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(共62张PPT)
第2节 微生物的培养技术及应用
第1章 发酵工程
（第一课时）微生物的基本培养技术
高中生物学·人教版(2019)·选择性必修3
微生物
课堂导入
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜。
在制作过程中有杂菌混入。
思考1：食用自制酸奶导致肠胃不适的原因是什么？
思考2：怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
？
微生物
难以用肉眼观察的微小生物的统称。P9
无细胞结构
原核生物
真核生物
真菌：酵母菌、毛霉等；
原生生物：草履虫、变形虫等
微生物的类群
病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌:链霉菌等
本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。
课堂导入
课堂导入
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜。
思考2：怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
制作工具和原料灭菌
控制发酵条件避免杂菌进入
接种纯的菌种
微生物的无菌培养技术
防止杂菌污染、获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提（发酵工程的重要基础）
课堂导入
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜。
思考3：实验室培养微生物基本要求是什么？
①提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件
②确保其他微生物无法混入
③并将需要的微生物分离出来
培养基
无菌技术
纯化培养
01
培养基的配制
02
无菌技术
目录
03
微生物的纯培养
04
练习与应用
培养基的配制
01
探究新知
一、培养基的配制
任务一：阅读教材P9-10页，思考下列问题：（3min）
1.培养基的概念、作用、种类及用途？
2.结合教材P10中“表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析培养微生物的培养基必备营养成分有哪些？
3.配制培养基时，如何满足不同微生物的特殊需求？举例说明。
自主学习
探究新知
一、培养基的配制
1.概念
2.作用
3.种类
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
固体
培养基
液体
培养基
+琼脂
微生物在固体培养基表面或内部生长，就可以形成肉眼可见的菌落。
扩大培养、工业生产
微生物的分离、鉴定、活菌计数
探究新知
一、培养基的配制
琼脂是一种从红藻中提取的多糖
琼脂易溶于沸水，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，在常规培养条件下呈现固态。
固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
拓展延伸
培养基种类及用途
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
用途
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
不加凝固剂
扩大培养、工业生产
加凝固剂，如琼脂
观察微生物的运动、
分类鉴定
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
天然培养基
合成培养基
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
选择培养基
鉴别培养基
加入某种化学物质，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
培养基中加氨苄青霉素
具有抗氨苄青霉素能力的菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌
选择培养基
培养基+氨苄青霉素
培养基
没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰
拓展延伸
怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌
探究新知
一、培养基的配制
4.培养基的成分
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
（1）一般都含有碳源、氮源、水、无机盐
牛肉膏
蛋白胨
①碳源：
（提供碳元素）
无机碳源：
CO2、CO32-、HCO3-
有机碳源：
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等
培养自养微生物
培养异养微生物
②氮源：
（提供氮元素）
无机氮源：
NH4＋、NO3-、NH3等
有机氮源：
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
③无机盐：
大量元素：Ca、K 、Mg等
微量元素：Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo等
（调节酸碱平衡、
维持一定的渗透压）
来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。
培养固氮微生物
有些无机盐离子可以作为化能合成菌的能源（如铁细菌）
（2）特殊需求：
满足微生物对 、 、 的需求。
特殊营养物质
pH
O2
01
04
03
02
实例
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ；
维生素
②培养霉菌时，需要将培养基pH调至 ；
酸性
③培养细菌时，需要将培养基pH调至 ；
中性或弱碱性
④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。
无氧
探究新知
一、培养基的配制
4.培养基的成分
主要指生长因子：如:维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。
习题巩固
1．微生物的培养需要配制培养基，以下叙述合理的是( )
A.培养基中都含有碳源、氮源、水、无机盐
B.因成分不同，培养基可分为固体培养基和液体培养基
C.培养基中的氮源能提供氮元素，但不能作为能源物质
D.筛选自养型微生物时，培养基中不需要加碳源
D
如自养微生物可直接利用空气中的CO2作为碳源
物理性质
NH3氧化释放化学能（可提供能量）
习题巩固
2.下表是某种微生物培养基的成分。以下说法错误的是（ ）
A．此培养基可用来培养自养型微生物
B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源
C．若除去①，此培养基可培养固氮菌
D．培养基中若加入氨基酸，则它可充当碳源、氮源
C
固氮菌可能是异养型，该培养基不含有机碳源，不能培养异养固氮菌
习题巩固
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
3.分析基础培养基实例——牛肉膏蛋白胨培养基，回答问题：
（1）分析该培养基的营养构成，上述实例属于固体/液体培养基？为什么？
液体培养基
未加琼脂
（2）为什么培养基需要氮源？（P10旁栏思考）
培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
（3）所有微生物是否都可以用培养基进行培养？
否。病毒是没有细胞结构微生物,必须在活细胞内寄生。
① 含有C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的碳源、氮源、能源。
② 自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于碳源。
