醋的叙述，错误的是（ ）
A．果醋制作可以人工添加醋酸菌
B．果醋发酵与果酒发酵的温度完全一致
C．果醋制作可以在制成的果酒基础上进行
D．需要对发酵瓶、榨汁机等器具进行消毒
2．宋代朱肱在《北山酒经》中记载了“卧浆”法：“造酒最在浆，…，不得过夏。”其核心是在
三伏天将小麦煮粥，借助空气中的乳酸菌等自然发酵成酸浆。次年酿酒时，以此酸浆浸米、
蒸煮，再加入酒曲发酵。此法可有效抑制杂菌，提升酒质。下列关于“卧浆”法的现代生物学
解释，错误的是（ ）
A．“浆不得过夏”：酸浆若储存过久，其积累的酒精可能被醋酸菌转化为乙酸导致酸败
B．“三伏天卧浆”：夏季温度较高有利于乳酸菌等微生物快速繁殖，缩短酸浆成熟时间
C．“以酸浆浸米”：酸浆的较低 pH值可抑制大多数杂菌生长，为酵母菌创造竞争优势环
境
D．“酸浆煮粥”：蒸煮酸浆的目的是为了彻底杀菌，确保后续的酿酒过程为纯种酵母菌发
酵
3．广东有丰富的水果资源用于制作果酒果醋，以下有关利用岭南佳果荔枝制作果酒果醋的
叙述正确的是（ ）
A．酵母菌无氧呼吸产生酒精是导致后期发酵液 pH下降的主因
B．制作果醋时，醋酸菌可在氧气充足时将酒精转化为醋酸
C．制作果酒时，果酒变酸的原因是密封不严导致乳酸菌大量繁殖
D．主发酵阶段完成酵母繁殖，后发酵阶段完成糖的分解和代谢
4．有些酵母菌可以利用工业废甲醇作为碳源，既可减少污染又可降低生产成本。研究人员
拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养，大致过程：①称量土样→②依次等比稀释
→③涂布平板→④挑取平板单菌落转移至培养液中培养→⑤进行甲醇分解能力的检测→⑥
选取优良菌株扩大培养。下列叙述正确的是（ ）
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A．培养基灭菌后需冷却至 25℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板
B．步骤③应将稀释后的菌液涂布在以甲醇为唯一碳源和氮源的固体培养基
C．步骤⑤分别测定培养液中甲醇的剩余量进一步筛选菌株
D．步骤⑥为使酵母菌数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和无氧环境
5．螺蛳粉是一种特色小吃，闻着臭吃着香，这种臭味来自酸笋。春季当竹子出笋后，剥去
笋壳，将其切成笋丝，放于陶罐中，使清水过面，并撒上适量食盐，将容器密封好，置于阴
凉处腌制一个月左右，酸笋即成。下列叙述正确的是（ ）
A．酸笋的酸味主要与醋酸菌发酵有关
B．腌制过程中，食盐的主要作用是调味
C．清水过面有利于菌种的繁殖与发酵
D．发酵过程中，亚硝酸盐的含量持续增加
6．HindⅢ是一种来源于流感嗜血杆菌中的限制性内切核酸酶,其特异性识别和切割的序列如
图所示。用该限制酶完全切割果蝇的 DNA,可得到多个 DNA片段。下列叙述错误的是（ ）
A．HindⅢ一般不作用于流感嗜血杆菌中的 DNA序列
B．推测果蝇的相关 DNA上存在多个 HindⅢ的酶切位点
C．HindⅢ切割产生的黏性末端不会与其他限制酶切割产生的相同
D．HindⅢ能使 DNA每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开
7．为获得纯化的酵母菌菌落，进行如图所示的平板划线操作，划线的顺序为①→②→③→
④→⑤。下列有关叙述错误的是（ ）
A．马铃薯琼脂培养基可采用湿热灭菌的方法
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B．进行划线操作时，培养皿盖不能完全打开，且需要在酒精灯火焰旁进行
C．完成划线操作后，将平板正立放入 28℃左右的恒温培养箱中培养
D．在区域①～⑤中，最有可能在区域⑤中得到酵母菌的纯培养物
8．我国科学家利用天山雪莲的 SikCDPK1基因(S基因)培育抗旱烟草时，为减少外源基因对
植物正常生长的潜在影响，将组成型启动子(35S)替换为干旱诱导型启动子(RD29A)。下列分
析错误的是
A．与 35S启动子相比，RD29A启动子通常在干旱条件下才驱动 S基因表达
B．可用农杆菌转化法将 RD29A—SikCDPK1表达载体导入烟草细胞
C．若 S基因成功导入，则能在烟草植株各部位的细胞中检测到对应的 mRNA
D．检测转基因烟草的抗旱性时，可测定其在干旱胁迫下的叶绿素含量
9．利用 PCR技术分析粪便已成为珍稀野生动物种群调查的有效手段，同种生物不同个体在
同源染色体某些位置上 DNA片段长度存在差异，这些片段可作为辨别不同个体的依据。下
列叙述错误的是（ ）
A．需去除粪便中微生物的 DNA以免干扰实验结果
B．设计 PCR引物时需要考虑物种特异性
C．反应体系中需加入四种脱氧核苷酸作为原料
D．PCR添加的两种引物均成为每个主要产物分子的一部分
10．某团队对菌种 m、菌种 n降解微塑料的能力进行实验研究，将总菌量相同的 m、n、m
+n（m:n=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，一段时间后测定微塑料
的相对残留率（相对残留率=相对剩余量/添加量×100%），结果如下表。下列叙述错误的是
（ ）
菌种 混合菌种 m
菌种 未接种 菌种 n
m +n
相对残留率（%） 100 69.36 78.30 58.79
A．用稀释涂布平板法可对活菌进行纯化和计数
