资源简介

1．2．1 微生物的基本培养技术（分层作业）
基础巩固+能力提升+拓展培优 三维训练
（限时：20min）
知识点1 培养基的配制
1．下列关于培养基配制的叙述，错误的是（ ）
A．常用固体培养基对微生物进行分离、纯化和鉴定
B．固体培养基中的琼脂既是凝固剂，也提供碳源和氮源
C．培养有特殊生长条件需求的微生物时，要对培养基做相应调整
D．无论是固体培养基还是液体培养基，配制时都要加水
【答案】B
【解析】A、不同培养基的用途不同，如在固体培养基上可形成单个菌落从而实现微生物的分离、纯化和鉴定，A正确；
B、固体培养基中加入的琼脂不能被微生物分解利用，故琼脂不能提供额外的碳源和氮源，B错误；
C、对有特殊生长条件需求的微生物要对培养基做调整，如培养乳酸杆菌时需要在培养基中加入维生素，C正确；
D、培养基中都含有碳源、氮源、无机盐和水，无论是固体培养基还是液体培养基，配制时都要加水，D正确。
故选B。
2．不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养物质的描述，不正确的是（ ）
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B．碳源物质也为该微生物提供能量
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D．水是该微生物的营养要素之一
【答案】B
【解析】A、培养基中的氮源物质可以为该微生物提供必要的氮素，A正确；
B、以CO2为唯一碳源的自养微生物，CO2不能为其提供能量，B错误；
C、无机盐可以为微生物提供碳、氮以外的重要元素，是该微生物不可缺少的营养物质，C正确；
D、水是生物体新陈代谢不可缺少的物质，是该微生物的营养要素之一，D正确。
故选B。
3．牛肉膏蛋白胨培养基常用于培养细菌，马铃薯培养基常用于培养酵母菌。下列关于这两种培养基的说法正确的是（ ）
A．牛肉膏只提供碳源，蛋白胨只提供氮源
B．马铃薯培养基中缺少氮源和无机盐
C．这两种培养基所培养微生物的同化类型均为异养型
D．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
【答案】C
【解析】A、牛肉膏可以提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素等，蛋白胨可以提供碳源、氮源、维生素等，A错误；
B、马铃薯培养基是天然培养基，营养成分比较全面，不缺氮源和无机盐，B错误；
C、两种生物都不能自己合成有机物，属于异养型生物，C正确；
D、固体培养基中的凝固剂无法在常温下溶于水，D错误。
故选C。
4．下表为1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成。下列叙述错误的是（　　）
组分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O
含量 5.0g 10.0g 5.0g 定容至1000mL
A．蛋白胨为微生物生长提供的主要营养是碳源、氮源和维生素等
B．该培养基灭菌可采用高压蒸汽杀死其中所有的微生物
C．若用该培养基倒平板，培养基中应加入适量的琼脂
D．若用该培养基培养大肠杆菌应将培养基的pH调至酸性
【答案】D
【解析】A、蛋白胨中含有多种有机物，其主要为微生物生长提供主要营养是碳源、氮源和维生素等，A正确；
B、该培养基灭菌可采用高压蒸汽灭菌杀死其中所有的微生物，包括芽孢和孢子，B正确；
C、若用该培养基倒平板，培养基中应加入适量的琼脂，作为凝固剂，C正确；
D、若用该培养基培养大肠杆菌，而大肠杆菌属于细菌，因而应将培养基的pH调至中性或弱碱性，D错误。
故选D。
5.培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列叙述正确的是（ ）
A．培养基中的营养物质浓度越高，越有利于微生物的生长
B．牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏主要为微生物提供氮源、磷酸盐和维生素
C．在培养细菌时一般需要将培养基调至酸性；培养乳酸杆菌时，需要在培养基中加维生素
D．在液体培养基中加琼脂制成的固体培养基，常用于菌种的分离、计数与鉴定
【答案】D
【解析】
A、培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物出现失水过多，甚至出现死亡的现象，对生长不利，A错误；
B、牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏主要提供碳源、磷酸盐和维生素，B错误；
C、不同微生物对培养基中的pH的要求不同，培养细菌时需要将培养基的pH调至中性或微碱性，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，以满足生长所需，C错误；
D、在液体培养基中加琼脂制成的固体培养基，常用于菌种的分离、计数与鉴定，D正确。
故选D。
知识点2 无菌技术
6.下列关于灭菌和消毒的叙述中，不正确的是（　　）
A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子
B．消毒和灭菌实质上是相同的
C．接种环用灼烧法灭菌
D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
【答案】B
【解析】
A、灭菌是指采用强烈的理化因素杀死一定环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子的措施，是彻底杀死，A正确；
B、消毒是一种采用较温和的理化因素杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒物体基本无害的措施，是部分杀灭，故消毒和灭菌实质上不相同， B错误；
C、接种环用灼烧法灭菌，C正确；
D、常用灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法，D正确。
故选 B。
7.下列关于实验室常用的消毒和灭菌方法的叙述，错误的是（ ）
A．接种箱使用前可以用紫外线照射进行消毒
B．接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧灭菌
C．培养皿放入干热灭菌箱采用干热灭菌法灭菌
D．培养基分装到培养皿后进行高压蒸汽灭菌
【答案】D
【解析】
A．接种箱使用前应该用紫外线照射进行消毒处理，A正确；
B．接种环一般用灼烧灭菌，即直接在酒精灯火焰充分燃烧层灼烧灭菌，B正确；
C．实验所用的培养皿可以采用干热灭菌法灭菌，C正确；
D．培养基应该在分装到培养皿前进行高压蒸汽灭菌，D错误。
故选：D。
