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单元过关检测卷（九）　生物技术与工程
（时间：90分钟　分值：100分）
一、选择题（本大题共20小题，每小题2分，共40分。每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，不选、多选、错选均不得分，请将答案填在答题卡相应位置）
1.（2025·杭州模拟）下列关于培养基的说法，正确的是（　　）
A.培养基中含量最高的是碳源
B.所有培养基中都必须含有生长因子
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落
2.下列关于“分离以尿素为氮源的微生物”实验的叙述，错误的是（　　）
A.从有哺乳动物排泄物的地方取土样，分离到目的微生物的概率高
B.实验中所用LB固体培养基，与分离大肠杆菌所用LB培养基成分有不同
C.对尿素固体培养基灭菌的方法是G6玻璃砂漏斗过滤
D.在尿素固体培养基生长的微生物不一定都能分泌脲酶
3.某研究性学习小组以樱桃番茄为材料进行果酒、果醋发酵。下列相关叙述正确的是（　　）
A.酵母菌与醋酸菌相比，发酵所需的最适温度较高
B.先供氧进行果醋发酵，然后隔绝空气进行果酒发酵
C.与人工接种发酵相比，自然发酵更容易控制产品品质
D.适当加大接种量可以提高发酵速率，且可抑制杂菌生长繁殖
4.大蜡螟幼虫肠道内存在降解塑料（由聚苯乙烯制成）的细菌，可有效加快塑料的降解。使用生活中常见的聚苯乙烯（PS）包装盒作为唯一食物来源喂食大蜡螟幼虫12天，经解剖、培养、分离，最终获得4株菌株。据图分析下列相关叙述错误的是（　　）
A.以聚苯乙烯为唯一食物来源喂食大蜡螟幼虫12天的目的是富集大蜡螟幼虫肠道内的PS降解菌
B.为保证计数的结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数
C.涂布时需要设置一个未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板以检验是否发生污染
D.Ⅱ号培养基中含有琼脂，接种后应立即将平板倒置，统计平板上菌落的数目可以准确计算活菌的数量
5.某些病毒感染会严重影响葡萄的产量和品质。某科研团队采用脱毒技术快速繁殖“阳光玫瑰”葡萄品种，具体流程如下图所示，其中①②为植物组织培养过程。
外植体试管苗剥取X再生
植株脱毒苗
下列叙述错误的是（　　）
A.图中的X可指试管苗的茎尖
B.推测热处理的基本原理是植物细胞比病毒更耐高温
C.过程①②所用的MS培养基无需另外添加植物激素
D.可通过PCR、抗原-抗体杂交等方法对再生植株进行病毒检测
6.下图为某植物原生质体的培养过程示意图。下列叙述正确的是（　　）
A.过程①通常用盐酸解离细胞壁
B.过程②可使原生质体再生出细胞壁
C.过程③培养基中细胞分裂素浓度相对较低
D.过程④表示为提高适应外部环境能力的炼苗过程
7.在植物的改良过程中，通过原生质体融合进行植物体细胞杂交已成为产生新基因型和操纵倍性的重要工具。科研人员将基因型为Aa的二倍体柑橘植株进行自身原生质体融合，所得四倍体植株再与原二倍体柑橘杂交，最后从杂交植株上得到了无子柑橘。嫁接时接上去的芽或枝叫作接穗，承受接穗的植株叫作砧木。下列相关叙述正确的是（　　）
A.原生质体融合后得到的四倍体植株茎秆粗壮，可作为嫁接过程中的接穗
B.杂交植株上得到无子柑橘的原因是抑制了减数分裂过程中纺锤体的形成
C.利用细胞膜的信息交流功能，有活力的原生质体在台盼蓝溶液中不被染色
D.理论上，四倍体植株与原二倍体柑橘杂交的后代中基因型为aaa的个体占1/12
8.（2025·金丽衢十二校二联）β-hcg（人绒毛膜促性腺激素）是由滋养层细胞分泌的一种糖蛋白。利用细胞工程方法以β-hcg为抗原制备单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　）
A.制备抗β-hcg单克隆抗体可以应用于医学诊断
B.聚乙二醇可以诱导B淋巴细胞和B淋巴细胞融合
C.小鼠注射β-hcg后，产生的血清抗体为单克隆抗体
D.制备抗β-hcg单克隆抗体，可以将杂交瘤细胞注射到动物体内
9.为阻断母源线粒体致病DNA的遗传，科学家采用“原核移植”技术，步骤如下：①将患病母亲的卵细胞和父亲的精子体外受精，雌原核和雄原核融合前将二者吸出；②健康女性的卵细胞和父亲的精子体外受精，雌原核和雄原核融合前将二者吸出；③将步骤①获得的原核植入到步骤②处理后的细胞质中，形成重组受精卵。下列叙述错误的是（　　）
A.该技术可完全确保后代不携带致病线粒体DNA
B.该方案用于体外受精的精子需要经过获能处理
C.该技术需要在无菌、无毒的条件下进行操作
D.利用该技术培育“试管婴儿”可能存在伦理争议
