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广东省汕头市潮南区某校2025-2026学年高二下学期第一次月考生物试题
一、单选题
1．广东佛山、浙江嘉兴依托果酒深加工发展功能性果醋产业，实现农产品增值超300%，下列关于制作果醋的叙述，错误的是（　　）
A．果醋制作可以人工添加醋酸菌
B．果醋发酵与果酒发酵的温度完全一致
C．果醋制作可以在制成的果酒基础上进行
D．需要对发酵瓶、榨汁机等器具进行消毒
2．宋代朱肱在《北山酒经》中记载了“卧浆”法：“造酒最在浆，…，不得过夏。”其核心是在三伏天将小麦煮粥，借助空气中的乳酸菌等自然发酵成酸浆。次年酿酒时，以此酸浆浸米、蒸煮，再加入酒曲发酵。此法可有效抑制杂菌，提升酒质。下列关于“卧浆”法的现代生物学解释，错误的是（ ）
A．“浆不得过夏”：酸浆若储存过久，其积累的酒精可能被醋酸菌转化为乙酸导致酸败
B．“三伏天卧浆”：夏季温度较高有利于乳酸菌等微生物快速繁殖，缩短酸浆成熟时间
C．“以酸浆浸米”：酸浆的较低pH值可抑制大多数杂菌生长，为酵母菌创造竞争优势环境
D．“酸浆煮粥”：蒸煮酸浆的目的是为了彻底杀菌，确保后续的酿酒过程为纯种酵母菌发酵
3．广东有丰富的水果资源用于制作果酒果醋，以下有关利用岭南佳果荔枝制作果酒果醋的叙述正确的是（　　）
A．酵母菌无氧呼吸产生酒精是导致后期发酵液pH下降的主因
B．制作果醋时，醋酸菌可在氧气充足时将酒精转化为醋酸
C．制作果酒时，果酒变酸的原因是密封不严导致乳酸菌大量繁殖
D．主发酵阶段完成酵母繁殖，后发酵阶段完成糖的分解和代谢
4．有些酵母菌可以利用工业废甲醇作为碳源，既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养，大致过程：①称量土样→②依次等比稀释→③涂布平板→④挑取平板单菌落转移至培养液中培养→⑤进行甲醇分解能力的检测→⑥选取优良菌株扩大培养。下列叙述正确的是（ ）
A．培养基灭菌后需冷却至25℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板
B．步骤③应将稀释后的菌液涂布在以甲醇为唯一碳源和氮源的固体培养基
C．步骤⑤分别测定培养液中甲醇的剩余量进一步筛选菌株
D．步骤⑥为使酵母菌数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和无氧环境
5．螺蛳粉是一种特色小吃，闻着臭吃着香，这种臭味来自酸笋。春季当竹子出笋后，剥去笋壳，将其切成笋丝，放于陶罐中，使清水过面，并撒上适量食盐，将容器密封好，置于阴凉处腌制一个月左右，酸笋即成。下列叙述正确的是（ ）
A．酸笋的酸味主要与醋酸菌发酵有关
B．腌制过程中，食盐的主要作用是调味
C．清水过面有利于菌种的繁殖与发酵
D．发酵过程中，亚硝酸盐的含量持续增加
6．HindⅢ是一种来源于流感嗜血杆菌中的限制性内切核酸酶,其特异性识别和切割的序列如图所示。用该限制酶完全切割果蝇的DNA,可得到多个DNA片段。下列叙述错误的是（ ）
A．HindⅢ一般不作用于流感嗜血杆菌中的DNA序列
B．推测果蝇的相关DNA上存在多个HindⅢ的酶切位点
C．HindⅢ切割产生的黏性末端不会与其他限制酶切割产生的相同
D．HindⅢ能使DNA每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开
7．为获得纯化的酵母菌菌落，进行如图所示的平板划线操作，划线的顺序为①→②→③→④→⑤。下列有关叙述错误的是（ ）
A．马铃薯琼脂培养基可采用湿热灭菌的方法
B．进行划线操作时，培养皿盖不能完全打开，且需要在酒精灯火焰旁进行
C．完成划线操作后，将平板正立放入28℃左右的恒温培养箱中培养
D．在区域①～⑤中，最有可能在区域⑤中得到酵母菌的纯培养物
8．我国科学家利用天山雪莲的SikCDPK1基因(S基因)培育抗旱烟草时，为减少外源基因对植物正常生长的潜在影响，将组成型启动子(35S)替换为干旱诱导型启动子(RD29A)。下列分析错误的是
A．与35S启动子相比，RD29A启动子通常在干旱条件下才驱动S基因表达
B．可用农杆菌转化法将RD29A—SikCDPK1表达载体导入烟草细胞
C．若S基因成功导入，则能在烟草植株各部位的细胞中检测到对应的mRNA
D．检测转基因烟草的抗旱性时，可测定其在干旱胁迫下的叶绿素含量
9．利用PCR技术分析粪便已成为珍稀野生动物种群调查的有效手段，同种生物不同个体在同源染色体某些位置上DNA片段长度存在差异，这些片段可作为辨别不同个体的依据。下列叙述错误的是（ ）
A．需去除粪便中微生物的DNA以免干扰实验结果
B．设计PCR引物时需要考虑物种特异性
C．反应体系中需加入四种脱氧核苷酸作为原料
D．PCR添加的两种引物均成为每个主要产物分子的一部分