8．为保证制备的培养基没有杂菌污染，需要进行严格的无菌操作。下列相关叙述正确的是（ ）
A．超净工作台在使用前进行紫外线照射以杀死物体表面或空气中的微生物
B．操作者的双手需要进行灭菌处理，避免操作过程中的污染
C．我们生活中经常用到的煮沸消毒法可以杀死物体表面和内部的所有微生物
D．培养基要进行干热灭菌并冷却到50℃左右时才能在酒精灯火焰附近倒平板
【答案】A
【解析】A、紫外线照射30分钟可以给超净工作台消毒，以杀死物体表面或空气中的微生物，A正确；
B、操作者的双手需要进行消毒处理，不能灭菌，B错误；
C、煮沸消毒法中100°C煮沸5~6分钟只能杀死微生物的营养细胞和部分芽孢，C错误；
D、培养皿等玻璃器皿可采用干热灭菌法灭菌，培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。
故选A。
9.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，研究人员对于无菌技术则围绕着如何避免杂菌污染展开讨论。下列操作中错误的是（　　）
A．灭菌常用方法有湿热灭菌，干热灭菌，灼烧灭菌等
B．在接种箱或超净工作台的使用前，可用紫外线照射30 min来进行消毒
C．若培养皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养皿培养微生物
D．接种环，接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌
【答案】D
【解析】
A、无菌技术包括消毒和灭菌，灭菌常用方法有湿热灭菌，干热灭菌，灼烧灭菌等，A正确；
B、在接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30min来进行消毒，以杀死物体表面或空气中的微生物，B正确；
C、空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生，因此若培养皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养基培养微生物，C正确；
D、接种环，接种针等用具应在酒精灯火焰的外焰部位灼烧灭菌，D错误。
故选D。
10.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ）
A．干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢
B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
【答案】D
【解析】A、灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程，干热灭菌可以杀死微生物的全部芽孢和孢子，A错误；
B、微生物培养过程中若添加抗生素可能会杀死目的菌株，导致实验失败，B错误；
C、湿热灭菌（如高压蒸汽灭菌）是常用的灭菌方法，适用于大多数培养基，C错误 ；
D、可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确。
故选D。
知识点3 微生物的纯培养
11．有关纯化酵母菌的实验操作，叙述错误的是（　　）
A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
B．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
C．每次划线结束，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
【答案】B
【解析】A、为避免杂菌的污染，第一步操作时需要灼烧接种环，A正确；
B、在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于第一区域的划线末端，B错误；
C、每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，保证再次划线的菌种来自上一次划线的末端，C正确；
D、划线结束后，由于接种环上还会残留菌种，因此需要灼烧接种环以杀死接种环上的菌种，从而避免细菌污染环境和感染操作者，D正确。
故选B。
12.在马铃薯琼脂培养基上进行酵母菌纯培养的实验中，描述不正确的是（ ）
A．完成平板划线后立即将接种后的平板和一个未接种的平板倒置培养
B．接种后的平板一般做三组目的是平行重复原则使实验结果准确可靠
C．使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境
D．离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染
【答案】A
【解析】A、完成平板划线后，不能直接倒置培养，而是待菌液被培养基吸收，再将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入相同温度的恒温培养箱中培养，这样可以检测培养基灭菌是否合格，检验实验的合理性，A错误；
B、接种后的平板一般做三组目的是平行重复原则，减小实验误差，使实验结果准确可靠，更具有说服力，B正确；
C、使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，杀死培养基上的微生物，以免污染环境或感染操作者，C正确；
D、离开实验室时一定要彻底将手洗干净、消毒，以防止被微生物感染，D正确。
故选A。
13.下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作说法正确的是（ ）
A．培养酵母菌的试剂和器具都要进行湿热灭菌
B．配制培养基、倒平板、接种均需要在酒精灯火焰旁进行
C．倒好的平板要立即使用，以免表面干燥，影响酵母菌生长
D．对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记
【答案】D
【解析】A、培养酵母菌的试剂通常要进行湿热灭菌，实验器具可以采用干热灭菌或灼烧灭菌，A错误；
B、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，而配培养基不需要在酒精灯的火焰旁进行，因为培养基最后还需要灭菌，B错误；
C、倒好的平板需要冷却后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影响接种后微生物的生长，C错误；
D、由于是倒置培养，对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记，这样便于观察，D正确。
故选D。
14.有关平板划线操作不正确的是（ ）
A．已灭菌的接种环在操作过程中仍需多次灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，再盖上培养皿盖