B．混合菌种组微塑料残留率最低，故菌浓度也最低
C．从残留率上分析，混合菌种降解微塑料的能力高于单一菌种
D．能在该培养基中生长繁殖的微生物不一定都能降解微塑料
11．如图为将相同大小的含有不同抗生素的灭菌滤纸片 A~D放在培养基甲上，用于判断抗
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生素的杀菌能力，乙为甲培养一段时间后的结果。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基甲中含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂
B．用无菌水配制成细菌悬液，再均匀涂布于培养基甲
C．根据抑菌圈直径大小可判断不同抗生素抑菌能力的强弱
D．不同抗生素的抑菌能力大小为 D>C>A>B
12．为筛选高效降解原油的细菌，科研小组从油田污泥中取样，按以下流程操作：①称取污
泥 10 g加入 90 mL无菌水，振荡摇匀制成菌悬液；②将菌悬液进行 10倍梯度稀释至 10 6；
③取 10 4、10 5、10 6稀释液各 0.1 mL，分别涂布于以原油为唯一碳源的培养基上；④在
37℃条件下培养 48小时后，统计 10 5稀释组三个平板的菌落数为 168、175、182.下列对实
验操作的判断及原因分析，正确的是（ ）
A．步骤①中无菌水需添加原油——保证目的菌正常生长
B．步骤②每次稀释需更换移液管——仅避免杂菌污染
C．步骤③应增加 10 3稀释组——10 5组菌落数符合计数要求
D．步骤④需对三个平板数据取平均值——减少实验偶然误差
13．莠去津是一种含氮的有机化合物，是广泛使用的除草剂。长期使用莠去津容易对土壤造
成污染。实验人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示，已知含过量莠去津的固体
培养基不透明。下列说法错误的是（ ）
A．目的菌能以莠去津为氮源进行增殖，产生有透明带的菌落
B．A瓶到 C瓶的目的是逐步稀释培养液中目的菌的浓度，以便后续目的菌的纯化
C．甲平板的接种方法是平板划线法，接种过程共灼烧 6次接种环
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D．无透明带的菌落可能是固氮菌，有透明带的菌落还需进一步鉴定
14．某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠 Gata3基
因一端，如图 1所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各 1只，交配以期
获得Gata3-GFP基因纯合子小鼠。为了鉴定交配获得的 4只新生小鼠的基因型，科研人员设
计了引物用于 PCR扩增，结果如图 2所示。下列叙述正确的是（ ）
A．应在 Gata3和 GFP基因编码区之间再插入一个启动子
B．图 2结果是选择引物 1和引物 2扩增得到的产物
C．1、3号条带属于杂合小鼠，4号条带属于所需纯合子
D．基因表达时图 1中基因的启动子区可以作为转录的模板
二、多选题
15．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是（ ）
A．培养不同微生物的培养基的 pH可能不同
B．待培养基冷却至 50℃左右时进行倒平板
C．待平板冷却凝固约 5~10分钟后将平板倒过来放置
D．配制培养基时先灭菌，再调 pH，再倒平板
16．巢式 PCR是一种特殊的聚合酶链式反应，使用两组不同的引物实现目标DNA片段的扩
增。第一组外引物扩增出的 DNA片段（中间产物）长度超出目标区域，第二组内引物称为
巢式引物，其结合部位在中间产物内部的目标区域，从而扩增出目标产物，具体过程如图所
示。有关叙述正确的是（ ）
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A．巢式 PCR反应体系中所用的两组引物需先后加入
B．巢式 PCR过程中反应温度最低的一步是复性阶段
C．若直接用内引物对模板 DNA扩增，不易得到目标产物
D．巢式 PCR反应体系常添加 Ca2+以激活 DNA聚合酶
三、解答题
17．红酸汤是我国黔南地区的特色发酵食品，其发酵过程中乳酸菌起关键作用。研究人员从
黔南三县市红酸汤中分离出布氏乳杆菌，并对其进行研究。回答下列问题：
(1)将稀释到一定浓度的酸汤样品，取 0.1mL涂布于 MRS琼脂培养基（最常用的乳酸菌培
养基），37℃培养 48h，利用平板划线法纯化获得菌株，从功能上分析，所用的 MRS琼脂
培养基属于____________培养基。进行图 1所示接种时，接种环需灼烧___________次，在
第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________
。
(2)若需对布氏乳杆菌进行计数，可采用的接种方法是________________，该方法计数结果
通常比实际值_______（填“偏大”或“偏小”），其原因是__________________________。除上
述计数方法外，还可利用____________________测定微生物数量。
(3)研究人员筛选出 SD-1、DY-1、DS-1三株较好的布氏乳杆菌的菌株，探究其相关特性，
部分实验结果如图 2~图 4所示，图 2、图 3分别为三种菌株的生长曲线和产酸曲线。
