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山东日照市2023-2024学年高二下学期期中考试生物试题
一、单选题
1．腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵制作的大豆食品。下列叙述错误的是（　　）
A．腌制腐乳的卤汤中加入的一定浓度的酒精能够起到灭菌作用
B．若制作过程中温度过低会导致毛霉菌丝不易进入豆腐块深层
C．微生物产生的酶将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸
D．腐乳的风味因豆腐含水量、发酵条件以及辅料的不同而不同
2．圆褐固氮菌是一种异养型自生固氮细菌，能够在土壤中独立固定氮气。科研人员进行了土壤中圆褐固氮菌的分离、计数和鉴定，并将之用于农业生产。下列说法正确的是（　　）
A．选择培养圆褐固氮菌的培养基不需要加碳源和氮源
B．为促进圆褐固氮菌的生长，需将培养基pH调至酸性
C．通过计算可知每克土壤中的固氮菌数约为1.8×108个
D．将种子与自生固氮菌拌种后播种，可减少化肥使用
3．进行土壤中尿素分解菌的选择培养所使用的培养基组分及含量如下表所示。下列分析正确的是（　　）
组分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 蒸馏水
含量 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至1 000 mL
A．由表中成分可知，该培养基属于液体培养基
B．葡萄糖和琼脂都可以为尿素分解菌提供碳源
C．常用高压蒸汽灭菌法对配制好的培养基灭菌
D．只有尿素分解菌能够在该选择培养基上生长
4．啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成，其主要工艺流程如下图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．制麦时需浸泡大麦，加入脱落酸有利于淀粉酶的形成
B．糖化后煮沸，主要是为了终止酶的作用并对糖浆灭菌
C．图中发酵阶段，要始终保持严格的无菌、无氧的环境
D．生产精酿啤酒需对发酵产物进行更彻底的过滤和消毒
5．“手指植物”是利用植物组织培养技术培育出的瓶装观赏植物。下列叙述错误的是（　　）
A．可用酒精、次氯酸钠对生理状况良好的外植体进行消毒
B．外植体接种时要注意插入方向且应在酒精灯火焰旁进行
C．脱分化过程需要在适宜的温度和充足的光照条件下进行
D．该技术属于无性繁殖，可保持观赏植物的优良遗传特性
6．研究发现，雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用，利用植物细胞培养技术生产雪莲次生代谢物的大致流程如下图所示。下列叙述错误的是（　　）
A．从雪莲中提取的次生代谢物不是雪莲生长所必需的
B．图中培养单细胞或小细胞团所用的培养基为液体培养基
C．可将培养的细胞置于低渗溶液中涨破以提取次生代谢物
D．利用该技术生产雪莲次生代谢物不受季节和气候的影响
7．动物细胞培养是动物细胞工程常用的技术之一。下列叙述错误的是（　　）
A．将动物组织分散成单个细胞需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
B．原代培养和传代培养过程都需要95%氧气和5%CO2的气体条件
C．培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等
D．向培养的体细胞中转入相关因子可能会使其转化为诱导多能干细胞
8．研究人员将可表达绿色荧光蛋白的供体猕猴的胚胎干细胞注射到与其遗传信息不同的猕猴胚胎中，经培养最终得到了具有高比例胚胎干细胞的嵌合体猴，过程如下图所示。下列叙述正确的是（　　）

A．胚胎干细胞具有分化为猕猴体内任何一种类型细胞的潜能
B．胚胎干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织中
C．需将供体猕猴的胚胎干细胞注入到桑葚胚的内细胞团部位
D．嵌合体猴仅部分位置发出绿色荧光可能是基因重组的结果
9．科研人员从供体母牛耳朵上采集细胞，注入到去核的卵母细胞中构建成重构胚，再将发育的胚胎移植到代孕母牛体内，最终获得了克隆牛“垦垦”。下列叙述错误的是（　　）
A．进行核移植前，通常需将采集到的卵母细胞在体外培养到MⅡ期