D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
【答案】B
【解析】A、已灭菌的接种环在每次划完一个区域后都要进行灭菌，进行下一个区域的划线，而划线完毕后仍然需要灭菌，因此在操作过程中仍需多次灭菌，A正确；
B、打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后还需通过火焰灭菌，再塞上棉塞，B错误；
C、将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，再盖上培养皿盖，防止空气中杂菌混入，C正确；
D、最后将平板倒置，以防止盖子水滴落引起污染，同时也有利培养基中水的蒸发，然后放入培养箱培养，D正确。
故选B。
15.下列有关微生物培养技术的操作，正确的是（　　）
A．为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应立即挑取菌种
B．培养基灭菌后，应将pH调到适于微生物生长的范围
C．倒平板时，应将打开的培养皿盖放在一边，防止培养基溅到皿盖上
D．高压蒸汽灭菌锅在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，维持15~30min来灭菌
【答案】D
【解析】
A、为了防止污染，接种前接种环需经灼烧灭菌，但需等接种环冷却后再挑取菌种，防止菌种被高温杀死，A错误；
B、配制培养基后，应先调节pH到适于微生物生长的范围，再进行灭菌，B错误；
C、倒平板时，应将培养皿盖打开一道缝隙后倒入培养基，不能将培养皿盖完全打开放到一边，C错误；
D、高压蒸汽灭菌是将灭菌物件放在盛有适当水的高压蒸汽灭菌锅内，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，保持15～30min，D正确。
故选D。
（限时：10min）
一、选择题
1.下列是对四种微生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的一组是（　　）
微生物种类 乳酸菌 根瘤菌 硝化细菌 衣藻
A 能源 糖类 光能 NH3 光能
B 碳源 糖类 CO2 CO2 CO2
C 氮源 N2 NH3
D 代谢类型 异养厌氧型 自养需氧型 自养需氧型 自养需氧型
A．A B．B C．C D．D
【答案】C
【解析】硝化细菌是化能合成型微生物，其代谢类型为自养需氧型；乳酸菌是厌氧型生物，其代谢类型为异养厌氧型；根瘤菌能固定N2，其代谢类型为异养需氧型；衣藻是光能型生物，其代谢类型为自养需氧型。
A、根瘤菌不能利用光能，A错误；
B、根瘤菌能固氮，但不能自己制造有机物，它的碳源不是CO2，B错误；
C、乳酸菌的氮源是NO3-；根瘤菌能固氮，氮源是N2；硝化细菌的氮源是NH3；衣藻的氮源是NO3-，C正确；
D、根瘤菌的代谢类型是异养需氧型，D错误。
故选C。
2.可采用高压蒸汽灭菌锅进行物品进行湿热灭菌。下列关于高压蒸汽灭菌锅使用及灭菌原理的说法中正确的是（ ）
A．灭菌物品放入灭菌桶后，盖好锅盖，依次旋紧锅盖四周的固定螺栓
B．加热时，须打开排气阀，排除锅内残留的冷空气，当压力表指针回“0”时，再关闭继续加热
C．灭菌后，打开排气阀排气，等压力表指针降至“0”时，打开锅盖，取出灭菌物品
D．高压蒸汽灭菌锅利用高温的热空气，在一定条件下能杀死所有微生物的营养体及芽孢
【答案】B
【解析】A、旋紧锅盖时应按对称方向旋紧四周固定螺栓，A错误；
B、加热时，须打开排气阀，排除锅内残留的冷空气，否则压力达到时温度没有达到指定的温度，B正确；
C、灭菌后，等压力表指针降至“0”时，打开排气阀排气，打开锅盖，取出灭菌物品，C错误；
D、高压蒸汽灭菌，用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌、真菌等微生物，对芽胞、孢子也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法，但是不能杀死所有微生物，D错误。
故选B。
3.如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（ ）
A．①步骤使用的培养基已经灭菌并调节过pH
B．②步骤接种环经灼烧灭菌后应趁热快速沾取菌液
C．③到④过程中，每次接种前后都需要对接种环进行灼烧处理
D．①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行
【答案】B
【解析】
A、①步骤表示倒平板，为防止杂菌污染，在倒平板之前培养基已经灭菌并调节过pH，A正确；
B、②步骤为用接种环沾取菌液，需在酒精灯火焰旁等接种环冷却后沾取，防止温度过高，将菌种杀死，B错误；
C、③到④过程中，每次接种前后都需要对接种环进行灼烧处理，进行纯化，最后一次划线后灼烧，防止污染环境，C正确；
D、①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行，以防被杂菌污染，D正确。
故选B。
4．如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是（ ）
A．正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁
B．甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染
C．丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行
D．培养基应冷却到50℃倒平板是由于该温度下不易受杂菌污染
【答案】D
【解析】图中所示操作分别为：甲→分装，乙→灼烧锥形瓶瓶口，丙→晃匀培养液，丁→倒置存放。平板冷凝后培养皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度较高，倒置平板既便于培养及表面水分蒸发，又能防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
A.倒平板的操作中，需要在无菌环境下操作，首先轻轻振荡灭菌后的锥形瓶，待冷却至50℃左右之后，然后再酒精灯附近灼烧锥形瓶瓶口灭菌，再在酒精灯附近进行倒平板操作，最后待培养基凝固后倒置存放，故正确的操作顺序为丙→乙→甲→丁，A选项正确；
B.培养基分装时，需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，防止瓶口的微生物污染培养基，B选项正确；
C.倒置培养基需要待培养基凝固后再进行，C选项正确；
D.培养皿应冷却到50℃倒平板是此温度下不烫手，便于后续的分装操作，D选项错误。故选D。
