资源简介

1．2．2 微生物的选择培养和计数 （分层作业）
基础巩固+能力提升+拓展培优 三维训练
（限时：20min）
1.C 2.B 3.D 4.B 5.D 6.A 7.B 8.D
9.D 10.D 11.B 12.A 13.B 14.D 15.C
（限时：10min）
1.D 2.B 3.D 4.B 5.D
6.【答案】
(1)以尿素为唯一氮源 酚红
(2) 45mL无菌水 摇匀(振荡、混匀) 涂布器 3
(3倒置 恒温培养 菌落数 2.48×108
7.【答案】
(1) 稀释涂布平板法 B
(2) 6．4×107
(3)防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
(4)B 5/五
（限时：8min）
1.C 2.A 3.C
4.【答案】
（1）敌敌畏 液体 碳源、氮源（和维生素）
（2）常年施用敌敌畏 平板划线法
（3）0.2 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
5.【答案】
(1) KNO3 防止皿盖上的水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快挥发
(2)设置重复实验，取平均值，减少实验误差 蓝
(3)其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低（合理即可）
(4)①探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响
②投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢（合理即可）
2 / 21．2．2 微生物的选择培养和计数（分层作业）
基础巩固+能力提升+拓展培优 三维训练
（限时：20min）
知识点1 选择培养基
1．下列选项中，不是使用选择培养基培养微生物的目的的是（ ）
A．除去其他微生物
B．使需要的微生物大量繁殖
C．通过表现特殊性状，与其他微生物相区别
D．可以增加要培养的微生物的浓度
2．地膜的主要成分是聚乙烯，化学式是（C2H3）n。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示操作。下列说法正确的是（ ）
A．覆盖地膜的土壤在富集培养前需要进行湿热灭菌处理
B．X培养基以聚乙烯为唯一碳源，属于选择培养基
C．降解地膜最高效的是细菌①，可挑选①中的菌种接种到Y培养基上
D．Y培养基属于固体培养基，其pH一般调至中性或弱酸性
3．研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如下图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（ ）
A．第0.5天时取样、蛋白胨氮源培养基
B．第1天时取样、蛋白胨氮源培养基
C．第2天时取样、角蛋白氮源培养基
D．第4天时取样、角蛋白氮源培养基
4.隐甲藻是一种好氧、异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一，从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述错误的是（　　）
A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量
知识点2 微生物的选择培养
5.科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株， 旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（ ）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
6.下列有关涂布平板操作的叙述，不正确的是（　　）
A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红
B．取少量菌液滴加在培养基表面
C．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10秒再用
D．涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀
7.如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，下列相关叙述正确的是（ ）
A．图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同
B．图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数
C．图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器
D．图乙每次划线应从同一起点开始以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落
8.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制的培养基，成功筛选到高效降解化合物A的细菌（目的菌），实验的主要步骤如下图所示。下列有关叙述错误的是（　　）
A．该培养基中化合物A可能既作碳源又作氮源
B．实验需要振荡培养，由此推测目的菌呼吸作用的类型是有氧呼吸
C．培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量显著降低的培养液接种
D．若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用平板划线法进行计数
知识点3 微生物的数量测定
9．下列关于菌种计数方法的叙述，错误的是（　　）
A．当样品的稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落
B．应该选取培养基表面菌落数目稳定时的记录作为有效数字
C．在某一浓度下至少涂布三个平板，以它们的平均值作为统计结果
D．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数
10.稀释涂布平板法不仅是分离和纯化微生物的重要方法，也是测定微生物数量的重要方法。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在统计数据时应（ ）
A．随机抽取某个稀释度的培养基，统计菌落数
B．将不同稀释度的3个培养基上的菌落数求和
C．将相同稀释度的全部培养基上的菌落进行计数
D．随机抽取相同稀释度的3个培养基统计菌落数后求平均值
11.尿素是一种重要的农业肥料，尿素分解菌可合成脲酶，利用以尿素为唯一氮源的选择培养基可从土壤中分离尿素分解菌并进行计数，科研人员取0.1g土壤分别稀释103~107倍，将0.1mL不同稀释倍数的土壤稀释液接种在固体培养基上，在相同的培养条件下得到如下数据。下列叙述正确的是（ ）
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数/个 1号平板 478 367 270 26 5
2号平板 496 354 268 20 8
3号平板 509 332 272 29 3
A．利用稀释涂布平板法可将稀释液中的菌体完全分离，一个菌落对应一个菌体
B．该实验中稀释倍数为105的平板菌落数为30~300最适合用来统计活菌数
C．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌均为尿素分解菌
D．若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，则统计结果一般比实际活菌数少
知识点4 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