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注：吸光度值越大说明菌体浓度越高，菌株生长能力越强。
①测定菌株的吸光度时，需先将待测溶液__________，以防止菌体沉淀导致测量结果不准确，
据图 2、图 3分析，相同培养条件下，繁殖速度快、产酸能力强的菌株是_____________，
判断依据是_________________。
②研究人员还测定了三株布氏乳杆菌的发酵上清液对大肠杆菌等 5种指示菌生长的抑制情
况，结果如图 4 所示。由图可知，三株布氏乳杆菌对 5种指示菌均有抑菌效果，其中
_______________菌分别对水弧球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力最好。
(4)研究人员结合其他相关实验，最终得出DY-1菌株可作为发酵食品开发的菌株选择。若将
该菌应用到工业上发酵制作泡菜时，需先进行菌种的_______________，发酵的中心环节是
_____________，后续经过相关工艺获得成品泡菜。
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18．酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工
业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品
中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：
(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后要调节培养基的
______，同时要及时地对培养基进行分装，并进行______灭菌，培养基按照用途分为______
和______。
(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约______
（选填“25℃”、“50℃”或“80℃”）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
(3)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和______供应。为监
测酵母的活细胞密度，经等体积台盼蓝染液染色，理论上应统计______色细胞的个数。
(4)若在步骤②中，取最后一个试管中的菌液 0.1mL分别涂布在 3个平板上，适宜条件下培
养一段时间，观察到菌落数分别为 140、150和 160个，则第一个试管中菌的浓度为______
个/mL。
19．某真菌的W基因编码的纤维素酶可高效降解秸秆中的纤维素，在生物质能源开发中具
有重要的应用前景。科研人员拟通过基因工程技术，将W基因导入放线菌中实现异源表达。
图 1为W 基因的结构及限制酶切位点（转录方向为左→右），图 2为所用质粒载体的结构，
下表为 5种限制酶的识别序列与切割位点。请回答下列问题：
限制酶 BamHI EcoRI Mfe I KpnI
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识别序列和切割位点
G'GATCC G'AATTC C'AATTG G'GTAC'C
（5'→3'）
(1)重组 DNA 技术的基本工具包括限制酶、DNA 连接酶和载体，其中限制酶的化学本质
是_______，其核心作用是________________。
(2)图 2中质粒上的氨苄青霉素抗性基因属于_________，其作用是______________。作为受
体的放线菌_____（填“能”或“不能”）具有氨苄青霉素抗性。质粒作为目的基因的“运输工具”，
除了具备标记基因外，还需具备的条件有___________________（写出两点）。
(3)限制酶 MfeⅠ和 EcoRⅠ切割后产生的黏性末端_______（填“能”或“不能”）被 T4DNA连
接酶连接，判断依据是__________________。
(4)W基因转录的模板链是____________。为了获得能正确表达含 W基因的重组质粒，应使
用____________限制酶切割图中含 W基因的DNA片段，使用_____________限制酶切割图
中质粒。
20．香菇是具有丰富营养价值和药用价值的食用真菌，被称作“山珍之王”。研究人员发现香
菇体内的 Lp-11蛋白具有抑制肿瘤细胞生长并诱导细胞凋亡的作用。为了获得大量纯净的
Lp-11蛋白，研究人员操作流程如图 1，序号①~④表示各个环节。回答下列问题：
注：pET2a质粒上的KanR中沿转录方向标注的5个限制酶的酶切位点之间的距离依次为40bp、
30bp、90bp、50bp，bp表示碱基对。
(1)图 1过程①需要在_______酶的作用下进行。①②过程获取的目的基因不含________（答
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出 2点）。
(2)为使目的基因与 pET32a质粒（长度为 5900bp）正确连接，在设计 PCR引物时可将引物
的_______（3′或 5'）端添加限制酶的识别序列，与 a链和 b链相结合的引物上添加的分别
是限制酶______、_____的识别序列。若计划用 1个 Lp-11基因为模板获得 n个 Lp-11基因，