5．实验小组采用鲜血琼脂平板，从环境中筛选获得高效降解血红蛋白的菌株，下列操作不恰当的是（　　）
A．取样——应从屠宰场地下水道中取样
B．分离——可用平板划线法对菌株分离
C．筛选——通过溶血圈直径大小比较菌株降解能力
D．培养——利用添加琼脂的培养基大规模培养菌株
【答案】D
【解析】
A、屠宰场地下水道中含有较多血红蛋白等物质，更有可能存在高效降解血红蛋白的菌株，从这里取样是合理的，A不符合题意；
B、平板划线法是常用的分离微生物的方法之一，可以将聚集的菌株逐步稀释分散，从而获得单个菌落实现分离，B不符合题意；
C、高效降解血红蛋白的菌株会使周围的血红蛋白被降解，从而形成溶血圈，溶血圈直径越大，通常说明菌株降解血红蛋白的能力越强，可以通过比较溶血圈直径大小来筛选降解能力强的菌株，C不符合题意；
D、添加琼脂的培养基是固体培养基，固体培养基一般用于分离、鉴定、计数等，大规模培养菌株通常使用液体培养基，这样可以使菌体与营养物质充分接触，更有利于菌体的生长繁殖，D符合题意；
故选D。
二、非选择题
6.在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染，从而保证生产、生活和科研实践的顺利进行，思考并回答下列问题：
(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是 （填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是 。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板 （填“倒置”或“正置”）。
(3)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器材一般采用 的方式灭菌；酵母菌的纯培养的培养基一般采用 的方式灭菌。
(4)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是 。
(5)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原理是紫外线能破坏DNA结构，在照射前，适量喷洒 ，可强化消毒效果。
(6)水厂供应的自来水通常是经过 （填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
【答案】
(1)蛋白胨 不同细菌生长繁殖的最适宜pH是不同的，因此制备培养基时要根据所培养的细菌的不同来调节培养基的pH
(2)倒置
(3)干热灭菌 高压蒸汽灭菌
(4)与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法或高温瞬时消毒法在达到消毒目的的同时，牛奶营养物质损失较少
(5)消毒液
(6)氯气
【分析】
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质;培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对PH、特殊营养物种和氧气的要求。
【详解】
（1）葡萄糖只能为细菌提供碳源，硝酸钠为细菌提供无机盐，而蛋白胨既可以为细菌碳源，也可以为细菌提供氮源;不同的细菌生长繁殖的最适宜pH是不同的，因此制备培养基时要根据所培养的细菌的不同来调节培养基的pH。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板倒置。
（3）玻璃和金属材质的实验器材利用干热灭菌方法灭菌。酵母菌的纯培养的培养基一般采用高压蒸汽灭菌的方式灭菌。
（4）与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法或高温瞬时消毒法在达到消毒目的的同时，牛奶营养物质损失较少。
（5）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原理是紫外线能破坏DNA结构，在照射前，适量喷洒消毒液，可以强化消毒效果。
（6）自来水消毒通常采用“氯气”或“紫外线”等方法。
7.化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业﹐用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见下表。请回答下列问题：
碳源 细胞干重（g/L） S产量（g/L）
葡萄糖 3．12 0．15
淀粉 0．01 0．00
制糖废液 2．30 0．18
实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法是 。
(2)菌株C的生长除需要碳源外，还需要 （答出2点即可）等营养物质。
(3)由实验结果分析可知，菌株C生长的最适碳源是 _____ ；用菌株C生产S的最适碳源是 ；碳源为淀粉时菌株C不能生长，推测可能原因是 。
(4)若以制糖废液作为碳源﹐为进一步确定生产S的最适碳源浓度﹐该小组进行了相关后续实验。请简要写出实验思路： 。
【答案】
(1)干热灭菌
(2)水、 氮源、无机盐、生长因子等
(3)葡萄糖 制糖废液 缺少淀粉酶
(4)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度
【分析】
培养基要满足微生物生长所需的水、无机盐、碳源、氮源，以及微生物对pH、O2、特殊营养物质（如维生素）的需求。
题干分析：以不同碳源（碳源种类）为自变量，细胞干重作为因变量来判断菌体生长情况，S产量也是因变量。若要进一步研究某种碳源的浓度对菌体生长和S产量的影响，则要以该碳源的浓度作为自变量。
【详解】
（1）防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键，对所需的玻璃器皿进行灭菌，常用的方法是干热灭菌。
（2）微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源以及特殊的营养物质，故菌株C的生长除需要碳源外，还需要水、氮源、无机盐、生长因子等营养物质。
（3）分析题干实验结果，以葡萄糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C生长的最适碳源是葡萄糖；以制糖废液为碳源时，S产量最高，故用菌株C生产S的最适碳源是制糖废液。由实验结果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉为碳源时，菌株C不能生长，说明菌株C无法利用淀粉，分析其原因是菌株C不能合成淀粉酶，导致其无法利用淀粉。
（4）以制糖废液作为碳源，进一步确定生产S的最适碳源浓度，可以以碳源浓度作为自变量，不同碳源浓度下S产量作为因变量，实验思路为：设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，从而确定最适碳源浓度。