10．某团队对菌种m、菌种n降解微塑料的能力进行实验研究，将总菌量相同的m、n、m+n（m:n=1:1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中，一段时间后测定微塑料的相对残留率（相对残留率=相对剩余量/添加量×100%），结果如下表。下列叙述错误的是（　　）
菌种 未接种 菌种m 菌种n 混合菌种m+n
相对残留率（%） 100 69.36 78.30 58.79
A．用稀释涂布平板法可对活菌进行纯化和计数
B．混合菌种组微塑料残留率最低，故菌浓度也最低
C．从残留率上分析，混合菌种降解微塑料的能力高于单一菌种
D．能在该培养基中生长繁殖的微生物不一定都能降解微塑料
11．如图为将相同大小的含有不同抗生素的灭菌滤纸片 A~D放在培养基甲上，用于判断抗生素的杀菌能力，乙为甲培养一段时间后的结果。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基甲中含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂
B．用无菌水配制成细菌悬液，再均匀涂布于培养基甲
C．根据抑菌圈直径大小可判断不同抗生素抑菌能力的强弱
D．不同抗生素的抑菌能力大小为 D>C>A>B
12．为筛选高效降解原油的细菌，科研小组从油田污泥中取样，按以下流程操作：①称取污泥10 g加入90 mL无菌水，振荡摇匀制成菌悬液；②将菌悬液进行10倍梯度稀释至10 6；③取10 4、10 5、10 6稀释液各0.1 mL，分别涂布于以原油为唯一碳源的培养基上；④在37℃条件下培养48小时后，统计10 5稀释组三个平板的菌落数为168、175、182.下列对实验操作的判断及原因分析，正确的是（　　）
A．步骤①中无菌水需添加原油——保证目的菌正常生长
B．步骤②每次稀释需更换移液管——仅避免杂菌污染
C．步骤③应增加10 3稀释组——10 5组菌落数符合计数要求
D．步骤④需对三个平板数据取平均值——减少实验偶然误差
13．莠去津是一种含氮的有机化合物，是广泛使用的除草剂。长期使用莠去津容易对土壤造成污染。实验人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示，已知含过量莠去津的固体培养基不透明。下列说法错误的是（　　）
A．目的菌能以莠去津为氮源进行增殖，产生有透明带的菌落
B．A瓶到C瓶的目的是逐步稀释培养液中目的菌的浓度，以便后续目的菌的纯化
C．甲平板的接种方法是平板划线法，接种过程共灼烧6次接种环
D．无透明带的菌落可能是固氮菌，有透明带的菌落还需进一步鉴定
14．某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图1所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，交配以期获得Gata3-GFP基因纯合子小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，科研人员设计了引物用于PCR扩增，结果如图2所示。下列叙述正确的是（　　）
A．应在Gata3和GFP基因编码区之间再插入一个启动子
B．图2结果是选择引物1和引物2扩增得到的产物
C．1、3号条带属于杂合小鼠，4号条带属于所需纯合子
D．基因表达时图1中基因的启动子区可以作为转录的模板
二、多选题
15．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是（　　）
A．培养不同微生物的培养基的pH可能不同
B．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
C．待平板冷却凝固约5~10分钟后将平板倒过来放置
D．配制培养基时先灭菌，再调pH，再倒平板
16．巢式PCR是一种特殊的聚合酶链式反应，使用两组不同的引物实现目标DNA片段的扩增。第一组外引物扩增出的DNA片段（中间产物）长度超出目标区域，第二组内引物称为巢式引物，其结合部位在中间产物内部的目标区域，从而扩增出目标产物，具体过程如图所示。有关叙述正确的是（ ）
A．巢式PCR反应体系中所用的两组引物需先后加入
B．巢式PCR过程中反应温度最低的一步是复性阶段
C．若直接用内引物对模板DNA扩增，不易得到目标产物
D．巢式PCR反应体系常添加Ca2+以激活DNA聚合酶
三、解答题
17．红酸汤是我国黔南地区的特色发酵食品，其发酵过程中乳酸菌起关键作用。研究人员从黔南三县市红酸汤中分离出布氏乳杆菌，并对其进行研究。回答下列问题：
(1)将稀释到一定浓度的酸汤样品，取0.1mL涂布于 MRS琼脂培养基（最常用的乳酸菌培养基），37℃培养48h，利用平板划线法纯化获得菌株，从功能上分析，所用的 MRS琼脂培养基属于____________培养基。进行图1所示接种时，接种环需灼烧___________次，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________。