12.下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（　　）
A．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂不变红
B．分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生NH3和CO2
C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数为30~300的平板进行计数
D．将实验组和对照组平板倒置，30~37℃恒温培养1~2d
13.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”操作的叙述中，错误的是（　　）
A．利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度
B．若要判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照
C．该实验每隔24h统计一次菌落数目，并以菌落数目稳定时的记录作为结果
D．用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红
14.在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从对应106培养基上筛选出大约120个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落，下列有关叙述，出现科学性错误的是（ ）　　
A．可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染
B．让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学无误
C．甲同学出现这种结果的原因可能是土样不同，也可能是操作过程出了问题
D．A、B选项的实验思路都遵循了实验的对照原则和平行重复原则
15.某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。下列关于土壤中分解尿素细菌的分离和计数的叙述，正确的是（ ）
A．分解尿素的细菌是以尿素的分解产物CO2作为碳源的
B．倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定
D．若实验组菌落平均数为57个/平板，空白对照平板上有3个菌落，则本组菌落数的平均值为54个/平板
（限时：10min）
选择题
1．下列有关生物学实验操作和结果分析的叙述中，错误的是（　　）
A．用无菌涂布器将大肠杆菌涂抹在固体培养基上后放入含抗生素的圆形滤纸片，连续培养几代后抑菌圈直径变小
B．探究土壤微生物对落叶的分解作用，实验组需要对土壤灭菌以排除土壤微生物作用，同时要尽可能避免土壤理化性质的改变
C．在以纤维素为唯一碳源的刚果红培养基中，若出现以某些菌为中心的透明圈，即为纤维素分解菌
D．在土壤中尿素分解菌的分离与计数实验中，用稀释涂布平板法进行尿素分解菌计数时，结果往往比实际值高
2.如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的示意图，下列有关叙述错误的是（ ）
A．在配制步骤②③的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌
B．步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
C．步骤④挑取③中不同的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力
D．步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单菌落
3.配制伊红-亚甲蓝琼脂培养基可用于鉴定大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽。下图为检测大肠杆菌对某种抗生素的敏感性进行的实验，图示培养两天后所见结果(①②③为加有不同浓度抗生素的圆纸片)。下列相关叙述正确的是（ ）
A．接种用的方法是平板划线法
B．实验表明不同种的大肠杆菌对同一种抗生素敏感性不同
C．①②③周围透明圈的大小差异可能与培养基的氮源不同有关
D．浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照
4.产脂肪酶细菌可用于含油废水处理，在含有底物的培养基上可分解脂肪形成肉眼可见的透明圈。科研人员用射线照射从土壤中分离的菌株，反复筛选后获得产酶能力提高的菌株。筛选具体流程如图所示，相关叙述正确的是（ ）
A．步骤①取土壤样品灭菌后溶于无菌水中制成菌悬液
B．步骤③中菌落周围的透明圈越大，其脂肪酶活性不一定越高
C．产脂肪酶的细菌进行培养时应放在4℃的恒温箱中培养
D．步骤②的固体平板是以脂肪为唯一碳源和氮源的选择培养基
5．某科研小组欲分离及培养若干种微生物用来处理剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶等湿垃圾。从土壤中筛选淀粉分解菌时，向培养基加碘液染色后，培养基上出现了A、B、C三种菌落，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．可选择菌落B中的微生物用来处理菜根菜叶等湿垃圾
B．实验结束后，合适的菌株被保存下来，其余的可以直接丢弃
C．菌落A的出现说明培养基中混入了淀粉以外的其他碳源
D．该实验用到的接种工具为涂布器，接种前应将其没在盛有酒精的烧杯中
非选择题
6.土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：
（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用 的选择培养基进行分离，并加入 指示剂进行鉴别。
（2）若取土样5g，应加入 配制成稀释10倍的土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如上图所示的不同浓度的土壤溶液，取样稀释前，一定要 以减少误差。将103~107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用 (涂布器/接种环)将菌液分散，每个浓度稀释液至少接种 个平板，以减少实验误差。
（3）将接种的培养皿 (正置/倒置)在37℃的 箱中培养24~48h，观察并统计 ，结果如下表所示。找出合适浓度，推测出每克土样中细菌数为 。
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数(个) >500 367 248 26 18
7.牛奶是适合微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要用巴氏消毒法消毒，以杀死有害微生物。某小组为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行了如图所示操作。请据图回答下列问题：
(1)图1所示方法为 ，若取最终的牛奶稀释液0.1mL在培养基上进行涂布，应选择的工具是图2中的 。
(2)理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为65、63、64，则可以推测每毫升酸奶中所含细菌数为 。
(3)接种操作完成后，需将平板倒置放入培养箱中培养，倒置的目的是不仅能防止水分过快挥发，而且可以 。如果培养基上出现形状、大小、颜色不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。
(4)要进一步分离纯化菌种，应采用图3中 （填字母）所示的划线分离操作，其正确操作过程中，划线工具至少要灼烧 次。
（限时：8min）
一、选择题