（限时：8min）
选择题
1.包扎伤口时，需要选用透气的消毒纱布或“创可贴”等敷料。图示研究人员开发的一种活性蓝细菌水凝胶贴片，其有助于慢性伤口的愈合。下列叙述错误的是（　　）
A．该水凝胶无需为活性蓝细菌提供有机营养物质
B．在接种蓝细菌前须将水凝胶灭菌后再调pH
C．长期口腔溃疡的患者，其伤口不适宜使用该种水凝胶贴片
D．水凝胶贴片开发过程需考虑蓝细菌的储存耐久性等问题
【答案】B
【解析】蓝细菌细胞中没有真正的细胞核，因而为原核生物，细胞中含有叶绿素和藻蓝素，能吸收光能，因而可进行光合作用产生氧气，图示中创可贴加入蓝细菌的目的就是利用了蓝细菌在光下产生氧气的功能；包扎伤口时，需要选用透气的消毒纱布或“创可贴”等敷料，可以避免厌氧菌无氧呼吸产生有毒物质。
A、蓝细菌为自养型生物，可通过光合作用合成有机物，该水凝胶无需为活性蓝细菌提供有机营养物质，A正确；
B、在接种蓝细菌前须将水凝胶调pH至中性或弱碱性后再灭菌，B错误；
C、口腔中无光照，水凝胶贴片中的蓝细菌不能进行光合作用，因此长期口腔溃疡的患者，其伤口不适宜使用该种水凝胶贴片，C正确；
D、水凝胶贴片开发过程需考虑蓝细菌的储存耐久性、避光保存等问题，D正确。
故选B。
2.溶磷菌能够将土壤中的难溶性磷转化为植物可吸收的可溶性磷。研究人员将适量溶磷菌接入已灭菌的含难溶磷的液体培养基中培养，每天取样测定溶磷量和pH变化情况，结果见下表。下列选项错误的是（　　）
项目/时间 1 2 3 4 5 6 7 8
溶磷量（mg/L） 210 508 700 800 701 690 680 550
pH 5.1 4.2 4.2 4.3 4.5 4.7 4.9 5.1
A．磷是植物生长发育的必需元素，可参与构成DNA、ATP、磷脂等化合物
B．据表中结果可推测溶磷菌分解难溶性磷的能力呈现先增强后减弱的趋势
C．根据pH变化，推测溶磷菌通过分泌碱性代谢产物促进难溶性磷的分解
D．将溶磷菌制成微生物肥料施用，有助于增进土壤肥力，改良土壤结构
【答案】C
【解析】A、磷是构成DNA、ATP、磷脂等化合物的必需元素，磷是植物生长发育的必需元素，A正确；
B、依据表格数据可知，溶磷量先升高后降低，说明溶磷菌分解难溶磷的能力呈现先增强后减弱的趋势，B正确；
C、依据表格数据可知，在加入溶磷菌后溶液pH迅速降低，溶磷量开始增加，随着pH回升，溶磷量就开始降低，据此推测溶磷菌可能通过产生酸性代谢产物分解难溶性磷，C错误；
D、土壤中的磷大部分以难被植物吸收利用的无效态如磷酸钙等难溶态存在，而溶磷菌可将难溶态磷分解为可被植物直接利用的可溶性磷，故可将其制成微生物菌肥促进植物对磷元素的吸收，提高土壤的肥力，改良土壤结构，D正确。
故选C。
3．科研人员发现某个敞口被真菌A污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，但真菌A附近没有细菌生长。科研人员认为这可能是真菌A产生了抑菌物质。为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（ ）
A．过程①使用了平板划线法接种真菌A，该过程中接种环至少要灼烧4次
B．过程②应取平板a中的单菌落置于培养基b中，其主要目的是选择培养
C．真菌A在培养基b中培养时，培养基中应加入琼脂
D．若仅乙、丙组出现了抑菌圈，则推测该抑菌物质可能不抑制大肠杆菌的生长
【答案】D
【解析】A、因为每一次划线之前需灭菌，最后一次也需灭菌。平板a中有4个区域平行线则需要灼烧5次，A错误；
B、过程②应取平板a中的单菌落置于培养基b中，其主要目的是扩大培养，B错误；
C、培养基b是液体培养基，不应加入琼脂，C错误；
D、若仅乙、丙出现抑菌圈，则推测抑菌物质可能不抑制大肠杆菌的生长，D正确。
故选D。
非选择题
4.人们按照各种生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，即液体培养基或固体培养基。下表为一种培养基的配方，试根据表中的成分回答下列问题：
成分 Ca（NO3）2 KH2PO4 KCl MgSO4 Fe（NO3）2 Mo 蒸馏水
含量 1 g 0.25 g 0.12 g 0.30 g 0.30 g 极少 1000 mL
若上述培养基用于植物培养，在培养的初期植物出现萎蔫现象，最可能的原因是 。可采用的最简单的有效措施是 。若培养一段时间后，检测到培养基中留存的NO3-较少而Ca2+等离子较多，这一现象与细胞膜的
功能有关。
（2）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 及特殊生长因子。
（3）分析表中成分发现，此培养基若用于培养微生物，则只能培养的微生物代谢类型是 。培养基中含有的营养物质有 类，分别是 。如果不慎将过量的NaCl加入培养基中，还不想浪费此培养基，则可加入 ，用于培养金黄色葡萄球菌。
（4）若此培养基用于菌种的鉴定，应该增加的成分是 。若表中除去Ca（NO3）2、Fe（NO3）2成分，该培养基则可用于培养 。
【答案】
培养基浓度过高 加水稀释 选择透过性
水、无机盐、碳源、氮源（缺一不得分）
自养型 三 无机盐、水和氮源 含碳有机物
琼脂 固氮微生物
【分析】
培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】
（1）若上述培养基用于植物培养，在培养的初期植物出现萎蔫现象，说明植物失水，最可能的原因是培养基浓度过高，则可采用的最简单的有效措施是加水稀释。若培养一段时间后，检测到培养基中留存的NO3-较少而Ca2+等离子较多，说明植物吸收NO3-较多而吸收Ca2+较少，即细胞膜具有选择透过性。
（2）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子。
（3）分析表中成分发现，培养基中含有的营养物质有三类，分别是无机盐、水和氮源，不含有机碳源，因此此培养基只能培养自养型微生物。如果不慎将过量的NaCl加入培养基中，还不想浪费此培养基，则可加入含碳有机物，用于培养金黄色葡萄球菌。
（4）鉴定菌种应该用固体培养基，因此若此培养基用于菌种的鉴定，应该增加凝固剂--琼脂。若表中除去Ca（NO3）2、Fe（NO3）2成分，即去除氮源，该培养基则可用于培养固氮微生物。
5.经人工诱变后，部分细菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了营养缺陷型菌株，这在工业生产上有较广阔的应用前景。如图是实验人员利用影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程，请回答下列问题：
(1)倒平板的适宜温度是50℃左右，待平板冷凝后，要将平板倒置，这样做的目的是 。
(2)进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至 （填“基本”或“完全”）培养基上，原因是 。