10.某研究小组欲制备单克隆抗体A，进行了如下实验：抗原A刺激小鼠后分离B淋巴细胞，诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选获得杂交瘤细胞后进行体外培养，获得单克隆抗体A。下列叙述正确的是（　　）
A.从免疫小鼠的肝脏中分离得到B淋巴细胞
B.可用仙台病毒或70％乙醇诱导细胞融合
C.杂交瘤细胞的克隆培养不能在动物体内进行
D.筛选得到的杂交瘤细胞在传代培养中可能发生染色体丢失现象
11.研究人员欲采用“异源囊胚补全法”将人源iPS细胞培育出的肾元祖细胞导入囊胚，然后移植到去除生肾区既存的肾元祖细胞的仔猪体内，培育出100％人源iPS细胞来源的肾单位并实际应用于移植医疗（如下图所示）。下列说法不正确的是（　　）
A.培育人源肾元祖细胞需向iPS细胞培养液中加入定向诱导分化剂
B.过程②需要将荧光蛋白标记的人源肾元祖细胞植入囊胚的内细胞团
C.过程③操作之前需要对代孕母猪进行同期发情处理，但不必超数排卵处理
D.该技术培育的人源肾脏不必考虑肾移植个体之间的遗传差异
12.2025年7月，世界首例体细胞克隆牦牛“纳木错1#”在我国诞生。本次克隆是采集优质野牦牛的耳廓组织，通过体细胞移植获得野牦牛克隆胚胎，然后将克隆胚胎移植到受体本土母牦牛的子宫内。下列叙述错误的是（　　）
A.可用机械法处理优质野牦牛的耳廓组织获得分散的体细胞
B.可用Ca2＋载体、蛋白酶合成抑制剂等方法激活野牦牛克隆胚胎的重构
C.受体本土母牦牛的子宫基本不会对野牦牛克隆胚胎发生免疫排斥反应
D.可取野牦牛克隆胚胎的桑葚胚滋养层细胞进行DNA分析，鉴定性别
　　阅读下列材料，回答13～14小题。
　　2023年春季，我国多地暴发甲型流感（甲流）。甲流是由甲流病毒H1N1引起的急性呼吸道感染，感染后常出现咽痛、咳嗽、发热等症状，接种甲流疫苗是预防甲流的有效方法。甲流病毒H1N1表面的血凝素抗原（HA）可识别宿主细胞的特定受体，利用杂交瘤技术制备的抗HA单克隆抗体可用于快速诊断甲流病毒的感染。
13.下列关于机体对抗甲流病毒H1N1的叙述，正确的是（　　）
A.B淋巴细胞的增殖分化需要甲流病毒和细胞因子两个信号的刺激
B.初次感染甲流病毒后，浆细胞识别病毒并产生相应抗体清除血液中的病毒
C.人体感染甲流病毒后没有出现发热症状，说明机体没有发生免疫反应
D.注射甲流疫苗后，机体会产生更多的抗体和记忆细胞，不会再感染甲流
14.为制备抗HA的单克隆抗体，研究人员设计技术流程如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A.图中小鼠多次注射HA后，从肝脏中获取B淋巴细胞
B.经选择培养后获得的杂交瘤细胞均能产生抗HA抗体
C.用多孔细胞板培养时每孔至少含有1个细胞
D.为获得纯度较高的抗HA抗体，扩大培养时一般不添加动物血清
15.（2025·金华一模）研究发现OsCBL8基因在提高水稻耐受非生物逆境胁迫方面具有重要作用，为研究OsCBL8基因的作用机理，我们需要通过PCR实验对该基因进行扩增，用于后续研究。关于PCR反应，下列叙述正确的是（　　）
A.通过PCR获取目的基因的过程中，第三轮循环至少需要消耗4对引物
B.PCR过程中Taq DNA聚合酶催化相邻的游离dNTP之间形成磷酸二酯键
C.PCR产物的大小可以直接通过亚甲基蓝染色进行鉴定
D.PCR过程中要加入缓冲液，一般添加Cu2＋来激活DNA聚合酶
16.PHA是嗜盐R菌合成的一种酯类物质，它的理化性质类似于合成塑料，但可被生物降解。为了利于从嗜盐R菌细胞中提取PHA，科学家采用基因工程的方法，将光诱导型启动子和溶菌蛋白基因成功连接后，导入嗜盐R菌中。下列相关说法错误的是（　　）
A.PHA是由嗜盐R菌的相关基因经转录后翻译出的产物
B.筛选PHA高产菌株时，可到含盐量高的咸水湖中寻找
C.导入的溶菌蛋白基因表达后有利于嗜盐R菌释放PHA
D.改造后的嗜盐R菌在发酵积累PHA过程中应避光培养
17.大量研究表明，蛋白激酶SOS2响应盐胁迫应答，该酶由SOS2基因编码。为研究其机制，研究者将质粒pART27与SOS2基因结合后形成重组质粒。在构建过程中，研究者分别使用“单酶切”和“双酶切”切割质粒与含SOS2基因的DNA片段（如图），酶切产物用DNA连接酶连接。在只考虑产物两两结合的情况下，下列叙述错误的是（　　）
A.“单酶切”组的产物中含有SOS2基因与SOS2基因的连接物
B.SOS2基因与pART27的正向连接物只能来自“双酶切”组
C.pART27与pART27的连接物是“单酶切”组的最大产物
D.“单酶切”组连接物的种类较“双酶切”组的连接物多