1.传统榨菜因含高盐和防腐剂对人类的健康有害，涪陵榨菜集团联合西南大学科研团队，研制出了益生菌榨菜。科研团队从“菌种库”中成功捕获了益生菌，它们不仅可靶向抑制腐败菌生长，还具备解辣、助眠、体重管理等健康功效。该榨菜研发的技术如下表所示，相关说法正确的是（　　）
技术 技术内容
目标益生菌筛选技术 用选择培养基筛选能抑制榨菜腐败的益生菌
益生菌培养技术 益生菌扩大培养
巴氏消毒和益生菌协同技术 巴氏消毒杀灭部分微生物、益生菌代谢产物抑菌
多菌株融合应用技术 将多种不同功能的益生菌进行融合应用
A．筛选目标益生菌时的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基
B．益生菌抑制榨菜中杂菌的主要方式是竞争营养物质
C．多菌株融合需要考虑益生菌的培养条件和菌株之间相互作用
D．将巴氏消毒改进为湿热灭菌可以提高益生菌榨菜的品质
2.莠去津是一种含氮的有机化合物，是广泛使用的除草剂。长期使用莠去津容易对土壤造成污染。实验人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示，已知含过量莠去津的固体培养基不透明。下列叙述正确的是（ ）
A．目的菌能以莠去津为氮源进行增殖，产生有透明带的菌落
B．整个实验过程中无需设置未接种的选择培养基作为空白对照
C．该过程若有3个菌落数为30~300适于计数的平板，可计算土壤中目的菌的数量
D．乙平板的接种方法是平板划线法，接种过程共灼烧6次涂布器
3．某真菌野生型菌株可以在基本培养基上正常生长，但其突变型菌株a、b、c则无法存活，a、b、c三种突变型菌株在不同物质条件下的生长情况如表所示。下列推测成立的是（　　）
菌株类型 a b c a和b
物质条件 基本培养基＋甲硫氨酸、生物素 基本培养基＋苏氨酸、硫胺素 基本培养基＋甲硫氨酸、硫胺素 基本培养基
生长情况 a b c 野生型菌株
A．三种突变型菌株的出现说明基因突变具有不定向性
B．配制基本培养基时应在灭菌后将pH调至酸性或中性
C．菌株a、b混合培养时，两者之间可能发生DNA转移
D．将菌株a、c混合培养，也可以得到野生型菌株
非选择题
4.微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。
（1）已知驯化培养基的成分为蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是 。依照物理性质划分，驯化培养基属于 培养基，其中蛋白胨可提供 （答出2种即可）。
（2）用于筛选的样品应来自 的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为 。
（3）将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的多个相同培养基C，培养24小时后，通过测定培养基中敌敌畏的剩余量，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计某一培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了3个平板培养基D，统计菌落数分别为250、247、253，测得该培养基C中活菌数为1.25×107个/mL，则涂布的菌液Y为 mL。该统计数据往往比活菌的实际数目 （填“多”或“少”），理由是 。
5.反硝化细菌是一类能将硝态氮（-N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，请回答下列问题：
样品采集→富集培养→反硝化细菌检测→稀释涂布→产气实验→菌种鉴定
(1)将1 mL采集的活性污泥样品加入装有9 mL、pH=7.2的磷酸盐缓冲液的100 mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有KNO3 2 g、FeSO4 0.2 g、KH2PO4 1 g、MgSO4 0.5 g、NaCl 2g、CaCO3 5 g，其中为反硝化细菌提供氮源的是 ，富集培养灭菌后待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是 。
(2)将富集后的样品进行梯度稀释后，使用涂布器将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH=6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了 ，放在30 ℃环境中培养2~3天后，挑选周围显 色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
(3)将液体培养基倒入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30 ℃恒温培养5~7 d，观察到小管内有气泡，检测到N2O，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是 。
(4)向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30 ℃，120 r/min摇床振荡培养，24 h后测量-N降解率等指标，结果如图所示。
①本研究的目的是 。
②当投菌量达到5%时，反硝化效果最好，-N降解率和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，-N降解率和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是 （答出一点即可）。
2 / 21．2．2 微生物的选择培养和计数（分层作业）
基础巩固+能力提升+拓展培优 三维训练
（限时：20min）
知识点1 选择培养基
1．下列选项中，不是使用选择培养基培养微生物的目的的是（ ）
A．除去其他微生物
B．使需要的微生物大量繁殖
C．通过表现特殊性状，与其他微生物相区别
D．可以增加要培养的微生物的浓度
【答案】C
【解析】A、利用选择性培养抑制或阻止其他微生物生长，从而除去其他微生物，A正确；B、利用选择性培养基分离特定微生物，目的是允许某种特定微生物生长繁殖，B正确；
通过表现特殊性状，如观察菌落特征与其他微生物相区别，此过程可以不使用选择培养基，C错误；
利用选择性培养基可以增加要培养的微生物的浓度，D正确。
故选C。
2．地膜的主要成分是聚乙烯，化学式是（C2H3）n。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示操作。下列说法正确的是（ ）
A．覆盖地膜的土壤在富集培养前需要进行湿热灭菌处理
B．X培养基以聚乙烯为唯一碳源，属于选择培养基
C．降解地膜最高效的是细菌①，可挑选①中的菌种接种到Y培养基上
D．Y培养基属于固体培养基，其pH一般调至中性或弱酸性
【答案】B
【解析】A、所需菌种来自土壤，不可对覆盖地膜的土壤进行湿热灭菌处理，否则无法获得菌种，A错误；
B、结合题意可知，目标菌种为能分解聚乙烯的菌种，故X培养基中以聚乙烯为唯一的碳源，属于选择培养基，B正确；
C、抑菌圈越大，说明降解地膜的效果越好，故可挑选⑤中的单菌落接种到Y培养基上，C错误；
D、在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，扩大培养一般用液体培养基，D错误。
故选B。
3．研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如下图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（ ）
A．第0.5天时取样、蛋白胨氮源培养基
B．第1天时取样、蛋白胨氮源培养基
C．第2天时取样、角蛋白氮源培养基
D．第4天时取样、角蛋白氮源培养基
【答案】D
【解析】A、第0.5天时堆肥温度较低，嗜热菌可能还未大量繁殖，且蛋白胨氮源培养基不能筛选出能降解角蛋白的目标菌，A错误；