(2)若需对布氏乳杆菌进行计数，可采用的接种方法是________________，该方法计数结果通常比实际值_______（填“偏大”或“偏小”），其原因是__________________________。除上述计数方法外，还可利用____________________测定微生物数量。
(3)研究人员筛选出SD-1、DY-1、DS-1三株较好的布氏乳杆菌的菌株，探究其相关特性，部分实验结果如图2~图4所示，图2、图3分别为三种菌株的生长曲线和产酸曲线。
注：吸光度值越大说明菌体浓度越高，菌株生长能力越强。
①测定菌株的吸光度时，需先将待测溶液__________，以防止菌体沉淀导致测量结果不准确，据图2、图3分析，相同培养条件下，繁殖速度快、产酸能力强的菌株是_____________，判断依据是_________________。
②研究人员还测定了三株布氏乳杆菌的发酵上清液对大肠杆菌等5种指示菌生长的抑制情况，结果如图4 所示。由图可知，三株布氏乳杆菌对5种指示菌均有抑菌效果，其中_______________菌分别对水弧球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力最好。
(4)研究人员结合其他相关实验，最终得出DY-1菌株可作为发酵食品开发的菌株选择。若将该菌应用到工业上发酵制作泡菜时，需先进行菌种的_______________，发酵的中心环节是_____________，后续经过相关工艺获得成品泡菜。
18．酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：

(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后要调节培养基的______，同时要及时地对培养基进行分装，并进行______灭菌，培养基按照用途分为______和______。
(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约______（选填“25℃”、“50℃”或“80℃”）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
(3)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和______供应。为监测酵母的活细胞密度，经等体积台盼蓝染液染色，理论上应统计______色细胞的个数。
(4)若在步骤②中，取最后一个试管中的菌液0.1mL分别涂布在3个平板上，适宜条件下培养一段时间，观察到菌落数分别为140、150和160个，则第一个试管中菌的浓度为______个/mL。
19．某真菌的W基因编码的纤维素酶可高效降解秸秆中的纤维素，在生物质能源开发中具有重要的应用前景。科研人员拟通过基因工程技术，将W基因导入放线菌中实现异源表达。图1为W 基因的结构及限制酶切位点（转录方向为左→右），图2为所用质粒载体的结构，下表为5种限制酶的识别序列与切割位点。请回答下列问题：
限制酶 BamHI EcoRI Mfe I KpnI HindⅢ
识别序列和切割位点（5'→3'） G'GATCC G'AATTC C'AATTG G'GTAC'C A'AGCTT
(1)重组DNA 技术的基本工具包括限制酶、DNA 连接酶和载体，其中限制酶的化学本质是_______，其核心作用是________________。
(2)图2中质粒上的氨苄青霉素抗性基因属于_________，其作用是______________。作为受体的放线菌_____（填“能”或“不能”）具有氨苄青霉素抗性。质粒作为目的基因的“运输工具”，除了具备标记基因外，还需具备的条件有___________________（写出两点）。
(3)限制酶 MfeⅠ和EcoRⅠ切割后产生的黏性末端_______（填“能”或“不能”）被T4DNA连接酶连接，判断依据是__________________。
(4)W基因转录的模板链是____________。为了获得能正确表达含 W基因的重组质粒，应使用____________限制酶切割图中含 W基因的DNA片段，使用_____________限制酶切割图中质粒。
20．香菇是具有丰富营养价值和药用价值的食用真菌，被称作“山珍之王”。研究人员发现香菇体内的Lp-11蛋白具有抑制肿瘤细胞生长并诱导细胞凋亡的作用。为了获得大量纯净的Lp-11蛋白，研究人员操作流程如图1，序号①～④表示各个环节。回答下列问题：
注：pET32a质粒上的KanR中沿转录方向标注的5个限制酶的酶切位点之间的距离依次为40bp、30bp、90bp、50bp，bp表示碱基对。
(1)图1过程①需要在________酶的作用下进行。①②过程获取的目的基因不含_________（答出2点）。