18.苏云金杆菌中的杀虫晶体蛋白Cry具有杀虫毒性，但Cry蛋白存在杀虫谱窄、毒力有限等问题，制约了其在农业生产中的进一步应用。科学家通过定点突变，将Cry蛋白第168位的组氨酸替换为精氨酸后，Cry蛋白对烟草天蛾的毒性提高了3倍；将Cry蛋白第282位、第283位的丙氨酸和亮氨酸分别替换成甘氨酸和丝氨酸后，Cry蛋白对烟草天蛾的毒性提高了7倍。下列有关叙述错误的是（　　）
A.对Cry蛋白的改造是通过改造Cry蛋白的相关基因来实现的
B.Cry蛋白的毒性提高的原因可能是改变了该蛋白质的空间结构
C.改造Cry蛋白应从Cry蛋白基因的脱氧核苷酸序列出发设计其特有的结构
D.使用蛋白质工程改造Cry蛋白过程中需要使用限制酶和DNA连接酶
19.为了解转基因烟草对生态环境的影响，研究人员以TMV-cp烟草品种NC89为实验材料，对转基因烟草外源基因TMV-cp漂移到杂草上的可能性进行了研究。研究人员随机选取了5株NC89烟草，并在NC89烟草株系及周边随机选取各种杂草，提取DNA，根据TMV-cp基因设计引物进行PCR扩增，电泳结果如图。
下列相关叙述错误的是（　　）
A.设置空白对照是为排除实验操作等对结果的影响
B.电泳结果表明TMV-cp基因在NC89烟草细胞内稳定存在
C.电泳结果表明烟草中的TMV-cp基因没有漂移至周边杂草
D.将TMV-cp基因转入其他植物时不需要经过安全性评价
20.（2025·台州二模）我国支持治疗性克隆，反对生殖性克隆。如图表示治疗性克隆过程，下列叙述错误的是（　　）
A.上述过程利用了核移植和胚胎移植技术
B.①过程可采用电脉冲融合技术
C.②③过程都需在CO2培养箱中培养
D.治疗性克隆可解决器官移植中的排异问题
二、非选择题（本大题共5小题，共60分，请在答题卡相应位置答题）
21.（15分）（2025·金华一模）我国餐厨垃圾占城市生活垃圾比重的37％～62％，垃圾废液中富含淀粉、蛋白质、脂类等有机物，丢弃处理是一种资源的浪费，而且处理不当还会滋生病原菌，污染环境。研究人员采集废弃垃圾液通过生物工程技术分离出了能高效降解淀粉、蛋白质、脂肪等成分的菌种制成复合微生物菌剂，实现垃圾无害化处理和资源化的高效利用。回答下列问题：
（1）菌种的选育。按照如图1流程分别分离获得高效分解淀粉、蛋白质、脂肪的菌种：
①采集废弃垃圾液作为分离样本，给我们提供的取样思路是　　　　　　，土样采集后进行富集培养，目的是　　　　　　　　　　　　　　。
②完成梯度稀释后，菌种接种到平板上的过程需要使用的工具为　　　　　　　　，与普通营养物质不同，厨余垃圾多来自烹饪余留，因此在分离培养基中宜提高　　　　含量配制成　　　（功能）培养基，更能实现菌株的分离。纯化培养采用的接种方法是　　　　　　　　。
（2）厨余垃圾处理的混菌发酵。用上述方法分别选育出高效分解淀粉、蛋白质和脂肪的菌种后，将三类菌按照一定的比例制成复合微生物菌剂，再将菌剂与经过预处理的厨余垃圾混合发酵。
①发酵过程中影响垃圾分解效率的因素除温度、pH、溶解氧等环境因素外，还有　　　　　　
　　　　　　　（至少列举2项）。
②发酵过程不仅能将垃圾无害化，同时还能通过　　　　　　　　　　技术从发酵液分离获得丰富的单细胞蛋白，实现垃圾的资源化。
③收集微生物处理后的厨余垃圾残渣，经晾晒后制成饲料，可实现　　　　　　　　　　，提高能量利用率。
（3）超级分解菌的培育。研究发现，混菌发酵过程中各种菌存在相互作用，导致分解效率低下，因此科研人员尝试获取能表达淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶的融合基因（图2），利用一种高效表达质粒的载体（图3），将其导入到巨大芽孢杆菌中，提高厨余垃圾的分解率。现有MspⅠ、BamH Ⅰ、MboⅠ、SmaⅠ、BglⅡ等限制酶，它们的识别序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG、A↓GATCT。①分别选择　　　　　　　酶切割融合基因和质粒（各选用一种酶），然后使用　　　　　酶连接形成重组质粒。若使用MboⅠ酶对重组质粒进行充分酶切，每个重组质粒至少能水解为　　个片段。
②采用感受态细胞法将重组质粒导入巨大芽孢杆菌后，将受体菌培养在添加　　　　的培养基进行检测筛选，即可获得能同时高效降解厨余垃圾的超级分解菌。
22.（10分）白花莲（2n＝22）和侧耳根（2n＝24）是两种均能产生黄酮类次生代谢物的中药材。为获得药效叠加的效果，科研人员将白花莲与侧耳根进行植物体细胞杂交，并统计了不同比例的植物激素诱导形成愈伤组织的情况，结果如表所示。
NAA∶BA 外植体接种数/个 愈伤组织数/个
2∶5 50 21
1∶5 42 34
4∶3 67 38
1∶10 39 23
（1）外植体需要经过　　　　过程得到愈伤组织。据表推测，若要获得更多愈伤组织，应选择的激素比例为　　　　　　，判断依据是　　　　　　　　　　　　。