(3)利用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取 （填“菌落A”或“菌落B”）进行接种培养，并进一步鉴定。
(4)科研人员用放射线处理目的菌获得两个突变株C和D，然后对突变株C和D进行实验，结果如表所示。
接种的菌种 一般培养基 实验处理及结果
C 不生长 添加营养物质甲，能生长
D 不生长 添加营养物质乙，能生长
C+D 能生长 不添加营养物质甲、乙，都能生长
①突变株C不能在一般培养基上生长的原因最可能是 。
②将突变株C和D混合在一起，接种于一般培养基上，都能生长的最可能的原因是 。
【答案】
(1)防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，又可避免培养基中的水分过快蒸发
(2)基本 防止基本培养基中混入特定氨基酸
(3)菌落A
(4) 突变株C缺乏合成营养物质甲所需要的酶
突变株D可以提供突变株C生长需要的营养物质甲，突变株C可以提供突变株D生长需要的营养物质乙
【分析】
培养基的概念及营养构成：（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质；（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】
（1）倒平板的适宜温度是50℃左右，待平板冷凝后，要将平板倒置，平板倒置的好处是一方面可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，另一方面也可避免培养基中的水分过快蒸发。
（2）进行过程②培养时，为防止特定氨基酸混入基本培养基中，应先将丝绒布转印至基本培养基上，再转接至完全培养基上。
（3）利用影印法培养可以使不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取完全培养基中的菌落A进行接种培养，并进一步鉴定。
（4）由表格分析可知，突变株C的生长依赖于营养物质甲，突变株C不能在一般培养基上生长的原因最可能是突变株C缺乏合成营养物质甲所需要的酶；突变株C的生长依赖物质甲，而突变株D的生长依赖于营养物质乙，不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株C为突变株D提供了营养物质乙，突变株D为突变株C提供了营养物质甲。
2 / 21．2．1 微生物的基本培养技术（分层作业）
基础巩固+能力提升+拓展培优 三维训练
（限时：20min）
知识点1 培养基的配制
1．下列关于培养基配制的叙述，错误的是（ ）
A．常用固体培养基对微生物进行分离、纯化和鉴定
B．固体培养基中的琼脂既是凝固剂，也提供碳源和氮源
C．培养有特殊生长条件需求的微生物时，要对培养基做相应调整
D．无论是固体培养基还是液体培养基，配制时都要加水
2．不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养物质的描述，不正确的是（ ）
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B．碳源物质也为该微生物提供能量
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D．水是该微生物的营养要素之一
3．牛肉膏蛋白胨培养基常用于培养细菌，马铃薯培养基常用于培养酵母菌。下列关于这两种培养基的说法正确的是（ ）
A．牛肉膏只提供碳源，蛋白胨只提供氮源
B．马铃薯培养基中缺少氮源和无机盐
C．这两种培养基所培养微生物的同化类型均为异养型
D．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
4．下表为1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成。下列叙述错误的是（　　）
组分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O
含量 5.0g 10.0g 5.0g 定容至1000mL
A．蛋白胨为微生物生长提供的主要营养是碳源、氮源和维生素等
B．该培养基灭菌可采用高压蒸汽杀死其中所有的微生物
C．若用该培养基倒平板，培养基中应加入适量的琼脂
D．若用该培养基培养大肠杆菌应将培养基的pH调至酸性
5.培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。下列叙述正确的是（ ）
A．培养基中的营养物质浓度越高，越有利于微生物的生长
B．牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏主要为微生物提供氮源、磷酸盐和维生素
C．在培养细菌时一般需要将培养基调至酸性；培养乳酸杆菌时，需要在培养基中加维生素
D．在液体培养基中加琼脂制成的固体培养基，常用于菌种的分离、计数与鉴定
知识点2 无菌技术
6.下列关于灭菌和消毒的叙述中，不正确的是（　　）
A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子
B．消毒和灭菌实质上是相同的
C．接种环用灼烧法灭菌
D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
7.下列关于实验室常用的消毒和灭菌方法的叙述，错误的是（ ）
A．接种箱使用前可以用紫外线照射进行消毒
B．接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧灭菌
C．培养皿放入干热灭菌箱采用干热灭菌法灭菌
D．培养基分装到培养皿后进行高压蒸汽灭菌
8．为保证制备的培养基没有杂菌污染，需要进行严格的无菌操作。下列相关叙述正确的是（ ）
A．超净工作台在使用前进行紫外线照射以杀死物体表面或空气中的微生物
B．操作者的双手需要进行灭菌处理，避免操作过程中的污染
C．我们生活中经常用到的煮沸消毒法可以杀死物体表面和内部的所有微生物
D．培养基要进行干热灭菌并冷却到50℃左右时才能在酒精灯火焰附近倒平板
9.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，研究人员对于无菌技术则围绕着如何避免杂菌污染展开讨论。下列操作中错误的是（　　）
A．灭菌常用方法有湿热灭菌，干热灭菌，灼烧灭菌等
B．在接种箱或超净工作台的使用前，可用紫外线照射30 min来进行消毒
C．若培养皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养皿培养微生物
D．接种环，接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌
