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第1章 发酵工程
第2节　微生物的培养技术及应用
第2课时　微生物的选择培养和计数
课时目标 1.运用适应观，说明选择培养基的原理。(生命观念)
2．采用归纳与概括等方法，阐述测定微生物数量的常用方法。(科学思维)
3．运用稀释涂布平板法，进行细菌分离和计数操作。(科学探究)
一、选择培养基
1．概念：在微生物学中，允许 种类的微生物生长，同时
其他种类微生物生长的培养基。
2．举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基的特点是以 为唯一氮源。
特定
抑制或阻止
尿素
二、微生物的选择培养
1．方法： 法。
2．过程
稀释涂布平板
三、微生物的数量测定
1．稀释涂布平板法测定微生物数量
(1)原理：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少 。
(2)计数原则
①一般选择菌落数为 的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。
②在同一稀释度下，应至少对 个平板进行重复计数，然后求出 。
稀释度
活菌
活菌
30～300
3
平均值
(3)统计结果
①统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。
2．显微镜直接计数法测定微生物数量
(1)统计工具：特定的 计数板或 计数板。
(2)统计方法：在 下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
(3)统计结果
①一般是 和 的总和。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。
菌落数
少
细菌
血细胞
显微镜
活菌数
死菌数
多
四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．实验原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成 的微生物才能分解尿素。利用以 作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
脲酶
尿素
2．方法步骤
◆名师点睛
1．有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步验证。
2．当尿素为选择培养基的唯一氮源时，只有能产生脲酶的微生物才能将尿素分解为NH3供自身利用，其他微生物由于缺少氮源而无法生长繁殖。
3．进行土壤取样操作时，取土样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌处理。操作完成后，一定要洗手。
4．为排除非测试因素(培养基)的干扰，实验需设置不接种的全营养培养基进行空白对照。
5．利用显微镜直接计数本身不能区分细菌的死活，但是，通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
6．若实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
◆视野拓展
　分解尿素的细菌的进一步鉴定
(1)鉴定原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成NH3，NH3会使培养基的碱性增强，pH升高。因此，可通过检测培养基pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(2)鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果培养基pH升高，指示剂将变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
×
√
◆基础速判(对的画“√”，错的画“×”)
1．选择培养基只允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物的生长。(　　　　)
2．以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基。(　　　　)
3．脲酶能催化尿素分解产生N2，N2可作为细菌生长的氮源。(　　　)
4．稀释涂布平板法能分离细菌，也能对样品中的细菌进行计数。(　　　　)
5．测定不同微生物数量时，接种的土壤稀释液的稀释度相同。(　　　　)
6．菌落特征是鉴别菌种的重要依据。(　　　　)
7．利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量。(　　　　)
√
√
×
×
√
◆思维启迪
1．对接种环和涂布器进行灼烧灭菌，在操作上有何区别？
提示：接种环灭菌时，应将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红；涂布器灭菌时，应先将涂布器浸在酒精中，再放在火焰上灼烧，直到酒精燃尽。
2．为什么稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少？
提示：因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
任务一 选择培养基
[问题探究]
1．你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？
答案：培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长、发育、繁殖。
2．该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？
答案：除了用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。