（2）愈伤组织需经　　　　　　　　　　酶处理后才能得到原生质体，制备原生质体的溶液不能选用低渗溶液，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　。
（3）在诱导白花莲和侧耳根的原生质体融合后，若仅考虑两两融合，则形成的细胞中可能含有的染色体数为　　　　条。研究表明，培养液中两种原生质体的密度越大，细胞间碰撞融合的概率越大。因此原生质体密度过低或过高均不利于双核异核融合体的形成，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
23.（9分）某种由基因突变引起的神经退行性疾病通常进展急速、症状严重影响患者的生活。若将患者体内的成纤维细胞中的致病基因经过基因编辑定向敲除后，通过体细胞核移植等一系列复杂操作后获得正常的神经干细胞，将其植入患者体内可减轻病情。具体思路如下图，请回答下列问题：
（1）卵母细胞应在　　　　期去核，通过　　　　　　方法可使①融合成重组细胞，过程②③培养的气体条件是　　　　　　　　　。
（2）早期胚胎发育中，滋养层细胞将来可以发育成　　　　　　　　　　　，ES细胞　　　　（填“具有”或“不具有”）组织特异性。
（3）将神经干细胞移植回患者体内理论上不会引起免疫排斥反应，理由是　　　　　　
　　　　　　　　　　。
（4）ES细胞可以发育成神经干细胞，但不可以发育成胎儿植入代孕妇女的子宫，让其发育成胎儿将触及伦理道德底线，请谈谈我国对此的看法：　　　　　　。
24.（14分）野生型黑麦草细胞壁中较高的木质素含量会降低其作为青储饲料的品质。D蛋白是催化木质素合成的关键酶，某研究小组通过构建含D基因部分序列正、反向片段的表达干扰载体（如下图所示），在细胞内产生双链RNA分子，诱导D基因的mRNA持续降解，培育得到低木质素含量的黑麦草。
（1）D基因的正、反向目的片段的克隆：提取野生型黑麦草叶片全部mRNA，　　　　成cDNA。根据cDNA序列选取合适的片段，分别设计正、反向目的片段的上下游引物，正向片段和反向片段引物的扩增序列　　　　（填“相同”或“不同”），酶切位点　　　　（同上），以使目的片段定向插入载体的特定位置。扩增产物经　　　　　　，切下目的条带回收后与载体连接，形成克隆载体以用于正、反目的片段的扩增。
（2）构建D基因的表达干扰载体：
Ⅰ.对含有正向片段的克隆载体和反向片段的克隆载体分别进行双酶切，将回收片段与经相同酶切的中间载体用　　　　　　　酶进行连接，获得含有干扰片段的重组中间载体；为使干扰片段能在受体细胞中复制，中间载体需有　　　　　　　。
Ⅱ.将干扰片段和超表达启动子插入Ti质粒的　　　　　中得到D基因的表达干扰载体，插入超表达启动子的目的是　　　　　　　　　　　　　　。
（3）导入和培养：将D基因的表达干扰载体导入农杆菌。黑麦草愈伤组织在菌液中浸没5 min，先置于无菌滤纸上吸去多余的菌液，再转入无菌水浸润的滤纸上共培养3天，共培养的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。筛选得到的愈伤组织经　　　　　　　过程，
培育得到再生植株。
（4）鉴定和筛选：对转基因植株与　　　　　　植株进行木质素含量测定与分析，筛选保留木质素含量显著　　　　　　　　　的植株。
25.（12分）ETS原癌基因1（ETS1）缺失可引起系统性红斑狼疮（SLE），利用CRSPR/Cas9系统敲除猪的ETS1基因可获得狼疮样猪模型，其制备流程如下：
（1）第一步是构建ETS1基因敲除细胞系：CRSPR/Cas9系统由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白组成，其剔除靶基因序列的过程如图所示。
①Cas9蛋白很可能作用于DNA分子的　　　　键。
②PCR使用引物的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　；研究者可将PCR扩增产物进行电泳，则可观察到未敲除细胞系、基因敲除纯合细胞系的条带的区别是　　　　　　　　　　　　　　。
（2）第二步获得重构胚：将上述制备的ETS1基因敲除纯合细胞作为　　　　细胞，将其植入　　　　　　细胞中获得重构胚，再使其完成细胞分裂和发育进程。
（3）第三步是胚胎移植并获得ETS1基因敲除狼疮样猪：胚胎移植的实质是　　　　　　
　　　　　　　。
（4）第四步是对目的基因的检测与鉴定：可从分子水平上检测ETS1基因敲除狼疮样猪的　　　　　　　　　　　　　等分子；通过观察　　　　　　　　　　的方法来确定ETS1基因敲除狼疮样猪是否制备成功。