10.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ）
A．干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢
B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
知识点3 微生物的纯培养
11．有关纯化酵母菌的实验操作，叙述错误的是（　　）
A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
B．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
C．每次划线结束，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
12.在马铃薯琼脂培养基上进行酵母菌纯培养的实验中，描述不正确的是（ ）
A．完成平板划线后立即将接种后的平板和一个未接种的平板倒置培养
B．接种后的平板一般做三组目的是平行重复原则使实验结果准确可靠
C．使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境
D．离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染
13.下列关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作说法正确的是（ ）
A．培养酵母菌的试剂和器具都要进行湿热灭菌
B．配制培养基、倒平板、接种均需要在酒精灯火焰旁进行
C．倒好的平板要立即使用，以免表面干燥，影响酵母菌生长
D．对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记
14.有关平板划线操作不正确的是（ ）
A．已灭菌的接种环在操作过程中仍需多次灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，再盖上培养皿盖
D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
15.下列有关微生物培养技术的操作，正确的是（　　）
A．为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应立即挑取菌种
B．培养基灭菌后，应将pH调到适于微生物生长的范围
C．倒平板时，应将打开的培养皿盖放在一边，防止培养基溅到皿盖上
D．高压蒸汽灭菌锅在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，维持15~30min来灭菌
（限时：10min）
一、选择题
1.下列是对四种微生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的一组是（　　）
微生物种类 乳酸菌 根瘤菌 硝化细菌 衣藻
A 能源 糖类 光能 NH3 光能
B 碳源 糖类 CO2 CO2 CO2
C 氮源 N2 NH3
D 代谢类型 异养厌氧型 自养需氧型 自养需氧型 自养需氧型
A．A B．B C．C D．D
2.可采用高压蒸汽灭菌锅进行物品进行湿热灭菌。下列关于高压蒸汽灭菌锅使用及灭菌原理的说法中正确的是（ ）
A．灭菌物品放入灭菌桶后，盖好锅盖，依次旋紧锅盖四周的固定螺栓
B．加热时，须打开排气阀，排除锅内残留的冷空气，当压力表指针回“0”时，再关闭继续加热
C．灭菌后，打开排气阀排气，等压力表指针降至“0”时，打开锅盖，取出灭菌物品
D．高压蒸汽灭菌锅利用高温的热空气，在一定条件下能杀死所有微生物的营养体及芽孢
3.如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（ ）
A．①步骤使用的培养基已经灭菌并调节过pH
B．②步骤接种环经灼烧灭菌后应趁热快速沾取菌液
C．③到④过程中，每次接种前后都需要对接种环进行灼烧处理
D．①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行
4．如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是（ ）
A．正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁
B．甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染
C．丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行
D．培养基应冷却到50℃倒平板是由于该温度下不易受杂菌污染
5．实验小组采用鲜血琼脂平板，从环境中筛选获得高效降解血红蛋白的菌株，下列操作不恰当的是（　　）
A．取样——应从屠宰场地下水道中取样
B．分离——可用平板划线法对菌株分离
C．筛选——通过溶血圈直径大小比较菌株降解能力
D．培养——利用添加琼脂的培养基大规模培养菌株
二、非选择题
6.在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染，从而保证生产、生活和科研实践的顺利进行，思考并回答下列问题：
(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是 （填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是 。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板 （填“倒置”或“正置”）。
(3)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器材一般采用 的方式灭菌；酵母菌的纯培养的培养基一般采用 的方式灭菌。
(4)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是 。
(5)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原理是紫外线能破坏DNA结构，在照射前，适量喷洒 ，可强化消毒效果。
(6)水厂供应的自来水通常是经过 （填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
7.化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业﹐用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见下表。请回答下列问题：
碳源 细胞干重（g/L） S产量（g/L）
葡萄糖 3．12 0．15