(2)为使目的基因与pET32a质粒（长度为5900bp）正确连接，在设计PCR引物时可将引物的______（3'或5'）端添加限制酶的识别序列，与a链和b链相结合的引物上添加的分别是限制酶______、______的识别序列。若计划用1个Lp-11基因为模板获得n个Lp-11基因，则PCR过程中消耗的引物总量是______。
(3)图1的④过程，通常先用________将受体细胞处理成感受态，此时细胞的特点是________受体菌应选用______（填“具有”或“不具有”）氨苄青霉素抗性的大肠杆菌。
(4)为了检测目的基因是否插入到pET32a质粒中，利用目的基因两端添加的限制酶切割质粒，然后对产物进行电泳，结果如图2。样品______最可能是插入了目的基因的重组质粒。
(5)将含有Lp-11基因的重组pET32a质粒导入大肠杆菌后，还需要进行基因工程的最后一个步骤即______，才能最终获得能生产Lp-11的转基因大肠杆菌。
21．聚乙烯型塑料应用广泛，但其难降解的特性带来了诸多环境问题。聚酯酰胺(PEAs) 的可水降解性使其有望成为聚乙烯的替代品。某科研团队利用大肠杆菌构建能合成PEAs的工程菌，如图1表示合成PEAs相关基因连接形成的DNA 片段，其中①②③④为引物，图2为载体质粒结构示意图。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增PEAs合成串联基因时，为保证PEAs基因能高效表达，应将强启动子碱基序列的________端与引物__________(①-④编号选填)连接，另一个用于扩增的引物 是______。在 PCR反应体系中，一般要添加，目的是_______。
(2)基因工程中构建基因表达载体的目的是______。
(3)研究人员将强启动子修饰后的PEAs合成串联基因插入图2载体质粒的位点1和位点2之间。图中的LacZ基因编码产生的酶可以分解X -gal , 产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。为了筛选出含有PEAs合成串联基因的大肠杆菌，应在培养基中加入_____并选择___________的菌落。
(4)为了避免工程菌在使用后逃逸造成环境污染，研究人员利用CRISPR/Cas9系统为工程菌 增加了自毁保护体系，机理如图2所示。研究结束后，在培养液中加入B物质，B物质通过_______,使gRNA基因和Cas9基因表达，gRNA和Cas9蛋白形成复合物后，gRNA通过______________识别目标DNA,Cas9蛋白对目标DNA进行剪切，最终使大肠杆菌死亡。gRNA基因可设置为 _____________(填“毒蛋白基因”或“生长必需基因”)的特异性序列。
参考答案
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 B D B C C C C C A B
题号 11 12 13 14 15 16
答案 D D B B ABC ABC
17．(1) 选择 6 逐步稀释样品中的微生物，使聚集的菌体逐步分散，最终获得单个菌落
(2) 稀释涂布平板法 偏小 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 显微镜直接计数法
(3) 振荡摇匀 DY-1 DY-1 的吸光度上升最快且最终值高，pH 下降最快且最终值低 SD-1
(4) 扩大培养 发酵罐内发酵
18．(1) pH 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 选择培养基 鉴别培养基
(2)50℃
(3) 氧气 无
(4)1.5×105
19．(1) 蛋白质 识别双链DNA分子的特定的识别序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开
(2) 标记基因 筛选重组DNA分子 不能 具备多个限制酶切点、能自我复制
(3) 能 限制酶 MfeⅠ和EcoRⅠ切割后产生的黏性末端相同
(4) 乙链 EcoRI和HindⅢ MfeⅠ和HindⅢ
20．(1) 逆转录 启动子、终止子
(2) 5' XhoI BamHⅠ 2n 2
(3) Ca2+ 处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态 具有
(4)2
(5)目的基因的检测与鉴定
21．(1) 3' ③ ② 激活DNA 聚合酶
(2)使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传，同时使目的基因能够表达和发挥作用
(3) X-gal和四环素 白色
(4) 解除A蛋白对P2启动子的抑制作用 碱基互补配对 生长必需基因

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