1.D　培养基中含量最高的应该是水，A错误；由于自身的缺陷，有些微生物对培养基成分有特殊的需求，需要在培养基中有针对性地添加某些特定的维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶等有机化合物才能生长，这些化合物统称为生长因子，并非所有培养基中都含有生长因子，B错误；固体培养基中含有凝固剂，即使加入少量水也无法制成液体培养基，C错误；微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落，根据菌落特征可鉴定、筛选不同微生物，D正确。
2.C　在含哺乳动物排泄物的土壤中有较多尿素且含脲酶的细菌数量更多，从有哺乳动物排泄物的地方取样，获得目的菌种几率很高，A正确；“分离以尿素为氮源的微生物”中以尿素作为唯一氮源，含脲酶的微生物在该培养基上能生长，其他微生物在该培养基上因缺乏氮源而不能生长，可用于分离含脲酶的微生物，该实验中需用全营养LB固体培养基作对照，通过对照可以判断选择培养基的选择作用，因此该培养基与分离大肠杆菌所用LB培养基成分有不同，B正确；在“分离以尿素为氮源的微生物”的实验中，配制好的尿素固体培养基加上封口膜后用高压蒸汽灭菌法灭菌，冷却后加入用G6玻璃砂漏斗过滤的尿素溶液，C错误；有的微生物可能可以利用目的菌的分解产物，从而在该培养基上生存，故在尿素固体培养基生长的微生物不一定都能分泌脲酶，还需进一步筛选，D正确。
3.D　果酒发酵所需最适温度低于果醋发酵，A错误；先制酒再制醋，故先隔绝空气进行果酒发酵，再供氧进行果醋发酵，B错误；自然发酵中，可能带有的杂菌较多，产品品质不一定更好，C错误；加大接种量，所需菌种数量较多，发酵速率快，也可抑制杂菌生长，D正确。
4.D　以聚苯乙烯为唯一食物来源喂食大蜡螟幼虫的目的是富集其肠道内的PS降解菌，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物，A正确；为保证计数的结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数，B正确；对涂布的平板进行培养时，需要将接种的培养基和一个同批次未接种的培养基都放入恒温箱中培养，这样操作的目的是作为对照，可以检测培养基平板是否灭菌彻底或是否发生污染，C正确；Ⅱ号培养基中含有琼脂，接种后应待涂布的菌液被培养基吸收，再将平板倒置，统计平板上菌落的数目可以估算活菌的数量，D错误。
5.C　植物顶端分生区附近（如茎尖）的病毒极少，甚至无病毒，切取一定大小的茎尖进行组织培养，再生的植株就有可能不带病毒，从而获得脱毒苗，A正确；推测热处理的基本原理是植物细胞比病毒更耐高温，处理后植物细胞处于生活状态，B正确；过程①②所用的MS培养基需要添加生长素、细胞分裂素等植物激素，C错误；可通过PCR技术检测病毒的核酸，利用抗原抗体杂交等方法检测病毒的蛋白质，进而对再生植株进行病毒检测，D正确。
6.B　①为去壁过程，根据酶的专一性原理，需用纤维素酶和果胶酶溶液处理，A错误；悬浮的原生质体经过②可再生出细胞壁，B正确；过程③表示诱导生芽的过程，需要提高细胞分裂素的比例以促进芽的分化，C错误；过程④为植物个体发育的过程，将试管苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生长，为炼苗过程，D错误。
7.D　分析题意可知，嫁接时接上去的芽或枝叫作接穗，承受接穗的植株叫作砧木，原生质体融合后得到的四倍体植株茎秆粗壮，可作为嫁接过程中的砧木，A错误；杂交植株上得到无子柑橘的原因是含有三个染色体组，联会紊乱导致无法产生种子，B错误；利用细胞膜的控制物质进出细胞功能，有活力的原生质体在台盼蓝溶液中不被染色，C错误；理论上，四倍体植株（AAaa，产生的配子及比例是AA∶Aa∶aa＝1∶4∶1）与原二倍体柑橘（Aa，配子及比例是A∶a＝1∶1）杂交的后代中基因型为aaa的个体占1/6×1/2＝1/12，D正确。
8.C　制备抗β-hcg单克隆抗体可以应用于医学诊断，广泛运用于早孕的诊断，快速方便，A正确；诱导动物细胞融合的方法有物理法、化学法（常用聚乙二醇）和灭活的病毒诱导，B正确；单克隆抗体是指由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生的化学性质单一、特异性强的抗体，C错误；制备抗β-hcg单克隆抗体，可以将杂交瘤细胞注射到动物体内，属于体内培养，成本低，D正确。
9.A　原核移植过程中，若操作不彻底，可能残留患病母亲卵细胞细胞质中的线粒体DNA，导致后代仍可能携带致病线粒体DNA，A错误；体外受精前，精子需进行获能处理，以具备与卵子结合的能力，步骤①和②均涉及体外受精，B正确；该技术需无菌、无毒环境，避免微生物污染和细胞损伤，C正确；该技术涉及胚胎操作和遗传物质干预，可能引发伦理争议（如设计婴儿、基因改造等），D正确。