B、第1天时堆肥温度仍不是很高，嗜热菌数量可能相对较少，同时蛋白胨氮源培养基无法针对降解角蛋白的功能进行筛选，B错误；
C、第2天时堆肥温度虽在上升，但还未达到较高温度，嗜热菌的生长优势可能不明显，且没有利用以角蛋白为唯一氮源的培养基进行筛选，C错误；
D、第4天时堆肥温度较高，适合嗜热菌生长繁殖，此时取样能获得较多嗜热菌；使用角蛋白氮源培养基，只有能高效降解角蛋白的嗜热菌才能利用角蛋白作为氮源生长，可筛选出目标菌，D正确。
故选D。
4.隐甲藻是一种好氧、异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一，从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述错误的是（　　）
A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量
【答案】B
【解析】A、隐甲藻为异养型生物，需从外界获取有机物作为碳源，腐烂叶片中的有机物可为其提供碳源，A正确；
B、湿热灭菌会杀死隐甲藻，导致无法获得活体隐甲藻，B错误；
C、抗生素可抑制细菌生长，而隐甲藻为真核生物，不受影响，因此选择培养基中加入抗生素可减少杂菌污染，C正确；
D、隐甲藻为好氧生物，提高通气量和搅拌速率可增加溶氧量，促进其有氧呼吸和代谢活动，从而提高DHA产量，D正确。
故选B。
知识点2 微生物的选择培养
5.科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株， 旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（ ）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
【答案】D
【解析】A、以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A正确；
B、逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B正确；
C、培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基的基本要求，C正确；
D、稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。用接种环涂布无法保证菌液均匀，D错误。
故选D。
6.下列有关涂布平板操作的叙述，不正确的是（　　）
A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红
B．取少量菌液滴加在培养基表面
C．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10秒再用
D．涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀
【答案】A
【解析】AC、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中，将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、 涂布器冷却后，再进行涂布，A错误，C正确。
B、取少量菌液（0.1 mL），滴加到培养基表面，B正确；
D、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使涂布均匀，D正确。
故选A。
7.如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，下列相关叙述正确的是（ ）
A．图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同
B．图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数
C．图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器
D．图乙每次划线应从同一起点开始以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落
【答案】B
【解析】A、据图可知，图甲中三个平板都是用稀释涂布平板法获得的菌落，三个平板上菌落数量不相同，推测所用的培养液的稀释倍数应当不相同，A错误；
B、图甲表示稀释涂布法，图乙表示平板划线法，图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数，B正确；
C、图甲所用的工具为涂布器，图乙所用的工具为接种环，C错误；
D、图乙每次划线应从上一次划线的末尾开始以便分离出单菌落，D错误。
故选B。
8.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制的培养基，成功筛选到高效降解化合物A的细菌（目的菌），实验的主要步骤如下图所示。下列有关叙述错误的是（　　）
A．该培养基中化合物A可能既作碳源又作氮源
B．实验需要振荡培养，由此推测目的菌呼吸作用的类型是有氧呼吸
C．培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量显著降低的培养液接种
D．若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用平板划线法进行计数
【答案】D
【解析】分析题干信息，该实验的目的是筛选出高效降解化合物A的细菌，在以化合物A为唯一碳源和氮源的培养基中只有能降解化合物A的微生物才能以化合物A为碳源和氮源生长繁殖，不能利用化合物A的微生物因缺乏碳源和氮源，无法生长繁殖。
A、磷酸盐、镁盐以及一些微量元素中不含有N元素，由此可推测该培养基中化合物A可能既作碳源又作氮源，A正确；
B、振荡培养可以增加培养液中氧气浓度，因此实验需要振荡培养，由此推测目的菌呼吸作用的类型是有氧呼吸，B正确；
C、培养瓶中化合物A含量显著降低，说明该培养瓶内的菌体降解化合物A的能力较强，因此培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量显著降低的培养液接种，以获得高效降解化合物A的细菌，C正确；
D、若要研究目的菌的生长规律，就需要计数菌体的数量，而平板划线法不能用于菌体计数，应采用稀释涂布平板法接种以计数菌体数量，D错误。
故选D。
知识点3 微生物的数量测定
9．下列关于菌种计数方法的叙述，错误的是（　　）
A．当样品的稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落
B．应该选取培养基表面菌落数目稳定时的记录作为有效数字
C．在某一浓度下至少涂布三个平板，以它们的平均值作为统计结果
D．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数
【答案】D
【解析】A、利用稀释涂布平板法计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，A正确；
B、计数时应该选取培养基表面菌落数目稳定时的记录作为有效数字，减少误差，B正确；
C、在某一浓度下涂布至少三个平板，以它们的平均值作为统计结果可以减少实验误差，C正确；
D、为了保证结果准确，一般采用菌落数为30-300的平板进行计数，D错误；
故选D。
10.稀释涂布平板法不仅是分离和纯化微生物的重要方法，也是测定微生物数量的重要方法。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在统计数据时应（ ）
A．随机抽取某个稀释度的培养基，统计菌落数
B．将不同稀释度的3个培养基上的菌落数求和
C．将相同稀释度的全部培养基上的菌落进行计数
D．随机抽取相同稀释度的3个培养基统计菌落数后求平均值
【答案】D
【解析】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
故选D。