则 PCR过程中消耗的引物总量是______。
(3)图 1的④过程，通常先用_______将受体细胞处理成感受态，此时细胞的特点是______受
体菌应选用_____（填“具有”或“不具有”）氨苄青霉素抗性的大肠杆菌。
(4)为了检测目的基因是否插入到 pET32a质粒中，利用目的基因两端添加的限制酶切割质粒，
然后对产物进行电泳，结果如图 2。样品_____最可能是插入了目的基因的重组质粒。
(5)将含有 Lp-11基因的重组 pET32a质粒导入大肠杆菌后，还需要进行基因工程的最后一个
步骤即_______，才能最终获得能生产 Lp-11的转基因大肠杆菌。
21．聚乙烯型塑料应用广泛，但其难降解的特性带来了诸多环境问题。聚酯酰胺(PEAs) 的
可水降解性使其有望成为聚乙烯的替代品。某科研团队利用大肠杆菌构建能合成 PEAs的工
程菌，如图 1表示合成 PEAs相关基因连接形成的 DNA 片段，其中①②③④为引物，图 2
为载体质粒结构示意图。回答下列问题：
(1)利用 PCR技术扩增 PEAs合成串联基因时，为保证 PEAs基因能高效表达，应将强启动
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子碱基序列的________端与引物__________(①-④编号选填)连接，另一个用于扩增的引物
是______。在 PCR反应体系中，一般要添加 ，目的是_______。
(2)基因工程中构建基因表达载体的目的是______。
(3)研究人员将强启动子修饰后的 PEAs合成串联基因插入图 2载体质粒的位点 1和位点 2
之间。图中的 LacZ基因编码产生的酶可以分解 X -gal , 产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，
否则菌落为白色。为了筛选出含有 PEAs合成串联基因的大肠杆菌，应在培养基中加入_____
并选择___________的菌落。
(4)为了避免工程菌在使用后逃逸造成环境污染，研究人员利用 CRISPR/Cas9系统为工程菌
增加了自毁保护体系，机理如图 2所示。研究结束后，在培养液中加入 B物质，B物质通
过_______,使 gRNA基因和 Cas9基因表达，gRNA和 Cas9蛋白形成复合物后，gRNA通
过______________识别目标 DNA,Cas9蛋白对目标 DNA进行剪切，最终使大肠杆菌死亡。
gRNA基因可设置为 _____________(填“毒蛋白基因”或“生长必需基因”)的特异性序列。
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《2025-2026 学年第二学期第一次月考高二生物》参考答案
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 B D B C C C C C A B
题号 11 12 13 14 15 16
答案 D D B B ABC ABC
1．B
【详解】A、果醋制作既可以利用自然环境中的野生醋酸菌，也可以人工添加纯化的醋酸菌
提升发酵效率和产品品质，A正确；
B、果酒发酵的菌种是酵母菌，最适发酵温度为 18~25℃；果醋发酵的菌种是醋酸菌，最适
发酵温度为 30~35℃，二者发酵温度并不一致，B错误；
C、当缺少糖源时，醋酸菌可以将果酒中的乙醇先转化为乙醛，再转化为醋酸，因此果醋制
作可以在制成的果酒基础上，通入氧气后进行发酵，C正确；
D．为了防止杂菌污染，保证目标发酵菌种的优势地位，制作果醋时需要对发酵瓶、榨汁机
等器具进行消毒处理，D正确。
2．D
【详解】A、酸浆自然发酵过程中除乳酸菌外，还会有酵母菌等微生物参与，产生少量酒精，
醋酸菌为好氧菌，若酸浆储存过久进入氧气，醋酸菌可将酒精转化为乙酸导致酸败，A正确；
B、微生物繁殖需要适宜的温度，三伏天温度较高，契合乳酸菌等微生物的适宜生长温度，
可加快其繁殖速率，缩短酸浆成熟时间，B正确；
C、乳酸菌发酵产生乳酸使酸浆 pH较低，多数杂菌不耐酸性环境，生长被抑制，而酵母菌
耐酸性较强，因此酸浆能为酵母菌创造竞争优势环境，C正确；
D、传统酿酒属于混合发酵，并非纯种酵母菌发酵，酒曲本身就含有酵母菌、霉菌等多种微
生物，且蒸煮无法实现彻底杀菌，目的是使原料淀粉糊化同时杀灭部分杂菌，D错误。
故选 D。
3．B
【分析】果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是 18～
30℃，前期需氧，后期不需氧；果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原
核细胞，条件是 30～35℃、一直需氧；酸奶制作的菌种主要是乳酸菌，代谢类型是厌氧菌，
属于原核细胞。
【详解】A、酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，二氧化碳是导致后期发酵液 pH下降的
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主因，A错误；
B、制作果醋时，在氧气充足条件下，醋酸菌可将酒精直接转化为醋酸，B正确；
C、在果酒制作过程中出现果酒变酸现象，其原因可能是发酵液中混有乳酸菌发酵产生乳酸；
也可能是发酵装置密闭不严，导致醋酸菌生长繁殖，产生醋酸，C错误；
