资源简介

(共24张PPT)
实验02 酵母菌的纯培养
人教版2019选择性必修3
微生物在自然界中常与多种生物混杂存在，难以用于单独研究其形态、结构与生理特性。纯培养是分离、研究和利用微生物的基础技术，也是科学认识微生物世界的关键入口。酵母菌作为结构典型、易于培养的真核微生物，是开展微生物实验的理想材料。本实验将通过无菌操作、培养基制备、接种与分离纯化等一系列规范操作，获得酵母菌的纯种菌落，直观认识微生物的生长特征，体会微生物研究中“无菌、纯净、可控”的核心思想。让我们从基础操作入手，掌握微生物纯培养的核心技能，开启探索微观生命世界的实验旅程。
实验启程
一、 生命观念
通过实验掌握酵母菌纯培养的原理和方法，理解微生物纯培养的核心逻辑，建立“微生物的生长繁殖依赖适宜环境条件”的生命观念，认同纯培养技术在微生物研究、工业生产中的重要价值，形成“结构与功能相适应”的认知。
二、科学思维
运用观察、对比、推理、归纳等科学方法，分析酵母菌的形态特征和菌落特点，解读培养基配方与酵母菌生长的关系，推理纯培养中无菌操作、接种方法对实验结果的影响，对比不同接种方法的优劣，形成基于实验证据的逻辑推理能力和误差分析意识。
实验目标
三、科学探究
通过设计和实施酵母菌纯培养实验，掌握微生物培养基的配制、无菌操作、接种（划线接种、涂布接种）、恒温培养和菌落观察的基本方法，提升实验设计、操作实施、现象描述与数据（菌落数量、形态）分析能力，理解实验设计的对照原则、单一变量原则和平行重复原则。
四、社会责任
结合实验原理，联系酵母菌纯培养技术在食品发酵（酿酒、制作面包）、医药生产、环境治理等领域的应用，认识微生物技术对人类生产生活的推动作用，树立“科学利用微生物、保障食品安全和生态安全”的责任意识，养成严谨的科学实验态度和规范的操作习惯。
实验目标
实验原理
目的要求
材料用具
实验步骤
结果分析，评价
探究实验的基本思路
1.实验原理
（1）菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
（2）纯培养物：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
（3）原理：
2.目的要求
（1）学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。
（2）学会进行无菌操作。
（3）尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。
3.材料用具
酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
4.方法步骤
（1）制备培养基
配制培养基
灭菌
倒平板
配制培养基
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。
培养基灭菌：高压蒸汽灭菌——121℃，气压100kPa，15-30min
培养皿灭菌：干热灭菌——160~170 ℃ ，灭菌2h
灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h.
4.方法步骤
（1）制备培养基
配制培养基
灭菌
倒平板
待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
倒平板注意事项：
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
倒平板：
4.方法步骤
（1）制备培养基
配制培养基
灭菌
倒平板
4.方法步骤
（2）接种和分离酵母菌
接种：指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。
接种工具：
接种针——用于穿刺接种；
接种环——用于斜面接种或平板划线接种；
玻璃涂布器——用于涂布平板接种；
4.方法步骤
接种的方法：涂布平板法、穿刺接种法、斜面接种法、平板划线法
（2）接种和分离酵母菌
4.方法步骤
平板划线法
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
稀释分散
生长繁殖
（2）接种和分离酵母菌
4.方法步骤
①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红
②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。
⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞
③试管口通过火焰
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。
4.方法步骤
（3）培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染
1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
提示：在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。
2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
提示：如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，
①既可以防止培养基表面的水分挥发，
②又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
一、实验核心基础
1.实验目的：掌握酵母菌纯培养的原理和方法，学会无菌操作和两种接种技术，观察酵母菌的菌落形态，获得酵母菌纯培养物，理解纯培养的核心意义。
2.观察内容：观察酵母菌的菌落形态（圆形、乳白色、表面光滑等），对比划线接种和涂布接种的菌落分布差异，识别纯培养物的特征。
3.材料用具：酿酒酵母菌种、PDA固体培养基、无菌水、无菌生理盐水、接种环、涂布器、恒温培养箱、超净工作台、培养皿、高压蒸汽灭菌锅等。
4.方法步骤：培养基配制与灭菌 → 无菌环境准备 → 菌液稀释 → 无菌接种（划线/涂布） → 恒温培养 → 菌落观察与纯培养物获取 → 实验整理。
核心结论：无菌操作和有效接种是酵母菌纯培养成功的关键，划线接种和涂布接种均可获得酵母菌纯培养物；酵母菌菌落具有典型形态特征，纯培养可排除杂菌污染，使单一酵母菌菌株大量繁殖。
二、实验结果分析与结果分析与评价
三、知识拓展与核心总结
紧扣“无菌操作防污染”和“有效接种获纯株”两大核心，理解酵母菌纯培养的原理，明确纯培养技术在食品发酵、医药生产等领域的应用价值，同时深化对微生物生长条件和无菌技术重要性的认知，养成严谨的科学实验素养。
1.有关纯化酵母菌实验操作的叙述，错误的是(　　)
A.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
B.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
C.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
D.划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
A
2．如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是(　　)
A．①步骤使用的培养基是已经调节过pH并灭菌的培养基
B．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
C．③到④的过程中，接种环共灼烧了5次
D．④步骤操作时，不能将第1区和第5区的划线相连
D
3.倒平板是制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的重要环节，如图为倒平板的操作示意图。
(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：_______________。
(2)甲、乙、丙中的灭菌方法是___________。
(3)丁中的操作需要等待________________才能进行。
丙→乙→甲→丁
灼烧灭菌
平板冷却凝固
感谢观看!

展开更多......

收起↑