1．选择培养基的类型
类型 条件 分离得到的菌种
改变培养条件 70～80 ℃的高温 水生栖热菌
添加某种
化学物质 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌
高浓度食盐 金黄色葡萄球菌
特殊碳源、氮源 石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物
营养缺陷 不加碳源 自养型微生物
2.选择培养基与鉴别培养基的比较
项目 选择培养基 鉴别培养基
特殊成分 加入某种化学物质 加入某种指示剂或化学药品
目的 抑制或阻止其他微生物生长，促进目的微生物生长 与微生物的代谢物或培养基中的成分发生特定反应
用途 培养、分离出特定微生物 鉴别不同的微生物
3.微生物的筛选方法
单菌落
挑取法 利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体培养基表面，直接根据微生物菌落的特征(菌落的形状、大小和颜色等)，利用单菌落挑取的方法获得目的微生物
选择培养法 利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物
鉴定培养法 利用鉴别培养基使目的菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物
1．下表为某微生物培养基的配方，下列有关叙述错误的是 (　　)
成分 含量 成分 含量
NaNO3 3 g FeSO4 0.01 g
K2HPO4 1 g 葡萄糖 30 g
琼脂 15 g H2O 1 000 Ml
MgSO4·7H2O 0.5 g 青霉素 0.1万单位
C
A.依物理性质划分，该培养基属于固体培养基；依用途划分，该培养基属于选择培养基
B．由培养基的配方可知，所培养微生物的同化作用类型是异养型
C．该培养基中青霉素的添加满足了微生物生长对特殊营养物质的需求
D．若用该培养基分离能分解尿素的细菌，应除去青霉素和NaNO3，并加入尿素
解析：
从培养基成分看，配方中含有凝固剂琼脂，属于固体培养基；依据用途划分，该培养基中加了青霉素，属于选择培养基，A正确。由培养基的配方可知，葡萄糖属于有机碳源，因此所培养微生物的同化作用类型是异养型，B正确。该培养基中添加青霉素是为了筛选能够抗青霉素的微生物，C错误。若用该培养基分离能分解尿素的细菌，应以尿素为唯一氮源，因青霉素有杀菌作用，故应除去青霉素和NaNO3，并加入尿素，D正确。
D
2．(2023·广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是 (　　)
A．a点时取样、尿素氮源培养基
B．b点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
解析：
本研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以应在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，D正确。
任务二 稀释涂布平板法和微生物的选择培养
菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。下图是某样品选择培养简化流程图。
[问题探究]
1．对样品悬液怎样进行依次等比稀释？
答案：取1 mL样品上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
2．涂布器一般是在酒精中浸泡，然后放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，该操作的目的是什么？
答案：杀死涂布器上的杂菌，防止杂菌污染。
1．两种纯培养方法的比较
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
关键步骤 接种环在固体培养基表面连续划线 依次等比稀释操作和涂布平板操作
接种工具 接种环 涂布器
用途 一般用于菌种的纯化 一般用于筛选菌株
优点 可根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落 既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
缺点 不能对微生物计数 操作复杂，需要涂布多个平板
培养
结果
相同点 ①都能分离菌种；②都是在固体培养基上进行的；③都是需要在酒精灯火焰旁进行接种的无菌操作；④都可用于观察菌落特征
2.稀释涂布平板法操作注意问题
(1)稀释操作
①稀释操作前，每支试管及其中的9 mL无菌水、移液管等均需灭菌。
②稀释操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。
(2)涂布操作
①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将蘸有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧灭菌。
②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
C
1．稀释涂布平板法是微生物培养中一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是 (　　)
A．操作中需要将菌液进行依次等比稀释
B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面
C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单菌落
D．操作过程中，对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理
解析：