因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。
③无机氮源不但能给自养型微生物提供氮源，也能作为能源物质，如NH3既作为硝化细菌的氮源，也作为能源（NH3氧化释放的化学能）。
④微生物常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；常用的无机氮源是铵盐、硝酸盐
特别提醒
无菌技术
02
探究新知
二、无菌技术
任务二：阅读教材P10-11页，思考下列问题：（3min）
自主学习
1.获得纯净的微生物培养物的关键？
2.无菌技术包括什么？消毒和灭菌的对象？
3.常用的消毒和灭菌方法？
4.概括实验前、中、后防止杂菌污染的具体措施。
5.(旁栏思考)无菌技术除用来防止培养物被污染外，还有什么作用？
探究新知
二、无菌技术
1.无菌技术的关键
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染
2.无菌技术的类型
消毒
使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物。
灭菌
指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
针对操作的空间、操作者的衣着和手
针对培养微生物的器皿、接种用具和培养基
培养皿
接种环
培养基
拓展延伸
芽孢和孢子
又称内生孢子，是细菌休眠体。芽孢含水量极低，抗逆性强，能经受高温、紫外线，电离辐射以及多种化学物质灭杀等。恶劣环境下，一个细菌产生一个芽孢，条件适宜时重新成为一个细菌。
芽孢
孢子
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞，能直接发育成新个体。
芽孢和孢子具有高度的耐热性，可抗化学药物和抗辐射。
探究新知
二、无菌技术
3.常用的消毒和灭菌方法
接种室、接种箱或超净工作台可用紫外线照射30min
100℃煮沸5-6 min
62-65℃下煮30min或80-90℃处理30s-1min,不破坏食物营养成分
（1）常用的消毒方法
用75%酒精擦拭双手；用氯气消毒水源等
煮沸消毒
巴氏消毒
化学药物消毒
紫外线消毒
生物消毒法
指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法(净化污水、污泥)
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方式,常用于培养基、无菌水等的灭菌
探究新知
二、无菌技术
3.常用的消毒和灭菌方法
其中高压蒸汽灭菌法效果最好
160~170℃的热空气中维持2~3h进行灭菌，常用于玻璃器皿和金属器具的灭菌
酒精灯火焰灼烧,常用于接种工具的灭菌(效果最彻底)
湿热灭菌
灼烧灭菌
干热灭菌
（2）常用的灭菌方法
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
涂布器
接种环
酒精灯外焰
P10旁栏思考：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
还能有效避免操作者自身被微生物感染。
实验前：
对操作空间、操作人员消毒
对所用器皿、接种用具和培养基灭菌
操作时：
避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触（再次污染）。
实验操作在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。
实验后：
培养基需灭菌之后再丢弃，避免污染环境或感染操作者。
超净工作台
探究新知
二、无菌技术
4.防止杂菌污染的措施：
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
家庭餐具等生活用品
100℃煮沸5～6 min
巴氏消毒法
不耐高温的液体（如牛奶、啤酒、果酒、酱油等）
62～65℃煮30 min
或 80～90℃煮30s～1 min
化学药物
生物活体（皮肤、伤口）、水源等
擦拭等，如用酒精擦拭双手、
用氯气消毒水源
紫外线
紫外线照射30 min
灼烧灭菌
接种的金属工具，接种时用的试管口或瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌
耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等
物品放入干热灭菌箱，
160～170 ℃，加热2～3h
湿热灭菌
培养基等，生产和实验室常用
高压蒸汽灭菌锅内，100 kPa，
温度121 ℃，15～30 min
接种室、接种箱，超净工作台
（最彻底）
课堂小结
消毒和灭菌的比较
趣味交互活动
双击上方链接
1.活动链接
2.操作方法
打开界面
点击左侧卡片 → 再点击右侧对应卡片进行连线（答案正确才能连接成功）
3.活动界面预览
无菌实验室：消毒与灭菌大闯关
1.下列有关无菌技术的说法，正确的是( )
A.无菌技术的关键是杀灭实验室中的所有的微生物
B.培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌
C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存
D.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌
习题巩固
C
防止杂菌污染
可湿热灭菌
干热灭菌
习题巩固
2.关于消毒、灭菌的方法，下列描述错误的是( )
A.接种用的无菌操作台要进行灭菌处理
B.用巴氏消毒法处理牛奶是因为高温易破坏牛奶的营养成分
C.煮沸半小时后的凉开水中可能仍含有部分芽孢和孢子
D.先喷洒消毒液，再用紫外线照射可增强消毒效果
B
不会破坏
习题巩固
3.在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解错误的是（ ）
A．消毒是指杀死物体表面或内部部分微生物
B．灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
C．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境
D．吸管和培养皿可以采用干热灭菌法
C
灭菌
微生物的纯培养
03
探究新知
三、微生物的纯培养
任务三：阅读教材P11-13页，思考下列问题：（3min）
自主学习
1.培养物、纯培养物、纯培养的概念？
2.什么是菌落？单菌落？
3.获得单菌落的方法？
4.酵母菌的纯培养的基本步骤？（注意倒平板和接种的具体操作）
纯培养物
培养物
纯培养
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体。
获得纯培养物的过程。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体。
配制培养基
灭菌
接种
分离
培养
探究新知
三、微生物的纯培养
（一）培养物、纯培养物、纯培养概念辨析：
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
1.实验原理
菌落
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
念珠菌显色培养基
大肠杆菌培养基
鉴别菌种：菌落的大小、形状、颜色、透明度、光泽度等是鉴定菌种的重要依据。
单菌落
一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
获得单菌落的方法
分散或稀释
繁殖
单个细胞
微生物群
单个菌落
平板划线法
稀释涂布平板法
2. 实验目的
① 学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板
② 学会进行无菌操作
③ 尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落
3. 材料用具
酵母菌培养液
提供接种用的酵母菌
配制酵母菌固体培养基
马铃薯
葡萄糖（或蔗糖）
蒸馏水
琼脂