D、主发酵阶段完成糖的分解和酒精生成，酵母菌大量繁殖，后发酵阶段进行陈酿和澄清等
过程，D错误。
故选 B 。
4．C
【分析】酵母菌为异养兼性厌氧生物，若要分离能分解甲醇的菌种，应以甲醇为唯一碳源的
选择培养基进行选择培养。
【详解】A、若培养基灭菌后冷却至 25℃左右，培养基已经凝固在锥形瓶中，无法转移到培
养皿中，故培养基灭菌后需冷却至 50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板，A错误；
B、为挑选能分解甲醇的菌种，应将稀释后的菌液涂布在以甲醇为唯一碳源的固体培养基，
甲醇中不含氮元素，B错误；
C、培养液中甲醇的剩余量越低，说明分解甲醇的能力越强，故分别测定培养液中甲醇的剩
余量进一步筛选菌株，C正确；
D、酵母菌为异养兼性厌氧生物，在充足的营养和有氧条件下能大量繁殖，即在培养过程中
需保证充足的营养和有氧环境，D错误；
故选 C。
5．C
【分析】 乳酸菌是厌氧菌，在无氧情况下能将葡萄糖分解成乳酸，可用于泡菜的腌制、乳
制品的发酵。
【详解】A、酸笋的酸味主要与乳酸菌发酵产生乳酸有关，A错误；
B、食盐的主要作用是抑制杂菌生长，B错误；
C、清水过面有利于保持无氧环境，有利于乳酸菌的繁殖与发酵，C正确；
D、发酵过程中，亚硝酸盐的含量先增加后逐渐减少，D错误。
故选 C。
6．C
【分析】基因工程又叫 DNA重组技术或基因拼接技术，是指按照人们的意愿，进行严格的
设计，并通过体外 DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符
答案第 1页，共 2页
合人们需要的新的生物类型和生物产品。DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内
切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。其中限制性核酸内切酶（限制酶）是“剪刀”、DNA
连接酶是“针线”。
【详解】A、HindⅢ是一种来源于流感嗜血杆菌中的限制性内切核酸酶，据此推测，HindⅢ
一般不作用于流感嗜血杆菌中的 DNA序列，A正确；
B、用 HindⅢ完全切割果蝇的 DNA，可得到多个 DNA片段，因而推测果蝇的相关 DNA上
存在多个 HindⅢ的酶切位点，B正确；
C、HindⅢ切割产生的黏性末端可能会与其他限制酶切割产生的相同，C错误；
D、HindⅢ能在特定的部位切割DNA分子，进而使DNA每一条链中特定部位的磷酸二酯键
断开，D正确。
故选 C。
7．C
【分析】平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同：
（1）第一次操作：杀死接种环上原有的微生物；
（2）每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于
上次划线的末端；
（3）划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
【详解】A、 湿热灭菌的方法通常用于实验室大部分培养基的灭菌，A正确；
B、进行划线操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，B正确；
C、划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，有利于表面的水分更好的挥发和防
止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，C错误；
D、平板划线分离法是把混杂在一起的微生物或同一种微生物群体中的不同细胞，用接种环
在培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生成繁殖成单菌
落。因此在区域①～⑤中，最有可能在区域⑤中得到酵母菌的纯培养物，D正确。
故选 C。
8．C
【详解】A、RD29A为干旱诱导型启动子，其特点是在干旱条件下激活基因转录，与组成
型启动子 35S（持续驱动基因表达）相比，具有条件特异性表达功能，A正确；
B、农杆菌转化法是植物转基因的常用方法，利用 Ti质粒的 T-DNA转移外源基因
（RD29A-SikCDPK1表达载体）至植物细胞，B正确；
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C、由于 RD29A启动子具有干旱诱导特性，S基因仅在干旱胁迫时表达，正常条件下不表
达，故无法在烟草植株所有部位的细胞中持续检测到 mRNA，C错误；
D、干旱胁迫下叶绿素含量变化可反映植物抗逆性，是评估转基因烟草抗旱性的有效指标，
D正确。
故选 C。
9．A
【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定 DNA的核酸合成技术；
过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链 DNA上；③中温延
伸：合成子链，PCR扩增中双链 DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。
【详解】A、由于不同的生物 DNA具有特异性，故利用 PCR技术辨别不同个体时不需要去
除粪便中微生物的 DNA，A错误；
B、引物是一端目的基因的核苷酸序列，需跟模板配对，因此设计 PCR引物时需要考虑物种