B．梯度离心法可在不穿透卵母细胞透明带的情况下对卵母细胞去核
C．Ca2+载体、乙醇等处理能使耳细胞和去核的卵母细胞发生融合
D．克隆牛“垦垦”的遗传物质与供体牛的遗传物质并不完全相同
10．研究人员利用细胞工程和基因编辑技术成功培育出了孤雄小鼠，实现了哺乳动物的同性繁殖，操作流程如图所示。下列叙述正确的是（　　）

A．上述实验说明精子转化来的ahESC具有发育的全能性
B．卵母细胞去除的“核”其实是纺锤体—染色体复合物
C．基因编辑的目的是将ahESC的Y染色体变为X染色体
D．理论上最终得到孤雄小鼠的性染色体组成为XX或YY
11．杜泊羊生长速度快，肉质好。科研工作者通过胚胎工程实现了杜泊羊的快速繁殖，其主要流程如下图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．采集的精子需要在体外进行获能处理，才能获得受精能力
B．可以使用免疫抑制剂来降低代孕羊对植入胚胎的排斥反应
C．用分割针将原肠胚均分后再进行移植可以提高胚胎的利用率
D．操作时要用激素对当地普通羊进行同期发情和超数排卵处理
12．下表为常用的限制性内切核酸酶（限制酶）及其识别序列和切割位点，由此推断下列叙述错误的是（　　）
限制酶名称 识别序列和切割位点 限制酶名称 识别序列和切割位点
BamHⅠ G↓GATCC SmaⅠ CCC↓GGG
HindⅡ GTY↓RAC Sau3AⅠ ↓GATC
注：Y为C或T，R为A或G。
A．能被BamH I识别并切割的DNA也能被Sau3A I识别和切割
B．经Hind Ⅱ、Sma I切割后的片段可以由T4 DNA连接酶连接
C．有些限制酶的识别序列只有一种，有些限制酶识别序列有多种
D．经BamH I、Sau3A I切割后连接形成的片段不能被BamH I识别
13．某同学利用洋葱为实验材料，进行DNA粗提取和鉴定实验。下列叙述错误的是（　　）
A．也可以选择猪肝、鸡血等作为实验材料，提取方法可能稍有不同
B．将洋葱研磨液过滤后，置于4℃冰箱中几分钟后，DNA出现在沉淀物中
C．向DNA提取液中加入体积分数为95%的冷酒精后，出现的白色丝状物为DNA
D．鉴定时，先将丝状物溶于2mol/L NaCl溶液，再加入二苯胺并进行沸水浴加热
14．苹果切开后颜色会加深的现象称为“褐变”。“褐变”是由于多酚氧化酶催化多酚类物质生成棕色色素所致，培育抗褐变转基因苹果的操作流程如图。下列叙述正确的是（　　）
A．图中的目的基因为多酚氧化酶基因，标记基因为卡那霉素抗性基因
B．目的基因的表达依赖上游的启动子，标记基因表达则不需要启动子
C．步骤③是获得转基因苹果的核心工作，常采用的方法是农杆菌转化法
D．可通过PCR技术检测苹果的染色体DNA上是否成功插入了目的基因
15．生物技术的安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列相关叙述正确的是（　　）
A．某些转基因食品中的DNA会与人体细胞的DNA发生基因重组
B．将α‐淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可防止转基因花粉的传播
C．生殖性克隆是利用克隆技术产生特定的细胞来修复或替代受损的细胞
D．试管婴儿必需的技术有体外受精、植入前的遗传学诊断和胚胎移植等
二、多选题
16．双层平板法是先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后形成底层平板；再倒入由宿主细菌、噬菌体以及琼脂含量较低的培养基组成的混合液，形成上层平板。培养一段时间后，在上层平板上观察到由于噬菌体侵染周围细菌而形成的空斑，即噬菌斑（通常一个噬菌斑来自一个噬菌体），根据噬菌斑的数目可计算噬菌体的数量。下列叙述错误的是（　　）
A．需先调节灭菌后培养基的pH，然后再进行倒平板
B．需使用灭菌后的涂布器将混合液均匀涂布在底层平板上
C．利用双层平板法统计出的噬菌体数量往往比实际值偏大
D．可用双层平板法来检测噬菌体和细菌间是否存在寄生关系
三、单选题
17．果醋需要10%~12%的糖发酵得到，而宣木瓜原液含糖量仅5%左右。以宣木瓜为材料制作果醋时，果实软化、破碎打浆后向溶液中加入白砂糖，接种酵母菌，敞口培养一天左右转为密闭发酵。当酒精浓度稳定后，接种醋酸菌，进行醋酸发酵。下列叙述错误的是（　　）
A．加入白砂糖是为了给酵母菌发酵提供充足碳源
B．敞口培养的目的是为酵母菌大量繁殖提供氧气
C．醋酸发酵过程中会产生大量CO2，因此需定时排气