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
天平，小刀，纱布，烧杯，锥形瓶，棉塞、牛皮纸（或报纸）；
皮筋，培养皿，接种环，酒精灯，超净工作台；
高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱和恒温培养箱等；
超净工作台
3. 材料用具
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
① 配制培养基
去皮
切块
加水
(1000mL)
加热煮沸
软烂
马铃薯
纱布过滤
加琼脂
（15～20g）
酵母菌
培养基
加水定容
(1000mL)
称取马铃薯
(200g)
马铃薯块
滤液
加葡萄糖/蔗糖
（20g）
（1）制备培养基
4. 方法步骤
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
② 灭菌：
培养基——高压蒸汽灭菌
转移
灭菌15~30min
皮筋勒紧
包牛皮纸
放入高压蒸汽灭菌锅中（100kPa、121℃）
酵母菌培养基
锥形瓶
加棉塞
高压蒸汽灭菌锅
a. 能避免因水蒸气凝结而浸湿棉塞。
b. 在取出盛有培养基的锥形瓶时，能隔绝空气中杂菌。
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
（1）制备培养基
4. 方法步骤
探究 实践
② 灭菌：
培养皿——干热灭菌
灭菌2h
几层牛皮纸包紧
放入干热灭菌箱（160～170℃）
5～8套培养皿
干热灭菌箱
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
（1）制备培养基
4. 方法步骤
探究 实践
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
（1）制备培养基
4. 方法步骤
探究 实践
① 配制培养基
② 灭菌
不能完全打开，以免杂菌污染培养基。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
1
拔出锥形瓶的棉塞。
2
将瓶口迅
速通过火焰。
3
用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿（10～20mL），立即盖上皿盖。
4
等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。
1.防止培养基表面的水分蒸发。
2.防止皿盖上冷凝水滴落，造成污染。
③ 倒平板：
培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
4. 方法步骤
（1）制备培养基
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
探究 实践
（1）制备培养基
③ 倒平板：
培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。
习题巩固
1.培养基灭菌后为什么要冷却到50℃左右时开始倒平板？
琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时，高于50 ℃则会烫手，若低于50℃不及时操作，琼脂会凝固。
2.为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？
避免杂菌污染。
3.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染或灭菌彻底？
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。
1
2
3
4
5
连续划线法
分区划线法
平板划线法
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
（2）接种和分离酵母菌
4. 方法步骤
方法
操作
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
（2）接种和分离酵母菌
4. 方法步骤
操作
将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。
1
2
在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。
将试管口通过火焰。
3
4
在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。
防止温度太高杀死菌种。
接种环：灼烧灭菌
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
4. 方法步骤
平板划线法的具体操作
（2）接种和分离酵母菌
5
将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。
6
灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意：不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。
7
注意不要划破培养基。
a.划破，会造成划线不均匀，难以分离单菌落；
b.存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落。
使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
最后一次划线已稀释成单个细胞，如与第一次相连则增加细菌数目，达不到纯化的效果。
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
4. 方法步骤
平板划线法的具体操作
（2）接种和分离酵母菌
接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；
划线首尾不能相接；
每次划线前后灼烧接种环进行灭菌；
划线操作结束后，仍需灼烧接种环。
1
2
3
4
分区划线法
（最常用）
1
2
3
4
5
划线后，培养皿倒置培养。
5
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
4. 方法步骤
平板划线法注意事项
（2）接种和分离酵母菌
蘸取菌液
思考：完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？
6次
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
灼烧时期 目的
取菌种前
每次划线前
接种结束后
杀死接种环上原有微生物
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
2.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？
使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，以便获得单个菌落。
习题巩固
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板 (一般做三组，重复实验)和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
警示
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
4. 方法步骤
（3）培养酵母菌
作空白对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染。
5. 实验结果分析与评价
（1）在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染了。
（2）在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、形状和大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点，则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