10.D　制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞是从免疫小鼠的脾脏中分离得到的，A错误；杂交瘤细胞的获得可利用聚乙二醇或灭活的病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合实现，B错误；杂交瘤细胞的克隆培养可在体内或体外进行，即将最终获得的杂交瘤细胞在体外培养或注入小鼠腹腔中均可以获得单克隆抗体，C错误；由于杂交瘤细胞是不同细胞融合获得的，因此，筛选得到的杂交瘤细胞在传代培养中可能会发生染色体丢失现象，进而可能会影响单克隆抗体的生产，D正确。
11.D　培育人源肾元祖细胞需向iPS细胞培养液中加入定向诱导分化剂，从而获得肾元祖细胞，A正确；内细胞团将来发育为胎儿的各种组织，过程②需要将荧光蛋白标记的人源肾元祖细胞植入囊胚的内细胞团，从而保证人源肾细胞的正常发育，B正确；过程③操作之前需对代孕母猪进行同期发情处理，但不需要进行超数排卵处理，因为代孕母猪不提供卵母细胞，C正确；该技术培育的人源肾脏依然需要考虑肾移植个体之间的遗传差异，因为该方法获得的肾脏可能含有囊胚的细胞发育的部分，D错误。
12.D　机械法（如剪碎组织）可用于初步分散体细胞，通常结合酶解法（如胰蛋白酶处理）获得单个细胞，A正确。Ca2＋载体可提高细胞内Ca2＋浓度，模拟受精激活信号；蛋白酶合成抑制剂可防止细胞结构分解，维持重构胚的完整性，两者均为激活胚胎的常用方法，B正确；受体子宫对移植胚胎的免疫排斥反应较弱，因胚胎的滋养层细胞可与母体建立免疫耐受，且克隆胚胎的遗传物质主要来自供体核，C正确；桑葚胚为实心细胞团，尚未分化出滋养层细胞，滋养层形成于囊胚阶段，因此无法从桑葚胚中取滋养层细胞进行性别鉴定，D错误。
13.A　B淋巴细胞的增殖分化需要甲流病毒和细胞因子两个信号的刺激，进而分化成浆细胞和记忆细胞，A正确；浆细胞没有识别病毒的能力，B错误；人体感染甲流病毒后，机体发生了免疫反应，消灭了病毒，导致没有出现发热症状，并非没有发生免疫反应，C错误；注射甲流疫苗后，可产生抗体和记忆细胞，但并不是不会感染甲流，因甲流病毒可发生变异等，有再次感染的可能性，D错误。
14.D　经过免疫的小鼠，一般从脾脏中获取B淋巴细胞，肝脏不是免疫器官，含有的B淋巴细胞较少，A错误；杂交瘤细胞既能产生抗体也能无限增殖，但杂交瘤细胞产生的未必是HA抗体，需要再进行抗原-抗体检测，B错误；用多孔细胞板培养时，有的孔只有一个细胞，有的没有，有的有多个，最佳的是只含有一个细胞，C错误；动物血清中含有抗体，为了获得纯度高的抗体，一般不添加血清，D正确。
15.A　在PCR反应体系中，如果扩增1次，需要2个引物；扩增第2次，需要4个引物；扩增第3次，需要8个引物；因此通过PCR获取目的基因的过程中，第三轮循环至少需要消耗8个（即4对）引物，A正确；dNTP有三个磷酸基团，dNMP只有一个磷酸基团，为脱氧核苷酸，延伸时，在Taq DNA聚合酶催化下，dNMP作为扩增的原料会依次连接到3'端，相邻的dNMP间形成磷酸二酯键，B错误；PCR产物鉴定常用的方法是琼脂糖凝胶电泳鉴定，C错误；PCR过程中要加入缓冲液，一般添加Mg2＋来激活DNA聚合酶，D错误。
16.A　PHA是酯类物质，属于次生代谢产物，由相关酶催化合成，而酶才是基因经转录和翻译的直接产物。因此，PHA并非直接由基因转录翻译产生，A错误。嗜盐R菌适于在高盐环境中生长，故高产菌株的筛选应在高盐环境（如咸水湖）中进行，B正确。溶菌蛋白基因表达会分解细胞壁，促使菌体裂解，从而释放胞内PHA，C正确。光诱导型启动子需光照激活，避光培养可避免溶菌蛋白过早表达，确保菌体正常积累PHA，D正确。
17.B　SOS2基因自身连接是“单酶切”的产物之一，A正确；不管是“单酶切”还是“双酶切”，均可使SOS2基因与质粒正向（正确）连接，B错误；质粒的相对分子量大于目的基因，故pART27与pART27的连接物是“单酶切”组的最大产物，C正确；“单酶切”可能造成目的基因反向连接或者目的基因自连或质粒自连，所以“单酶切”组形成的连接物的种类多于“双酶切”组，D正确。
18.C　蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，对Cry蛋白的改造是通过改造Cry蛋白的相关基因来实现的，A正确；蛋白质的结构决定功能，Cry蛋白的毒性提高了的原因可能是改变了该蛋白质的空间结构，B正确；改造Cry蛋白应从Cry蛋白的结构和功能出发设计其特有的结构，并改造或合成相关基因，C错误；蛋白质工程的基础是基因工程，需要改造或合成相关的基因，故使用蛋白质工程改造Cry蛋白过程中需要使用限制酶和DNA连接酶，D正确。
19.D　为了排除实验操作等对结果的影响，需要设置空白对照，A正确；3～7为NC89烟草样品，均存在TMV-cp基因条带，说明TMV-cp基因在NC89烟草细胞内稳定存在，B正确；8～18表示杂草样品，都没有出现TMV-cp基因条带，则烟草中的TMV-cp基因没有漂移至周边杂草，C正确；将TMV-cp基因转入其他植物时需要经过安全性评价，D错误。