淀粉 0．01 0．00
制糖废液 2．30 0．18
实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法是 。
(2)菌株C的生长除需要碳源外，还需要 （答出2点即可）等营养物质。
(3)由实验结果分析可知，菌株C生长的最适碳源是 _____ ；用菌株C生产S的最适碳源是 ；碳源为淀粉时菌株C不能生长，推测可能原因是 。
(4)若以制糖废液作为碳源﹐为进一步确定生产S的最适碳源浓度﹐该小组进行了相关后续实验。请简要写出实验思路： 。
（限时：8min）
一、选择题
1.包扎伤口时，需要选用透气的消毒纱布或“创可贴”等敷料。图示研究人员开发的一种活性蓝细菌水凝胶贴片，其有助于慢性伤口的愈合。下列叙述错误的是（　　）
A．该水凝胶无需为活性蓝细菌提供有机营养物质
B．在接种蓝细菌前须将水凝胶灭菌后再调pH
C．长期口腔溃疡的患者，其伤口不适宜使用该种水凝胶贴片
D．水凝胶贴片开发过程需考虑蓝细菌的储存耐久性等问题
2.溶磷菌能够将土壤中的难溶性磷转化为植物可吸收的可溶性磷。研究人员将适量溶磷菌接入已灭菌的含难溶磷的液体培养基中培养，每天取样测定溶磷量和pH变化情况，结果见下表。下列选项错误的是（　　）
项目/时间 1 2 3 4 5 6 7 8
溶磷量（mg/L） 210 508 700 800 701 690 680 550
pH 5.1 4.2 4.2 4.3 4.5 4.7 4.9 5.1
A．磷是植物生长发育的必需元素，可参与构成DNA、ATP、磷脂等化合物
B．据表中结果可推测溶磷菌分解难溶性磷的能力呈现先增强后减弱的趋势
C．根据pH变化，推测溶磷菌通过分泌碱性代谢产物促进难溶性磷的分解
D．将溶磷菌制成微生物肥料施用，有助于增进土壤肥力，改良土壤结构
3.科研人员发现某个敞口被真菌A污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，但真菌A附近没有细菌生长。科研人员认为这可能是真菌A产生了抑菌物质。为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（ ）
A．过程①使用了平板划线法接种真菌A，该过程中接种环至少要灼烧4次
B．过程②应取平板a中的单菌落置于培养基b中，其主要目的是选择培养
C．真菌A在培养基b中培养时，培养基中应加入琼脂
D．若仅乙、丙组出现了抑菌圈，则推测该抑菌物质可能不抑制大肠杆菌的生长
二、非选择题
4.人们按照各种生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，即液体培养基或固体培养基。下表为一种培养基的配方，试根据表中的成分回答下列问题：
成分 Ca（NO3）2 KH2PO4 KCl MgSO4 Fe（NO3）2 Mo 蒸馏水
含量 1 g 0.25 g 0.12 g 0.30 g 0.30 g 极少 1000 mL
若上述培养基用于植物培养，在培养的初期植物出现萎蔫现象，最可能的原因是 。可采用的最简单的有效措施是 。若培养一段时间后，检测到培养基中留存的NO3-较少而Ca2+等离子较多，这一现象与细胞膜的
功能有关。
（2）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 及特殊生长因子。
（3）分析表中成分发现，此培养基若用于培养微生物，则只能培养的微生物代谢类型是 。培养基中含有的营养物质有 类，分别是 。如果不慎将过量的NaCl加入培养基中，还不想浪费此培养基，则可加入 ，用于培养金黄色葡萄球菌。
（4）若此培养基用于菌种的鉴定，应该增加的成分是 。若表中除去Ca（NO3）2、Fe（NO3）2成分，该培养基则可用于培养 。
5.经人工诱变后，部分细菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了营养缺陷型菌株，这在工业生产上有较广阔的应用前景。如图是实验人员利用影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程，请回答下列问题：
(1)倒平板的适宜温度是50℃左右，待平板冷凝后，要将平板倒置，这样做的目的是 。
(2)进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至 （填“基本”或“完全”）培养基上，原因是 。
(3)利用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取 （填“菌落A”或“菌落B”）进行接种培养，并进一步鉴定。
(4)科研人员用放射线处理目的菌获得两个突变株C和D，然后对突变株C和D进行实验，结果如表所示。
接种的菌种 一般培养基 实验处理及结果
C 不生长 添加营养物质甲，能生长
D 不生长 添加营养物质乙，能生长
C+D 能生长 不添加营养物质甲、乙，都能生长
①突变株C不能在一般培养基上生长的原因最可能是 。
②将突变株C和D混合在一起，接种于一般培养基上，都能生长的最可能的原因是 。
2 / 21．2．1 微生物的基本培养技术 （分层作业）
基础巩固+能力提升+拓展培优 三维训练
（限时：20min）
1.B 2.B 3.C 4.D 5.D 6.B 7.D 8.A
9.D 10.D 11.B 12.A 13.D 14.B 15.D
（限时：10min）
C 2.B 3.B 4.D 5.D
6.【答案】
(1)蛋白胨 不同细菌生长繁殖的最适宜pH是不同的，因此制备培养基时要根据所培养的细菌的不同来调节培养基的pH
(2)倒置
(3)干热灭菌 高压蒸汽灭菌
(4)与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法或高温瞬时消毒法在达到消毒目的的同时，牛奶营养物质损失较少
(5)消毒液
(6)氯气
7.【答案】
(1)干热灭菌
(2)水、 氮源、无机盐、生长因子等
(3)葡萄糖 制糖废液 缺少淀粉酶
(4)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度
（限时：8min）
1.B 2.C 3.D
4.【答案】（1）培养基浓度过高 加水稀释 选择透过性
（2）水、无机盐、碳源、氮源（缺一不得分）
（3）自养型 三 无机盐、水和氮源 含碳有机物
（4）琼脂 固氮微生物
5.【答案】(1)防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，又可避免培养基中的水分过快蒸发
(2)基本 防止基本培养基中混入特定氨基酸
(3)菌落A
(4) 突变株C缺乏合成营养物质甲所需要的酶
突变株D可以提供突变株C生长需要的营养物质甲，突变株C可以提供突变株D生长需要的营养物质乙
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