（3）你是如何记录实验结果的？请与其他同学交流、互评。
可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等。
探究新知
三、微生物的纯培养
（二）酵母菌的纯培养
探究 实践
习题巩固
1．(2024·湖南高考)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（　　）
A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦ C．①②⑦⑧ D．①③④⑤
D
×
×
×
×
习题巩固
2.(2025·泰州靖江期中)实验小组对酿酒酵母菌进行平板划线的纯培养操作，下列有关叙述正确的是( ）
A.将配制好的马铃薯琼脂培养基放入干热灭菌箱内灭菌
B.在酒精灯火焰附近，将培养皿盖完全打开后倒入培养基
C.从第一次划线的末端开始到第二次划线结束，即完成接种
D.将接种后的平板和未接种的平板倒置，放入恒温培养箱中培养
D
高压蒸汽灭菌锅
打开一条稍大于瓶口的缝隙
一般再做第三、四、五次划线
习题巩固
3.微生物接种的方法有很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是（ ）
A．划线操作时，用蘸有菌种的接种环在培养基表面划线
B．划线时不要将第④区域的划线与第①区域相连
C．完成图中所示的平板划线实验，接种环共需灼烧 4 次
D．完成平板划线后需要将平板倒置，放入恒温培养箱中培养
5次
C
探究新知
有一段时间，水果“酵素”风靡各地。水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水,密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。
“酵素”是什么？水果“酵素”的制作原理是什么？水果“酵素”中可能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？水果“酵素”中的所有成分都有益于人体健康吗？
如果要更加有力地支持或反驳水果“酵素”有益健康的论点，应该怎样获取证据？
评估论点的可信程度
思维训练
探究新知
思维训练
1.“酵素”是什么？水果“酵素”的制作原理是什么？
2.水果“酵素”中可能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？
3.水果“酵素”中的所有成分都有益于人体健康吗？
所谓"酵素"，就是"酶"的另一种说法。"酵素"制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。
可能有糖类（包括一些简单的糖和膳食纤维等）、蛋白质（包括多种酶）、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质。
酵素可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。
"吃水果'酵素'可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力"的论点值得怀疑。
可以通过查阅专业学术期刊上发表的有关研究论文，或亲自检测水果"酵素"中的成分，获取科学可靠的证据进行全面论证。
无菌技术
微生物的基本培养技术
微生物的纯培养
紫外线消毒
化学药物消毒
巴氏消毒
煮沸消毒
培养基的配制
培养基的种类
培养基的营养成分
消毒
灭菌
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
课堂小结
制备培养基
接种分离
培养
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）等
平板划线法
配制培养基 灭菌 倒平板
练习与应用
04
一、概念检测
1. 微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。
(1) 培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。( )
(2) 消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。( )
(3) 微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。( )
教材P14
2. 日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
√
×
×
练习与应用
干制可以降低食品的水分含量；
腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；
低温储存通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
二、拓展应用
1. 某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
(1) 这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有 。
(2)“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？
(3) 从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
培养皿和培养基
接种
教材P14
练习与应用
通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。
可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
2. 某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210r/min、230r/min和250r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
(1)摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？
意味着培养液中O2含量不同。
(2)从图中数据你可以得出什么结论 其原因是什么
培养液中O2含量越高，酵母菌种群密度越大。
(3)为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定？
这时候已经达到了环境容纳量。
教材P14
练习与应用
练习与应用
3.（2019·全国III卷·高考真题）回答下列与细菌培养相关的问题。
（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是 （填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是 。硝化细菌在没有碳源的培养基上 （填“能够”或“不能”）生长，原因是 。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板 （填“倒置”或“正置”）。
（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是 。
（4）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过 处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
蛋白胨
不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同
能够
硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源
倒置
在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征
灭菌

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