稀释涂布平板法包括等比稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要将菌液进行依次等比稀释，A正确；涂布平板时，需要将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，B正确；只有在一定的稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物才能分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落，C错误；操作过程中，对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防止杂菌污染，D正确。
A
2．某学者欲研究被石油污染过的土壤中的细菌数，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列有关操作错误的是 (　　)
A．利用平板划线法对细菌进行计数
B．利用以石油为唯一碳源的培养基筛选能分解石油的细菌
C．采用稀释涂布平板法分离菌种
D.称取土壤和稀释土壤溶液时应在酒精灯火焰旁操作
解析：
平板划线法能将细菌分离纯化，但不能用于计数，采用稀释涂布平板法分离菌种，并对菌种进行计数，A错误、C正确；筛选能分解石油的细菌只能利用以石油为唯一碳源的选择培养基，B正确；称取土壤和稀释土壤溶液过程中的每一步都要在酒精灯火焰旁操作，D正确。
B
3．(2024·石家庄高二检测)下面是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，相关叙述正确的是 (　　)
A．图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同
B．图乙只适合分离微生物而不适合对微生物进行计数
C．图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器
D．图乙每次划线应从同一起点开始，以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落
解析：
根据图甲中三个平板的菌落密度可知，三个平板中所用培养液的稀释倍数不相同，A错误；图乙是平板划线法接种后的结果，只适合分离微生物而不适合对微生物进行计数，B正确；稀释涂布平板法接种使用涂布器，平板划线法接种使用接种环，C错误；图乙每次划线应从上一次划线的末端开始，以便使聚集的菌种逐步稀释获得单菌落，D错误。
任务三 微生物的分离与计数
下图是“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验流程示意图。
[问题探究]
1．在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？
答案：作为重复实验，统计时取平均值，可减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。
2．为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？
答案：该操作可尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体刚开始的时候看不出明显的菌落。
3．取10 g土壤溶解在90 mL无菌水中，取1 mL加入试管并加入9 mL无菌水，重复6次，取0.2 mL菌液进行涂布，结果三个平板中菌落数分别是56、50、44，求1 g土壤中的细菌数。
答案：(56＋50＋44)÷3÷0.2×107＝2.5×109个。
1．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验结果分析
2．两种计数方法的比较
项目 稀释涂布平板法 显微镜直接计数法
用具 培养基、涂布器等 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板
计数对象 培养基上的菌落 菌体本身
计算
方法 每克样品中的菌落数＝×M
C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；
M：稀释倍数 以XB.K.25血细胞计数板(计数室高度为0.1 mm，每个小方格面积为1/400 mm2)为例，每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数
项目 稀释涂布平板法 显微镜直接计数法
优点 计数的是活菌 计数方便、操作简单
缺点 比实际数值偏小 比实际数值偏大
共同点 均需要稀释到一定浓度才能计数
B
1．研究小组利用稀释涂布平板法来估测大肠杆菌的数量，每一个浓度涂布4个平板。下列关于操作步骤的叙述，正确的是 (　　)
A．因为实验前后形成对照，因此本实验不必设置空白对照组
B．涂布前将蘸有少量酒精的涂布器引燃，待涂布器冷却后再涂布
C．为避免混淆，应在培养皿的皿盖上做标记，并将培养皿倒置培养
D．用此法估测的数值往往偏小，故应以菌落数最多平板的计数为准
解析：
该实验需要一个空白平板作对照，以判断平板是否被杂菌污染，A错误。涂布器灭菌时，将蘸有少量酒精的涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布，B正确。应在培养皿的皿底上做标记，因为如果标记在皿盖上，培养皿倒置后标记就看不到了，C错误。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，D错误。
A
2．(2025·洛阳高二检测)科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和纯化实验，部分实验流程如图所示。已知步骤④获得的三个平板的菌落数分别为90、95、100，对照组菌落数为0。下列叙述正确的是 (　　)
A．10 g土壤中平均自生固氮菌数约为9.5×107个
B．步骤②充分振荡的目的是为了增加固氮菌的浓度
C．步骤⑤使用的培养基是不添加氮源的鉴别培养基
D．该计数法得到的菌落数往往高于用显微镜直接计数
解析：