特异性，B正确；
C、PCR是对目的基因进行扩增的技术，反应体系中需加入四种脱氧核苷酸作为原料，C正
确；
D、引物与模板结合后，DNA聚合酶开始延伸，引物成为产物的一部分，D正确。
故选 A。
10．B
【详解】A、稀释涂布平板法既可以通过单菌落分离纯化活菌，也可以统计活菌数目，A正
确；
B、微塑料可作为微生物生长的碳源等营养物质，混合菌种降解微塑料能力更强，获得的营
养更多，总初始菌量相同的情况下，混合组菌浓度更高，B错误；
C、相对残留率越低说明降解的微塑料越多，混合组相对残留率低于两种单一菌种，说明降
解能力高于单一菌种，C正确；
D、培养基中含有蛋白胨，可为微生物提供碳源、氮源等营养，因此能在该培养基生长的微
生物，可能利用蛋白胨生长，不一定能降解微塑料，D正确。
11．D
【详解】A、培养基甲是固体培养基，含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂，A正确；
B、防止杂菌污染，需要用无菌水配制成细菌悬液，再均匀涂布于培养基甲，B正确；
C、根据抑菌圈直径大小可判断不同抗生素抑菌能力的强弱，抑菌圈直径越大，说明抗生素
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的杀菌能力越强，C正确；
D、由图乙可知，不同抗生素的抑菌能力大小为 B>A>C>D，D错误。
12．D
【详解】A、步骤①为制备菌悬液，仅需无菌水将污泥中的菌体分散即可，无需添加原油，
目的菌的筛选依靠后续以原油为唯一碳源的选择培养基实现，A错误；
B、步骤②每次稀释更换移液管，除避免杂菌污染外，更重要的是防止上一次稀释的高浓度
菌液残留，保证稀释倍数的准确性，并非仅为避免杂菌污染，B错误；
C、涂布平板计数要求平板菌落数处于 30~300区间即符合计数要求，本实验 10 组菌落数
均在该范围内，无需额外增加 10 稀释组，10 稀释倍数更低，菌浓度更高，菌落数会远超
300无法计数，C错误；
D、对同一稀释度下多个平板的菌落数取平均值，可有效减少单次计数的偶然误差，提升结
果准确性，D正确。
13．B
【详解】A、实验使用的是无氮培养液+过量莠去津，目的菌能以莠去津为氮源进行增殖，
由于含过量莠去津的固体培养基不透明，而目的菌能降解莠去津，所以其菌落周围会产生透
明带，A正确；
B、从A瓶到 C瓶的培养液中除莠去津外无其他氮源，该过程是通过选择培养基进行富集培
养，目的是增加培养液中目的菌的浓度，B错误；
C、由图甲平板的划线形态可知，接种方法是平板划线法，在平板划线法接种过程中，每次
划线前后都要灼烧接种环，图中共有 5次划线，所以接种过程共灼烧 6次接种环，C正确；
D、无透明带的菌落，说明其不能利用莠去津作为氮源，这类菌落可能是固氮菌，因为固氮
菌可利用空气中氮气作为氮源，有透明带的菌落有可能是莠去津降解菌，但为确保其纯度和
降解能力等，还需进一步鉴定，D正确。
故选 B。
14．B
【详解】A、分析图中可知，启动子在编码区的左侧，GFP基因在 Gata3基因的右侧，启动
子启动转录后，可以在 Gata3基因转录后，使 GFP基因转录，Gata3基因的启动子也能控制
GFP基因的表达，无需在 Gata3和 GFP基因编码区之间再插入一个启动子，A错误；
B、若用引物 1和引物 3PCR扩增，杂合子和 Gata3-GFP基因纯合子都能扩增出相应的片段，
而野生型没有 PCR产物，由图 2可知，PCR扩增结果出现了大片段和小片段，因此是选择
答案第 1页，共 2页
引物 1和引物 2扩增得到的产物，B正确；
C、整合 GFP基因后，核酸片段变长，1、3号有大片段和小片段，所以是杂合小鼠，2号个
体只有大片段，所以是 Gata3-GFP基因纯合子，4号个体只有小片段，是野生型，C错误；
D、基因表达时图 1中基因编码区能转录，启动子区不转录，D错误。
故选 B。
15．ABC
【详解】A、不同微生物的生长繁殖对 pH 的需求不同。例如：细菌通常适宜在中性或弱碱
性（pH 7.0~7.6）环境生长，真菌则偏好酸性（pH 5.0~6.0）环境。因此，培养不同微生物的
培养基 pH 可能不同，A正确；
B、培养基灭菌后，需要冷却到 50℃左右时，才能用来倒平板．可以用手触摸盛有培养基的
锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板，操作时应使锥形
瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基，B正确；
C、平板倒好后，需待培养基冷却凝固约 5~10 分钟，再将平板倒置。这样做的目的是：防
止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，同时利于培养基表面干燥，C正确；
D、配制培养基的正确流程是：计算→称量→溶化→调 pH→灭菌→倒平板。若先灭菌再调
pH，在调 pH 的过程中会引入杂菌，导致灭菌失去意义，D错误。
故选 ABC。
16．ABC
【详解】A、巢式 PCR通过两轮 PCR反应，使用两套引物特异性地扩增 DNA片段，第二
对引物的功能是特异性地扩增位于首轮 PCR产物内的一段 DNA片段。 第一轮扩增中，外
引物用以产生扩增产物，此产物在内引物的作用下进行第二轮扩增，从而提高反应的特异性，
获得的产物特异性更强，利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率提高，所