D．醋酸发酵所需的温度比酵母菌发酵所需要的温度高
四、多选题
18．某团队利用植物体细胞杂交技术获得了三倍体无核柑橘，方法是：首先处理由二倍体柑橘的花粉离体培养得到的愈伤组织，获得原生质体；然后处理二倍体柑橘幼叶细胞获得原生质体；随后诱导两种原生质体融合，培养一段时间后检测再生愈伤组织细胞中的DNA含量，结果如下图所示（融合的原生质体仅发生两两融合）。下列说法正确的是（　　）
A．融合的原生质体需放在无菌水中培养，以防止杂菌污染
B．DNA相对含量为25、50的细胞来自未融合的原生质体
C．培养DNA相对含量为75的细胞可获得三倍体无核柑橘
D．通过该实验也可以获得四倍体柑橘的愈伤组织细胞
19．对RNA病毒的检测可采用RT-PCR技术。RT-PCR是将RNA的逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式反应（PCR）相结合的技术。检测时，先提取病毒RNA，经逆转录生成cDNA，然后在同一反应体系中进行PCR。下列叙述正确的是（　　）
A．RNA提取液中需添加RNA酶抑制剂，目的是防止RNA被降解
B．RT-PCR反应体系中加入的DNA 聚合酶和逆转录酶均需耐高温
C．PCR利用DNA热变性原理，通过调节温度控制DNA双链的解聚与结合
D．PCR反应的延伸过程中，DNA聚合酶只能从引物的3'端连接核糖核苷酸
20．双向启动子可同时结合两个RNA聚合酶来驱动基因的表达，研究人员为检测双向启动子的作用效果，构建了下图所示的表达载体，并进行相关实验。下列分析正确的是（　　）
A．为了插入GUS基因，需用Sal I和Sph I酶切整合了LUC基因的质粒
B．可以通过在培养基中添加潮霉素来筛选成功导入表达载体的受体细胞
C．图中GUS基因和LUC基因转录时的模板链不是DNA分子的同一条链
D．可通过观察培养基中是否同时出现荧光和蓝色物质来确认双向启动子的作用
五、解答题
21．产黄青霉菌是一种自然界中广泛存在的霉菌，是生产青霉素的重要工业菌种。当产黄青霉菌处于葡萄糖浓度不足的环境中时，会分泌青霉素。工业上生产青霉素的发酵工程流程如图所示。
(1)由图中分离纯化的结果推测，该过程中采用的分离纯化方法是_____。刚分离获得的菌种不会直接加入主发酵罐，而是先进行母种培养，其目的是_____。
(2)图中主发酵过程中要随时取样检测培养基中的微生物数量、产物浓度等，同时，要严格控制______（答出三点）等发酵条件，因为环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢产物的形成。
(3)随着主发酵过程的进行，需要适时向发酵罐内“补料”，补充的培养基成分有磷酸二氢钠、葡萄糖等，其中磷酸二氢钠的功能是______（答出两点）。为使产黄青霉菌处于“半饥饿”状态，延长青霉素的合成期，“补料”添加葡萄糖时应采取的方式是________（从添加的量与频次角度回答）。
22．两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞中的染色体在融合前发生断裂，产生的染色体片段会由于整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，科研人员将苜蓿的耐寒基因转入油菜细胞中，实验流程如下图。

(1)图中过程a常用______酶对油菜细胞和苜蓿细胞进行处理，以获得两种细胞的原生质体。过程c中可以用化学诱导剂______诱导两种原生质体融合。
(2)过程d中杂种细胞可以培育成再生植株，其原因是______。获得再生植株的过程中，若愈伤组织在诱导生芽的培养基上未形成芽但分化出了根，原因可能是生长素用量与细胞分裂素用量的比值______（填“偏高”或“偏低”）。
(3)利用特异性引物对油菜和苜蓿基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，然后利用上述特异性引物对再生植株进行PCR扩增，结果如下图。

据图判断，再生植株①~④中一定是杂种植株的是______。进一步检测发现，植株②没有表现出耐寒性状，由此推测耐寒基因可能位于图中大小为_______bp的DNA片段上。
23．Graves病（GD）是一种自身免疫性甲状腺疾病，主要表现为甲状腺功能亢进。研究发现，GD患者甲状腺细胞表面表达大量细胞间粘附分子1（ICAM-1），导致甲状腺肿大。科研人员通过制备单克隆抗体，对治疗GD进行了尝试。