11.尿素是一种重要的农业肥料，尿素分解菌可合成脲酶，利用以尿素为唯一氮源的选择培养基可从土壤中分离尿素分解菌并进行计数，科研人员取0.1g土壤分别稀释103~107倍，将0.1mL不同稀释倍数的土壤稀释液接种在固体培养基上，在相同的培养条件下得到如下数据。下列叙述正确的是（ ）
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数/个 1号平板 478 367 270 26 5
2号平板 496 354 268 20 8
3号平板 509 332 272 29 3
A．利用稀释涂布平板法可将稀释液中的菌体完全分离，一个菌落对应一个菌体
B．该实验中稀释倍数为105的平板菌落数为30~300最适合用来统计活菌数
C．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌均为尿素分解菌
D．若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，则统计结果一般比实际活菌数少
【答案】B
【解析】A、利用稀释涂布平板法不可将稀释液中的菌体完全分离，可能会出现两个或多个菌体连在一起，A错误；
B、为减小误差一般统计菌落数为30～300的平板，该实验中稀释倍数为105的平板菌落数为30～300，最适合用来统计活菌数，B正确；
C、以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，还有可能是自生固氮菌，C错误；
D、若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，不能区分活菌和死菌，则统计结果一般比实际活菌数多，D错误。
故选B。
知识点4 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
12.下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（　　）
A．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂不变红
B．分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生NH3和CO2
C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数为30~300的平板进行计数
D．将实验组和对照组平板倒置，30~37℃恒温培养1~2d
【答案】A
【解析】AB、用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，尿素分解菌将尿素分解成NH3和CO2，会使培养基碱性增强，指示剂变红，A错误，B正确；
C、统计尿素分解菌的数目时，以菌落数为30~300的平板进行计数，C正确；
D、为排除培养基制备过程中可能造成的污染，应设置不接种菌液的对照组的平板，而后将实验组和对照组的平板倒置，防止皿盖上的冷凝水珠滴落在培养基上造成污染;细菌一般需要30~37℃恒温培养1~2d，D正确。
故选A。
13.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”操作的叙述中，错误的是（　　）
A．利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度
B．若要判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照
C．该实验每隔24h统计一次菌落数目，并以菌落数目稳定时的记录作为结果
D．用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红
【答案】B
【解析】A、利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是恰当的稀释度，稀释倍数太低，菌落太多会长在一起，稀释倍数太高，平板上菌落数目过少，都不易进行计数，A正确；
B、若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种了的没有选择作用的细菌通用的牛肉膏蛋白胨培养基作对照，B错误；
C、该实验每隔24h统计一次菌落数目，并以菌落数目稳定时的记录作为结果，C正确；
D、以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后，培养基的pH相对稳定，不会使酚红指示剂变红，D正确。
故选B。
14.在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从对应106培养基上筛选出大约120个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落，下列有关叙述，出现科学性错误的是（ ）　　
A．可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染
B．让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学无误
C．甲同学出现这种结果的原因可能是土样不同，也可能是操作过程出了问题
D．A、B选项的实验思路都遵循了实验的对照原则和平行重复原则
【答案】D
【解析】A、污染可能是培养基灭菌不彻底，或操作过程没有保证无菌操作，将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染，A正确。
B、若是土样不同造成的，让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学操作正确，B正确；
C、甲同学获得的菌落远大于其他同学，可能是由于所取的土样不同，也可能操作过程被污染，C正确；
D、A选项的实验思路都遵循了实验的对照原则，B选项的实验思路都遵循了实验的重复性原则，D错误。
故选D。
15.某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。下列关于土壤中分解尿素细菌的分离和计数的叙述，正确的是（ ）
A．分解尿素的细菌是以尿素的分解产物CO2作为碳源的
B．倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定
D．若实验组菌落平均数为57个/平板，空白对照平板上有3个菌落，则本组菌落数的平均值为54个/平板
【答案】C
【解析】A、分解尿素的细菌是异养型，不能以CO2作为碳源，A错误；
B、倒平板时，不能将打开的培养皿盖放到一边，以免微生物污染，正确的做法是：用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20 mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；
C、无机盐可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定，所以培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定，C正确；
D、在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。若空白对照组出现菌落，说明操作过程中存在微生物污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用，D错误。
故选C。
（限时：10min）
选择题
1．下列有关生物学实验操作和结果分析的叙述中，错误的是（　　）
A．用无菌涂布器将大肠杆菌涂抹在固体培养基上后放入含抗生素的圆形滤纸片，连续培养几代后抑菌圈直径变小
B．探究土壤微生物对落叶的分解作用，实验组需要对土壤灭菌以排除土壤微生物作用，同时要尽可能避免土壤理化性质的改变
C．在以纤维素为唯一碳源的刚果红培养基中，若出现以某些菌为中心的透明圈，即为纤维素分解菌