20.A　该过程表示治疗性克隆过程，利用了核移植技术，但并没有使用胚胎移植技术，A错误；①表示核移植过程，是把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构建形成重组胚胎，可采用电脉冲融合技术，B正确；②③过程都需置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养，CO2主要作用是维持培养液的pH，C正确；治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞，可解决器官移植中的排异问题，D正确。
21.（1）①从菌种生存环境中取样容易得到相应菌种　对目标菌种扩增，提高其所占比例，有利于分离获得菌种　②移液器和玻璃刮刀（涂布器，三角刮刀）　氯化钠　选择　平板划线法　（2）①菌种类型、菌种的配比、菌液浓度、垃圾种类、垃圾浓度等　②沉淀、过滤、离心　③物质和能量多级利用　（3）①MboⅠ和BamHⅠ　DNA连接　3　②抗生素B
解析：（1）①采集废弃垃圾液作为分离样本，给我们提供的取样思路是从菌种生存环境中取样容易得到相应菌种；为了对目标菌种扩增，提高其所占比例，有利于分离获得菌种，因此土样采集后可进行富集培养。②完成梯度稀释后，菌种接种到平板上的过程需要使用的工具为移液器和玻璃刮刀（或涂布器，三角刮刀）；由于厨余垃圾多来自烹饪余留，因此在分离培养基中宜提高氯化钠含量配制成选择培养基，更能实现菌株的分离。纯化培养常用的接种方法是平板划线法。（2）①影响发酵过程中垃圾分解效率的因素除温度、pH、溶解氧等环境因素外，还有菌种类型、菌种的配比、菌液浓度、垃圾种类、垃圾浓度等因素。②发酵过程可通过沉淀、过滤、离心技术从发酵液分离获得丰富的单细胞蛋白，实现垃圾的资源化。③经微生物处理后的厨余垃圾残渣，晾晒后制成饲料，可实现物质和能量多级利用，提高能量利用率。（3）①融合基因和质粒都存在GGATCC、GATC序列，因此可用MboⅠ和BamHⅠ切割，然后使用DNA连接酶连接形成重组质粒；由于MboⅠ酶识别GATC，可识别并切割GGATCC、GATC、AGATCT 3种序列，因此若使用MboⅠ酶对重组质粒进行充分酶切，每个重组质粒至少能水解为3个片段。②为了筛选出含重组质粒的巨大芽孢杆菌，重组质粒上应该还有标记基因（供重组质粒的筛选和鉴定），一般为抗性基因，因为抗生素A抗性基因已被BamHⅠ酶破坏，故添加含抗生素B的培养基进行检测筛选。
22.（1）脱分化　NAA∶BA＝1∶5　该处理得到的愈伤组织比例最高　（2）纤维素酶和果胶　原生质体没有细胞壁，在低渗溶液中会吸水涨破　（3）44、48、46　原生质体的密度过低时，细胞间碰撞融合的概率小，融合率较低；原生质体密度过高时，两个以上的细胞会融合形成多核细胞，导致双核异核融合率降低
解析：（1）在一定的激素和营养等条件的诱导下，外植体培养成愈伤组织的过程叫作脱分化。在此过程中，起重要作用的激素为NAA和BA，分析题表可知，当NAA∶BA＝1∶5，得到的愈伤组织比例最高，故该激素比例下可获得更多愈伤组织。（2）愈伤组织需去除细胞壁才能得到原生质体，植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，故该过程需要经过纤维素酶和果胶酶处理。制备原生质体的溶液不能选用低渗溶液，因为原生质体没有细胞壁，在低渗溶液中会吸水涨破。（3）白花莲体细胞染色体数为22，侧耳根体细胞染色体数为24，诱导白花莲和侧耳根的原生质体融合后，若仅考虑两两融合，则形成的细胞可能为白花莲-白花莲融合细胞、侧耳根-侧耳根融合细胞、侧耳根-白花莲融合细胞，细胞中可能含有的染色体数为44、48、46。原生质体的密度过低时，细胞间碰撞融合的概率小，融合率较低；原生质体密度过高时，两个以上的细胞会融合形成多核细胞，导致双核异核融合率降低。因此，原生质体密度过低或过高均不利于双核异核融合体的形成。
23.（1）减数第二次分裂中（或MⅡ中）　电融合　95％空气和5％CO2　（2）胚胎的附属或胚外结构　不具有　（3）神经干细胞的遗传物质与患者体细胞的遗传物质基本相同，表面抗原一致　（4）我国禁止生殖性克隆人，遵循“四不原则”；允许治疗性克隆研究，需进行严格的伦理监管，保障科学应用，符合伦理道德与法律规范