从图中可知，稀释倍数为104，三个平板的平均菌落数为(90＋95＋100)÷3＝95，涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL，则每克样品中的菌落数为(95÷0.1)×104＝9.5×106，那么10 g土壤中平均自生固氮菌数约为9.5×106×10＝9.5×107个，A正确；步骤②充分振荡的目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，使微生物均匀分布，B错误；因为要分离自生固氮菌，自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，所以步骤⑤使用的培养基是不添加氮源的选择培养基，用于筛
解析：
选出自生固氮菌，C错误；该计数法是稀释涂布平板法，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，而显微镜直接计数法能把死菌、活菌都计算在内，所以该计数法得到的菌落数往往低于用显微镜直接计数，D错误。
利用微生物降解治理水污染——科学探究与社会责任
污水治理是生态文明建设的一项重要任务，利用微生物降解污染物是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑。
设计1：考查推理判断能力
(1)下表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方，表中X物质最可能为____________。
成分 MgSO4 蛋白质 X物质 水 琼脂
用量 5 g 10 g 7 g 1 000 mL 20 g
设计2：考查理解应用能力
(2)若将100 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后，取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100 mL原菌液中有PVA分解菌____________个。该接种方法是________________，通过该方法测量的菌落数值与实际值相比一般会________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。
设计3：考查科学探究与长句表达能力
(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外，还需要加入________，用于鉴别PVA分解菌。若用上述培养基比较不同菌株降解PVA能力的大小，请用简洁的语言写出设计思路： 。
答案：(1)聚乙烯醇(PVA)
(2)1.6×109　稀释涂布平板法　偏小
(3)碘　用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一段时间后，通过测定白色透明斑的大小(或直径)来确定不同菌株降解PVA能力的大小
解析：
(1)表格是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方，即该培养基属于选择培养基，该培养基的配制过程中应该以PVA为唯一碳源，因此表中X物质最可能为聚乙烯醇(PVA)。(2)分析题干信息可知，空白对照组平板上未出现菌落，说明制备的平板合格，且实验操作可靠，则100 mL原菌液中PVA分解菌的数目＝160÷0.1×104×100＝1.6×109个。这种接种方法为稀释涂布平板法，由于在涂布过程中会出现两个或多个细胞聚集在一起产生一个菌落的情况，所以该方法的测量值与
解析：
实际值相比一般会偏小。(3)依据题干信息可知，要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中还需要加入碘，若菌落周围出现白色透明斑，则该细菌为PVA分解菌。若用上述培养基比较不同菌株降解PVA能力的大小，可用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一段时间后，通过测定白色透明斑的大小(或直径)来确定不同菌株降解PVA能力的大小。
D
1．(2025·广州高二检测)研究人员利用无机盐、琼脂和石油配制培养基，欲培养出石油降解菌，以修复被石油污染的土壤。下列相关叙述中，错误的是 (　　)
A．这种培养基是一种选择培养基
B．这种培养基的唯一碳源是石油
C．能在该培养基上生长的微生物可能是石油降解菌
D．石油降解菌在未被石油污染的土壤中含量较高
解析：
分离获得能降解石油的菌株的关键是用以石油作为唯一碳源的选择培养基进行培养，A、B正确；由于该培养基以石油作为唯一碳源，能在该培养基上生长的微生物可能是石油降解菌，C正确；石油降解菌在被石油污染的土壤中含量较高，D错误。
D
2．(2025·泰安高二检测)根据国家标准每毫升合格的巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50 000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶最合适的消毒温度和时间的探究，下列相关实验操作合理的是 (　　)
A．统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度
B．将等量的新鲜牛奶分别置于60 ℃、80 ℃、100 ℃恒温水浴锅中处理相同的时间
C．对处理后的牛奶利用平板划线法进行接种后，在37 ℃下培养24 h，然后计数
D．通常要用同一稀释度下的牛奶至少接种3个平板进行重复计数，然后求取平均值
解析：
考虑消毒效果的同时，还应考虑牛奶营养物质的流失，故统计培养基上全部菌落数，不一定以菌落数最少组的处理温度作为最适消毒温度，A错误；探究新鲜牛奶最合适的消毒温度和时间，应设置一系列温度梯度，仅设置60 ℃、80 ℃、100 ℃三个温度范围较局限，可能无法准确找到最合适的消毒温度，B错误；平板划线法不能用于计数，应该用稀释涂布平板法对处理后的牛奶进行接种计数，C错误；通常要用同一稀释度下的牛奶至少接种3个平板进行重复计数，然后求取平均值，这样可以减小误差，使实验结果更准确，D正确。