D．在土壤中尿素分解菌的分离与计数实验中，用稀释涂布平板法进行尿素分解菌计数时，结果往往比实际值高
【答案】D
【解析】A、将含抗生素的滤纸片置于接种大肠杆菌的培养基上，抗生素会抑制敏感菌生长形成抑菌圈。连续培养后，抗性菌被筛选并增殖，导致抑菌圈直径变小，A正确；
B、探究土壤微生物对落叶分解的作用时，实验组需灭菌以消除微生物变量，同时保持土壤理化性质不变（如湿度、pH），确保单一变量原则，B正确；
C、在刚果红培养基中，纤维素分解菌分泌纤维素酶分解纤维素，形成透明圈，透明圈越大说明分解能力越强，C正确；
D、稀释涂布平板法计数时，若多个菌体粘连形成单个菌落，会导致计数结果偏低（而非偏高），因实际菌落数少于菌体数，D错误。
故选D。
2.如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的示意图，下列有关叙述错误的是（ ）
A．在配制步骤②③的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌
B．步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
C．步骤④挑取③中不同的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力
D．步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单菌落
【答案】B
【解析】A、在配制步骤②、③的培养基时，为避免杂菌污染，应先调pH值后再进行高压蒸汽灭菌，A正确；
B、要筛选出能高效分解尿素细菌，所选用的培养基要以尿素为唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步骤③所用的培养基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B错误；
C、步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，形成相互对照试验，比较细菌分解尿素的能力，C正确；
D、步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落，D正确。
故选B。
3.配制伊红-亚甲蓝琼脂培养基可用于鉴定大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽。下图为检测大肠杆菌对某种抗生素的敏感性进行的实验，图示培养两天后所见结果(①②③为加有不同浓度抗生素的圆纸片)。下列相关叙述正确的是（ ）
A．接种用的方法是平板划线法
B．实验表明不同种的大肠杆菌对同一种抗生素敏感性不同
C．①②③周围透明圈的大小差异可能与培养基的氮源不同有关
D．浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照
【答案】D
【解析】抑菌圈的大小可以表示大肠杆菌对抗生素的敏感性的大小，抑菌圈越大说明大肠杆菌对该种抗生素越敏感，否则越不敏感。图中②的抑菌圈最大，大肠杆菌对该种抗生素最敏感。
A、该实验的接种方式是稀释涂布平板法，A错误；
B、从图中看出，接种不同浓度抗生素的圆纸片周围的抑菌圈大小不同，说明同一种大肠杆菌对不同浓度抗生素的敏感度不同，B错误；
C、本培养基的氮源是相同的，C错误；
D、浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照，D正确。
故选D。
4.产脂肪酶细菌可用于含油废水处理，在含有底物的培养基上可分解脂肪形成肉眼可见的透明圈。科研人员用射线照射从土壤中分离的菌株，反复筛选后获得产酶能力提高的菌株。筛选具体流程如图所示，相关叙述正确的是（ ）
A．步骤①取土壤样品灭菌后溶于无菌水中制成菌悬液
B．步骤③中菌落周围的透明圈越大，其脂肪酶活性不一定越高
C．产脂肪酶的细菌进行培养时应放在4℃的恒温箱中培养
D．步骤②的固体平板是以脂肪为唯一碳源和氮源的选择培养基
【答案】B
【解析】A、土壤样品中包含目的菌株，进行灭菌会杀死所有微生物包括要培养的目的菌株，所以不可以进行灭菌处理，A错误；
B、透明圈与菌落的比值越大，说明该菌株脂肪酶活性越高，步骤③中菌落周围的透明圈越大，其脂肪酶活性不一定越高，B正确；
C、产脂肪酶的细菌进行培养时，将培养皿倒置于适宜温度的恒温箱中培养，C错误；
D、要筛选可以产生脂肪酶的细菌，需要用以脂肪作为唯一碳源的固体培养基，D错误 。
故选B。
5．某科研小组欲分离及培养若干种微生物用来处理剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶等湿垃圾。从土壤中筛选淀粉分解菌时，向培养基加碘液染色后，培养基上出现了A、B、C三种菌落，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．可选择菌落B中的微生物用来处理菜根菜叶等湿垃圾
B．实验结束后，合适的菌株被保存下来，其余的可以直接丢弃
C．菌落A的出现说明培养基中混入了淀粉以外的其他碳源
D．该实验用到的接种工具为涂布器，接种前应将其没在盛有酒精的烧杯中
【答案】D
【解析】A、淀粉分解菌能将淀粉分解，在培养基上形成透明圈，透明圈直径和菌落直径的比值越大，说明淀粉分解菌分解淀粉的能力越强，菜根菜叶的主要成分不是淀粉，不宜选用淀粉分解菌，A错误；
B、实验结束后，合适的菌株被保存下来，其余的应经过灭菌处理后再丢弃，防止污染环境，B错误；
C、菌落A的出现说明培养基中混入以空气的碳为碳源的微生物，C错误；
A、该实验用到的接种工具为涂布器，接种前应将其没在盛有酒精的烧杯中，涂布接种时，涂布器应从盛酒精的烧杯中取出，并将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃冷却后再使用，D正确。
故选D。
非选择题
6.土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：
（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用 的选择培养基进行分离，并加入 指示剂进行鉴别。
（2）若取土样5g，应加入 配制成稀释10倍的土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如上图所示的不同浓度的土壤溶液，取样稀释前，一定要 以减少误差。将103~107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用 (涂布器/接种环)将菌液分散，每个浓度稀释液至少接种 个平板，以减少实验误差。
（3）将接种的培养皿 (正置/倒置)在37℃的 箱中培养24~48h，观察并统计 ，结果如下表所示。找出合适浓度，推测出每克土样中细菌数为 。
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数(个) >500 367 248 26 18
【答案】
(1)以尿素为唯一氮源 酚红
(2) 45mL无菌水 摇匀(振荡、混匀) 涂布器 3
(3倒置 恒温培养 菌落数 2.48×108
【分析】
分离菌株的思路： （1）自然界中目的菌株的筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 （2）实验室中目的菌株的筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
【详解】
（1）尿素分解菌能分解尿素作为氮源，而其他微生物在只有尿素作为唯一氮源的培养基上会因为缺少氮源而不能生长，所以为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行分离，并加入酚红指示剂进行鉴别，当尿素被分解形成氨后，会使培养基的pH升高，指示剂将变红。