以巢式 PCR反应体系中所用的两组引物需先后加入，A正确；
B、PCR过程包括高温变性、低温复性、中温延伸，故巢式 PCR过程中反应温度最低的一
步是复性阶段，B正确；
C、若直接用内引物对模板 DNA扩增，则内引物与模板的非目标区域进行碱基互补配对的
概率会上升，不易得到目标产物，C正确；
D、巢式 PCR反应体系常添加Mg2+以激活 DNA聚合酶，D错误。
故选 ABC。
17．(1) 选择 6 逐步稀释样品中的微生物，使聚集的菌体逐步分散，最终获
答案第 1页，共 2页
得单个菌落
(2) 稀释涂布平板法 偏小 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只
是一个菌落 显微镜直接计数法
(3) 振荡摇匀 DY-1 DY-1 的吸光度上升最快且最终值高，pH 下降最快且最
终值低 SD-1
(4) 扩大培养 发酵罐内发酵
【详解】（1）MRS 琼脂培养基是专门用于培养乳酸菌的，从功能上属于选择培养基（它可
以选择性地让乳酸菌生长，抑制其他微生物）。图 1 是平板划线法，整个过程中接种环需要
灼烧 6次（第一次是划线前，之后每次划线前都要灼烧，最后一次划线结束后还要灼烧一次）。
在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始，目的是逐步稀释微生物，使聚集的菌种
逐步分散，最终获得单个菌落。
（2）需对布氏乳杆菌进行计数，可采用的接种方法是稀释涂布平板法。 该方法计数结果通
常比实际值偏小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，导
致计数结果偏低。除上述计数方法外，还可利用显微镜直接计数法测定微生物数量。
（3）①菌体沉淀会导致测量结果不准确。因此，在测量前需要将菌液摇匀或振荡，使菌体
均匀悬浮在液体中。图 2 中 DY-1 的吸光度值上升最快且最终值较高，说明其繁殖速度快；
图 3 中 DY-1 的 pH 下降最快且最终值最低，说明其产酸能力强。
②由图 4 可知，三株布氏乳杆菌对 5种指示菌均有抑菌效果，其中 SD-1对水弧球菌、金
黄色葡萄球菌的抑菌能力最好。
（4）若将 DY-1 菌株应用到工业上发酵制作泡菜时，需先进行菌种的扩大培养，发酵的中
心环节是发酵（主要是乳酸菌发酵产生乳酸），后续经过相关工艺获得成品泡菜。
18．(1) pH 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 选择培养基 鉴别培养基
(2)50℃
(3) 氧气 无
(4)1.5×105
【分析】配制培养基的操作步骤为计算→称量→溶化→调 pH→定容→培养基的分装→包扎
→灭菌→倒平板。据图分析，从土壤样品中分离该类酵母的实验流程为①称量土样→②梯度
稀释→③平板浇注分离→④划线纯化→⑤扩大培养。
【详解】（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量、溶化，然后调节培养基的 pH并对
培养基进行分装，接着利用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；培养基按照用途分为选择培养基选择
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培养基。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，步骤③是倒平板，故在步
骤③中将温度约 50℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养，因最终需要倒置培养，
为便于观察，需要在皿底做好标记。
（3）酵母通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的
营养和氧气；活细胞膜具有选择透过性，经等体积台盼蓝染液染色，无色细胞是活细胞才能
计数。
（4）3个平板上的菌落数分别为 140、150和 160，3个平板上的菌落的平均数为（140
+150+160）÷3=150个，则每升样液中所含有的酵母菌活菌数量为 150×103=1.5×105个。
19．(1) 蛋白质 识别双链 DNA分子的特定的识别序列，并且使每一条链中特定部
位的磷酸二酯键断开
(2) 标记基因 筛选重组DNA分子 不能 具备多个限制酶切点、能自我复
制
(3) 能 限制酶 MfeⅠ和 EcoRⅠ切割后产生的黏性末端相同
(4) 乙链 EcoRI和 HindⅢ MfeⅠ和 HindⅢ
【详解】（1）重组 DNA 技术的基本工具包括限制酶、DNA 连接酶和载体，其中限制酶的
化学本质是蛋白质，限制酶能识别双链 DNA分子的特定的识别序列，并且使每一条链中特
定部位的磷酸二酯键断开，进而获得 DNA片段。
（2）图 2中质粒上的氨苄青霉素抗性基因属于标记基因，标记基因的作用是筛选重组 DNA
分子。作为受体的放线菌“不能”具有氨苄青霉素抗性，否则会影响受体菌的筛选。质粒作为
目的基因的“运输工具”，除了具备标记基因外，还需具备多个限制酶切点、供外源 DNA片
段（基因）插入其中；能自我复制，使目的基因可以在受体细胞中复制并稳定保存。
（3）限制酶 MfeⅠ和 EcoRⅠ切割后产生的黏性末端序列相同，因而“能”被 T4DNA连接酶