(1)用ICAM-1作为抗原多次免疫若干只小鼠，目的是_______。几周后取这些免疫小鼠的血清，分别加入到多孔培养板的不同孔中，然后向多孔培养板中加入_______进行检测。依据反应结果，选出阳性反应最强的培养孔所对应的小鼠N。
(2)培养骨髓瘤细胞时需要定期更换培养液，目的是防止_______。融合前将部分骨髓瘤细胞置于筛选杂交瘤细胞的培养基中培养，一段时间后，若培养基中_______，说明该培养基符合实验要求。
(3)取小鼠N的脾脏细胞制备成细胞悬液，与骨髓瘤细胞进行融合，然后用选择培养基筛选得到具有分裂能力的细胞。将获得的上述细胞在多孔培养板上进行培养，然后进一步检测，从中选择_______，将其植入小鼠腹腔中克隆培养，一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体。
六、实验题
24．组织纤维溶酶原激活物（t-PA）能高效降解血栓，是心梗和脑血栓的急救药。临床使用发现t-PA有诱发颅内出血的副作用，为此研究人员通过蛋白质工程将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸（密码子UCU），获得了副作用显著降低的改良t-PA．下图为利用重叠延伸PCR技术改造t-PA基因和构建相应的表达载体的过程。
(1)研究人员通过重叠延伸PCR技术对天然的t-PA基因进行序列改造，先利用引物________进行PCR1，获得产物1；再通过PCR2，获得产物2；重叠延伸后利用引物________进行PCR3，获得大量改良t-PA基因。
(2)研究表明，t-PA蛋白第84位氨基酸相应基因的模板链（图中t-PA基因的上链）的碱基序列是ACA，则诱变引物b中该突变位点的碱基是________。将改良t-PA基因用限制酶切后得到如上图所示的片段，那么质粒pCLY11需用限制酶________切割，才能与改良t-PA基因高效连接。
(3)质粒pCLY11中的lacZ表达产物可以将X-gal分解为半乳糖和深蓝色物质，从而使所在的菌落呈现蓝色，反之则为白色。将转化后的大肠杆菌接种在含有________的培养基上进行筛选，含重组质粒的大肠杆菌所长出的菌落呈________色。
25．聚羟基脂肪酸酯（PHA）是一种可降解的生物大分子，常用来制备环保塑料包装袋，研究人员通过构建受温度控制的大肠杆菌表达体系来生产PHA．为实现通过温度控制工程菌合成所需的蛋白质，科研人员利用下图方案，构建了相关的基因表达载体，然后将其导入大肠杆菌，获得相应的工程菌。
(1)图1所示的基因表达载体中，RFP基因和GFP基因属于______；启动子M和启动子R的类型虽然不同，但是二者都能与_____结合，启动基因的转录。
(2)据图1分析，当培养温度为30°C时，该工程菌表达的基因是____。
(3)PHA的合成过程中，可由单体分子3HB和4HB随机聚合形成随机聚合物；也可以先形成3HB聚合体和4HB聚合体，再形成分段共聚物（如图2所示），其中分段共聚物形式的PHA品质更佳。为应用工程菌大规模生产优质PHA，研究人员对图1所示的方案进行改造，一方面将GFP基因替换为A酶基因，将RFP基因替换为B酶基因，同时构建上游连接着________的X酶基因的表达载体，然后将其共同导入大肠杆菌，获得可以合成PHA的工程菌。用该工程菌发酵24小时，若要获得3HB比例为25%的分段共聚物，需要将发酵条件控制为________。
1．A
2．D
3．C
4．B
5．C
6．C
7．B
8．A
9．C
10．B
11．A
12．D
13．B
14．D
15．B
16．ABC
17．C
18．CD
19．AC
20．BCD
21．(1) 稀释涂布平板法 增加菌种数量
(2)pH、温度、溶解氧
(3) 提供无机盐；维持培养液的pH 少量多次添加
22．(1) 纤维素酶和果胶 聚乙二醇
(2) 植物细胞的全能性 偏高
(3) ①②④ 1000
23．(1) 使小鼠产生能分泌抗ICAM-1抗体的B淋巴细胞 ICAM-1
(2) 细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 无骨髓瘤细胞生长
(3)产生抗ICAM-1抗体的杂交瘤细胞
24．(1) a、b a、d
(2) G XmaⅠ、Bgl Ⅱ
(3) 新霉素和X-gal 白
25．(1) 目的基因 RNA聚合酶
(2)C基因和GFP基因
(3) 持续表达启动子 30℃发酵6小时，37℃发酵18小时

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