（2）若取土样5g，应加入45mL无菌水配制成稀释5÷（5+45）=10倍的土壤溶液。取样稀释前，一定要振荡使菌体分布均匀，以减少误差。将103～107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上时，应该采用稀释涂布接种法，因此所用工具是涂布器；每个浓度稀释液至少接种3个平板，以减少实验误差。
（3）将接种的培养皿倒置在37℃的恒温培养箱中培养24～48h，观察并统计菌落数。由于计数时合适的稀释倍数应以平板上出现30～300个菌落的为宜，所以稀释倍数应为105，所以根据表格数据可推测出每克土样中细菌数为248÷0.1×105=2.48×108个。
7.牛奶是适合微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要用巴氏消毒法消毒，以杀死有害微生物。某小组为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行了如图所示操作。请据图回答下列问题：
(1)图1所示方法为 ，若取最终的牛奶稀释液0.1mL在培养基上进行涂布，应选择的工具是图2中的 。
(2)理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为65、63、64，则可以推测每毫升酸奶中所含细菌数为 。
(3)接种操作完成后，需将平板倒置放入培养箱中培养，倒置的目的是不仅能防止水分过快挥发，而且可以 。如果培养基上出现形状、大小、颜色不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。
(4)要进一步分离纯化菌种，应采用图3中 （填字母）所示的划线分离操作，其正确操作过程中，划线工具至少要灼烧 次。
【答案】
稀释涂布平板法 B
(2) 6．4×107
(3)防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
(4)B 5/五
【分析】
配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项：①倒平板的温度一般50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固；②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
平板划线操作的注意事项：①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌；②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；③划线时最后一区域不要与第一区域相连，划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
【详解】
（1）图1为梯度稀释操作，即稀释涂布平板法；取最终的牛奶稀释液0.1mL在培养基上进行涂布，应选择图2中的B涂布器进行操作。
（2）分析图解可知，酸奶稀释了105倍，在恒温培养箱中培养一段时间后，3个平板上菌落数分别为65、63、64个，则可以推测酸奶中每毫升含菌数为=(65+63+64) ÷3÷0.1×105=6.4×107个。
（3）接种操作完成后，需将平板倒置放入培养箱中培养，倒置的目的是不仅能防止水分过快挥发，而且可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，如果培养基上出现形状、大小、颜色不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。
（4）平板划线法时，每次从上次划线的末端开始划线，B符合题意；第一次划线之前需要灼烧，每次划线之后需要灼烧，则共需要5次。
（限时：8min）
一、选择题
1.传统榨菜因含高盐和防腐剂对人类的健康有害，涪陵榨菜集团联合西南大学科研团队，研制出了益生菌榨菜。科研团队从“菌种库”中成功捕获了益生菌，它们不仅可靶向抑制腐败菌生长，还具备解辣、助眠、体重管理等健康功效。该榨菜研发的技术如下表所示，相关说法正确的是（　　）
技术 技术内容
目标益生菌筛选技术 用选择培养基筛选能抑制榨菜腐败的益生菌
益生菌培养技术 益生菌扩大培养
巴氏消毒和益生菌协同技术 巴氏消毒杀灭部分微生物、益生菌代谢产物抑菌
多菌株融合应用技术 将多种不同功能的益生菌进行融合应用
A．筛选目标益生菌时的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基
B．益生菌抑制榨菜中杂菌的主要方式是竞争营养物质
C．多菌株融合需要考虑益生菌的培养条件和菌株之间相互作用
D．将巴氏消毒改进为湿热灭菌可以提高益生菌榨菜的品质
【答案】C
【解析】A、筛选目标益生菌时使用的是选择培养基（根据特定功能筛选），而牛肉膏蛋白胨培养基是基础培养基（适用于多种微生物生长），A错误；
B、益生菌代谢产物抑菌，说明其抑制杂菌的主要方式是分泌抑菌物质（如抗生素），而非单纯竞争营养物质，B错误；
C、多菌株融合需保证不同菌株在相同培养条件（如pH、温度）下能共存，且需避免种间竞争或拮抗作用，否则影响功能发挥，C正确；
D、巴氏消毒（60-70℃）可杀死部分微生物但保留益生菌活性，而湿热灭菌（121℃高压）会杀死所有微生物（包括益生菌），破坏产品特性，D错误。
故选C。
2.莠去津是一种含氮的有机化合物，是广泛使用的除草剂。长期使用莠去津容易对土壤造成污染。实验人员从土壤中筛选莠去津降解菌的过程如下图所示，已知含过量莠去津的固体培养基不透明。下列叙述正确的是（ ）
A．目的菌能以莠去津为氮源进行增殖，产生有透明带的菌落
B．整个实验过程中无需设置未接种的选择培养基作为空白对照
C．该过程若有3个菌落数为30~300适于计数的平板，可计算土壤中目的菌的数量
D．乙平板的接种方法是平板划线法，接种过程共灼烧6次涂布器
【答案】A
【解析】A、根据题干信息可知，这一筛选过程所用的培养基以莠去津为唯一氮源，有透明带的菌落证明其能水解莠去津，A正确；
B、整个实验过程中均需设置未接种的选择培养基作为空白对照，检测培养基是否灭菌合格，同时排除操作过程中是否有杂菌污染，B错误；
C、乙平板的接种方法为平板划线法，这一方法不能进行菌落计数，C错误；
D、平板划线法接种过程所用的接种工具为接种环，不是涂布器，D错误。
故选A。
3．某真菌野生型菌株可以在基本培养基上正常生长，但其突变型菌株a、b、c则无法存活，a、b、c三种突变型菌株在不同物质条件下的生长情况如表所示。下列推测成立的是（　　）
菌株类型 a b c a和b
物质条件 基本培养基＋甲硫氨酸、生物素 基本培养基＋苏氨酸、硫胺素 基本培养基＋甲硫氨酸、硫胺素 基本培养基
生长情况 a b c 野生型菌株
A．三种突变型菌株的出现说明基因突变具有不定向性
B．配制基本培养基时应在灭菌后将pH调至酸性或中性
C．菌株a、b混合培养时，两者之间可能发生DNA转移
D．将菌株a、c混合培养，也可以得到野生型菌株
【答案】C
【解析】A、三种突变型菌株的出现表明基因突变导致不同代谢途径缺陷，但未涉及同一基因的不同突变方向，不能直接说明基因突变的不定向性，A错误；
B、配制基本培养基时，pH调节应在灭菌前进行，避免灭菌后操作引入杂菌污染；且多数微生物培养基需调至中性或微碱性，B错误；
C、菌株a和b单独无法在基本培养基生长，但混合培养时出现野生型（可生长），说明两者通过DNA转移（如接合）实现了基因重组，弥补了彼此的代谢缺陷，C正确；
D、菌株a缺乏合成甲硫氨酸的能力，菌株c同样缺乏甲硫氨酸合成能力（因添加甲硫氨酸才能生长），两者混合无法通过互补修复甲硫氨酸合成缺陷，故不能得到野生型，D错误。
故选C。
非选择题
4.微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。
（1）已知驯化培养基的成分为蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是 。依照物理性质划分，驯化培养基属于 培养基，其中蛋白胨可提供 （答出2种即可）。