B
3．(2024·衡阳高二期末)将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌(菌株a和b)进行如图所示的实验。下列叙述正确的是 (　　)
A．基本培养基中包含菌株a和b所需的特殊营养物质
B．菌株a和b需要的特殊营养物有所不同
C．接种至基本培养基的方法是平板划线法
D．基本培养基出现的少量菌落皆为单菌落
解析：
在基本培养基上单独培养菌株a和b时，培养基中均无法生长菌落，而当a和b共同培养时，培养基中有少量菌落产生，因此基本培养基中无法提供它们单独生长的特殊营养物质，A错误；a单独培养和b单独培养均不能生长，a和b混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的特殊营养物质，而无法独立生长，因此它们所需要的特殊营养物质有所不同，B正确；根据菌株a和菌株b混合后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时采用的是稀释涂布平板法，C错误；基本培养基出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，D错误。
B
4．油烟污染物中含有多种有害物质，不易降解。某同学从长期受到油烟污染的环境中分离出油烟降解菌，其筛选分离过程如下图所示。下列叙述正确的是 (　　)
A．图示过程①～③为等比稀释
B．在培养基中加入油烟污染物，其作用是为微生物提供碳源和能源
C．过程④使用的是固体培养基，需加入琼脂作为微生物生长繁殖的营养物质
D．过程④可采用稀释涂布平板法或平板划线法分离菌种并进行计数
解析：
图示过程①～③中，加入油烟污染物作为唯一碳源，可初步筛选出能分解油烟的微生物，故该过程称为选择培养，A错误；配制固体培养基时加入琼脂，其作用是作为凝固剂，而不是为微生物生长繁殖提供营养物质，C错误；分离菌种常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，但对活菌进行计数时常用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，D错误。
D
5．(2025·福州高二检测)为检测大肠杆菌对某种抗生素的敏感性进行实验，图示为培养两天后所见结果(①②③为加有不同浓度抗生素的圆纸片)。下列相关叙述正确的是 (　　)
A．接种用的方法是平板划线法
B．实验表明不同种的大肠杆菌对同一种抗生素敏感性不同
C．①②③周围透明圈的大小差异可能与培养基的氮源不同有关
D．浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照
解析：
该接种方法是稀释涂布平板法，A错误；据题意可知，培养基上透明圈的大小与该抗生素的浓度有关，根据单一变量原则，该实验无法说明不同种大肠杆菌对同种抗生素的敏感性不同，B错误；大肠杆菌为异养生物，同一平板的培养基中的含氮量是相同的，C错误；图中浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照，D正确。
6．生物柴油是以野生油料植物、废餐饮油等为原料，通过化学反应制成的可供内燃机使用的燃料，是一种绿色能源。其中微生物脂肪酶在催化生产生物柴油中起着重要作用。为筛选产脂肪酶的微生物，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
(1)产脂肪酶的微生物主要从油污土壤或水体中寻找，原因是 。
(2)为确保能够分离得到产脂肪酶的微生物，常将土壤或水体稀释液先进行选择培养，该培养基的碳源要求为________________________，进行该操作的优点是 。
(3)分离、纯化培养时，可采用______________法接种，从而得到分布均匀的单菌落；从物理形态角度考虑，该培养基属于______________。培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径________的菌落进行纯化培养。为提高该步操作的可信度，设置如下对照实验：
对照组 作用 应出现的现象
未接种的选择培养基　 判断选择培养基是否被污染 ①_______________________
接种的牛肉膏蛋白胨培养基　　　 ②__________________ 对照组培养基上的菌落数大于选择培养基上的菌落数
答案：(1)油污土壤或水体中所含脂肪较多，更可能富含产脂肪酶的微生物
(2)以脂肪作为唯一碳源　允许产脂肪酶的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长
(3)稀释涂布平板　固体培养基　大　①未出现菌落　②判断选择培养基是否起到了选择作用
解析：
(1)取样时应从富含该微生物的环境中寻找，油污土壤或水体中所含脂肪较多，可能有较多的产脂肪酶的微生物。(2)为确保能够分离得到产脂肪酶的微生物，常将土壤或水体稀释液先进行选择培养，该培养基的碳源要求为以脂肪作为唯一碳源，在该培养基上，只有能分解脂肪的微生物能够生长；该步骤属于选择培养，优点是允许特定种类的微生物(产脂肪酶的微生物)生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。(3)微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布
解析：
平板法能得到分布均匀的单菌落；由于该培养基需要进行菌落的培养和观察，故从物理形态角度考虑，该培养基属于固体培养基。直径大的菌落对应菌株分解能力强，故选择直径大的菌落进行纯化培养。对照实验中，判断选择培养基是否被污染，应设置一组未接种的选择培养基，预期结果是未出现菌落；此外需要设置一组接种的牛肉膏蛋白胨培养基，目的是判断选择培养基是否起到了选择作用，若对照组培养基上的菌落数大于选择培养基上的菌落数，则证明实验成功。

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