连接，即二者属于同尾酶，切割后获得的黏性末端相同。
（4）根据图示中单链的方向和基因转录的方向（左→右）可知，且子链延伸的方向是 5’→
3’，因此，W基因转录的模板链是乙链。为了获得能正确表达含 W基因的重组质粒，这里
限制酶Mfe I不能被选择，因为该酶能将目的基因切割，也不能选择 BamHI，该限制酶能将
启动子切割，也不能选择 EcoRI切割质粒，因为质粒中有两个该酶的切割位点，且MfeⅠ和
EcoRⅠ为同尾酶，因而应使用 EcoRI和 HindⅢ限制酶切割含 W基因的 DNA片段，不选择
KpnI的原因是该切割位点会导致目的基因不能正确转录；使用MfeⅠ和 HindⅢ限制酶切割
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图中质粒。
20．(1) 逆转录 启动子、终止子
(2) 5' XhoI BamHⅠ 2n 2
(3) Ca2+ 处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态 具有
(4) 2
(5)目的基因的检测与鉴定
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用 PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、
终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样；
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）过程①是由 RNA 合成 cDNA，属于逆转录过程，需要逆转录酶催化。通过
逆转录和 PCR 获取的目的基因是由 mRNA 逆转录而来，不包含启动子、终止子、内含子
等结构。
（2）PCR 扩增时可在引物的 5' 端添加限制酶识别序列，这样能在目的基因两侧构建出限
制酶的识别序列。因为目的基因上有限制酶 SalⅠ和MunⅠ的识别序列，不能用二者来切割
目的基因和质粒。AmpR和 KanR上都有 EcoRⅠ的识别序列，也不能用其切割目的基因和质
粒。目的基因的 a链 3' 端在右侧，b链 3' 端在左侧，故引物分别在 a链右侧、b链左侧与
其互补配对。根据图中所给的转录方向及质粒中启动子的方向，为保证目的基因与质粒的正
确连接，与 a链和 b链相结合的引物上添加的分别是限制酶 XhoI和 BamHⅠ的识别序列。
PCR 扩增中，因原有的两条母链不消耗引物，故引物消耗量为 2n 2。
（3）将大肠杆菌处理成感受态细胞常用 Ca2+，此时细胞能吸收周围环境中的 DNA 分子。
由于质粒上的氨苄青霉素抗性基因没有被破坏，受体菌应选用具有氨苄青霉素抗性的大肠杆
菌。
（4）pET32a质粒长度为 5900bp，用限制酶XhoI和BamHⅠ进行切割，会切割掉长度为 120bp
的片段，剩余的质粒的长度为 5780bp，然后再与长度为 357bp的目的基因连接。这样插入
了目的基因的重组质粒用两端添加的限制酶切割，会出现长度为 5780bp、357bp的片段。故
样品 2最可能是插入了目的基因的重组质粒。
（5）基因工程的步骤包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细
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胞、目的基因的检测与鉴定。将重组质粒导入大肠杆菌后，需通过检测与鉴定，才能确定获
得能生产 Lp-11 的转基因大肠杆菌。
21．(1) 3' ③ ② 激活 DNA 聚合酶
(2)使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传，同时使目的基因能够表达和发挥作用
(3) X-gal和四环素 白色
(4) 解除 A蛋白对 P2启动子的抑制作用 碱基互补配对 生长必需基因
【详解】（1） 转录过程中子链沿着 5'→3'的方向进行，启动子是 RNA聚合酶结合的位点，
可驱动下游基因的转录，因此强启动子的 3′端需要连接引物才能保证基因正常转录；根据
PCR扩增的原理，引物需要与模板的 3'端结合，要完整扩增 PEAs合成串联基因，需要选择
位于两端、方向相反的引物②和③；Mg2+的作用是激活 DNA聚合酶，提高酶活性。
（2）构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，
可以遗传给下一代，同时保证目的基因能够表达和发挥功能。
（3） 目的基因插入 LacZ基因内部，会破坏 LacZ基因，未插入目的基因的质粒 LacZ完整，
可表达酶分解 X-gal使菌落变蓝；插入目的基因的质粒 LacZ失活，菌落为白色，同时质粒
携带四环素抗性基因，因此培养基需要加入 X-gal和四环素，筛选出白色菌落即为含有目的
基因的大肠杆菌。
（4） 根据图示，原本 A蛋白基因的表达被抑制，加入 B物质后，B抑制了该抑制作用，
即可以解除 A蛋白对 P2启动子的抑制作用，A蛋白激活启动子 P2，使 gRNA基因和 Cas9
基因表达；gRNA通过碱基互补配对特异性识别目标DNA序列；要使工程菌自毁，需要Cas9
剪切大肠杆菌生存必需的基因，使工程菌死亡，因此 gRNA的识别序列对应大肠杆菌的生
长必需基因。
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