（2）用于筛选的样品应来自 的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为 。
（3）将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的多个相同培养基C，培养24小时后，通过测定培养基中敌敌畏的剩余量，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计某一培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了3个平板培养基D，统计菌落数分别为250、247、253，测得该培养基C中活菌数为1.25×107个/mL，则涂布的菌液Y为 mL。该统计数据往往比活菌的实际数目 （填“多”或“少”），理由是 。
【答案】
敌敌畏 液体 碳源、氮源（和维生素）
常年施用敌敌畏 平板划线法
0.2 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
【分析】
培养基从功能上可划分为选择培养基和鉴别培养基，从物理性质上可划分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基，从成分上可划分为天然培养基和合成培养基。
【详解】
（1）本实验目的是筛选抗敌敌畏的微生物，故驯化时，培养液逐步加入的物质X是敌敌畏，这样操作的目的是筛选出高效分解敌敌畏的微生物；由图可知，该驯化培养基中并未加入凝固剂如琼脂等，故依照物理性质划分，驯化培养基属于液体培养基；蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，可以为微生物生长提供碳源、氮源和维生素。
（2）该实验的目的是从土壤中筛选能能高效降解有机磷农药—敌敌畏的微生物，故用于筛选的样品应来自常年施用敌敌畏的土壤，这样能够增加获得目的菌的概率。结合题图可知，将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为平板划线法。
（3）单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的培养基C，单位时间内剩余的敌敌畏越少，说明筛选出的微生物分解敌敌畏的能力越强，故通过测定培养瓶中敌敌畏的剩余量，可筛选出分解敌敌畏能力较强的微生物。微生物计数时应选择菌落数目在30～300之间的进行计数，统计菌落数分别为250、247、312、253，则菌落的平均数（250+247+253）÷3=250个，图中稀释倍数是104，由公式可知250÷Y×104=1.25×107个/mL可知，涂布菌液Y=0.2mL。用该方法计数时，由于可能存在两个或多个细菌形成一个菌落，所以计数的微生物数目比实际活菌数少。
5.反硝化细菌是一类能将硝态氮（-N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，请回答下列问题：
样品采集→富集培养→反硝化细菌检测→稀释涂布→产气实验→菌种鉴定
(1)将1 mL采集的活性污泥样品加入装有9 mL、pH=7.2的磷酸盐缓冲液的100 mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有KNO3 2 g、FeSO4 0.2 g、KH2PO4 1 g、MgSO4 0.5 g、NaCl 2g、CaCO3 5 g，其中为反硝化细菌提供氮源的是 ，富集培养灭菌后待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是 。
(2)将富集后的样品进行梯度稀释后，使用涂布器将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH=6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了 ，放在30 ℃环境中培养2~3天后，挑选周围显 色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
(3)将液体培养基倒入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30 ℃恒温培养5~7 d，观察到小管内有气泡，检测到N2O，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是 。
(4)向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30 ℃，120 r/min摇床振荡培养，24 h后测量-N降解率等指标，结果如图所示。
①本研究的目的是 。
②当投菌量达到5%时，反硝化效果最好，-N降解率和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，-N降解率和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是 （答出一点即可）。
【答案】
KNO3 防止皿盖上的水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快挥发
设置重复实验，取平均值，减少实验误差 蓝
其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低（合理即可）
①探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响
②投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢（合理即可）
【分析】
题干以“反硝化细菌的应用价值”为背景，围绕反硝化细菌的分离、鉴定及投菌量对其反硝化效果的影响展开研究：反硝化细菌可将硝态氮还原为氮气，能解决水体富营养化、亚硝酸盐毒害，具有养殖废水处理的应用价值；核心流程：反硝化细菌的分离鉴定流程（样品采集→富集培养→反硝化细菌检测→稀释涂布→产气实验→菌种鉴定）；实验内容：通过培养基配制、培养操作、指示剂筛选、投菌量梯度实验，探究反硝化细菌的培养条件与反硝化效果的影响因素。题干涉及的知识点具体包括：微生物培养基的成分分析（培养基中氮源的判断）；微生物培养的基本操作：富集培养的目的（增加目标菌的数量）；平板倒置的目的（防污染、保水分）；稀释涂布平板法的操作（梯度稀释、涂布分离）；选择培养的原理：利用反硝化作用的“产碱特性”，结合BTB酸碱指示剂筛选目标菌；实验设计原则：重复实验的意义（减少误差）；微生物代谢的环境影响因素：投菌量对反硝化效果（降解率、总脱氮率）的影响。
【详解】
（1）①为反硝化细菌提供氮源的是KNO3：反硝化细菌利用硝态氮作为氮源，培养基中的可提供硝态氮。②平板倒置的目的是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，同时避免培养基中的水分过快挥发：微生物培养中平板倒置能减少污染风险，同时维持培养基湿度。
（2）① 每个稀释度涂布3个培养基是为了设置重复实验，取平均值以减少实验误差：重复实验可提高实验结果的准确性与可靠性。② 挑选周围显蓝色的单菌落：反硝化作用是产碱过程，会使BTB培养基pH升高，而BTB在碱性条件下显蓝色，此类菌落对应的细菌能进行反硝化作用。
（3）不能依据硝酸盐浓度降低鉴定的原因是：活性污泥中的其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，会导致硝酸盐浓度降低，无法确定是反硝化细菌的作用。
（4）①本研究的目的是探究反硝化细菌的投菌量对反硝化效果（降解率、总脱氮率）的影响。
② 投菌量过高反硝化效果下降的原因：投菌量过大，培养基中的碳源等营养物质被快速消耗，细菌因营养不足生长代谢受抑制（或投菌量过大，耗氧速度加快，体系中氧气供应不足，不利于细菌生长代谢）。
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