解析：（1）卵母细胞应在减数第二次分裂中期（MⅡ中期）去核（此时卵母细胞具备最佳受精能力和核移植潜能）。使去核卵母细胞与成纤维细胞核融合的方法是电融合。动物细胞培养的气体条件是95％空气（提供O2）＋5％CO2（维持培养液pH）。（2）早期胚胎中，滋养层细胞将来发育成胚胎的附属或胚外结构（为胚胎发育提供营养和保护）。ES细胞（胚胎干细胞）不具有组织特异性，具有发育全能性（可分化为各种组织细胞）。（3）神经干细胞由患者自身成纤维细胞经核移植、分化而来，其遗传物质与患者自身细胞的遗传物质基本一致（核基因来自患者，仅修正了致病基因），不会被免疫系统识别为“外来异物”，因此不会引起免疫排斥反应。（4）我国对“胚胎干细胞用于生殖性克隆（如发育成胎儿）”持禁止态度，坚持伦理监督与科学规范，强调胚胎干细胞研究需遵循：禁止生殖性克隆人，坚持四不原则（不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验）；允许治疗性克隆研究，以攻克疾病为目的，同时进行严格的伦理监管，确保技术应用符合伦理道德与法律规范。
24.（1）逆转录　相同　不同　琼脂糖凝胶电泳（或电泳）　（2）Ⅰ.DNA连接　复制起点　Ⅱ.T-DNA　促进正、反向目的片段（干扰片段）的转录，得到足量的相应RNA分子　（3）使携带干扰片段（目的片段）的T-DNA整合到受体细胞染色体DNA上　再分化　（4）野生型（或非转基因）　降低
解析：（1）提取野生型黑麦草叶片全部mRNA，通过逆转录过程合成cDNA。根据cDNA序列选取合适的片段，由于正反向的D基因片段的碱基序列相同，因而设计正、反向目的片段的上下游的引物和限制酶切位点是不相同的，正向片段和反向片段引物的扩增序列相同，即含有相同的限制酶切序列，进而可以使目的片段定向插入载体的特定位置。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，切下目的条带回收后与载体在DNA连接酶的作用下实现连接，此后可用于正、反目的片段的扩增。（2）Ⅰ.对含有正向片段的克隆载体和反向片段的克隆载体分别进行双酶切，将回收片段与经相同酶切的中间载体用DNA连接酶进行连接，获得含有干扰片段的重组中间载体；中间载体需有复制起点，这样可以使干扰片段能在受体细胞中稳定存在。Ⅱ.将干扰片段和超表达启动子插入Ti质粒的T-DNA中得到D基因的表达干扰载体，进而可使目的基因转移到受体细胞的染色体DNA上，插入的超表达启动子能促进正、反向目的片段（干扰片段）的转录，进而可得到足量的相应RNA分子，用于抑制后续的翻译过程，进而使黑麦草中木质素含量下降。（3）利用农杆菌转化法将目的基因表达载体导入到黑麦草细胞中，即将黑麦草愈伤组织在菌液中浸没5 min，先置于无菌滤纸上吸去多余的菌液，再转入无菌水浸润的滤纸上共培养3天，共培养的目的是使携带干扰片段（目的片段）的T-DNA整合到受体细胞（黑麦草愈伤组织细胞）染色体DNA上，从而保证目的基因在黑麦草细胞中稳定存在。筛选得到的愈伤组织通过再分化过程，产生胚状体，进而培育得到再生植株，即转基因植株。（4）对转基因植株与野生型（或非转基因）植株进行木质素含量测定与分析，筛选保留木质素含量显著降低的植株，说明在该转基因植株中目的基因起到了应有的作用，因而需要将该植株保留。
25.（1）①磷酸二酯　②使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸　两者均只有一个条带，但前者的条带分子量大，后者的条带分子量小　（2）供体　去核的MⅡ期卵母　（3）早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移　（4）ETS1基因、mRNA、ETS1蛋白　是否出现SLE症状
解析：（1）①Cas9蛋白能切割DNA分子的特定序列，这与限制酶的功能相同，二者都是作用于DNA分子的磷酸二酯键。②在PCR技术中，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，从而启动DNA的复制过程。当基因未被敲除时，目标基因序列完整，PCR扩增产物长度较长；而基因敲除纯合细胞系中，目标基因部分序列被切除，PCR扩增产物长度更短。所以对PCR扩增产物进行电泳，未敲除细胞出现一条分子量比较大的条带，基因敲除纯合细胞系出现一条分子量比较小的条带，前者移动速度慢，后者移动速度快。（2）在重构胚的获得过程中，通常将基因敲除的纯合细胞作为供体细胞，植入去核的MⅡ期卵母细胞中获得重构胚，可以利用物理法（如电刺激）或化学法（如钙离子载体、乙醇等）激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程。（3）胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。（4）从分子水平上检测，可检测ETS1基因敲除狼疮样猪的ETS1基因、RNA（转录水平）、ETS1蛋白（翻译水平）等分子。因为ETS1基因缺失可引起系统性红斑狼疮（SLE），所以通过观察是否出现系统性红斑狼疮（SLE）症状的方法，来确定ETS1基因敲除狼疮样猪是否制备成功。
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